מאמר שיטה

קביעה כמותית למחצה של צפיפות נוירון דופאמין בסבסטנציה ניגרה של מודלים מכרסמים באמצעות ניתוח תמונה אוטומטי

DOI:

10.3791/62062

⸱

2 בפברואר 2021

 ,  ,  ,  , 
1Krembil Research Institute, Toronto Western Hospital, University Health Network, 2Department of Laboratory Medicine and Pathobiology, University of Toronto, 3Department of Surgery, Division of Neurosurgery, University of Toronto, 4Department of Medicine, Division of Neurology, University of Toronto, 5Department of Medicine, Division of Neurology, Edmond J. Safra Program in Parkinson's Disease and the Morton and Gloria Shulman Movement Disorders Clinic, Toronto Western Hospital, University Health Network, 6Tanz Centre for Research in Neurodegenerative Diseases, University of Toronto

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כאן אנו מציגים שיטה אוטומטית לקביעה כמותית למחצה של מספר נוירון דופאמין בסובסטנציה חולדה nigra pars compacta.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הערכה של מספר נוירונים דופאמין הסובסטנציה ניגרה היא שיטה מרכזית במחקר טרום קליני מחלת פרקינסון. נכון לעכשיו, ספירה סטריאולוגית לא משוחדת היא התקן לכימות של תאים אלה, אך היא נשארת תהליך מייגע וגוזל זמן רב, אשר לא יכול להיות ריאלי עבור כל הפרויקטים. כאן, אנו מתארים את השימוש בפלטפורמת ניתוח תמונה, אשר יכולה להעריך במדויק את כמות התאים המסומנים באזור מוגדר מראש של עניין. אנו מתארים פרוטוקול צעד אחר צעד לשיטת ניתוח זו במוח החולדה ומדגימים שהוא יכול לזהות ירידה משמעותית בנוירונים חיוביים טירוסין הידרוקסילאז עקב ביטוי של מוטציה α-סינוקלאין בסובסטיה ניגרה. אימתנו מתודולוגיה זו על ידי השוואה עם תוצאות שהושגו על ידי סטריאולוגיה משוחדת. יחד, שיטה זו מספקת תהליך יעיל ומדויק לגילוי שינויים במספר נוירון דופאמין, ולכן מתאים לקביעה יעילה של ההשפעה של התערבויות על הישרדות התא.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחלת פרקינסון (PD) היא הפרעת תנועה נוירודגנרטיבית נפוצה המאופיינת על ידי נוכחות של אגרגטים חלבון המכיל α-synuclein (α-syn) ואת האובדן המועדף של נוירונים דופאמין הסובסטנציה ניגרה pars compacta (SNpc)1. כימות של מספר נוירון דופאמין הוא חלק חיוני של מחקר PD כפי שהוא מאפשר את ההערכה של השלמות של המערכת nigrostriatal, ובכך, מתן נקודת קצה חשובה כדי להעריך את האפקטיביות של טיפולים פוטנציאליים שינוי המחלה. נכון לעכשיו, התקן לכימות מספר תא הוא ספירה סטריאולוגית לא משוחדת, המשתמשת ב חתכים דו מימדיים (2D) של רקמה כדי להעריך תכונות נפחיות במבנים תלת מימדיים (3D)2,3,4. שיטות סטריאולוגיות מבוססות עיצוב מודרניות משתמשות בהליכי דגימה אקראיים מקיפים ומיישמות פרוטוקולי ספירה (הידועים כבדיקות) כדי למנוע חפצים פוטנציאליים ושגיאות שיטתיות, המאפשרים זיהוי אמין של הבדלים רק מעט יותר מאשר וריאציה בין בעליחיים 5. בעוד סטריאולוגיה מספקת כלי אנליטי רב עוצמה למחקרים היסטולוגיים in vivo, זה זמן אינטנסיבי, מניח הכנת דגימה אחידה, ודורש אימות במספר שלבים, אשר יכול להשפיע על היעילות הנדרשת יותר ויותר עבור חקירה תרגום פרה קליני.

