הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

פרוטוקול הצלת עוברים להכלאה בין-מינית בסקווש

3.7K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/64071

⸱

12 בספטמבר 2022

 ,  ,  , 
1UF/IFAS Tropical Research and Education Center

במאמר זה

סיכום

המאמר מתאר פרוטוקול חילוץ עוברים להתחדשות של עוברים לא בשלים הנגזר מההכלאה הבין-מינית של Cucurbita pepo ו- Cucurbita moschata. ניתן לשכפל את הפרוטוקול בקלות והוא יהווה משאב חשוב לתוכניות גידול סקווש.

תקציר

הכלאה בין-מינית בגידולי קוקורביטה (סקווש) רצויה להרחבת השונות הגנטית ולאינטרוגרסיה של אללים שימושיים. עוברים לא בשלים הנוצרים מצלבים רחבים אלה חייבים להתחדש באמצעות טכניקות מתאימות להצלת עוברים. למרות שטכניקה זו מבוססת היטב עבור גידולים רבים, חסר תיאור מפורט של המתודולוגיה המתאימה לדלעת שתאפשר את יישומה השגרתי. כאן אנו מתארים פרוטוקול הצלת עוברים שימושי להכלאה בין-מינית של C. pepo ו- C. moschata. כדי לזהות שילובים בני קיימא להצלת עוברים, בוצעו 24 צלבים בין-ספציפיים. סט פירות התקבל מעשרים ושניים צלבים, מה שמעיד על שיעור הצלחה של 92%. עם זאת, רוב הפירות שהתקבלו היו parthenocarpic, עם זרעים נטולי עוברים (זרעים ריקים). רק שילוב צלב אחד הכיל עוברים לא בשלים שניתן היה לחדשם באמצעות אמצעי גידול צמחיים בסיסיים. בסך הכל חולצו 10 עוברים מפרי F1 הבין-ספציפי, ושיעור ההצלחה של הצלת עוברים היה 80%. פרוטוקול חילוץ העוברים שפותח כאן יהיה שימושי להכלאה בין-מינית בתוכניות גידול סקווש.

מבוא

קוקורביטה (שם מדעי: Cucurbita; 2n = 40) הוא סוג מגוון מאוד במשפחת ה-Cucurbitaceae, הכולל 27 מינים שונים, מתוכם חמישה מבויתים1. מבין אלה, Cucurbita moschata, C. pepo, ו- C. maxima הם החשובים ביותר מבחינה כלכלית בעולם. בארה"ב, C. moschata ו- C. pepo הם שני המינים החשובים ביותר בייצור החקלאי. C. pepo מורכב מארבעה תת-מינים (ovifera, pepo, fraternal ו-gumala) המכילים קבוצות דלעת בקיץ ובחורף של נוכלים, סטרייטנק, בלוט, צדפות, קוקוזל, מח ירקות, קישואים ודלעת 2,3,4,5. C. moschata מורכב בעיקר מסוגי שוק דלעת חורף כולל דלורית, דיקינסון וקבוצת גבינה1. שני המינים מגוונים מבחינה מורפולוגית ופנוטיפית, כאשר C. pepo נחשב לתנובה שלו, לאוזניים, להרגל גידול השיחים ולתכונות פרי מגוונות הכוללות צורת פרי, גודל פרי, צבע בשר ותבנית קליפה. מאידך גיסא, C. moschata מוערך על הסתגלותו לחום ולחות, כמו גם עמידות למחלות ומזיקים 6,7. הכלאה בין-מינית בין C. moschata ו- C. pepo היא לא רק אסטרטגיה חשובה לאינטרוגרסיה של תכונות רצויות בין שני המינים, אלא גם מאפשרת את הרחבת הבסיס הגנטי בתוכניות רבייה 7,8.

הצלבות מוקדמות בין C. moschata ו- C. pepo נעשו כדי לקבוע את ההתאמה שלהם ו / או מחסומים טקסונומיים 9,10,11, בעוד שמחקרים מאוחרים יותר התמקדו בעיקר בהעברת תכונות רצויות12,13,14. הכלאה בין-מינית בין שני המינים התמקדה בהעברת תכונות חדשות כגון הרגל גידול של שיח או שיח למחצה ושיפור התשואה מ- C. pepo יחד עם עמידות למחלות, הסתגלות ללחץ אביוטי ומרץ מוגבר מ- C. moschata14,15,16. לדוגמה, הצלבות ספציפיות בין C. pepo (P5) ו- C. moschata (MO3) הביאו לתפוקת פירות גבוהה יותר 13, בעוד ש- C. moschata accessions (מקומי ניגרי ומנין) היו בשימוש נרחב כמקור העיקרי לעמידות בפני נגיפי פוטיוירוס בתרבויות C. pepo מעובדות 17,18.

