בפרוטוקול הנוכחי, פונקציית מחסום האנדותל של הבלוטה התת-מנדיבולרית (SMG) הוערכה על ידי הזרקת עוקבים פלואורסצנטיים משוקללים מולקולריים שונים לוורידים הזוויתיים של מודלים של חיות ניסוי in vivo תחת מיקרוסקופ סריקת לייזר של שני פוטונים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
אין ויוו זיהוי חדירות כלי דם בבלוטה תת-מנדיבולרית של עכבר
במאמר זה
סיכום
תקציר
לרוק תפקיד חשוב בבריאות הפה ובבריאות הכללית. תפקוד מחסום האנדותל השלם של כלי הדם מאפשר הפרשת רוק, בעוד שתפקוד לקוי של מחסום האנדותל קשור להפרעות רבות בהפרשת בלוטת הרוק. הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטת זיהוי חדירות פארא-תאית in vivo להערכת תפקודם של צמתים הדוקים של האנדותל (TJs) בבלוטות תת-מנדיבולריות של עכברים (SMG). ראשית, דקסטראנס עם תוויות פלואורסצנטיות עם משקלים מולקולריים שונים (4 kDa, 40 kDa או 70 kDa) הוזרקו לוורידים הזוויתיים של עכברים. לאחר מכן, ה-SMG החד-צדדי נותח ותוקן במחזיק המותאם אישית תחת מיקרוסקופ סריקת לייזר של שני פוטונים, ולאחר מכן צולמו תמונות עבור כלי דם, אצ'יני וצינורות. באמצעות שיטה זו, נצפתה הדליפה הדינמית בזמן אמת של העוקבים בגדלים שונים מכלי הדם לצדדים הבסיסיים של האצ'יני ואפילו על פני אפיתליה האצ'ינארית לתוך הצינורות כדי להעריך את השינוי בתפקוד מחסום האנדותל בתנאים פיזיולוגיים או פתופיזיולוגיים.
מבוא
בלוטות הרוק השונות מייצרות רוק, המשמש בעיקר כקו ההגנה הראשון מפני זיהומים ומסייע לעיכול, ובכך ממלא תפקיד חיוני בבריאות הפה ובבריאות הכללית1. אספקת הדם חיונית להפרשת בלוטת הרוק מכיוון שהיא מספקת כל הזמן מים, אלקטרוליטים ומולקולות היוצרים את הרוק הראשוני. תפקוד מחסום האנדותל, המווסת על ידי קומפלקס הצומת ההדוק (TJ), מגביל בקפדנות ובעדינות את חדירתם של נימים, שהם חדירים מאוד למים, מומסים, חלבונים ואפילו תאים הנעים מכלי הדם במחזור הדם לרקמות בלוטת הרוק 2,3. מצאנו בעבר כי פתיחת ה- TJs של האנדותל בתגובה לגירוי כולינרגי מקלה על הפרשת הרוק, ואילו הפגיעה בתפקוד מחסום האנדותל קשורה להיפו-הפרשה וחד....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל הליכי הניסוי אושרו על ידי ועדת האתיקה של מחקר בבעלי חיים, מרכז מדעי הבריאות של אוניברסיטת פקין, וצייתו למדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה (פרסום NIH מס '85-23, מתוקן 1996). עכברים זכרים מסוג בר (WT) בקבוצת הגיל של 8-10 שבועות שימשו למחקר הנוכחי. חיות הניסוי טופלו בקפידה כדי למזער את הכאב ואי הנוחות שלהן.
1. נהלים לבעלי חיים
- הכינו וניהלו את חומרי ההרדמה והמעקב.
- לשמור על תנאים סטריליים לאורך כל המחקר לעקר את המכשירים על ידי autoclaving. חלקו את העכברים לשתי קבוצות.
הערה: קבוצת הביקורת נותרה ללא טיפול, והקבוצה השנייה עם קשירת צינור SMG חד-צדדית למשך יום אחד שימשה כקבוצת הניסוי. בעת הקיבוץ, יש לבחור עכברים ....
- לשמור על תנאים סטריליים לאורך כל המחקר לעקר את המכשירים על ידי autoclaving. חלקו את העכברים לשתי קבוצות.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
בעקבות הפרוטוקול, ה-SMG החד-צדדי חובר למחזיק בהתאמה אישית, והבלוטה נשמרה רחוק ככל האפשר מגוף העכבר כדי למנוע מהנשימה לגרום לתוצרי תנועה. הזרימה המהירה של תאי הדם האדומים (נקודות שחורות) בכלי הדם נצפתה תחת המיקרוסקופ. לאחר מציאת שדה הרקמה מתחת לעדשה עינית, יש לעבור כדי לתפעל את תוכנת המיקרוסקופ. בקבוצת הביקורת, שני העוקבים היו קיימים בכלי הדם של העכבר SMG. בפרט, בשל משקלו המולקולרי הקטן, FD4 הצליח לדלוף מתוך כלי הדם אל הצדדים הבסיסיים של האציני והצינורות, ובכך לתאר בבירור את צורת האצ'יני והצינורות (כפי שמציינים A<.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
תחזוקה וויסות של תפקוד מחסום אנדותל חיוניים להומאוסטזיס וסקולרי. תאי האנדותל והצמתים הבין-תאיים שלהם ממלאים תפקיד קריטי בשמירה ובבקרה על שלמות כלי הדם12. כוח הגזירה של זרימת הדם, גורמי גדילה וגורמים דלקתיים יכול לגרום לשינויים בחדירות כלי הדם, ובכך להשתתף בהתרחשות והתפתחות של מחלות מערכתיות כגון יתר לחץ דם, סוכרת ומחלות אוטואימוניות13,14,15. התפלגות כלי הדם וזרימת הדם של בלוטת הרוק היא אחת הנפוצות ביותר ב.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין מה לחשוף.
תודות
מחקר זה נתמך על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מענקים 31972908, 81991500, 81991502, 81771093 ו-81974151) וקרן בייג'ינג למדעי הטבע (מענק 7202082).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מיקרוסקופ 2 פוטונים (TCS-SP8 DIVE) | לייקה, גרמניה | ||
| 4 kDa דקסטרן עם תווית FITC | סיגמא אולדריץ' | 46944 | |
| 70 kDa רודמין דקסטרן עם תווית B | סיגמא אולדריץ' | R9379 | |
| הפרדת רקמות קהה ניקל | Bejinghuabo Company | NZW28 | |
| קרם אפילציה | Veet | ||
| מזרק סטרילי חד פעמי | Zhiyu Company | 1 מ"ל | |
| Image J תוכנה | המכונים הלאומיים לבריאות | ||
| מזרק אינסולין | Becton, Dickinson and Company | 0253316 | 1 מ"ל |
| Leica Application Suite X software | Leica Microsystems | ||
| Microtubes | Axygen | MCT-150-C | 1.5 מ"ל |
| פוספט חוצץ מלח 1x | Servicebio | G4207-500 | |
| מספריים לרקמות | Bejinghuabo Company | M286-05 | |
| Tribromoethanol | JITIAN Bio | JT0781 |
מקורות
- Carpenter, G. H. The secretion, components, and properties of saliva. Annual Review of Food Science and Technology. 4, 267-276 (2013).
- Garrett, J. R. The proper role of nerves in salivary secretion: A review. Journal of Dental Research.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
