הפרוטוקול הנוכחי מתאר את כל השלבים החיוניים להשתלת רחם מוצלחת (UTx) בחולדות. מודל החולדות הוכח כמתאים לקידום היישום הקליני של UTx; עם זאת, UTx חולדה הוא הליך מורכב ביותר הדורש הוראות זהירות.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
הפרוטוקול הנוכחי מתאר את כל השלבים החיוניים להשתלת רחם מוצלחת (UTx) בחולדות. מודל החולדות הוכח כמתאים לקידום היישום הקליני של UTx; עם זאת, UTx חולדה הוא הליך מורכב ביותר הדורש הוראות זהירות.
השתלת רחם (UTx) היא גישה חדשה לטיפול בנשים עם אי פוריות מוחלטת של גורם הרחם (AUFI). על פי הערכות, 3%-5% מהנשים סובלות מ-AUFI. מנשים אלה נשללה האפשרות להביא ילדים לעולם עד הופעתו של UTx. היישום הקליני של UTx הונע על ידי מחקרים ניסיוניים בבעלי חיים, וה- UTx המוצלח הראשון הושג בחולדות. בהתחשב במאפיינים הפיזיולוגיים, האימונולוגיים, הגנטיים והרבייה שלהן, חולדות הן מערכת מודל מתאימה להשתלות כאלה. בפרט, תקופת ההריון הקצרה שלהם היא יתרון ברור, שכן נקודת הסיום הרגילה של UTx ניסיוני היא הריון מוצלח עם לידת חי. האתגר הגדול ביותר עבור מודלים של חולדות נותר האנטומיה הקטנה, הדורשת מיומנויות מיקרוכירורגיות מתקדמות וניסיון. למרות ש- UTx הוביל להריון במרפאה, ההליך אינו מבוסס ודורש אופטימיזציה ניסיונית מתמשכת. כאן מוצג פרוטוקול מפורט, הכולל פתרון בעיות חיוני עבור UTx חולדה, אשר צפוי להפוך את ההליך כולו לקל יותר להבנה עבור אלה ללא ניסיון בסוג זה של מיקרו-כירורגיה.
השתלת רחם (UTx) היא טיפול חדשני לאי פוריות מוחלטת של גורם הרחם (AUFI). AUFI נובע מהיעדרות (מולדת או נרכשת) או מום ברחם ומשפיע על 3%-5% מהנשים בעולם1. סיבות אתיות, משפטיות או דתיות שוללות אימוץ או פונדקאות עבור נשים רבות שיש להן רצון לאימהות אך סובלות מ- AUFI2. עבור נשים אלה, UTx נשאר האפשרות היחידה להקים משפחה משלהם. UTx יושם במרפאה, אם כי בהצלחה מעורבת; ההליך מאתגר מבחינה טכנית ודורש שיפור מתמיד עבור הממסד הקליני שלו.
בשנת 2014, ההשתלה הראשונה של רחם מתורם חי (LD) - וכתוצאה מכך הריון מוצלח - בוצעה על ידי הקבוצה השבדית החלוצית של Brännström3. הלידה הראשונה לאחר UTx מתורם שנפטר (DD) דווחה בשנת 2016 בברזיל4. עד שנת 2021, יותר מ -80 UTxs בוצעו ברחבי העולם, אולם עם שיעור הצלחה של כ -50% ועם שתלים המגיעים מ LD עבור רוב1.
אמנם לא מציל חיים, UTx הוא הליך פופולרי יותר ויותר כדי למלא את הרצונות עבור צאצאים משלו. ככזה, הביקוש לשתלים הולך וגובר, ומציב את תרומת DD במוקד עתידי. עם זאת, תרומת DD מסובכת עקב חשיפות איסכמיות ארוכות יותר (ובמקרה של מוות לבבי, גם חם), מה שמעלה את הסיכון לתפקוד לקוי של השתלודחייה 5,6. טכניקה כירורגית, דרישת התאמת תאימות, ודיכוי חיסוני נלווה נותרו נושאים קריטיים לגבי תוצאות UTx7.
