הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

מודל הממברנה הכוריאואלנטואית של אפרוח (CAM) ככלי לחקר השתלת רקמת שחלה

2.4K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/64867

⸱

23 ביוני 2023

 ,  ,  ,  , 
1Gynecology Research Unit, Institut de Recherche Expérimentale et Clinique, Université Catholique de Louvain, 2Gynecology Department, Cliniques Universitaires Saint-Luc

במאמר זה

סיכום

במאמר זה, אנו מתארים פרוטוקול לפיתוח מודל קסנוגרפטינג של קרום כוריואלנטואי אפרוח (CAM) עבור רקמת שחלה אנושית ומדגימים את יעילות הטכניקה, מסגרת הזמן של רה-וסקולריזציה של השתל ויכולת הקיום של הרקמה על פני תקופת השתלה של 6 ימים.

תקציר

שימור והשתלת רקמת שחלות היא אסטרטגיה יעילה לשימור פוריות, אך יש לה חסרון עיקרי אחד, והוא אובדן זקיקים מסיבי המתרחש זמן קצר לאחר ההשתלה מחדש עקב הפעלת זקיק חריגה ומוות. מכרסמים הם מודלים לבחינת הפעלת זקיקים, אך העלות, הזמן והשיקולים האתיים הופכים לאוסרים יותר ויותר, ובכך מניעים את הפיתוח של חלופות. מודל הממברנה הכוריאואלנטואית של האפרוחים (CAM) אטרקטיבי במיוחד, בהיותו זול ושומר על כשל חיסוני טבעי עד היום ה -17 לאחר ההפריה, מה שהופך אותו לאידיאלי ללמוד קסנוגרפטינג לטווח קצר של רקמת שחלה אנושית. ה- CAM הוא גם מאוד וסקולרי ונמצא בשימוש נרחב כמודל לחקר אנגיוגנזה. זה נותן לו יתרון יוצא דופן על פני מודלים במבחנה ומאפשר לחקור מנגנונים המשפיעים על תהליך אובדן זקיק מוקדם לאחר השתלה. הפרוטוקול המתואר כאן נועד לתאר את הפיתוח של מודל קסנוגרפטינג CAM עבור רקמת שחלה אנושית, עם תובנות ספציפיות לגבי יעילות הטכניקה, מסגרת הזמן של רה-וסקולריזציה של השתל ויכולת הקיום של הרקמה על פני תקופת השתלה של 6 ימים.

מבוא

הביקוש לשימור פוריות להתוויות אונקולוגיות ושפרות, כמו גם מסיבות חברתיות, גדל באופן דרמטי בעשורים האחרונים. עם זאת, טיפולים שונים המשמשים לריפוי מחלות ממאירות ולא ממאירות רעילים מאוד לגונדות ויכולים לגרום לאי ספיקת שחלות מוקדמת יאטרוגנית, מה שמוביל בסופו של דבר לאי פוריות1. טכניקות מבוססות לשימור פוריות כוללות שימור בהקפאת עוברים, ויטריפיקציה של ביציות לא בשלות או בוגרות, ושימור בהקפאה של רקמת שחלה 2,3,4. הקפאת רקמת שחלה היא האפשרות היחידה הזמינה לשימור פוריות אצל נערות לפני גיל ההתבגרות או נשים הזקוקות לטיפול מיידי בסרטן. שיקום התפקוד האנדוקריני לאחר השתלת רקמת שחלה מתרחש ביותר מ-95% מהנבדקות, כאשר שיעורי לידות החי נעים בין 18% ל-42%5,6,7,8,9.

