הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטות לביטוי טרנסגני בלבבות חולדות ועכברים על ידי הזרקה ישירה של הנגיף בהנחיית אקוקרדיוגרפיה. שיטות להערכת הרגישות של לבבות להפרעות קצב חדריות על ידי גירוי חשמלי מתוכנת של לבבות מבודדים, Langendorff-perfused מוסברים גם כאן.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
ביטוי טרנסגני נגיפי בלבבות מכרסמים והערכת הסיכון להפרעות קצב לב
במאמר זה
סיכום
תקציר
מחלות לב הן הגורם המוביל לתחלואה ולתמותה ברחבי העולם. בשל קלות הטיפול והשפע של זנים מהונדסים, מכרסמים הפכו למודלים חיוניים למחקר לב וכלי דם. עם זאת, הפרעות קצב לב קטלניות ספונטניות שלעתים קרובות גורמות לתמותה בחולי מחלות לב הן נדירות במודלים של מכרסמים של מחלות לב. הסיבה העיקרית לכך היא ההבדלים בין המינים בתכונות החשמליות של הלב בין בני אדם למכרסמים ומהווה אתגר לחקר הפרעות קצב לב באמצעות מכרסמים. פרוטוקול זה מתאר גישה המאפשרת ביטוי טרנסגני יעיל בשריר הלב של עכברים וחולדות באמצעות זריקות תוך-שריריות מונחות אקוקרדיוגרפיה של נגיף רקומביננטי (אדנו-וירוס ונגיף הקשור לאדנו). עבודה זו גם מתווה שיטה המאפשרת הערכה אמינה של רגישות הלב להפרעות קצב באמצעות עכברים ולבבות עכברים וחולדות מבודדים, לנגנדורף, עם גירויים חשמליים אדרנרגיים ומתוכנתים. טכניקות אלה הן קריטיות לחקר הפרעות בקצב הלב הקשורות לשיפוץ לב שלילי לאחר פציעות, כגון אוטם שריר הלב.
מבוא
מחלות לב וכלי דם הן סיבת המוות המובילה בעולם, וגבו את חייהם של 18 מיליון אנשים בשנת 2017 לבדה1. מכרסמים, במיוחד עכברים וחולדות, הפכו למודל הנפוץ ביותר במחקר קרדיווסקולרי בשל קלות הטיפול והזמינות של ביטויי יתר מהונדסים שונים או קווי נוקאאוט. מודלים של מכרסמים היו בסיסיים להבנת מנגנוני המחלה ולזיהוי מטרות טיפוליות חדשות פוטנציאליות באוטם שריר הלב2, יתר לחץ דם3, אי ספיקת לב4 וטרשת עורקים5. עם זאת, השימוש במכרסמים במחקרים על הפרעות קצב לב מוגבל על ידי גודל הלב הקטן שלהם וקצב הלב המהיר יותר בהשוואה למודלים אנושיים או בעלי חיים גדולים. לכן, הפרעות קצב קטלניות ספונטניות בעכברים או בחולדות לאחר אוטם שריר הלב הן נדירות2. החוקרים נאלצים להתמקד בשינויים משניים עקיפים שעשויים לשקף מצע פרו-אריתמי, כגון פיברוזיס או ביטוי גנים, מבלי להראות שינויים משמעותיים בעומס הפרעות קצב או נטיות פרו-קצביות. כדי להתגבר על מגבלה זו, שיטה המאפשרת הערכה אמינה של הרגישות של לבבות עכברים וחולדות לטכיאריתמיות חדריות לאחר שינוי גנטי 6,7 או אוטם שריר הלב2 מתוארת בפרוטוקול הנוכחי. שיטה זו משלבת גירוי קולטן אדרנרגי עם גירוי חשמלי מתוכנת כדי לגרום לטכיאריתמיות חדריות בלבבות עכברים וחולדותמבודדים, מסוג Langendorff-perfused.