מחקרים קודמים הראו כי הכלאה בין C. moschata ו- C. pepo אפשרית אך קשה 8,15. הצלבים הבין-ספציפיים עלולים לגרום לכך שלא יהיו פירות (הפלה), פירות פרתנוקרפיים נטולי זרעים בני קיימא (זרעים ריקים), פירות ללא זרעים שבהם העוברים הלא בוגרים לא מצליחים להתפתח (stenospermocarpy), או פירות עם מעט עוברים לא בשלים שניתן להציל לצמחים בוגרים באמצעות הצלת עוברים15,16. לדוגמה, לא הושגו זרעים בני קיימא על ידי חציית C. pepo (מלכת השולחן, האם) עם C. moschata (גבינה גדולה, אבהית), עם זאת, הצלב ההדדי הניב 57 זרעים בני קיימא מתוך 134 האבקה9. הייאז השיגה זרעים בני קיימא מצלבי C. moschata ו- C. pepo רק כאשר צלבים נעשו בשעה 04:00 בבוקר באמצעות אבקה שאוחסנה בטמפרטורה של 10 מעלות צלזיוס במשך הלילה19. באגט חצה שמונה זנים שונים של C. moschata עם C. pepo (דליקטה) ודיווח כי מתוך 103 האבקה כוללת, התקבלו 83 פירות שנראו תקינים, אך אף אחד מהם לא הכיל זרעים בני קיימא8. בהצלבה בין C. pepo (S179) ו- C. moschata (NK), Zhang et al. השיגו 15 פירות עם 2,994 זרעים, אך רק 12 מהם היו בני קיימא בעוד שהשאר הציגו התפתחות בסיסית בלבד. מחקרים אלה מצביעים על כך שלמרות שמעבר בין-ספציפי בין C. moschata ל- C. pepo מועיל מאוד, השגת פירות עם זרעים בני קיימא מהצלבים דורשת16.

הצלת עוברים הוצעה כשיטה מתאימה להתגבר על בעיות הנובעות מהפלה מוקדמת או מעוברים שפותחו בצורה גרועה והיא אחת הטכניקות המוקדמות והמוצלחות ביותר בתרבית במבחנה להתחדשות של עוברים לא בשלים16,20. הצלת עוברים כוללת תרבית מבחנה של עוברים לא מפותחים/לא בשלים ולאחר מכן העברה למדיום מזין סטרילי כדי להקל על התאוששות השתילים ובסופו של דבר צמחים בוגרים21. למרות שהצלת עוברים משמשת בדרך כלל בגידול סקווש, חסר תיאור מפורט של המתודולוגיה המתאימה שתאפשר את יישומה השגרתי. שימוש בטכניקת הצלת עוברים כדי להתגבר על מחסומי הכלאה בין-ספציפיים במיני Cucurbita דווח כבר בשנת 195422. עם זאת, ההצלחה של הצלת עוברים במחקרים המוקדמים לא דווחה או נמוכה מאוד. Metwally et al. דיווחו על שיעור הצלחה של 10% (התחדשות לצמחים בוגרים) בקרב 100 עוברים היברידיים בין-ספציפיים שניצלו מהכלאה בין C. pepo ו- C. martinezii23. Sisko et al. דיווחו על שיעור הצלחה משתנה של התחדשות עוברים בקרב עוברים שהתקבלו משילובים צולבים שונים: שיעור ההתחדשות של בני כלאיים שהושגו על ידי חציית C. maxima (Bos. Max) ו- C. pepo (הבהלה לזהב) היה 15.5%, עבור C. pepo (קישואים) ו- C. moschata (הוקאידו) היה 20%, ואילו עבור C. pepo (הבהלה לזהב) ו- C. moschata (דולגה) הוא היה 37.5%24. בנוסף לגנוטיפ, המדיה ותנאי התרבית במבחנה הם גורמים חשובים להצלחת הטכניקה25,26. במחקר הנוכחי נבדקו שילובי צלב שונים בין C. moschata ו- C. pepo, ופותחה מתודולוגיה פשוטה לשימוש בטכניקת הצלת העוברים בסקווש. פיתוח טכניקת הצלת עוברים פשוטה וקלה לשחזור תאפשר הכלאה בין-מינית ושיפור הנבטים בתוכניות גידול סקווש.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. שתילה והאבקה