למרות שהשתלת רקמת שחלה קפואה ומופשרת הוכחה כמוצלחת, עדיין יש מקום לשיפור. ואכן, כאשר שברי קליפת המוח בשחלות מושתלים ללא אנסטומוזה וסקולרית, הם חווים תקופה של היפוקסיה שבמהלכה מתרחשת revascularization השתל 10,11,12. הרוב המכריע של המחקרים שחקרו השתלת רקמת שחלה אנושית השתמשו במודל קסנוגרפטינג, שבו רקמת שחלה מושתלת בעכברות מדוכאות חיסון. הרה-וסקולריזציה המלאה של הקסנוגרפטים אורכת כ-10 ימים, כאשר הן כלי המארח והן כלי השתל תורמים להיווצרות כלי דם פונקציונליים 12,13,14. בסביבות 50%-90% מרזרבת הזקיק אובדת בחלון היפוקסי זה לפני השלמת רה-וסקולריזציה של השתל 10,15,16. הוצע מאוד כי אובדן זקיקים מסיבי זה מתרחש הן באמצעות מוות ישיר של זקיקים, כפי שמודגם על ידי ירידה במספר הזקיקים המוחלט שנותר לאחר השתלה, והן על ידי הפעלת צמיחת זקיקים קדמונית, כפי שעולה משינויים בפרופורציות הזקיקים לקראת שיעורים מוגברים של גידול זקיקים17,18.

באופן מעניין, עבודות מחקר קודמות שהשתמשו ברקמות שחלות שונות של בעלי חיים שהושתלו בקרום כוריאואלנטואי אפרוח (CAM), שיש לו מבנה המחקה את אתר ההשתלה הטיפוסי של הצפק, דיווחו על עיכוב של הפעלת זקיק ספונטנית, כאשר רזרבת הזקיק הראשונית נשארת שלמה עד 10 ימים 19,20,21,22. הצוות שלנו הוכיח בעבר כי השתלת רקמת שחלה אנושית קפואה-מופשרת ל-CAM היוותה גישה אמינה לחקר השתלת רקמת שחלה אנושית בשלביה האיסכמיים הראשונים23 ולאחרונה הראה כי שיטת השתלה זו הצליחה לנטרל את הפעלת זקיק24.

מודל CAM מושך במיוחד לא רק בגלל שביציות זולות בהרבה מעכברות, אלא גם בגלל האופי הווסקולרי מאוד של CAM, המאפשר לבחון את הקשר בין הפעלת זקיקים לבין רה-וסקולריזציה של שתל השחלות. מערכת העופות היא, אכן, אחת הדרכים הנפוצות והמגוונות ביותר לחקר אנגיוגנזה25. התפתחות עובר אפרוח (ED) אורכת 21 יום עד הבקיעה, וה-CAM נוצר בתוך 4-5 הימים הראשונים באמצעות איחוי האלנטואי והכוריון26. יש לציין כי עובר האפרוח הוא פונדקאי חיסוני באופן טבעי עד היום ה-17 של ED, כך שניתן לבצע ניסויים בקסנוגרפטינג ללא כל סיכון לדחיית השתל27,28. יתר על כן, גישת מודל CAM אינה מעלה כל חשש אתי או משפטי במונחים של החוק האירופי29, מה שהופך אותו חלופה אטרקטיבית למודלים אחרים של בעלי חיים. באשר לתנאי הרבייה, עוברי אפרוחים זקוקים רק לאינקובטור שנקבע על 37 מעלות צלזיוס עם לחות אוויר יחסית של 40%-60%. דרישות ניסוי מוגבלות אלה מפחיתות באופן משמעותי את עלויות המחקר בהשוואה לשימוש בעכברים מדוכאי חיסון.

הפרוטוקול המוצג כאן נועד לתאר את הפיתוח של מודל קסנוגרפטינג CAM עבור רקמת שחלה אנושית ולספק תובנות ספציפיות לגבי יעילות הטכניקה, מסגרת הזמן של רה-וסקולריזציה של השתל וכדאיות הרקמה על פני תקופת השתלה של 6 ימים. פרוטוקול זה יכול להיות בעל עניין רב לחקר המנגנונים מאחורי אובדן זקיק מוקדם לאחר השתלה ולחקר ההשפעה של מספר גורמים (גורמי גדילה, הורמונים וכו ') על תופעה זו.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

השימוש ברקמה אנושית אושר על ידי מועצת הביקורת המוסדית של האוניברסיטה הקתולית של לוביין. המטופלות נתנו את הסכמתן מדעת בכתב לשימוש ברקמת השחלה שלהן למטרות מחקר.

