הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

אסטרטגיות מוקסה לעכברים

1.7K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/63119

⸱

7 בינואר 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Traditional Chinese Medicine, Sichuan Provincial People's Hospital, University of Electronic Science and Technology of China, 2Chinese Academy of Sciences Sichuan Translational Medicine Research Hospital, 3Acupuncture and Tuina School, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 4Department of Pharmacy Service, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 5Department of Acupuncture, Southwest Medical University Affiliated Traditional Chinese Medicine Hospital, 6Department of Acupuncture, Chongqing Traditional Chinese Medicine Hospital

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטת יישום מוקסה לעכברים, עם היתרונות של הפחתת פחד העכברים, הבטחת רווחתם ושיפור היעילות עבור החוקרים.

תקציר

תחום מחקר המוקסה-בסטציה מתרחב, עם עלייה מהירה בפרסומים בשנים האחרונות. מוקסה הוא טיפול המצית מוקסה על עורם של בני אדם, עם עלייה בטמפרטורת העור ההיקפית ואדמומיות מקומית. במהלך טיפול זה, על המקבל להישאר דומם כדי למנוע צריבה ולחשוף אתרי התערבות למניפולציה קלה; עם זאת, שמירה על יציבה קבועה במהלך מוקסה היא אתגר גדול עבור בעלי חיים. לפיכך, מניפולציה של מוקסה בבעלי חיים קטנים, כמו עכברים, עלולה להוביל למספר קשיים עבור חוקרים. בנוסף, יציבה לא נוחה לבעלי חיים עלולה להוביל לפחד והתנגדות למוקסה, סיכון מוגבר לפציעה, רווחת בעלי חיים מופחתת ונתוני מחקר פחות תקפים. יש צורך בשיטת מוקסה יעילה ונוחה כדי להגן על רווחת בעלי החיים ולמזער את ההשפעות השליליות על תוצאות הניסוי. עם זאת, שיטות מוקסה משתנות מאוד ולעתים קרובות יעילות מוגבלת. חשוב מכך, תנוחת מוקסה לא נוחה עלולה לגרום לתגובת לחץ, כמו אלה שנצפו בחרדה, פחד וכעס, שיכולה להשפיע על נתוני המחקר. לכן, נדרשות אסטרטגיות למוקסה של בעלי חיים הגורמות לנזק המינימלי האפשרי במהלך ההתערבות. פרוטוקול זה מציג שיטת קשירת עכבר להתערבות מוקסובה, מזעור אי נוחות בעכבר ושיפור יעילות המחקר. מודגשות אסטרטגיות חיוניות לקשירת עכברים ויישום מוקסה ומתוארים מבנה מכשיר הקשירה.

מבוא

מוקסה הוא טיפול חיצוני המשמש ברפואה הסינית המסורתית1. הוא יושם באופן נרחב במשך מאות שנים כאמצעי לשמירה על כושר ומניעה וריפוי של מחלות 2,3. עם זאת, מנגנון המוקסה עדיין לא ברור; לפיכך, תחום מחקר זה התרחב בשנים האחרונות כאשר חוקרים חוקרים את השפעותיו ואת המנגנונים הביולוגיים שלו.