ההתקדמות הטכנולוגית האחרונה במדע הדיגיטלי מאפשרת לאמץ יישומים חדשניים להערכות יעילות יותר של פתולוגיה ללא סטריאומיקרוסקופ, תוך מילוי הצורך כפונדקאי של סטריאולוגיה לא משוחדת. שיטות אלה להגביר את המהירות, להפחית את השגיאה האנושית, ולשפר את הרבייה של טכניקות סטריאולוגיות6,7. HALO היא פלטפורמה כזו לניתוח תמונה לניתוח רקמות כמותיות בפתולוגיה דיגיטלית. הוא מורכב ממגוון מודולים שונים ומדווח על נתוני ביטוי מורפולוגיים ומולטי-אקסים על בסיס תא אחר תא על פני מקטעי רקמות שלמים באמצעות אלגוריתמים לזיהוי תבניות. מודול ה-FL הציטונוקלארי מודד את החיוביות האימונופלואורסצנטית של סמנים פלואורסצנטיים בגרעין או בציטופלסמה. הדבר מאפשר דיווח על מספר התאים החיוביים עבור כל סמן ועל ציון העוצמה עבור כל תא. המודול יכול להיות מותאם כדי לספק גדלי תאים בודדים ומדידות אינטנסיביות, אם כי תכונה זו אינה נדרשת לכימות של נוירונים דופאמין.

מטרת מחקר זה היא לאמת שיטה זו עם מודל חולדה α-syn וקטורי מאומת בעבר של ניוון עצבי ניגרל8,9,10. במודל זה, מוטציה אנושית A53T α-syn באה לידי ביטוי SNpc על ידי הזרקה סטראוטקטית של סרוטיפ היברידי וירוס הקשורים אדנו 1/2 (AAV1/2), וכתוצאה מכך ניוון עצבי משמעותי על פני תקופה של 6 שבועות. SNpc uninjected התווית עשוי, במחקרים מסוימים, לשמש שליטה פנימית עבור הצד מוזרק. בדרך כלל, הזרקת וקטור AAV-ריק (AAV-EV) בקבוצת שליטה של בעלי חיים משמש כפקד שלילי. אנו מציגים מדריך שלב אחר שלב להערכת הצפיפות של נוירונים דופאמין שנותרו SNpc מוזרק לאחר 6 שבועות באמצעות תוכנת ניתוח תמונה אוטומטית (איור 1).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל ההליכים אושרו על ידי ועדת הבריאות האוניברסיטאית לטיפול בבעלי חיים ובוצעו בהתאם להנחיות ולתקנות שנקבעו על ידי המועצה הקנדית לטיפול בבעלי חיים.

1. הזרקה סטראוטקטית

  1. זוג בית נקבה בוגרת Sprague-Dawley חולדות (250-280 גרם) בכלובים עם מצעים עץ וגישה ad lib למזון ומים. שמור על מושבת בעלי החיים במחזור אור /כהה רגיל של 12 שעות (אורות ב-06:30) עם טמפרטורה ולחות קבועות.
  2. בצע הזרקה סטראוטקטית חד צדדית של AAV ישירות SNpc בצד ימין של המוח (צד ימין או שמאל, על פי ההעדפות של כל מעבדה) כפי שתואר קודם לכן8,10. להזריק 2 μL של AAV1/2 ב titer הסופי של 3.4 x 1012 חלקיקים גנומיים / מ"ל.

2. חתך במוח ואימונוהיסטוכימיה (IHC)