כדי לנהל את הסיכונים הנ"ל במרפאה, יש צורך במודלים מתאימים של בעלי חיים לחקר איסכמיה ודיכוי חיסוני. נקודת הקצה הרלוונטית ביותר מבחינה קלינית עבור מודלים של בעלי חיים נותרה לידה מוצלחת; עד כה, הריונות לאחר UTx ניסיוני הושגו בעכברים, חולדות, כבשים, ארנבות וקופי צינומולגוס8. בעוד שבעלי חיים גדולים יותר מיועדים מראש לרכישה ואופטימיזציה של טכניקות כירורגיות, מכרסמים מגיעים עם היתרון המובהק של תקופות הריון קצרות. לכן, מודלים של מכרסמים עדיפים על שיקולים מעשיים, כלכליים ואתיים9. עם זאת, האתגר העיקרי של UTx בעכברים הוא האנטומיה הקטנה, כאשר הניתוח התובעני מאוד קשור ליכולת השחזור הנמוכה של UTx10. לעומת זאת, חולדות נגישות יותר מבחינה כירורגית ושומרות על היתרונות של זמני הריון קצרים. ככזו, החולדה הפכה למודל המועדף עלUTx 9. Wranning et al. הציגו את מודל החולדות של UTx אורתוטופי בשנת 2008, ובאמצעות מודל זה, לידת החי הראשונה לאחר UTx והזדווגות טבעית דווחה11,12,13. מחקרים מאוחרים יותר תרמו תרומה קריטית ליישום UTx בבני אדם9.
עם זאת, UTx נשאר מאתגר בחולדות, ורק קבוצות מעטות עדיין שלטו בטכניקה כירורגית זו. אחד המכשולים הרלוונטיים להתפשטות UTx של חולדות בקרב החוקרים הוא היעדר תיאור מדויק של השלבים המיקרוכירורגיים הבודדים, המלכודות והמדדים לפתרון בעיות14. פרוטוקול זה נועד לספק מדריך מפורט להליך מיקרוכירורגי מורכב מאוד זה כדי להקל על יישום מודל בעלי חיים זה במחקר עתידי.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כל הניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם לתקנות הפדרליות השווייצריות לבעלי חיים ואושרו על ידי המשרד הווטרינרי של ציריך (n° 225/2019), תוך הבטחת טיפול בבני אדם. נקבות חולדות לואיס בתולות (משקל גוף של 170-200 גרם) ונקבות חולדות וירג'ין בראון נורווגיה (170-200 גרם) שימשו כתורמות/מושתלות רחם, ואילו חולדות לואיס זכריות (300-320 גרם) שימשו להזדווגות. גילן של החולדות היה 12-15 חודשים. בעלי החיים התקבלו ממקורות מסחריים (ראו טבלת חומרים) ושוכנו בתנאים מבוקרים ובסביבה מועשרת עם גישה חופשית למים ולמזון סטנדרטי.
1. שאיבת רחם
הערה: לפרטים על הנוהל, עיין בדוחות12,13,15 שפורסמו בעבר.
2. השתלת רחם סינגנית
הערה: לפרטים על הנוהל, עיין בדוחות12,13,15 שפורסמו בעבר.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מוצגות תוצאות משתי קבוצות של חולדות. UTx בוצע לפני (קבוצה 1, n = 8) ואחרי (קבוצה 2, n = 8) התאמת פרוטוקול (טבלה 1) כדי להדגים את ההשפעות של השינויים שלנו (אנא עיין בדיון לקבלת הסבר על השינויים שלנו)12,15,21.
התוצאה של UTx חולדה קשורה לשלושה שלבים מרכזיים. השלב הראשון הוא התאוששות מוצלחת מ- UTx. בדרך כלל, הנמענים צריכים להתאושש בתוך 2 הימים הראשונים לאחר הניתוח. השלב ה...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הפרוטוקול המוצג כאן מציע הוראות מפורטות לגישה הניתוחית מאחורי השתלת רחם בחולדות. הפרוטוקול עבר אופטימיזציה כדי להגדיל את הסיכויים ללידות חי לאחר UTx וההזדווגות שלאחר מכן. הפרוטוקול המקורי נלקח מקבוצת Brännström 12,13, בהשראת עבודת העכבר של Akouri et al.10, ושונה בהתבסס על חוויות המחברים בשנים האחרונות. ככאלה, השינויים הונעו על ידי עקומות למידה אמיתיות המשקפות את ההתפתחות מהשתלות כושלות לתוצאות הניתנות לשחזור.