במהלך מוקסה חייב המקבל להישאר דומם כדי להשיג את התוצאות הטובות ביותר4. טיפול מוקסה נמשך בדרך כלל 15-30 דקות 5,6. בשל כך, מניפולציה של מוקסה עבור בעלי חיים, במיוחד בעלי חיים קטנים כמו עכברים וחולדות (מועדפים לשימוש בניסויים בבעלי חיים), הפכה לאתגר גדול עבור חוקרים. רוב מכשירי המוקסה מתאימים לשימוש קליני ולא ניתן להשתמש בהם לבעלי חיים, במיוחד עבור בעלי חיים קטנים כמו עכברים 7,8,9. מלבד זאת, בניגוד לבני אדם, בעלי חיים בקושי יכולים למלא פקודות ולהישאר יציבים לאורך זמן. יציבה קבועה ולא נוחה לבעלי חיים עלולה להוביל לרגשות פסיביים, כולל חרדה, פחד, כעס, עצבנות והתנגדות לטיפול, להגביר את הסיכון לפציעה, להפחית את רווחת בעלי החיים וכתוצאה מכך לנתוני מחקר פחות תקפים10. כדי לפתור בעיה זו, במחקרים קודמים, חומרי הרדמה יושמו לתקופות ממושכות במהלך ניסויים בבעלי חיים הכוללים טיפולים חיצוניים ברפואה הסינית המסורתית, כולל דיקור, מוקסה ומחקר עיסוי 11,12,13. עם זאת, בהתחשב בכך שהתנאים הפיזיים משתנים עם ההרדמה, וברוב המקרים הקליניים, מוקסה ניתנת לאנשים במצב הכרה, הרדמה עשויה להשפיע על אותנטיות נתוני המחקר. לכן, שיטה לקשירת בעלי חיים במודע ובנוחות הופכת לאתגר. כדי לפתור את הבעיות הטכניות הללו, הוצגו מכשירים מיוחדים למוקסה עכבר. פרוטוקול זה מספק שיטת קשירה שתסייע לחוקרים בביצוע טיפול מוקסה בבעלי חיים, ותאפשר לבעלי החיים להישאר יציבים, מודעים ונוחים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הניסויים בוצעו בהתאם למדריך המכונים הלאומיים לבריאות לטיפול ושימוש בחיות מעבדה ואושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת צ'נגדו של TCM. הטיפול והתחזוקה של בעלי החיים במעבדה בוצעו בעקבות הפניות14,15. עכברי C57BL/6J זכרים בוגרים, במשקל 20-25 גרם, שימשו לניסוי. כל העכברים נשמרו במחזור אור/חושך של 12 שעות בטמפרטורה של 24 מעלות צלזיוס ו-40%-50% לחות, עם גישה חופשית למזון ומים. הפרוטוקול הבא מתאר את הליכי המוקסה בתנאי דיור מעבדה טיפוסיים.

1. הכנת הציוד

  1. קשירת עכבר
    1. הכן מכשיר קשירת עכבר המורכב מפלטה אנכית, בסיס צלחת אנכית וסוגריים עשויים עץ.
      1. בנה את הגוף הקבוע באמצעות סד עץ ישר (אורך: 30 ס"מ x רוחב: 3 ס"מ x גובה: 3 ס"מ) והצמד את חגורת הסקוטש הקבועה (המורכבת משני צדדים: צד וו (4 ס"מ x 3 ס"מ) וצד לולאה (10 ס"מ x 3 ס"מ)) כדי לאפשר קשירה של גוף העכבר תוך שמירה על גמישות (ראה טבלת חומרים).
      2. השתמש באקדח דבק כדי לחבר את צד הקרס בצד ימין של סד העץ והצמד אורך 1/4 של צד הלולאה בצד שמאל.
    2. הנח את העכבר על המיטה הקבועה, והשתמש בחגורת הסקוטש הקבועה כדי לקשור את פלג הגוף העליון של העכבר.
      הערה: ודא שחגורת הקשירה אינה הדוקה מספיק כדי להפעיל לחץ על הלב, מה שעלול להוביל למותו של העכבר. קשרו את העכבר בצורה רופפת אך יציבה.
    3. השתמש בסרט כדי לחבר את הגפיים התחתונות/העליונות לשני צידי סד העץ ולחבר את הזנב למשטח סד העץ.
  2. הכנת מתלה מיטת העכבר
    הערה: המתלה מורכב מלוח עץ אנכי, לוחית עץ וסוגרי עץ. התושבת מורכבת מחתיכת נירוסטה בצורת L, המספקת תמיכה לכל מיטת עכבר.
    1. חבר את הצלחת האנכית על לוחית הבסיס, וצור חריצים מרובעים בלוחית הבסיס כדי להכניס מקלות עץ המשמשים כבלבול (איור 1).
    2. הכן כיסוי ראש שקוף מפלסטיק אם העכברים מקבלים מוקסה מעל הראש.
      1. השתמש במזרק של 1000 מ"ל, והסר את המחט ומוט הליבה. השתמש בכלי חיתוך או בסכין כדי לחתוך את מעיל המזרק לשניים.
      2. בחרו משני הצדדים של מעיל המזרק, חתכו את הראש והזנב והניחו את החלק האמצעי בצד (אורך: 4 ס"מ) ככיסוי הראש לעכבר.
      3. קדחו חור (1 ס"מ) במרכז מעיל המזרק בעזרת מכונת מקדחה והניחו מקל מוקסה בחור. הנח כיסוי ראש על ראשו של העכבר כדי להגביל את תנועת ראשו ולהגן עליו מפני המוקסה המודלקת.
    3. חבר שתי רצועות עץ מקבילות (אורך: 7 ס"מ x רוחב: 1 ס"מ) וחתיכה אופקית (אורך: 7.5 ס"מ x רוחב: 1 ס"מ) לקצה הראש של מיטת העכבר אם עכברים מקבלים מוקסה על הגפיים הקדמיות (איור 2).
      הערה: המרווח בין כל רצועת עץ מקבילה למיטת העכבר צריך להיות 1 ס"מ. ניתן לקבוע את מספר הסוגריים וגובה הלוחות האנכיים על סמך דרישות הניסוי. יש לבצע את הצעדים הללו בעדינות כדי להימנע מהפחדת העכברים. הקפידו לתת לעכברים אימון אדפטיבי במשך שבוע לפני הניסוי.
  3. הכנת מחזיק מקל מוקסה
    1. הכן את מחזיק מקל המוקסה המורכב ממלבן מתכת מגנטי (אורך: 30 ס"מ), בסיס תושבת (אורך: 5 ס"מ x רוחב: 5 ס"מ x גובה: 2 ס"מ), וקוביות עץ (אורך: 3 ס"מ x רוחב: 1.5 ס"מ x גובה: 1 ס"מ), כל אחת עם חור (קוטר: 0.55 ס"מ) במרכז שלתוכו ניתן להניח מקל מוקסה (ראה טבלת חומרים).
    2. הצמידו מגנט שטוח ודק (אורך: 3 ס"מ × רוחב: 1.5 ס"מ, עובי: 0.2 ס"מ) לצד אחד של כל קובייה. המשיכה המגנטית בין הקוביות עם מקלות מוקסה למחזיק מאפשרת התאמת גובה מקלות המוקסה.
      הערה: ודא שהקטבים המגנטיים של מגנטי הקובייה נמצאים מול הקוטב של מגנט המחזיק.
  4. כדי לתעד את ההתחלה והסוף של הליך המוקסה, הנח התקן תזמון (ראה טבלת חומרים) ליד התקן קשירת העכבר שבו ניתן לקרוא אותו בקלות.
  5. השתמש ביד חשופה או בכפפה דקה בעת החזקת וקשירת העכברים. יד עטויה כפפה דקה יעילה גם במהלך טיפול מוקה.