  1. הרדמה החולדה עם 5% isoflurane על ידי הצבת בתא הרדמה במשך 3 דקות. ניתן להשתמש בשיטות מאושרות אחרות עבור שלב זה לאחר בדיקה מוסדית מתאימה.
  2. לאחר החולדה הגיעה למישור כירורגי של הרדמה עמוקה, להעביר אותו חרוט האף מודבק בחוזקה לשולחן necropsy. אבטחו את כפות הרגליים של החולדה באמצעות סרט הדבקה והשתמשו בשיטת תגובה לצביטת בוהן כדי לקבוע את עומק ההרדמה. החיה חייבת להיות לא מגיבה לפני שהיא ממשיכה.
  3. בצע חתך לרוחב מתחת לעצם החזה וחתך דרך הסרעפת לאורך כל כל כלוב הצלעות כדי לחשוף את חלל הצלעות. להרים ולהדק את עצם החזה עם hemostat ומניחים מעל הראש.
  4. מהדקים את הלב באמצעות מלקחיים ומכניסים מחט פרפר המחוברת למשאבת זלוף לקצה האחורי של החדר השמאלי. לחלחל עכברוש transcardially עם 150 מ"ל של מלוחים הפריניזציה, או עד העיניים והעור ברורים. זלוף עם 4% paraformaldehyde (PFA), במקום מלוחים, ניתן להעדיף כדי להקל על immunostaining עם נוגדנים מסוימים או חתך מוח דק יותר.
  5. לאחר השלמת הזלוף, ערפו את ראשם עם גיליוטינה וחילצו את המוח למטריצת מוח, משטח גחוני הפונה כלפי מעלה.
  6. באמצעות סכין גילוח טרי, לעשות חתך במישור קורנל 2 מ"מ rostral כדי chiasm אופטי. החלק את הלהב מצד לצד כדי למנוע עיוות של המוח בעת החיתוך.
  7. לטבול את החלק האחורי של המוח בבקבוקון שכותרתו מראש המכיל כ 20 מ"ל של 4% PFA עבור 48 שעות של לאחר קיבוע בטמפרטורת החדר. החלק השני של המוח עשוי להיות פלאש קפוא 2-מתילבוטן מקורר -42 מעלות צלזיוס לפני אחסון ב -80 מעלות צלזיוס.
  8. לאחר 48 שעות, להעביר את המוח הקבוע בקבוקון שכותרתו המכיל 30% סוכרוז מלוחים אגירה פוספט (PBS) ולאחסן ב 4 מעלות צלזיוס עד שהם שוקעים (48-72 שעות).
  9. הכן microtome על ידי הצבת קרח יבש בשוקת של שלב הדגימה, ואחריו 100% אתנול. לאחר קירור הבמה, לסחוט טמפרטורת חיתוך אופטימלית (OCT) תרכובת על הבמה עד שהוא יוצר עיגול 2 ס"מ קוטר ו 0.5 ס"מ עובי. ברגע שהוא קפא חלקית, בזהירות להוריד את המוח על התל של OCT, להבטיח את משטח חיתוך striatal נשאר במקביל לשלב.
  10. מוסיפים עוד קרח יבש לשלב כדי לעזור למוח לקפוא. ברגע שהמוח הפך צבע שמנת, לנקות את השלב של קרח יבש.
  11. לתקוע חור בצד ימין של המוח עם מחט 25G להבחין בחצי הכדור הימני והשמאלי. היזהר לא להעביר את המחט דרך מבנים אנטומיים של עניין.
  12. חיתוך סדרתי של 40 מיקרומטר במישור הקורונה החל מ bregma -3.8 ומסתיים ב bregma -6.8.
  13. יש לאחסן שש סדרות בצינורות מסומנים בתמיסה נגד הקפאה (40% PBS, 30% 2-ethoxyethanol, 30% גליצרול). כל סדרה צריכה להכיל 12 חלקי מוח.
  14. בחר קבוצה אחת של מקטעים עבור כתמים אימונוהיסטוכימיים, ולשטוף את פתרון נגד הקפאה עם 3 x 10 דקות שוטף ב 0.2% PBS-T.
  15. חסום למשך שעה ב- RT עם אגוזים עדינים בתמיסת חסימה (סרום עיזים רגיל 10% (NGS), 2% אלבומין סרום שור (BSA) ב- 0.2% PBS-T). בצע את זה עם דגירה עם נוגדן ארנב אנטי טירוסין הידרוקסילאז (TH) (1:500) ועכבר נגד α-syn נוגדן (1:500) ב 2% NGS ב 0.2% PBS-T לילה בטמפרטורת החדר.
  16. לשטוף את הנוגדן העיקרי עם 3 x 5 דקות שוטף ב 0.2% PBS-T, ואחריו 1 דגירה h עם עז אנטי ארנב אלקסה פלואור 488 נוגדן משני (1:500) ו עז נגד העכבר אלקסה פלואור 555 נוגדן משני ב 2% NGS ב 0.2% PBS-T. ודאו שהקטעים מוגנים מפני אור ואגוזים בעדינות.
  17. לשטוף את הנוגדן המשני עם 3 x 5 דקות שוטף ב 0.2% PBS-T ולהרכיב את הסט המלא של מקטעים על שקופיות מוגן מפני אור ואבק באמצעות מברשת צבע צרה. מכסה עם פלואורסצנטיות הרכבה בינונית וחותמת עם לכה ציפורניים ברורה.