הערה: חשוב לזהות גנוטיפים תואמים שההכלאה שלהם תביא לסט פירות ולייצור עוברים בני קיימא.

  1. תנאי שתילה ותחזוקה
    1. השג זרעים של גנוטיפים של דלעת (cultivars/accessions) להכלאה (טבלה 1).
    2. מלאו 50 תאים התחלתיים (25 ס"מ רוחב x 50 ס"מ אורך) עם חומר עציץ מתוקן עם דשן NPK שלם המכיל 1.38 גרם/ק"ג N, 1.38 גרם/ק"ג P ו-1.38 גרם/ק"ג K.
    3. זורעים זרעים לעומק השווה לאורכם ומכסים במדיום עציצים. להשקות את הדירות מבלי ליצור מים עומדים. לאחר מכן, שמרו על המדיה לחה על ידי השקיה ידנית פעם ביום.
    4. בשלב השני של עלי אמת, השתלו את השתילים לתוך עציצים בקוטר 25 ס"מ עד 30 ס"מ מתוקנים עם דשן NPK שלם ב 3 כפות / סיר. דשן את הצמחים פעם בשבוע עם 500 מ"ל/סיר של דשן נוזלי המכיל NPK 20:20:20 הוסיף לריכוז של 1 גרם לכל גלון מים.
    5. לשמור על צמחים בחממה בטמפרטורות שבין 22-28 מעלות צלזיוס תחת משטר אור טבעי. עבור גנוטיפים מתפתלים, ספקו סורג תומך בחממה (איור 1).
  2. ביצוע האבקות
    1. בדרך כלל, פריחה בדלעת מתחילה בגיל 6 עד 8 שבועות מהזריעה, תלוי בזן (איור 2A,B). התחילו לבצע הכלאה מבוקרת (צלבים) ברגע שהצמחים מתחילים לפרוח. בתנאי חממה, האבקה יכולה להיעשות כל השנה.
    2. זהה פרחים זכריים ונקביים של זני C. pepo ו- C. moschata שיהיו מוכנים להאבקה למחרת. כדי לזהות פרחים כאלה, בדוק אם יש פרחים שעלי הכותרת שלהם הם בעלי גוון צהוב אך אינם פתוחים. הדביקו בעדינות את הפרחים הסגורים בחלקם העליון באמצעות סרט מיסוך כדי למנוע האבקה מקרית של חרקים (איור 2C,D).
    3. בבוקר יום המחרת, הפרחים מוכנים להאבקה. בצע האבקה לפני 10:00 בבוקר כדי לשפר את שיעור ההצלחה של הכלאה27.
    4. פתח את פרחי הנקבה והזכר על ידי הסרה עדינה של החלק העליון המודבק של עלי הכותרת. הסירו את עלי הכותרת מהפרח הזכרי והעבירו את האבקה על-ידי שפשוף עדין של הפורקן על הסטיגמה של הפרח הנקבי (איור 3A).
    5. לאחר ההאבקה, מיד לסגור את הפרח הנקבי המואבק עם סרט מיסוך. השתמשו בתג כדי לתעד את תאריך ההאבקה ולציין את ההורים האבהיים והאימהיים שבהם נעשה שימוש בצלב (איור 3B).
    6. צלב מוצלח מסומן על ידי שחלה מורחבת אשר יוצרת במהירות פרי קטן תוך שבוע אחד (איור 4A). לאחר מכן הצמח מוכן לקטיף 45-55 ימים לאחר האבקה28 (איור 4B).