2. הליך מוקסה

  1. לבש את כפפות המעבדה. לפני טיפול מוקסה יש לגלח את הפרווה באמצעות מכונת גילוח עכבר באתר המוקסה כדי לחשוף את נקודת הדיקור.
  2. הכנס מקלות מוקסה (בקוטר 0.5 ס"מ ואורך 10 ס"מ) למחזיק מקל המוקסה (הכולל את מלבן המתכת המגנטי, בסיס התושבת וקוביות עץ עם חורים במרכזם להכנסת מקל מוקסה, ומחזיק מקל אחד יכול להכיל רק מקל מוקסה אחד, שלב 1.3).
  3. כדי לברר את טמפרטורת המוקסה, חבר גלאי תרמי דיגיטלי בנקודת הדיקור כדי לנטר את שינוי הטמפרטורה.
  4. הפעל את הטיימר והצית את מקל המוקסה; לתקן או לשלוט במרחק בין עור נקודת הדיקור לקצה המואר של מקל המוקסה בהתאם לשינוי הטמפרטורה הנדרש לניסוי.

3. מוקסה עכבר בו זמנית

הערה: ניתן לטפל בעכברים עם מוקסה כקבוצה. מתלה מיטת עכבר משמש למיקום מיטות העכברים כך שניתן יהיה לטפל בקבוצת עכברים בו זמנית.

  1. הניחו כל מיטת עכבר על המתלה והכניסו מקל עץ לתוך לוחית הבסיס כדי להגן על העכברים מפני נפילה (איור 3).
  2. הכנס מקלות מוקסה (קוטר 0.5 ס"מ ואורך 12 ס"מ) למחזיק מקל המוקסה ברמות החופפות לכל מיטת עכבר. כוונן את המרחק בין מתלה העכבר למחזיק המקל ולאחר מכן הצית את מקלות המוקסה.
    הערה: זה מאפשר לטפל בעכברים עם מוקסה במצב רגוע ונוח. במהלך מוקה, ודא שהמרחק בין מתלה העכבר למחזיק המקל נשאר עקבי עבור כל העכברים.
  3. לפני הדוגמנות, ערכו את תגובות העכבר לבדיקת סף הנסיגה התרמית (TWL) כדי לקבוע אם מוקסה תהיה יעילה בשיכוך כאבים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

טבלה 1 מסכמת את הגורמים השונים המשפיעים על התגובות למוקסה. תוצאות חיוביות של מוקסה עכברים צוינו על ידי מדדים מרובים של רווחת עכברים והשפעות חיוביות.