3. מיקרוסקופיה קונפוקלית ורכישת תמונה

  1. לכוד תמונות IHC באמצעות תוכנה המצמדת למיקרוסקופ קונפוקאלי בהגדלה של פי 10. פתח את חור הסיכה ל 1.5 AU כדי ללכוד מטוס רחב בהיקף ~ 1.5 מיקרומטר ולהגדיר את המיקוד בצד מוזרק של המוח.
  2. בכרטיסיה רכישה, סמן את האפשרות דימות סריקת אריחים והגדר את הממדים ל- 10 x 4.
  3. תחת החלונית 'מצב רכישה', הגדר את גודל התצוגה ל- 1.1. פעולה זו מסייעת למנוע סימני תפירה ברורים בין תמונות סריקת אריחים.
  4. הגדר את גודל המסגרת ל- 1024 x 1024 פיקסלים ואת הממוצע ל- 2 כדי להבטיח רכישת תמונה באיכות גבוהה.
  5. בלוח ערוצים, הגדר מסלול 1 אל Alexa488 ומסלול 2 אל Alexa555.
  6. טען את השקופית על הבמה ובחר מקטע עם כתמי TH חזקים. לחץ על בשידור חי בפאנל הרכישה.
  7. בחלונית 'ערוצים', הגדר את עוצמת הלייזר והרווח לרמות שמגדילות את האות ומגבילות את הרעש מהרקע. השתמש במחוון הטווח כדי להבטיח שהאותות לא יתמלאו יתר על המידה (כפי שצוין בשכבת-על אדומה כהה).
  8. חזור על השלב לעיל עם שקופיות מרובות כדי להבטיח כתמים עקביים בין שקופיות כמו כוח לייזר / רווח לא ניתן להתאים בין שקופיות.
  9. בכרטיסיה רכישה, סמן את התיבה מיקומים.
  10. בשלב זה, אתה מוכן להתחיל הדמיה. באמצעות העינית, לבחור את החלק הראשון מראה כתמי TH חיוביים, להגדיר את המוקד בנקודת העניין (כלומר, SNpc) ולאחר מכן להעביר את הבמה לקו האמצע של המקטע. פעולה זו שומרת את המיקום בצירים x, y ו- z ותדמיין סריקת אריח הלוכדת את המקטע כולו.
  11. חזור על השלב לעיל עבור כל המקטעים ברחבי SNpc נותן קבוצה שלמה של תמונות של SNpc. אם נדרש ניתוח מפורט של הצד הלא מודבק, יש לחזור על שלבים 3.10 עד 3.11 על-ידי הגדרת המוקד בצד הלא מודבק.