גישות סטנדרטיות להעברת גנים נגיפיים ברקמת שריר הלב של מכרסמים כרוכות לעתים קרובות בחשיפת הלב על ידי בית החזה 9,10,11, שהוא הליך פולשני וקשור להתאוששות מאוחרת של בעלי החיים לאחר ההליך. מאמר זה מתאר שיטה של הזרקה ישירה של וירוס בהזרקה ישירה של הנגיף תחת הדרכת הדמיה אולטרסאונד לביטוי יתר של טרנסגנים. הליך פחות פולשני זה מאפשר התאוששות מהירה יותר של בעלי החיים לאחר הזרקה נגיפית ופחות פגיעה ברקמות, בהשוואה לבית החזה, מפחית כאב ודלקת לאחר הניתוח בבעל החיים, ובכך מאפשר הערכה טובה יותר של ההשפעות של גנים מהונדסים על תפקוד הלב.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל השיטות והנהלים המתוארים אושרו על ידי הוועדה לביקורת אתית של מחקר בבעלי חיים באוניברסיטת אוטווה והוועדה לבדיקת בטיחות ביולוגית במכון הלב של אוניברסיטת אוטווה. פרוטוקולי הבטיחות שפותחו כוללים כי כל ההליכים העוסקים באדנווירוס רקומביננטי או בווירוס הקשור לאדנו (AAV) בוצעו בארון בטיחות ביולוגית ברמה II. כל הפריטים שהיו במגע עם הנגיף פורקו לחלוטין לאחר הניסוי. במחקר הנוכחי נעשה שימוש בעכברי Ctnnb1 flox/flox ו-αMHC-MerCreMer (בני 8-12 שבועות, משני המינים) ובחולדות ספראג-דאולי (200-250 גרם, זכר). החיות התקבלו ממקורות מסחריים (ראו טבלת חומרים). כל ההליכים העוסקים בבעלי חיים בוצעו על ידי אנשי צוות שהוכשרו ואושרו על ידי ועדות רגולטוריות מוסדיות. ציוד מגן אישי מתאים שימש במהלך כל ההליכים.
1. ביטוי טרנסגנים ויראליים ברקמות חדריות מכרסמים
הערה: אחסן אדנו-וירוס רקומביננטי או AAV המבטא את גן היעד ואת וירוס הבקרה המתאים, כגון Ad-GFP (טיטר של 1 x 10 10 PFU/mL) או AAV9-GFP (טיטר של 1 x 1013 GC/mL) (ראה טבלת חומרים), במקפיא של −80 מעלות צלזיוס.
- ביום הזרקת הנגיף, הפשירו את הנגיף על הקרח. שאפו את הנגיף המבטא את גן המטרה ואת נגיף הבקרה לשני מזרקים נפרדים (נפח = 50 μL) עם 30 G 1/2 מחטים ושמרו על קרח עד לשימוש.
הערה: יש להסיר בזהירות את כל הבועות במזרק ובמחט. - מתן בופרנורפין לחולדות או עכברים (0.05 מ"ג/ק"ג לחולדות, 0.1 מ"ג/ק"ג לעכברים, תת-עוריים), שעה אחת לאחר מכן לגרום להרדמה באמצעות 3% איזופלורן, ולשמור על איזופלורן ב-2% (ב-100% חמצן בקצב זרימה של 0.5-1.0 ליטר/דקה) לצורך ההליך הבא.
- צובטים בעדינות את גוף החיה (למשל, הזנב) עם זוג מלקחיים, ואם החיה אינה מגיבה לצביטה בתנועות גוף כלשהן, מאושר הרדמה נכונה.
- יש לשמור על טמפרטורת הגוף ב-37°C באמצעות כרית חימום חשמלית. לגלח את השיער באזור החזה באמצעות גוזז שיער.
הערה: יש להקפיד על שימוש בכרית חימום חשמלית עקב פיזור חום לא אחיד פוטנציאלי. - יש למרוח משחה אופטלמית על שתי העיניים כדי למנוע את התייבשות הקרנית.
- השאירו את בעל החיים במצב שכיבה והשתמשו במערכת הדמיה פרה-קלינית (ראו טבלת חומרים) להדמיית אולטרסאונד של לב החיה בכיוון הציר הקצר.
הערה: השלבים הבאים מבוצעים בארון בטיחות ביולוגית ברמה II המספק סביבה סטרילית. נהלי בטיחות סטנדרטיים, כולל אלה עם טיפול בטוח במחט, מיושמים. - לעקר את אזור החזה התחתון השמאלי של החיה עם סיבובים מתחלפים של קרצוף מבוסס יוד או על בסיס כלורהקסידין ואלכוהול שלוש פעמים בתנועה מעגלית.
- בהנחיית הדמיית אולטרסאונד, יש להחדיר את המחט 30 G 1/2 של המזרק המכיל את הנגיף כפי שהוכן בשלב 1.1. לתוך החזה של החיה דרך צד החזה התחתון השמאלי של הגוף.