1. הזמנת יום 0 ביציות בעלות סיכוי גבוה לעבור

  1. מצאו ספק מוסמך של ביצי לגהורן לבנות שנבחר על ידי לוהמן ברמת מעבדה, המדווח על שיעורים גבוהים של ביציות עובריות, התלוי בעיקר בגיל האפרוחים.

2. הכנת הביצים לדגירה;

  1. לפני הגעת הביצים, יש להרכיב ולאזן את אינקובטור הביצים לטמפרטורה של 37°C בלחות אוויר יחסית של 40%-60%. עקוב אחר הטמפרטורה ולחות האוויר על ידי הכנסת מדחום ומד לחות לאינקובטור. ודא שמכסה האינקובטור מצויד בחלון זכוכית כדי לאפשר לבדוק את הפרמטרים הפנימיים של האינקובטור מבלי לפתוח אותו (איור 1).
  2. לאחר שקיבלו את היום 0 ביצים מאפרוחי לגהורן לבנים שנבחרו על ידי לוהמן מספק ביצים מוסמך במעבדה, נקו את פני הקליפות בנייר לחות וייבשו אותן מיד.
    הערה: מכיוון שקרום קליפת הביצה נקבובי, ניתן להשתמש במים אוטוקלאביים לניקוי משטחי ביצים ולבקרת לחות בתוך האינקובטור על מנת למזער את סיכוני הזיהום.
  3. תייגו את הביצים באמצעות סמן (למשל, תאריך ומספר ביצה).
  4. דוגרים על הביצים כשהקצה המחודד פונה כלפי מטה, ומסובבים אותן כדי לאפשר ל-CAM להתפתח. סובבו ידנית את הביצים ב-180° פעמיים עד שלוש פעמים ביום או השתמשו במסובב אוטומטי.
    הערה: על מנת לוודא שהביצים אכן מסובבות, ניתן לסמן את קליפת הביצה באותיות "X" ו-"O" בשני הצדדים הצדיים המנוגדים באמצעות עיפרון או טוש. חלון הזכוכית במכסה האינקובטור מאפשר לבדוק את סיבוב הביצים מבלי לפתוח את המכשיר.

3. פתיחת קליפת הביצה ביום השלישי של ED

הערה: חלון מלבני נעשה בקליפת הביצה ביום 3 של ED.

