מאמר שיטה

השתלת עור Murine

DOI:

10.3791/634

⸱

16 בינואר 2008

 , 
1Department of Physiology and Biophysics, University of California, Irvine (UCI)

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

השתלה אלוגנאית העור הוא מודל סטנדרטי לארח assay T התגובות התא MHC-אנטיגנים שונים התורם. זה וידאו המאמר מספק הדרכה ויזואלית של כל צעד מעורב בביצוע BALB/c--> השתלת C57BL / 6 העור.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בתור אחד המודלים המחמירים ביותר והפחות מאתגר מבחינה טכנית, השתלת עור היא שיטה רגילה לארח assay T התגובות התא MHC-אנטיגנים שונים התורם. מטרת מאמר-video זה היא לספק את הצופה עם הפגנה צעד אחר צעד ויזואלית של השתלת עור באמצעות מודל העכבר. הפרוטוקול מחולק 5 מרכיבים עיקריים: 1) התורם קצירת העור; 2) הכנת הנמען להשתלה; 3) להשתלת עור; 4) הסרת התחבושת דחיית שתל ניטור: 5) עצות מועילות. בקיאים פעם, את ההליך עצמו צריך לקחת <10 דקות לבצע.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

לפני תחילת הניסוי:

  • לקבל אישור IACUC
  • לעקר כלי ניתוח ו-Q-טיפים

I. רקמות התורם קציר

  1. להרדים עכבר התורם (בהתאם SOP של המוסד)
  2. שיער רטוב חזרה מהבסיס של האוזן עם אלכוהול
  3. התורם קציר העור על ידי חיתוך האוזן את בבסיס
  4. מניחים בצלחת רקמה על הקרח
  5. האוזן פיצול: הצדדים קמצוץ הגחון ועל הגב של רקמת בבסיס של האוזן עם עכברוש שיניים מלקחיים, משוך בעדינות בנפרד רקמות; רקמות לצוף הגב, משטח פנימי למטה, PBS על קרח; להשליך דש הגחון collagenous

השנייה. הכן מקבל עבור להשתלות

  1. עכבר הרדימי באמצעות הליך אישור
  2. ניהול כאבים להקלה על כאב לאחר הניתוח (כלומר 0.05-0.1 מ"ג / g ip Bupernex)
  3. המקום העכבר במצב לרוחב
  4. בצע קמצוץ הבוהן כדי להבטיח חיים הוא מסומם מספיק
  5. שיער רטוב עם אלכוהול לגלח החזה
  6. נגב אזור נקי עם ספוגית אלכוהול

ג. עור להשתלות

  1. ודא ~ 1 ס"מ חתך: עור אוהל עם עכברוש שיניים מלקחיים ולחתוך ~ 0.25-0.5 ס"מ מתחת מלקחיים
  2. הסרת העור תורם PBS, במקום על גבי המיטה שתל (עם המשטח הפנימי של העור אוזן מול המיטה שתל), ולהסיר PBS עם עודף סטרילי Q-קצה
  3. בזהירות לחתוך עור עודף תורם כל כך השתלת שנמצאת ביובש בתוך המיטה שתל (מוודא קצוות השתל אינם מכורבלת מתחת שתל שאינו הנגאובר על העור גזע של הנמען)
  4. גלישת הנמען תחבושת סטרילית (עם קטע שאינו דבק גזה הניח על שתל העור)
  5. ודא תחבושת כי הוא לא חזק מדי (להעריך נשימה של החיה) והזרועות, כי הם ניידים בחופשיות
  6. תחבושת Secure עם תפר 2-0 יחיד משי
  7. חיה מקום בכלוב נקי (תחת מנורת חימום עד שהחיה התאוששה מספיק מן ההרדמה)
  8. צג הנמען 1-2/day סימנים של מצוקה ולנהל משכך כאבים לפי הצורך להקלה על הכאב

IV. הסרת תחבושת (6-7 ימים לאחר ההשתלה)

  1. עכבר הרדימי באמצעות הליך אישור
  2. גזור להסיר תפר משי
  3. בעזרת מספריים סוף בוטה, לחתוך בזהירות באמצעות תחבושת (כדי לוודא שלא לשבש את השתל) בעדינות להסיר
  4. חזור העכבר לכלוב נקי
  5. בדוק ~ שתל 8 שעות לאחר הסרת התחבושת סימנים של scabbing או התכווצות. אם כיום, שתל עשוי נכשלו vascularize ואת צריכה להיחשב כשל טכני.
  6. מעקב יומי אחר סימנים של דחייה (בדרך כלל מגדירים נמק ~ 80% של רקמת התורם)
  7. השתלות עור allogeneic בדרך כלל דוחים בין D8-12 מנותחות

ו 'עצות שימושיות

  1. מסיק רקמות התורם קרוב לבסיס של האוזן יהיה: 1) למקסם את גודל השתל, ו 2) לספק הסככה הגחון אחיד שיאפשר פיצול
  2. השתמש תמיד סכין גילוח חדש גילוח הנמען
  3. אם כאבים תינתן ip, לנהל הליך לפני ההשתלה כדי לצמצם מנותחות טיפול (למזער סיכוי לשבש את השתל)
  4. במידת האפשר, להסיר את הכפפות לפני החלת את התחבושת. כפפות נוטים לתקוע את התחבושת לסבך את הבקשה
  5. הנחת תפר בודד בסוף תחבושת יהיה למזער מוקדמת הסרת
  6. לעטוף כמו תחבושת הדוקה כפי שמותר להעריך נשימה לפני הנחת תפר. אם תחבושת הדוקה מדי, בעלי חיים יפסיק לנשום. אם תחבושת רופפת מדי, בעלי חיים תסיר אותו.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כפי שמודגם במאמר-video זה, המודל השתלת עור היא שיטה מהירה וקלה לניטור allogeneic T התגובות התא. השתלה אלוגנאית העור יש מגוון רחב של יישומים נוצל עד assay את היעילות של מגוון רחב של סוכני מדכאות חיסון ואינדוקציה סובלנות פרוטוקולים, וכן כדי לחקור את ההשפעות הביולוגיות של נוגדנים חסימה שונים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

NIH אימונולוגיה הדרכה גרנט T32 AI 60,573 (KRG) ו-NIH מענק GM 41,514 (MDC)

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
פינצטה למיקרו-דיסקציה (מעוקלת)Sigma-AldrichF4142
פינצטת שיני חולדה (1x2 שיניים, ישרה)Fine Science Tools11053-10n=2
מספרי סטראביזמוס (קצה קהה)Fine Science Tools14074-11
פינצטת איריס (מעוקלת)Fine Science Tools11065-07
מספרי קפיץ (זוויתיים)Fine Science Tools15006-09
מחזיק מחטים מיקרוסקופי מסוג HalseyFine Science Tools12500-12
צלחות 10 cmCorning430167
PBSCellgro21-040-CV
Bupernex (Buprenorphine hydrochloride)Reckitt Benckiser517201
מזרקי אינסולין (29 Ga)Monoject8881 600145
מקלונים (Q-tips)Solon Manufacturing Company362
להבי תער בעלי קו חיתוך יחיד (#9)Smith & Nephew Inc.67-0238
חוט תפירה ממשי (2-0; PS-2)Ethicon Inc.583H

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

מאמרים קשורים