- מתקרבים לקצה המחט לתוך הקיר החופשי הקדמי של החדר השמאלי ומזריקים באיטיות 10-15 μL של הנגיף. ודא הזרקה מוצלחת בתמונות אולטרסאונד על ידי הבהירות המשופרת ליד קצה המחט.
הערה: כמות הנגיף המוזרק בכל אתר אינה עולה על 15 μL כדי למנוע נזק פיזי לרקמות שריר הלב. - למשוך את המחט מהלב ולהחדיר אותו לאזורים אחרים של החדר השמאלי עבור זריקה שנייה ושלישית של אותה כמות של הנגיף.
הערה: המספר הכולל של אתרי ההזרקה נקבע על ידי תכנון הניסוי. אם נדרש ביטוי טרנסגני מוקדי, יש צורך בזריקה אחת בלבד; אם נדרש ביטוי טרנסגני מפוזר יותר, יש צורך בדרך כלל באתרי הזרקה מרובים (שלושה עד חמישה). - לאחר השלמת הזריקות, להחזיר את החיה לכלוב שלה.
- עקוב בזהירות אחר החיה עד שהיא חזרה להכרה מספקת כדי לשמור על משענת החזה ולהחזיר אותה לחדר המגורים שלה.
- יש לתת בופרנורפין הידרוכלוריד (0.1 מ"ג/ק"ג, פעמיים ביום לעכברים, 0.05 מ"ג/ק"ג, פעמיים ביום לחולדות, תת-עוריות) לבעל החיים במשך היומיים הבאים. החזירו בעלי חיים לוויבריום ועקבו מדי יום אחר כל סימן חריג של כאב או מצוקה, ואם נמצאו, טפלו בבעלי חיים בהתאם לפרוטוקולים של הוועדה המוסדית לטיפול בבעלי חיים.
2. הערכה של רגישות להפרעות קצב לב
הערה: ב 4-6 ימים לאחר הזרקת אדנווירוס ו 1-2 שבועות לאחר הזרקת AAV, להעריך את הרגישות של לבבות בעלי חיים להפרעות קצב לב בעקבות שלבים 2.1.-2.2.
- בצע זלוף לנגנדורף של לב החולדה או העכבר.
- הכן תמיסת טירודה על ידי הוספת הדברים הבאים ל 1 ליטר מים: NaCl, 7.9 גרם (סופי = 135 mM); KCl, 0.37 גרם (5.0 מ"מ); CaCl2, 0.27 גרם (1.8 mM); MgCl 2, 0.24 גרם (1.2 מ"מ); HEPES, 2.38 גרם (10 מ"מ); וגלוקוז, 1.8 גרם (10 מ"מ). התאם את ה-pH ל-7.40 באמצעות NaOH (ראו טבלת חומרים).
- סנן את התמיסה באמצעות מסנן 0.2 מיקרומטר ובועה עם 100% O 2 ברציפות בשלבים 2.1.6.-2.2.8.
- לתת הפרין לחולדה או לעכבר (500 U/kg, הזרקה תוך-צפקית) וכעבור 10 דקות להרדים את החיה עם 3% איזופלורן. הקפידו על הרדמה מספקת עם צביטה עדינה על הגוף.
- השתמש באזמל כדי לבצע חתך אנכי של 1-1.5 ס"מ בקו אמצע עצם הבריח לכריתת בית החזה השמאלית ולחשוף את הלב.
- לאסוף את הלב על ידי חיתוך עם זוג מספריים ברמת קשת אבי העורקים ומיד לשים את הלב לתוך תמיסת טירוד קר כקרח.
הערה: יש להיזהר שלא לגרום נזק ללב במהלך איסוף הלב. - ניתן למצות את אבי העורקים של הלב באמצעות מחט קהה (18 גרם לחולדות; 23 גרם לעכברים) המחוברת למערכת פרפוזיה שונה של לנגנדורף (ראו טבלת חומרים) במצב קצב זרימה קבוע. התאם את קצב הזרימה כדי לשמור על לחץ הזלוף על 70-80 מ"מ כספית.
הערה: יש להסיר את כל הבועות במחט הזלוף לפני ביצוע קנולציה של אבי העורקים. שימוש במיקרוסקופ חיתוך מקל על הצינור. - מניחים את הלב המשומר בצלחת פלסטיקמצופה סיליקון 9, 10 ס"מ עם החדר השמאלי פונה כלפי מעלה ומחלחלים ללב 9,12 עם תמיסת טירודה O2-bubbled ב 37 מעלות צלזיוס.