  1. הכינו את מכסה המנוע של הזרימה הלמינרית על מנת לעבוד בתנאים סטריליים. הניחו את המכשירים הבאים מתחת למכסה המנוע, וחיטאו אותם באתנול 70% (אם לא עבר חיטוי כבר):
    - מתלה ביצים
    - נר ביצים או מקור אור קר מוקד
    -סמן
    - סיכה סטרילית ישרה
    -מחט סטרילית 19 גרם
    -5 מ"ל מזרק סטרילי
    - להב מסור גלילה
    -מלקחיים סטריליים
    - סרט הדבקה
  2. מעבירים ביצה אחת מהאינקובטור למתלה הביצים שמונח מתחת למכסה המנוע, ומכבים את מסובב הביצים.
  3. בחושך, זהו את כיס האוויר של הביצה על ידי הנחת נר הביצה (או מקור אור קר מוקדי) כנגד קליפת הביצה. כיס האוויר ממוקם בקצה הקהה של הביצה. השתמשו בטוש כדי לאתר את מרכז כיס האוויר על קליפת הביצה.
  4. הדליקו את האורות. עשו חור קטן בקליפת הביצה, שם היא מסומנת על ידי סיבוב עדין של סיכה ישרה סטרילית. פתח זעיר בקוטר של כ-1 מ"מ מספיק בדרך כלל.
    הערה: היזהרו לא לדחוף את הסיכה עד הביצה. אם זה קורה, השליכו את הביצה.
  5. חבר מחט סטרילית של 19 גרם למזרק סטרילי של 5 מ"ל.
  6. בחושך, אתר את שק החלמון באמצעות נר הביצה (או מקור אור קר מוקדי), ונקב את הביצה דרך החור שנוצר בשלב 3.4 עם מחט סטרילית 19 G בזווית של 45° לכיוון תחתית הביצה; היזהרו מאוד לא לשבש את שק החלמון. שואפים בין 1.5-2 מ"ל של אלבומן כדי לנתק את CAM מן הקליפה, ולאחר מכן לסגור את החור עם חתיכת סרט דבק.
    הערה: אם שק החלמון משובש במהלך השאיפה, הנוזל השואף במזרק יהיה בצבע צהוב ולא שקוף (אלבומן). אם זה קורה, להחליף את המחט ואת מזרק. אם נשאבת כמות גדולה יחסית של חלמון ביצה, הדבר עלול לסכן את יכולת הקיום של העובר.
  7. הדליקו את האורות. מניחים את הביצה בצורה אופקית, ומציירים בטוש חלון מלבני בגודל 1X1.5 ס"מ. אין להגדיל את החלון מהרוחב הרגיל של סרט הדבקה סטנדרטי.
  8. החזיקו את הביצה ביד אחת, וראו בעדינות את החלון ששורטט קודם לכן לתוך קליפת הביצה באמצעות להב מסור גלילה. ודא כי הקליפה אינה נסדקת ולא לחתוך כל הדרך עד CAM מדוכא. נשפו באופן קבוע כדי להסיר אבק פגזים ופסולת.
  9. החליקו מלקחיים סטריליים מתחת לחתיכה המלבנית של הקליפה המנוסרת, ואחזו במיומנות כדי להסיר אותה בצורה נקייה מבלי לפגוע ב- CAM. בנוסף, השליכו את קרום הקליפה החיצונית הלבנה כדי שתוכלו לראות את העובר ואת ה-CAM שלו.
    הערה: אם אבק קליפות ביצים או פסולת נופלים על CAM, ניתן להסיר אותו באמצעות מלקחיים סטריליים, נזהר מאוד לא לקרוע את CAM.
  10. זהה ביציות עובריות בנות קיימא. ניתן להבחין בהם על ידי האלבומן השקוף שלהם וטבעת כלי הדם סביב העובר, שם לב פועם עשוי לפעמים להיות מזוהה אפילו בשלב זה (יום 3 של ED). יש להשליך עוברים לא מופרים או מתים.
  11. הניחו סרט הדבקה על החלון החדש שנוצר כדי למנוע התייבשות. הקפד לקפל קצה אחד מעל עצמו כדי להקל על ההסרה.
  12. החזירו את הביצה לאינקובטור כשהחלון הפתוח פונה כלפי מעלה והקלטת לא נוגעת ב-CAM. השתמשו בפיסת נייר מקופלת או בחלק ממדף הביצים כדי למנוע מהביצה להתגלגל. ודא שהמגש המסתובב כבוי.
  13. חזור על שלבים 3.2-3.12 כדי לפתוח את הביציות הנותרות.

4. השתלת רקמת שחלה אנושית קפואה-מופשרת ל-CAM

הערה: השתלה ל- CAM צריכה להתחיל באופן אידיאלי בין הימים 7-10 של ED.