לאחר מכן, מתוארות דוגמאות ספציפיות לתוצאות המתקבלות כאשר טכניקת המוקסה-בסטציה משולבת עם הליכי הזרקה מושרים על ידי אדג'ובנט (CFA) של פרוינד (CFA). מבחן סף הנסיגה התרמית (TWL) שימש להערכת היעילות של מוקסה בשיכוך כאבים16.

לאחר האכלה אדפטיבית במשך שבוע במחזור אור/חושך של 12 שעות ב-24...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

טכניקת המוקסה יעילה להפרעות רבות, כגון עייפות, נדודי שינה, שלשולים ותסמונת כאב 20,21,22,23,24,25,26. עם היתרונות של טיפול במוקסה למחלות רבות, המנגנון של טכניקה זו משך את תשומת ליבם של החוקרים. היישום של מוקסה בבעלי חיים הכרחי כדי לחקור את המנגנונים המולקולרי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים שאין להם מה לחשוף.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מהקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (81704187, 8210152562), תוכנית המדע והטכנולוגיה של סצ'ואן (2019YJ0587, 2018JY0482, 2019YJ0329), האקדמיה למדעי הרפואה של סצ'ואן וקרן המחקר של בית החולים העממי של סצ'ואן (2018ZX05), קרן המחקר של חוקרי שינגלין של אוניברסיטת צ'נגדו לרפואה סינית מסורתית (QNXZ2019034).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
השלם את האדג'ובנט של פרוינד (CFA)סיגמא-אולדריץ'SF588102
אקדח דבקDeli Group Co., Ltd.DL5041
כפפת מעבדהBoci  ושות', בע"מ53625130323
מלבן מתכת מגנטי (עובי: 0.2 ס"מ)Sitoo נייר מכתבים ושות', בע"מ1007908729
Moxa מקלHanyi Airong מפעל5613
גיליון פלדהRizhan חומרי מתכת ושות', בע"מ1108
מזרק (1000 מ"ל)Xinmin Fuda ושות', בע"מ
טיימרBevoza ושות', בע"מKT003
סקוטש חגורתמינסוטה כרייה וייצור ושות', בע"מ3MSJ3550
קוביית עץChuang Hing עץ שבב ושות', בע"מ2581457A
סד עץChuang Hing עץ שבב ושות', בע"מ3410968M
מקל עץChuang Hing עץ שבב ושות', בע"מ2785476M
רצועת עץChuang Hing עץ שבב ושות', בע"מ2374652S
796341