- ודא את cannulation אבי העורקים הנכון בתחילת perfusion על ידי התבוננות שטיפת הדם מהלב במהלך שתיים עד שלוש פעימות הלב הראשונות ואת שינוי צבע הלב מאדום חיוור.
- הניחו את האלקטרודות של מערכת א.ק.ג. של בעלי חיים קטנים (ראו טבלת חומרים) סביב הלב על ידי החדרתן לציפוי הסיליקון אלסטומר בצלחת (איור 1). הקלט אק"ג באמצעות תוכנה תואמת.
- בצע גירוי קולטן אדרנרגי וגירוי חשמלי מתוכנת כדי לגרום לטכיאריתמיות חדריות.
- לאחר קנולציה מוצלחת של אבי העורקים, ממשיכים לחדור ללב עם תמיסת טירוד למשך 20 דקות כדי לייצב את הכנת הלב.
- הוסף איזופרוטרנול 1 μM (ראה טבלת חומרים) לתמיסת הטירודה המשמשת לזילוף לב בשלבים 2.2.3.-2.2.8.
- לאחר 10 דקות של זליגת איזופרוטארנול, עוררו את הלב בנקודת השיא באמצעות שתי אלקטרודות פלטינה המחוברות לממריץ חשמלי (ראו טבלת חומרים).
- התחילו עם הליך הגירוי (איור 2), הכולל 10 גירויים עוקבים (מרווחים של S1, 5 V, 100 אלפיות השנייה) שלאחריהם גירוי נוסף (S2) עם מרווח ראשוני של 80 אלפיות השנייה. הפחת שוב ושוב את מרווח S2 ב-2 אלפיות השנייה בכל פעם עד שלא ניתן עוד ללכוד את פעימות הלב (כלומר, להגיע לתקופת העקשנות היעילה של הלב, ERP)13.
- עקוב אחר כל טכיאריתמיות חדריות המושרות (כולל טכיקרדיה חדרית ופרפור חדרי) על ידי אק"ג.
- אם לא מושרות הפרעות קצב על ידי ההליך הנ"ל, הוסף גירוי נוסף נוסף (S3) לאחר S2 עם אותם מרווחים ראשוניים (80 אלפיות השנייה) וגזירה (על ידי 2 אלפיות השנייה) עד להגעה ל- ERP.
- אם עדיין לא מושרות טאכיאריתמיות חדריות, הוסיפו עוד גירוי אחד נוסף (S4) לאחר S3 עם אותם מרווחים ראשוניים ומרווחים עד להגעה ל-ERP.
- אם עדיין לא מושרות טאכיאריתמיות חדריות (כצפוי בבקרה על לבבות בריאים), הפסיקו את פרוטוקול הגירוי החשמלי וחשבו שהלב אינו ניתן להשראה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
כאשר עוקבים אחר הפרוטוקול המתואר כאן (איור 1), לב של חולדה או עכבר מבודד פועם בקצב וביציבות במשך 4 שעות לפחות. אם התכנון הניסיוני דורש תקופה ארוכה יותר של זלוף לב, כדאי להוסיף אלבומין לתמיסת הזלוף כדי להפחית את המופע של בצקת שריר הלב לאחר זלוףארוך 14. הכללת איזופרוטארנול בתמיסת הזלוף מחקה את הפעלת מערכת העצבים הסימפתטית המתרחשת במצבים קצביים רבים כגון אוטם שריר הלב ואי ספיקת לב. במהלך הגירוי החשמלי המתוכנת, הקצב המוצלח של הלב מאומת על ידי (1) לכידת פעימות הלב ביחס של ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
מספר שלבים הם קריטיים להצלחת הכנת הלב המבודד והמבודד של לנגנדורף. ראשית, חשוב להימנע מכל נזק ללב במהלך איסוף הלב (למשל, עקב סחיטה או חיתוך בשוגג עם המספריים). שנית, זה קריטי לשים את הלב שנאסף לתוך פתרון טירוד קר בהקדם האפשרי כי זה יעצור את פעימות הלב ולהפחית את צריכת החמצן של הלב. שלישית, אסור שהחדרת המחט לאבי העורקים תהיה עמוקה מדי – באופן אידיאלי, קצה המחט קרוב לרמת המסתם האאורטלי, כך שהלב מוחדר היטב דרך העורקים הכליליים. לבסוף, יש להסיר בועות במחט הזלוף לפני ביצוע קנולציה של אבי העורקים – בדרך כלל כדאי להפעיל את המשאב...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין אינטרסים כלכליים מתחרים.