  1. הפשירו רצועות קליפת המוח של השחלות תחת מכסה המנוע של הזרימה הלמינרית בהתאם לפרוטוקול המתואר במקום אחר30.
  2. חותכים את רצועות קליפת המוח לשלושה שברים של 4 מ"מ x 2 מ"מ x 1 מ"מ. השתמש בחתיכה אחת כבקרה ללא השתלה ובשתיים האחרות לקסנוגרפטינג למשך יום אחד או 6 ימים.
    הערה: אם יש מספיק רקמה זמינה, עבוד בכפילות.
  3. מעבירים ביצה אחת מהאינקובטור למתלה הביצים הממוקם מתחת למכסה המנוע, כשהחלון פונה כלפי מעלה.
  4. קלפו את הסרט מהחלון, וודאו שהעובר בר-קיימא. בשלב זה, עוברים בני קיימא כוללים כלי דם נרחבים, אלבומן שקוף, פעימות לב נראות לעין ותנועה מסוימת של העובר.
  5. הכן את אתר ההשתלה על ידי טראומה עדינה של אזור קטן של CAM על ידי הנחת רצועה של 1 ס"מ2 של נייר עדשה סטרילי Ether-extracted על משטח האפיתל והסרתו מיד.
    הערה: ה- CAM הוא מחסום בלתי חדיר אלא אם כן הממברנה עברה טראומה על ידי הסרת החלק ההיקפי העליון של שכבת האפיתל הכפולה, והותירה את שכבת הבסיס שלמה. טכניקה זו גם משפרת את תהליך revascularization על ידי הפעלת ריפוי פצע. אם נייר העדשה הסטרילי שחולץ מאתר נשאר על ה-CAM זמן רב מדי, הממברנה עלולה להידבק לנייר העדשה ולהיקרע. אם זה קורה, השליכו את הביצה.
  6. אחזו ברצועה אחת של קליפת המוח השחלתית שהוקפאה והופשרה (4 מ"מ x 2 מ"מ x 1 מ"מ) בעזרת מלקחיים מיקרוכירורגיים, והניחו אותה על ה-CAM שעבר טראומה עם הצד המדולרי כנגד ה-CAM. להשתיל חתיכת רקמה אחת לכל ביצה.
  7. מכסים את החלון בסרט דבק, ומחזירים בזהירות את הביצה לאינקובטור. ודאו שפתח קליפת הביצה זקוף והביצה בטוחה.
  8. חזור על שלבים 4.1-4.7 להשתלת כל הרקמות הנותרות.
    הערה: יש לבדוק את השתלים בכל יום השתלה כדי להעריך את כדאיות העובר ולעקוב אחר שינויים בכלי הדם.

5. קצירת השתלים

הערה: Xenografts יש לקצור לכל המאוחר עד יום 17 של ED, שכן המערכת החיסונית של העובר הופך בוגר ומוכשר מהיום 18.

  1. הניחו את הביצה על מתלה, והגדילו את החלון בקליפת הביצה כדי לאפשר הדמיה טובה יותר של השתל ומניפולציה קלה יותר.
  2. להעריך את השתל באופן מקרוסקופי, ולשים לב במיוחד לתגובה וסקולרית של CAM כלפי השתל. צלם תמונות דיגיטליות או סרטונים לפרוטוקול.
  3. אחזו את הרקמה או את ה-CAM שמסביבה במלקחיים, והשתמשו במספריים או באזמל כדי להוציא את השתל מה-CAM בזהירות.
    הערה: השתלים מתכסים בשכבה שנייה של CAM בסביבות היום השלישי של ההשתלה ובסופו של דבר הופכים לעטופים. ייתכן גם שהם נעו בתוך הביצה ביום 6, מה שמקשה על שליפתם במקרים מסוימים.
  4. לנתח את הרקמות שנכרתו בכל שיטה המתאימה לניסוי הנתון. במחקר הנוכחי, חלקי רקמה היו קבועים בפרפורמלדהיד, משובצים בפרפין ומוכתמים בהמטוקסילין ואוזין בעקבות השלבים המתוארים להלן:
    1. תקן את השברים בפרפורמלדהיד 4% למשך 24 שעות, והטמע אותם בפרפין באמצעות התקן הטבעה אוטומטי עם השלבים המוזכרים בטבלה 1.
    2. השאירו את הקוביות המשובצות בפרפין למשך הלילה בטמפרטורה של 4°C לפני שתחתכו אותן למקטעים בעובי 5 מיקרומטר בעזרת מיקרוטום.
    3. מורחים את חלקי הרקמה על מגלשת זכוכית המונחת על צלחת חמה (30 מעלות צלזיוס), ומשאירים אותם להתייבש במשך 2 שעות, ואחריו 24 שעות בתנור ב 37 מעלות צלזיוס.
    4. לאחר מכן, הכתימו את המגלשות בהמטוקסילין ובאאוסין בהתאם לפרוטוקול המתואר במקום אחר31. לאחר מכן, הפוך את הדגימות לדיגיטליות באמצעות סורק שקופיות, ונתח אותן באמצעות תוכנת ניתוח תמונות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