2. טכניקת הצלת עוברים

  1. היערכות למדיה
    1. הכינו מלאי אנטיביוטיקה: עבור cefotaxime (מלח נתרן), להמיס את האנטיביוטיקה ב 4 מ"ל של מים deionized או מזוקקים, לסנן דרך מסנן מזרק סטרילי 0.22 μm, ולעשות 0.5 מ"ל aliquots. יש לאחסן בטמפרטורה של -20°C. תמיסת המלאי המתקבלת תהיה בריכוז של 250 מ"ג/מ"ל.
    2. עבור אמפיצילין (מלח נתרן), יש להמיס את האבקה ב-10 מ"ל מים, לסנן דרך מסנן מזרק סטרילי של 0.22 מיקרומטר, ולאליקוט במלאי של 1 מ"ל בריכוז סופי של 100 מ"ג/מ"ל. יש לאחסן בטמפרטורה של -20°C.
    3. הפוך את Murashige ו- Skoog (MS) לבינוניים על ידי המסת 2.45 גרם של בינוני (ריכוז 4.91 גרם לליטר) ב-500 מ"ל של מים מזוקקים בבקבוק של 1 ליטר. הוסיפו 1.5 גרם של מסטיק גלן ואוטוקלאב בטמפרטורה של 121 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות. מסטיק הגלן מתמוסס לחלוטין במהלך האוטוקלבינג.
    4. לאחר autoclaving, לקרר את המדיום על ידי הנחת הבקבוק באמבט מים ב 50 מעלות צלזיוס. מוציאים את מלאי האנטיביוטיקה מהמקפיא ומפשירים אותם בארון הזרימה הלמינרית.
    5. מעבירים את הבקבוק הבינוני למכסה המנוע של הזרימה הלמינרית. הוסיפו 0.6 מ"ל של תמיסת מלאי cefotaxime (250 מ"ג/מ"ל) ו-0.25 מ"ל של מלאי אמפיצילין (100 מ"ג/מ"ל) לבקבוק הבינוני וערבבו היטב. יוצקים כ-7 מ"ל מהמדיום לתוך צלחת פטרי סטרילית (60 מ"מ x 15 מ"מ).
    6. תנו למדיום להתמצק בצלחות הפטרי למשך כ-15-20 דקות. סוגרים את צלחות הפטרי בעטיפת איטום ומניחים אותן בקופסת אחסון. יש לאחסן בטמפרטורת החדר.
  2. הצלת עוברים
    1. לפני שתתחיל, נקו ועקרו את ארון זרימת האוויר הלמינרי עם 70% אלכוהול אתילי.
    2. קצרו את פרי הדלעת על-ידי שבירה/חיתוך שלו מהגפן הראשית וחטאו את משטח הפרי על-ידי שטיפה עם חומר ניקוי נוזלי (לדוגמה, 0.3% כלורוקסילנול) בכיור המעבדה עד להסרת כל הלכלוך הרופף (איור 5A).
    3. יש לשטוף במי ברז בשפע. יבשו את הפרי במגבות נייר נקיות. העבירו את הפרי לארון זרימת האוויר הלמינרי (איור 5B).
    4. פני השטח מעקרים את הפרי על ידי התזת 70% אתנול על הפרי בארון הסטרילי של זרימת האוויר הלמינרית. חצו את הפרי בסכין סטרילית (איור 5C) והוציאו את הזרעים.
    5. השתמשו במלקחיים סטריליים כדי לפתוח באופן אספטי את שכבת הזרעים ולחשוף את העוברים הלא בשלים (איור 6). הניחו בזהירות את העוברים הלא בשלים בצלחת פטרי המכילה MS בינוני בתוספת cefotaxime ואמפיצילין (איור 7A). סוגרים את צלחת הפטרי ואוטמים בסרט עטיפה.
      הערה: בהתאם לגודל העובר, ניתן להכניס חמישה או שישה עוברים לצלחת פטרי.
    6. מניחים את צלחות הפטרי האטומות עם העוברים בתא גידול מתחת ל-16 שעות פוטופריוד בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס ו-70% לחות יחסית. אם מתרחש זיהום, מיד תת-תרבות העוברים הלא מזוהמים לצלחת חדשה עם אותו מדיום.
    7. הקוטילדונים יתחילו להתרחב לאחר 4 ימים ויהפכו לירוקים תוך 10 ימים (איור 7B). בשלב זה, במידת הצורך, לבצע subculturing לתוך לוחות חדשים המכילים את אותו מדיום כדי לאפשר הרחבת רקמות. השורשים יתחילו להופיע ב-14 יום (איור 7C), וב-21 יום יהיו לצמחים שורשים מורחבים ולקוטילדונים (איור 7D).
      הערה: מדיום התרבית המשמש בפרוטוקול מתאים להבחנה ליורה ושורשים ללא ויסות גדילה משלימים.
    8. בשלב זה, הסירו את השתילים מכלי הפטרי ושטפו בעדינות את המדיה מהשורשים במי ברז (איור 8). הניחו את הצמחים במיכל פלסטיק (14 ס"מ על 9 ס"מ על 4 ס"מ) וכסו את השורשים במגבות נייר רטובות (איור 9A). מכסים את המיכל ומרחים מחדש את מגבות הנייר לפי הצורך.
    9. שומרים את המכלים בטמפרטורת החדר (25-28 מעלות צלזיוס) ועם פוטופריוד של 16 שעות. שלב זה יאקלם את הצמחים. לאחר התאקלמות במשך 7-10 ימים במיכל, השתילים יהיו באורך של כ -3-4 אינץ '. במהלך תקופה זו, יש להרטיב מחדש את מגבות הנייר לפי הצורך.
    10. מעבירים את השתילים ל-50 תאי התחלה (25 ס"מ רוחב X 50 ס"מ אורך) מתוקנים עם דשן כפי שתואר קודם לכן ומעבירים אותם לחממה (איור 9B). אין שתילים מעל המים כדי למנוע ריקבון; יש להוסיף כ-10-20 מ"ל לתא לפי הצורך.
    11. בשלב השני עד השלישי של עלי אמת, השתיל את השתילים בעציצים בקוטר 30 ס"מ מלאים בחומר עציצים מתוקן בדשן כפי שתואר קודם לכן (איור 10A). ספקו תמיכה לצמחי גפנים ובצעו הכלאה מבוקרת כאשר הצמחים מתחילים לפרוח, כפי שתואר קודם לכן (איור 10B).
    12. תחזקו את הצמחים בחממה בטמפרטורות שבין 22-28 מעלות צלזיוס תחת משטר אור טבעי. להעריך את הצמחים עבור תכונות פירות וזרעים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