4. ניתוח תמונה וכימות

  1. הפרד קבצי תמונה באמצעות תוכנה מתאימה וייבא קבצי תמונה לתוכנה אוטומטית לניתוח תמונות.
  2. הגדר אזור מעניין על-ידי בחירה בכלי ביאור עט כדי לצייר ביאור סביב ה- SNpc.
    הערה: במקטעים שבהם יש כמות גדולה של אובדן נוירון דופאמין, הגדלה זמנית של פליטה/ספיגה יכולה לעזור להגדיר בבירור את SNpc (איור 2).
  3. מעבר לכרטיסיה ניתוח ומהתפריט הנפתח ניתוח, בחר כוונון בזמן אמת. פעולה זו פותחת חלון נפרד בתמונת המקטע המאפשר שינוי בזמן אמת של פרמטרי ניתוח (איור 3).
  4. תחת המקטע הגדלה של ניתוח, בחר את גודל התצוגה המתאים של התמונה.
  5. תחת סעיף זיהוי תאים, בחר צבע גרעיני כצבע המשמש לכתם TH (Alexa Fluor 488).
  6. להתאים את סף הניגוד הגרעיני, עוצמה גרעינית מינימלית, תוקפנות פילוח גרעיני, והגדרות גודל גרעיני תוך צפייה זהירה בחלון כוונון בזמן אמת.
    הערה: ייצוג מדויק של כל תא בודד כתא יחיד בחלון הכוונון בזמן אמת חיוני לדיוק. הגדרות אלה נמצאות בקנה מידה שרירותי בהתאם לתוכנה שבה נעשה שימוש, אך יש צורך בהתאמה נכונה כדי לאפשר לתוכנה להבחין במדויק בין תאים בודדים ובין תאים לרקע (איור 3).
  7. חזור על תהליך זה עם מינימום של 10 דגימות נפרדות כדי להבטיח הסכמה אחידה של מה מהווה תא על פני סעיפים שונים.
    הערה: ניתן לזהות סמני תאים נוספים (כגון α-syn או NeuN) באותה פלטפורמת ניתוח באמצעות המקטעים סמן 1 או סמן 2 בכרטיסיה ניתוח.
  8. לאחר שנדגמו מספר מתאים של תמונות וכוונון בזמן אמת הותאם בהתאם, שמור את הגדרות הניתוח בתפריט הנפתח פעולות הגדרות.
  9. בחר את כל התמונות שיש לנתח ולחץ על נתח.
  10. בחר בהגדרת הניתוח ששמרת זה עתה ובחלון אזור הניתוח, סמן את התיבה שכבות ביאור. לאחר מכן, בדוק את שכבה 1 ולחץ על נתח.
    הערה: עבור מוח יחיד, הניתוח נמשך בדרך כלל כ-5 דקות. התוצאה שהושלמה תציג בבירור כל פריט שנספר כתא (איור 4).
  11. לאחר השלמת, יצא את נתוני ניתוח הסיכום עבור כל המקטעים. קיימת אפשרות לייצא נתוני ניתוח אובייקטים, אשר יספק נתונים מפורטים, כולל גודל התא של כל תא בודד שזוהה. ערכת נתונים זו יכולה לשמש לבחינת שינויים בגודל התא בתגובה לרעלן/טיפולי.
  12. הוסף את סה"כ התאים מכל מקטע שנותח לכל בעל חיים ואת האזור המנותח הכולל (מ"מ2). חלק את המספר הכולל של תאים לפי האזור הכולל שנותח כדי לחשב את מספר התאים/מ"מ2 ב- SNpc עבור כל עכברוש

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

על ידי יישום השיטות לעיל על רקמת המוח שנאספו 6 שבועות לאחר זריקות AAV, הוכחנו כי הזרקה סטריאוטקטית של AAV המבטא מוטציה A53T α-syn (AAV-A53T) ב SNpc של המוח החולדה תוצאות ירידה משמעותית בצפיפות של נוירונים דופאמין לעומת הזרקה של AAV וקטור ריק (AAV-EV) כפקד (איור 5A, B). המספר הממוצע של נוירונים חיוביים TH / מ"מ2 ב SNpc של חולדות מוזרק עם AAV-EV היה 276.2 ± 34.7, וב SNpc של חולדות מוזרק עם AAV-A53T היה 41.2 ± 17 (P = 0.0003). כימות של מספר נוירונים דופאמין ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ההערכה האמינה של שלמות המערכת הדופאמינרגית במודלים פרה-קליניים של PD היא קריטית כדי לקבוע את האפקטיביות של טיפולים פוטנציאליים לשינוי מחלות. לכן, חשוב לשלוט ולמזער מבלבלים פוטנציאליים שעשויים להפחית את האמינות והשחזור של נתונים היסטופטולוגיים. תוצאות כמותיות זהירות יכולות לספק מידע רב יותר מתיאורים איכותיים או חצי כמותיים בלבד. במקביל, עלינו להכיר בכך שאילוצים בזמן ובמשאבים עלולים להקשות על ביצוע ספירה סטריאולוגית בלתי משוחדת לכימות שינויים פתולוגיים או אובדן תאים. עם זאת, עם ההתקדמות האחרונה, רבים של קריטריונים אלה ניתן...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מדווחים שאין אינטרסים מתחרים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מבקשים להודות לכל הצוות במתקן מיקרוסקופיה אופטי מתקדם (AOMF) ברשת הבריאות האוניברסיטאית על זמנם וסיוע בפיתוח פרוטוקול זה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
נוגדן A-SynThermoFisher Scientific32-8100
ABC EliteVector LabsPK-6102
Alexa Fluor 488 נוגדן משניThermoFisher ScientificA-11008
Alexa Fluor 555 נוגדן משניThermoFisher ScientificA-28180
אלקליין פוספטאז מצומד נגד ארנב igGג'קסון Immuno111-055-144
Biotinylated Anti Mouse IgGVector LabsBA-9200
בקר סרום אלבומיןסיגמאA2153
DAKO פלואורסצנטי מדיוםAgilentS3023
HALO™Indica Labs
Histo-Clear IIDiamedHS202
ImmPACT DAB Peroxidase SubstrateVector LabsSK-4105
LSM880 מיקרוסקופ קונפוקליZeiss
NeuN נוגדןMilliporeMAB377
מעבדות וקטור סרום עיזים רגילS-1000-20
OCTTissue-Tek
ParaformaldehydeBioShopPAR070.1
הזזה מיקרוטוםLeicaSM2010 R
סטריאו חוקרMBF Bioscience
סוכרוזBioShopSUC700
TH נוגדןThermoFisher ScientificP21962
VectaMount הרכבה בינוניתVector LabsH-5000
וקטור כחול אלקליין אלקליין מצעVector LabsSK-5300
Zen Black SoftwareZeiss
Zen Blue SoftwareZeiss