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי מענקי הפרויקט של המכונים הקנדיים לחקר הבריאות (CIHR) (PJT-148918 ו- PJT-180533, ל- WL), פרס חוקר הקריירה המוקדמת של CIHR (AR8-162705, ל- WL), קרן הלב והשבץ של קנדה (HSFC) מלגת מקדונלד ופרס חוקר חדש (S-17-LI-0866, ל- WL), מלגות סטודנטים (ל- JW ו- YX), ומלגת פוסט-דוקטורט (ל- AL) מאוניברסיטת אוטווה קרנות הקדשת לב במכון הלב. המחברים מודים למר ריצ'רד סימור על תמיכתו הטכנית. איור 2 נוצר עם Biorender.com עם רישיונות מאושרים.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 30 גרם 1/2 PrecisionGlide Needle | Becton Dickinson (BD) | 305106 | |
| וירוס הקשור לאדנו (AAV9-GFP) | Vector Biolabs | 7007 | |
| אדנו-וירוס (Ad-GFP) | וקטור Biolabs | 1060 | |
| אדנו-וירוס (Ad-Wnt3a) | Vector Biolabs | ADV-276318 | |
| ארון בטיחות ביולוגית (רמה II) | Microzone Corporation | N/A | דגם #: BK-2-4 |
| בופרנורפין | וטרינרגי | DIN 02342510 | |
| סידן כלוריד | סיגמא-אולדריץ' | 102378 | |
| D-גלוקוז | פישר כימיקל | D16-1 | |
| קוצץ שיער | WAHL Clipper Corporation | 78001 | |
| מזרק המילטון | סיגמא-אולדריץ' | 20701 | 705 LT, נפח 50 μ L |
| כרית חימום | Life Brand | E12107 | |
| Heparin | Fresenius Kabi | DIN 02264315 | |
| HEPES | Sigma-Aldrich | H4034 | |
| Isoflurane | Fresenius Kabi Ltd. | M60303 | |
| איזופרוטרנול הידרוכלוריד | סיגמא-אולדריץ' | 1351005 | |
| LabChart 8 תוכנה | ADInstruments Inc. | גרסה 8.1.5 | להקלטת א.ק.ג |
| מגנזיום כלוריד הקסהידרט | סיגמא-אולדריץ' | M2393 | |
| (Ctnnb1flox/flox) | עכברי Jackson Labs | 4152 | |
| (α MHC-MerCreMer) | Jackson Labs | 5650 | |
| מיקרוסקופ | Leica | S9i | עבור מתמר מערכת לנגנדורף |
| MS400 | VisualSonic Inc. | N/A | |
| Systane | DIN 02444062 | ||
| אשלגן כלורי (KCl) | Sigma-Aldrich | P9541 | |
| מד לחץ | NETECH | DigiMano 1000 | למערכת לנגנדורף |
| משאבת | קול-פארמר | UZ-77924-65 | למערכת לנגנדורף |
| עכברוש (ספראג-דולי, זכר) | נהר צ'ארלס | 400 | |
| להבי אזמל | Fine Science Tools | 10010-00 | |
| ידית אזמל | Fine Science Tools | 10007-12 | |
| סיליקון אלסטומר | למטה בע"מ | סילגארד 184 | למערכת לנגנדורף |
| מערכת א.ק.ג לבעלי חיים קטנים | ADInstruments Inc. | N/A | Powerlab 8/35 ו-Animal Bio Amp |
| נתרן כלוריד | סיגמא-אולדריץ' | S7653 | |
| נתרן הידרוקסיד | סיגמא-אולדריץ' | 567530 | |
| סטימולטור | IonOptix | MyoPacer EP | |
| VEVO3100 מערכת הדמיה פרה-קלינית | VisualSonic Inc. | לא ישים |
מקורות
- Virani, S. S., et al. Heart disease and stroke statistics-2020 update: A report from the American Heart Association. Circulation. 141 (9), 139(2020).
- Wang, J., et al. Cardiomyocyte-specific deletion of β-catenin protects mouse hearts from ventricular arrhythmias after myocardial infarction. Scientific Reports. 11 (1), 17722(2021).
- Wang, T., et al. Effect of exercise training on the FNDC5/BDNF pathway in spontaneously hypertensive rats. Physiological Reports. 7 (24), 14323(2019).