שיעורי הישרדות עוברי אפרוחים
שיעור הישרדות העוברים מחלון (יום 3 של ED) להשתלת רקמת שחלה (יום 7 של ED) היה 79% (33/42). מכיוון שאחוז הביציות המועברות ביום 0 אינו ידוע, נצטוו מספר על 0 ביצים מתרנגולות לגהורן לבנות שנבחרו על ידי לוהמן כדי להבטיח שיהיו מספיק ביצים עובריות זמינות להשתלה. בסך הכל 23 ביציות בנות קיימא שימשו להשתלה, אחת מהן נספתה במהלך 24 השעות הראשונות, וכתוצאה מכך שיעור הישרדות העובר הכולל של 96% לאחר ההשתלה (22/23).

היבט מקרוסקופי של השתלים
ל...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

החלק המאתגר ביותר בפרוטוקול המתואר כאן הוא יצירת החור הקטן הדרוש לשאיפת האלבומן על מנת לנתק את ה- CAM מקליפת הביצה לפני יצירת חלון. הפעלת לחץ רב מדי עלולה לגרום לחדירת יתר או אפילו לסדוק ולהרוס את הביצית, ולגרום נזק בלתי הפיך ל- CAM ולכלי הדם שלה. כדי לצמצם את הטעויות למינימום במהלך הניסיונות הראשוניים להפריד את ה-CAM, מומלץ מאוד לתרגל יצירת חורים קטנים בקליפת הביצה של ביצים לא מופרות, שנקנו במכולת באמצעות סיכה ישרה. יתר על כן, בהתחשב בשונות הטבעית של הפוריות בין אצוות, יחד עם העובדה שלא כל העוברים שורדים את ההליך, מומלץ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