שי...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
המחברים מצהירים כי אין להם אינטרסים מתחרים.
מחקר זה נתמך על ידי הקרן הלאומית השוויצרית למדע (מענק פרויקט מס' 310030_192736). ברצוננו להודות לד"ר פראוקה סיהוסן מהמכון לפתולוגיה וטרינרית של אוניברסיטת ציריך על תמיכתה ההיסטופתולוגית.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מספריים זוויתיים לצד 5 מ"מ | FST | 15008-08 | |
| מהדק נייר גדול | לא ספציפי | משמש כמפסק | |
| מחט כיפוף קהה G30 | Unimed SA | ||
| Bupivacain 0.5% | Sintetica | ||
| Buprenorphine 0.3 מ"ג/מ"ל | Temgesic | ||
| Dosiernadel G25 | H.SIGRIST& שותף AG | ||
| Dumont #5SF Forceps | FST | 11252-00 | |
| Ethilon 10/0 Ethicon | 2810G | ||
| Ethilon 6/0 | Ethicon | 667H | |
| Ethilon 7/0 Ethicon | EH7446H | ||
| Ethilon 8/0 Ethicon | 2808G | ||
| Femal Brown Norway Rats (150-170 g) | Janvier | ||
| Femal Lewis Rats (150-170 גרם) | Charles River Deutschland | ||
| מספריים עדינים - Sharp | FST | 14060-09 | כל מספריים קטנים אחרים עובדים מדי |
| מחזיק מחט מיקרו Halsey | FST | 12500-12 | כל בעל צורך קטן אחר עובד גם |
| Heparin Natrium 25000 כלומר / 5 מ"ל | B. מכון בראון | ||
| תמיסת זלוף ז'ורז' לופז ( IGL) | מכון ז'ורז' לופז | פתרון לשימור איברים | |
| חולדות לואיס זכר (300-320 גרם) | Charles River Deutschland | ||
| Micro Serrefines 13 מ"מ | FST | 18055-04 | |
| מיקרו סרפינס 16 מ"מ גבוגן | FST | 18055-06 | |
| מוליך מהדק מיקרו-סרפין עם נעילה | פ.ס.ט | 18056-14 | |
| MÖ lnlyncke Op Towel | Mö lnlyncke | 800300 | וילון סטרילי |
| NaCl 0.9% | B.Braun | ||
| Octenisept | Schü lke | ||
| סרט נייר | Tesa | לתיקון החיה | |
| Philips Avent Schneller Flaschenwä rmer SCF358/02 | Philips | 12824216 | |
| Ringerfundin | B.Braun | ||
| Rompun 2% | Bayer | Xylazine | |
| מחזיקי מחט עם ידית עגולה | FST | 12075-12 | |
| מחזיקי מחט עם ידית עגולה | FST | 12075-12 | |
| S& מלקחיים מרחיבי כלי T - בזווית 45° | F.S.T | 00276-13 | |
| Sacryl Naht | KRUUSE | 152575 | |
| Scapel No 10 | Swann Morton | 201 | |
| מיכל | היסטו קטן כל מיכל היסטו קטן עובד בסדר לאחסון קר של השתל | ||
| שקיות | כל שקיות ניילון שקופות הן בסדר | ||
| ספוגית כותנה סטרילית | Lohmann-Rauscher | כל צמר גפן סטרילי הוא בסדר | |
| גזה סטרילית | Lohmann-Rauscher | כל גזה סטרילית היא בסדר | |
| מספריים ישרים 8 מ"מ | FST | 15024-10 | |
| מיקרוסקופ כירורגי – SZX9 | אולימפוס | OLY-SZX9-B | |
| סאטר נון סטיק GLISS 0.4 מ"מ | סאטר | 78 01 69 SLS | |
| תפר קשירת מלקחיים | FST | 00272-13 | |
| מחצלת חימום | ThermoLux | ||
| לעור | כל מלקחיים רקמות הם בסדר | ||
| מלקחיים מרחיב כלי | FS | 00125-11 | |
| Vicryl בתוספת 4/0 | Ethicon | VCP292H |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.