- Lin, H. B., et al. Innate immune Nod1/RIP2 signaling is essential for cardiac hypertrophy but requires mitochondrial antiviral signaling protein for signal transductions and energy balance. Circulation. 142 (23), 2240-2258 (2020).
- Karunakaran, D., et al. RIPK1 expression associates with inflammation in early atherosclerosis in humans and can be therapeutically silenced to reduce NF-κB activation and atherogenesis in mice. Circulation. 143 (2), 163-177 (2021).
- Gharibeh, L., et al. GATA6 is a regulator of sinus node development and heart rhythm. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 118 (1), 2007322118(2021).
- Lu, A., et al. Direct and indirect suppression of Scn5a gene expression mediates cardiac Na+ channel inhibition by Wnt signalling. Canadian Journal of Cardiology. 36 (4), 564-576 (2020).
- Liang, W., et al. Role of phosphoinositide 3-kinase {alpha}, protein kinase C, and L-type Ca2+ channels in mediating the complex actions of angiotensin II on mouse cardiac contractility. Hypertension. 56 (3), 422-429 (2010).
- Kapoor, N., Liang, W., Marban, E., Cho, H. C. Direct conversion of quiescent cardiomyocytes to pacemaker cells by expression of Tbx18. Nature Biotechnology. 31 (1), 54-62 (2013).
- Kim, N. K., Wolfson, D., Fernandez, N., Shin, M., Cho, H. C. A rat model of complete atrioventricular block recapitulates clinical indices of bradycardia and provides a platform to test disease-modifying therapies. Scientific Reports. 9 (1), 6930(2019).
- Cingolani, E., et al. Gene therapy to inhibit the calcium channel beta subunit: Physiological consequences and pathophysiological effects in models of cardiac hypertrophy. Circulation Research. 101 (2), 166-175 (2007).
- Ionta, V., et al. SHOX2 overexpression favors differentiation of embryonic stem cells into cardiac pacemaker cells, improving biological pacing ability. Stem Cell Reports. 4 (1), 129-142 (2015).
- Guss, S. B., Kastor, J. A., Josephson, M. E., Schare, D. L. Human ventricular refractoriness. Effects of cycle length, pacing site and atropine. Circulation. 53 (3), 450-455 (1976).
- Segel, L. D., Ensunsa, J. L. Albumin improves stability and longevity of perfluorochemical-perfused hearts. The American Journal of Physiology. 254, 1105-1112 (1988).
- Hong, P., et al. NLRP3 inflammasome as a potential treatment in ischemic stroke concomitant with diabetes. Journal of Neuroinflammation. 16 (1), 121(2019).
- Lin, H. B., et al. Macrophage-NLRP3 inflammasome activation exacerbates cardiac dysfunction after ischemic stroke in a mouse model of diabetes. Neuroscience Bulletin. 36 (9), 1035-1045 (2020).
- Lin, H. B., et al. Cerebral-cardiac syndrome and diabetes: Cardiac damage after ischemic stroke in diabetic state. Frontiers in Immunology. 12, 737170(2021).
- Brack, K. E., Narang, R., Winter, J., Ng, G. A. The mechanical uncoupler blebbistatin is associated with significant electrophysiological effects in the isolated rabbit heart. Experimental Physiology. 98 (5), 1009-1027 (2013).
- Allison, S., et al. Electroconductive nanoengineered biomimetic hybrid fibers for cardiac tissue engineering. Journal of Materials Chemistry. B. 5 (13), 2402-2406 (2017).
- Hamel, V., et al. De novo human cardiac myocytes for medical research: Promises and challenges. Stem Cells International. 2017, 4528941(2017).
- Liang, W., Lu, A., Davis, D. R. Induced pluripotent stem cell-based treatment of acquired heart block: The battle for tomorrow has begun. Circulation. Arrhythmia and Electrophysiology. 10 (5), 005331(2017).
- McLaughlin, S., et al. Injectable human recombinant collagen matrices limit adverse remodeling and improve cardiac function after myocardial infarction. Nature Communications. 10 (1), 4866(2019).
- Villanueva, M., et al. Glyoxalase 1 prevents chronic hyperglycemia induced heart-explant derived cell dysfunction. Theranostics. 9 (19), 5720-5730 (2019).
- Kanda, P., et al. Deterministic paracrine repair of injured myocardium using microfluidic-based cocooning of heart explant-derived cells. Biomaterials. 247, 120010(2020).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