המחברים מודים למירה הריניוק, BA, על סקירת השפה האנגלית של המאמר.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מחט היפודרמית Agani, 19 GTerumo EuropeAN*1950R1מחט 19 G לשאיבת מזרק Terumo אלבום
, 5 מ"ל מנעול לואר קונצנטריTerumo EuropeSS*05LE1מזרק סטרילי 5 מ"ל
Caseviewer v2.23DHISTECHתוכנת ניתוח תמונה
Diethyl etherMerck Chemicals603-022-00-4אתר סטרילי לטראומה של ה-CAM
תמיסה מימית Eosin Y 0.5%Merck1098441000תמיסת צביעה
פורמלדהיד 4% תמיסה מימית חוצצת (פורמלין 10%)VWR97139010פורמלדהיד המשמש לקיבוע רקמות
מקררLiebherr7081260מקרר בטמפרטורה של 4 מעלות; C משמש להטמעת פרפין
צלחת חימוםSchottSLK2פלטה חמה המשמשת לייבוש השקופיות
IncubatorThermo Forma Scientific 3111תנור 10365156המשמש לדגירת שקופיות
Leica CLS 150 XE מיקרוסקופ מקור אור קרLeicaCLS 150 XEמקור אור קר מוקדי לנר את הביצים
רקמת ניקוי עדשות, כיתה 541VWR111-5003רקמה להשרות באתר סטרילי כדי לגרום לטראומה
של ההמטוקסיליןשל CAM מאייר MERCK1092491000תמיסת צביעה
מתנולVWR20847307מתנול
מיקרוטוםThermoScientific-MICROMHM325-2Microtome
Pannoramic P250 Flash III3DHISTECH/Slide סורק בהגדלה של פי 20
Paraformaldehyde Merck1,04,00,51,000תמיסת הטמעת פרפין
Paraplast Plus RSigmaP3683-1KG
צלחת פטרי פרפין, 60x15 מ"מ,גריינר628161צלחת פטרי סטרילית
מחזיק סיכותFine Science Tools26016-12מחזיק פינים
PolyhatchBrinseaCP01Fחממת ביצים עם מסובב אוטומטי
להב מסור גלילה, 132 מ"מSencys/להב מסור ליצירת חלון בקליפת הביצה
סיכות הכנסה מנירוסטהFine Science Tools26007-02סיכה ישרה ליצירת חור בקליפת הביצה
Steril-Helios Angelantoni IndustrieST-00275400000מכסה מנוע זרימה למינארי
Superfrost Plus מוט בורדס é s 90°VWR631-9483שקופיות זכוכית 
Tissue-Tek VIP 6AlSakura60320417-0711 VID6E3-1מכשיר הטבעה אוטומטי
מלקחיים טיטניוםFine Science Tools11602-16מלקחיים להסרת קליפות ביצה ומניפולציה של רקמות שחלות
טולואן, 28701364VWRתמיסת הטמעת פרפין
סטרילי