מקורות

  1. Ebrary, I. Guide for the care and use of laboratory animals. NIH Publication. 327 (3), 963-965 (2011).
  2. Wang, M., et al. Mechanism of traditional chinese medicine in treating knee osteoarthritis. Journal of Pain Research. 13, 1421-1429 (2020).
  3. Wang, T., Xu, C., Pan, K., Xiong, H. Acupuncture and moxibustion for chronic fatigue syndrome in traditional Chinese medicine: A systematic review and meta-analysis. BMC Complementary and Alternative Medicine. 17 (1), 163(2017).
  4. Zimmermann, M. Ethical guidelines for investigations of experimental pain in conscious animals. Pain. 16 (2), 109-110 (1983).
  5. Zhou, W., et al. Effect of moxibustion and acupuncture on gastric mucosal cell apoptosis and expression of NF-κB, Bcl-2 in chronic atrophic gastritis rats. Acupuncture Research. 46 (4), 284-288 (2021).
  6. Wang, Y., et al. βEffect of moxibustion on -EP and Dyn levels of pain-related indicators in patients with rheumatoid arthritis. Evidence-based Complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2021, 6637554(2021).
  7. Huang, P., et al. Design of moxibustion device for experimental rabbits. Chinese Acupuncture & Moxibustion. 39 (09), 1024-1026 (2019).
  8. Li, M., Sun, Z. An automatic moxibustion box with temperature control. Chinese Acupuncture & Moxibustion. 39 (06), 649-650 (2019).
  9. Luo, Z., Zhang, C., Zhou, M., Chen, C. Manufacture and clinical application of a medical warm moxibustion instrument. Shanghai J Acu-mox. 37 (05), 596-598 (2018).
  10. Liang, Y. L., Sun, Y. H., Sun, Y. H., Sun, L. H., Jiang, H. T. Design and use of rat box for moxibustion experiment. Acupuncture Research. 36 (03), 224(2011).
  11. Meng, J., Fu, W., Zhu, G., Song, L. Effect of acupuncture on coronary collateral circulation function in dogs with experimental myocardial infarction. Acupuncture Research. 3 (1), 196-197 (1986).
  12. Tan, D. Experimental study on the effect of moxibustion at Neiguan point on the content of serum free fatty acid (FFA) in rabbits with acute myocardial ischemia. Liaoning Journal of Traditional Chinese Medicine. 6, 44-45 (1991).
  13. Seo, B., et al. Skeletal muscle regeneration with robotic actuation-mediated clearance of neutrophils. Science Translational Medicine. 13 (614), (2021).
  14. Bielitzki, J. T., Barbee, R. W., Garber, J. Guide for the care and use of laboratory animals. NIH Publication No 85-23(rev). 327 (3), 963-965 (2011).
  15. National Research Council (US), Institute for Laboratory Animal Research. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. National Research Council (US), Institute for Laboratory Animal Research. , National Academies Press. Washington (DC). (1996).
  16. Zuo, C., et al. Ipsi- and contralateral moxibustion generate similar analgesic effect on inflammatory pain. Evidence-based complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2019, 1807287(2019).
  17. Poulaki, S., Rassouli, O., Liapakis, G., Gravanis, A., Venihaki, M. Analgesic and anti-inflammatory effects of the synthetic neurosteroid analogue BNN27 during CFA-induced hyperalgesia. Biomedicines. 9 (9), 1185(2021).
  18. Duan, L., et al. Metabolomics analysis on mice with depression ameliorated by acupoint catgut embedding. Frontiers in Psychiatry. 12, 703516(2021).
  19. Wang, J., et al. Protection against doxorubicin-induced cardiotoxicity through modulating iNOS/ARG 2 balance by electroacupuncture at PC6. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2021, 6628957(2021).
  20. Chen, Y., Gao, X., Sun, C. Pricking and penetrating moxibustion therapy in patients with refractory insomnia: A randomized and controlled clinical trial. Journal of Traditional Chinese Medicine. 38 (5), 754-762 (2018).
  21. Liu, C., et al. Effectiveness and safety of fire-needle moxibustion on insomnia: Protocol for a systematic review and meta-analysis. Medicine. 98 (7), 14509(2019).
  22. Han, K., et al. Moxibustion for treating cancer-related fatigue: A multicenter, assessor-blinded, randomized controlled clinical trial. Cancer Medicine. 10 (14), 4721-4733 (2021).
  23. Bao, C., et al. Effect of mild moxibustion on intestinal microbiota and NLRP6 inflammasome signaling in rats with post-inflammatory irritable bowel syndrome. World Journal of Gastroenterology. 25 (32), 4696-4714 (2019).
  24. Chen, F., et al. Efficacy and safety of moxibustion for chronic low back pain: A systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials. Complementary Therapies in Clinical Practice. 39, 101130(2020).
  25. Zhang, C., et al. The role of STIM1/ORAI1 channel in the analgesic effect of grain-sized moxibustion on inflammatory pain mice model. Life Sciences. 280, 119699(2021).
  26. Zhao, L., et al. Effectiveness of moxibustion treatment as adjunctive therapy in osteoarthritis of the knee: A randomized, double-blinded, placebo-controlled clinical trial. Arthritis Research & Therapy. 16 (3), 133(2014).
  27. Goldman, N., et al. Adenosine A1 receptors mediate local anti-nociceptive effects of acupuncture. Nature Neuroscience. 13 (7), 883-888 (2010).
  28. Torres-Rosas, R., et al. Dopamine mediates vagal modulation of the immune system by electroacupuncture. Nature Medicine. 20 (3), 291-295 (2014).
  29. Solovchuk, M., Deng, H., Sheu, T. Experimental and numerical study on the temperature elevation in tissue during moxibustion therapy. Evidence-based Complementary and Alternative Medicine:eCAM. 2020, 7514302(2020).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

הסרטון יגיע בקרוב
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.