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kalia, L. V., Lang, A. E. Parkinson's disease. Lancet. 386 (9996), 896-912 (2015).
  2. West, M. J., Slomianka, L., Gundersen, H. J. Unbiased stereological estimation of the total number of neurons in thesubdivisions of the rat hippocampus using the optical fractionator. The Anatomical Record. 231 (4), 482-497 (1991).
  3. Nair-Roberts, R. G., et al. Stereological estimates of dopaminergic, GABAergic and glutamatergic neurons in the ventral tegmental area, substantia nigra and retrorubral field in the rat. Neuroscience. 152 (4), 1024-1031 (2008).
  4. Golub, V. M., et al. Neurostereology protocol for unbiased quantification of neuronal injury and neurodegeneration. Frontiers in Aging Neuroscience. 7, 196(2015).
  5. Schmitz, C., Hof, P. R. Design-based stereology in neuroscience. Neuroscience. 130 (4), 813-831 (2005).
  6. Penttinen, A. M., et al. Implementation of deep neural networks to count dopamine neurons in substantia nigra. European Journal of Neuroscience. 48 (6), 2354-2361 (2018).
  7. Yousef, A., et al. Neuron loss and degeneration in the progression of TDP-43 in frontotemporal lobar degeneration. Acta Neuropathologica Communications. 5 (1), 68(2017).
  8. Koprich, J. B., et al. Expression of human A53T alpha-synuclein in the rat substantia nigra using a novel AAV1/2 vector produces a rapidly evolving pathology with protein aggregation, dystrophic neurite architecture and nigrostriatal degeneration with potential to model the pathology of Parkinson's disease. Molecular Neurodegeneration. 5, 43(2010).
  9. Koprich, J. B., et al. Progressive neurodegeneration or endogenous compensation in an animal model of Parkinson's disease produced by decreasing doses of alpha-synuclein. PLoS One. 6 (3), 17698(2011).
  10. McKinnon, C., et al. Early-onset impairment of the ubiquitin-proteasome system in dopaminergic neurons caused by alpha-synuclein. Acta Neuropathologica Communications. 8 (1), 17(2020).
  11. Henderson, M. X., et al. Spread of alpha-synuclein pathology through the brain connectome is modulated by selective vulnerability and predicted by network analysis. Nature Neuroscience. 22 (8), 1248-1257 (2019).
  12. Ip, C. W., et al. AAV1/2-induced overexpression of A53T-alpha-synuclein in the substantia nigra results in degeneration of the nigrostriatal system with Lewy-like pathology and motor impairment: a new mouse model for Parkinson's disease. Acta Neuropathologica Communications. 5 (1), 11(2017).
  13. Webster, J. D., Dunstan, R. W. Whole-slide imaging and automated image analysis: considerations and opportunities in the practice of pathology. Veterinary Pathology. 51 (1), 211-223 (2014).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Parkinson s DiseaseTyrosine Hydroxylase StainingConfocal MicroscopyUnbiased StereologyCell DetectionRodent BrainAlpha Synuclein

מאמרים קשורים