כדאיות סט פירות וזרעים
נערכה בדיקה ראשונית לקביעת כדאיות סט הפירות והזרעים במגוון שילובים צולבים. בסך הכל נבחרו 15 גנוטיפים של דלעת, ארבעה C. pepo ו-11 C. moschata, (טבלה 1). מתוך 24 צירופי הצלב הבין-ספציפיים שנוסו, הושגה ערכת פירות עבור 22 (טבלה 2), המייצגת הצלחה כוללת של >92% בערכת הפירות. לא הושגו פירות בוגרים על ידי חציית O ו-M ו-E ו-J, בעוד שהמספר הגבוה ביותר של פירות (n = 6) הושגו על ידי חציית F ו-J (טבלה 2). מספר הפרחים שהו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

ישנם שני צווארי בקבוק עיקריים להכלאה בין-מינית מוצלחת בין C. moschata ו- C. pepo: מחסום תאימות צולבת, הנקבע על ידי היענות גנוטיפית לייצור עוברים היברידיים, ומחסומים לאחר ההפריה, המעכבים את התפתחותם של עוברים היברידיים לזרעים רגילים. כפי שדווח בעבר על דלעת, בדיקת התאימות הצולבת במחקר הנוכחי גילתה כי רוב הפרי התפתח באופן חלקי, כאשר רוב הזרעים אינם ניתנים להשגה16. לגנוטיפ ההורי יש השפעה ניכרת על התאימות של הכלאה בין-מינית בין C. moschata ו- C. pepo. מבין 24 צירופי ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים על היעדר ניגוד עניינים.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי המכון הלאומי למזון וחקלאות של USDA, פרויקט NRS מס '. FLA-TRC-006176 והמכון למדעי המזון והחקלאות של אוניברסיטת פלורידה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
אמפיציליןפישר סיינטיפיקBP1760-5
אוטוקלאבסטריסAMSCO LAB 250
איזון
צפוטקסיםסיגמא אלפריךC 7039
צינורות צנטריפוגה (1.5 מ"ל)סיגמא אלפריךT9661
חומר ניקוי
אתנול, 95%מלקחיים של Decon Labs2805HC
VWR82027-408
מסטיק גלאןCaisson LaboratoriesG024
תא גידול או מדף
מואר מכסה מנוע למינרי / ארון בטיחות ביולוגיתThe Baker Company, IncEdgegard
נייר דבק UlineS-11735
מדיה בקבוק
Murashige & Skoog Medium ResearchProducts InternationalM10200
NPK דשן (20-20-20)BWI Companies, Inc  PR200
Osmocote Plus דשןBWI Companie,s IncOS90590
Parafilm MSigma AlfrichP7793
צלחת פטרי (60 x 15 מ"מ)USA Scientific, Inc8609-0160
עציצים לצמחיםBWI Companies, IncNP4000BXL
מיכלי מזון מפלסטיק, בשימוש חוזראוסקר מאייר4470003330
תגי תלייה מפלסטיקשל אמזוןB07QTZRY6T
ג'וליגארדנרPro-Line C/B
מגשי התחלה שתילים BWICompanies Incמסנן
(0.22 אום)ExtraGeneB25CA022-S
הוםדיפו  2A060006
אמבטיית
תערובת עציצים מזרק GPPF128S4 תמיכה בסבכה מים

מקורות

  1. Paris, H. S. Genetic Resources of Pumpkins and Squash, Cucurbita spp. Genetics and Genomics of Cucurbitaceae. Plant Genetics and Genomics: Crops and Models. Grumet, R., Katzir, N., Garcia-Mas, J. 20, (2016).
  2. Gong, L., Stift, G., Kofler, R., Pachner, M., Lelley, T. Microsatellites for the genus Cucurbita and an SSR-based genetic linkage map of Cucurbita pepo L. Theoretical and Applied Genetics. 117 (1), 37-48 (2008).
  3. Paris, H. S., et al. Assessment of genetic relationships in Cucurbita pepo (Cucurbitaceae) using DNA markers. Theoretical and Applied Genetics. 106 (6), 971-978 (2003).
  4. Robinson, R. W., Decker-Walters, D. S. Cucurbits. , CAB International. Wallingford, Oxon, UK. (1997).
  5. Teppner, H. Cucurbita pepo (Cucurbitaceae)-history, seed coat types, thin coated seeds and their genetics. Phyton (Horn). 40 (1), 1-42 (2000).
  6. Hazra, P., Mandal, A. K., Dutta, A. K., Ram, H. H. Breeding pumpkin (Cucurbita moschata Duch. Ex Poir.) for fruit yield and other characters. International Journal of Plant Breeding. 1 (1), 51-64 (2007).
  7. Paris, H. S. History of the cultivar-groups of Cucurbita pepo. Horticultural Reviews-Westport Then New York. 25, 71(2001).
  8. Baggett, J. R. Attempts to cross Cucurbita moschata (Duch.) Poir. 'Butternut and C. pepo L. 'Delicata'. The Cucurbit Genetics Cooperative. 2, 32-34 (1979).
  9. Erwin, A. T., Haber, E. S. Species and Varietal Crosses in Cucurbits. Agricultural Experiment Station, Iowa State College of Agriculture and Mechanical Arts. , (1929).
  10. Whitaker, T. W., Bohn, G. W. The taxonomy, genetics, production and uses of the cultivated species of Cucurbita. Economic Botany. 4 (1), 52-81 (1950).
  11. Bemis, W. P., Nelson, J. M. Interspecific hybridization within the genus Cucurbita I, fruit set, seed and embryo development. Journal of the Arizona Academy of Science. 2 (3), 104-107 (1963).
  12. Washek, R. L., Munger, H. M. Hybridization of Cucurbita pepo with disease resistant Cucurbita species. The Cucurbit Genetics Cooperative. 6, 92(1983).
  13. Davoodi, S., Olfati, J. A., Hamidoghli, Y., Sabouri, A. Standard heterosis in Cucurbita moschata and Cucurbita pepo interspecific hybrids. International Journal of Vegetable Science. 22 (4), 383-388 (2016).
  14. De Oliveira, A. C. B., Maluf, W. R., Pinto, J. E. B., Azevedo, S. M. Resistance to papaya ringspot virus in summer squash Cucurbita pepo L. introgressed from an interspecific C. pepo× C. moschata cross. Euphytica. 132 (2), 211-215 (2003).
  15. Rakha, M. T., Metwally, E. I., Moustafa, S. A., Etman, A. A., Dewir, Y. H. Production of Cucurbita interspecific hybrids through cross pollination and embryo rescue technique. World Applied Sciences Journal. 20 (10), 1366-1370 (2012).
  16. Zhang, Q. I., Yu, E., Medina, A. Development of advanced interspecific-bridge lines among Cucurbita pepo, C. maxima, and C. moschata. HortScience. 47 (4), 452-458 (2012).
  17. Brown, R. N., Bolanos-Herrera, A., Myers, J. R., Miller Jahn, M. Inheritance of resistance to four cucurbit viruses in Cucurbita moschata. Euphytica. 129 (3), 253-258 (2003).
  18. Pachner, M., Paris, H. S., Winkler, J., Lelley, T. Phenotypic and marker-assisted pyramiding of genes for resistance to zucchini yellow mosaic virus in oilseed pumpkin (Cucurbita pepo). Plant Breeding. 134 (1), 121-128 (2015).
  19. Hayase, H. Cucurbita-crosses. XV. Flower pollination at 4 am in the production of C. pepo x C. moschata F1 hybrids. Japanese Journal of Breeding. 13 (2), 76-82 (1963).
  20. Reed, S. Embryo rescue. Plant development and biotechnology. , 235-239 (2004).
  21. Sharma, D. R., Kaur, R., Kumar, K. Embryo rescue in plants-a review. Euphytica. 89 (3), 325-337 (1996).
  22. Wall, J. R. Interspecific hybrids of Cucurbita obtained by embryo culture. Proceedings of the American Society of Horticultural Science. 63, 427-430 (1954).
  23. Metwally, E. I., Haroun, S. A., El-Fadly, G. A. Interspecific cross between Cucurbita pepo L. and Cucurbita martinezii through in vitro embryo culture. Euphytica. 90 (1), 1-7 (1996).
  24. Sisko, M., Ivancic, A., Bohanec, B. Genome size analysis in the genus Cucurbita and its use for determination of interspecific hybrids obtained using the embryo-rescue technique. Plant Science. 165 (3), 663-669 (2003).
  25. Giancaspro, A., et al. Optimization of an in vitro embryo rescue protocol for breeding seedless table grapes (Vitis vinifera L.) in Italy. Horticulturae. 8 (2), 121(2022).
  26. Warchol, M., et al. The effect of genotype, media composition, pH and sugar concentrations on oat (Avena sativa L.) doubled haploid production through oat x maize crosses. Acta Physiologiae Plantarum. 40 (5), 1-10 (2018).
  27. Nepi, M., Pacini, E. Pollination, pollen viability and pistil receptivity in Cucurbita pepo. Annals of Botany. 72 (6), 527-536 (1993).
  28. Harvey, W. J., Grant, D. G., Lammerink, J. P. Physical and sensory changes during development and storage of buttercup squash. New Zealand Journal of Crop and Horticultural Science. 25 (4), 341-351 (1997).
  29. Moon, P., Meru, G. Embryo rescue of aged Cucurbita pepo seeds using squash rescue medium. Journal of Horticultural Science and Research. 2 (1), 62-69 (2018).
  30. Nuñez-Palenius, H. G., Ramírez-Malagón, R., Ochoa-Alejo, N. Muskmelon embryo rescue techniques using in vitro embryo culture. Plant Embryo Culture. , Humana Press. 107-115 (2011).
  31. Vining, K. J., Loy, J. B. Seed development and seed fill in hull-less seeded cultigens of pumpkin (Cucurbita pepo L). Cucurbitaceae 98: Evaluation and Enhancement of Cucurbit Germplasm. McCreight, J. M. , ASHS Press. Alexandria, VA. 64-69 (1998).
  32. Vining, K. J. Seed development in hull-less-seeded pumpkin (Cucurbita pepo L.). , University of New Hampshire. L.), Durham, NH. M.S. Thesis (1999).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

הערכת דובדבנים של דלעתמיני Cucurbitaעוברים לא בשליםהפראה מבוקרתמצע MSהתחדשות צמחיםגידול בחממהעיקור זרעים
פרוטוקול הצלת עוברים להכלאה בין-מינית בסקווש
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.