מקורות

  1. Cacciottola, L., Donnez, J., Dolmans, M. M. Ovarian tissue and oocyte cryopreservation prior to iatrogenic premature ovarian insufficiency. Best Practice & Research Clinical Obstetrics & Gynaecology. 81, 119-133 (2022).
  2. Dolmans, M. -M., Hossay, C., Nguyen, T. Y. T., Poirot, C. Fertility preservation: How to preserve ovarian function in children, adolescents and adults. Journal of Clinical Medicine. 10 (22), 5247(2021).
  3. Donnez, J., Dolmans, M. -M. Fertility preservation in women. New England Journal of Medicine. 377 (17), 1657-1665 (2017).
  4. Donnez, J., Dolmans, M. -M. Fertility preservation in women. Nature Reviews Endocrinology. 9 (12), 735-749 (2013).
  5. Dolmans, M. -M., et al. Transplantation of cryopreserved ovarian tissue in a series of 285 women: a review of five leading European centers. Fertility and Sterility. 115 (5), 1102-1115 (2021).
  6. Shapira, M., Dolmans, M. -M., Silber, S., Meirow, D. Evaluation of ovarian tissue transplantation: results from three clinical centers. Fertility and Sterility. 114 (2), 388-397 (2020).
  7. Jensen, A. K., et al. Outcomes of transplantations of cryopreserved ovarian tissue to 41 women in Denmark. Human Reproduction. 30 (12), 2838-2845 (2015).
  8. Vander Ven, H., et al. Ninety-five orthotopic transplantations in 74 women of ovarian tissue after cytotoxic treatment in a fertility preservation network: Tissue activity, pregnancy and delivery rates. Human Reproduction. 31 (9), 2031-2041 (2016).
  9. Diaz-Garcia, C., et al. Oocyte vitrification versus ovarian cortex transplantation in fertility preservation for adult women undergoing gonadotoxic treatments: A prospective cohort study. Fertility and Sterility. 109 (3), 478-485 (2018).
  10. Nisolle, M., Casanas-Roux, F., Qu, J., Motta, P., Donnez, J. Histologic and ultrastructural evaluation of fresh and frozen-thawed human ovarian xenografts in nude mice. Fertility and Sterility. 74 (1), 122-129 (2000).
  11. Van Eyck, A. -S., et al. Electron paramagnetic resonance as a tool to evaluate human ovarian tissue reoxygenation after xenografting. Fertility and Sterility. 92 (1), 374-381 (2009).
  12. Van Eyck, A. -S., et al. Both host and graft vessels contribute to revascularization of xenografted human ovarian tissue in a murine model. Fertility and Sterility. 93 (5), 1676-1685 (2010).
  13. Hossay, C., et al. Can frozen-thawed human ovary withstand refreezing-rethawing in the form of cortical strips. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 37 (12), 3077-3087 (2020).
  14. Manavella, D. D., et al. Two-step transplantation with adipose tissue-derived stem cells increases follicle survival by enhancing vascularization in xenografted frozen-thawed human ovarian tissue. Human Reproduction. 33 (6), 1107-1116 (2018).
  15. Rahimi, G., et al. Re-vascularisation in human ovarian tissue after conventional freezing or vitrification and xenotransplantation. European Journal of Obstetrics & Gynecology and Reproductive Biology. 149 (1), 63-67 (2010).
  16. Cacciottola, L., Manavella, D. D., Amorim, C. A., Donnez, J., Dolmans, M. -M. In vivo characterization of metabolic activity and oxidative stress in grafted human ovarian tissue using microdialysis. Fertility and Sterility. 110 (3), 534-544 (2018).
  17. Gavish, Z., et al. Follicle activation is a significant and immediate cause of follicle loss after ovarian tissue transplantation. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 35 (1), 61-69 (2018).
  18. Masciangelo, R., Hossay, C., Donnez, J., Dolmans, M. -M. Does the Akt pathway play a role in follicle activation after grafting of human ovarian tissue. Reproductive BioMedicine Online. 39 (2), 196-198 (2019).
  19. Fortune, J. E., Cushman, R. A., Wahl, C. M., Kito, S. The primordial to primary follicle transition. Molecular and Cellular Endocrinology. (1-2), 53-60 (2000).
  20. Cushman, R. A. Bovine ovarian cortical pieces grafted to chick embryonic membranes: A model for studies on the activation of primordial follicles. Human Reproduction. 17 (1), 48-54 (2002).
  21. Gigli, I., Cushman, R. A., Wahl, C. M., Fortune, J. E. Evidence for a role for anti-Müllerian hormone in the suppression of follicle activation in mouse ovaries and bovine ovarian cortex grafted beneath the chick chorioallantoic membrane. Molecular Reproduction and Development. 71 (4), 480-488 (2005).
  22. Qureshi, A. I., et al. Testosterone selectively increases primary follicles in ovarian cortex grafted onto embryonic chick membranes: relevance to polycystic ovaries. Reproduction. 136 (2), 187-194 (2008).
  23. Martinez-Madrid, B., et al. Chick embryo chorioallantoic membrane (CAM) model: A useful tool to study short-term transplantation of cryopreserved human ovarian tissue. Fertility and Sterility. 91 (1), 285-292 (2009).
  24. Hossay, C., et al. Follicle outcomes in human ovarian tissue: Effect of freezing, culture, and grafting. Fertility and Sterility. 119 (1), 135-145 (2023).
  25. Ribatti, D. The Chick Embryo Chorioallantoic Membrane in the Study of Angiogenesis and Metastasis. , Springer. Dordrecht, the Netherlands. (2010).
  26. Pawlikowska, P., et al. Exploitation of the chick embryo chorioallantoic membrane (CAM) as a platform for anti-metastatic drug testing. Scientific Reports. 10 (1), 16876(2020).
  27. Davison, T. F. The immunologists' debt to the chicken. British Poultry Science. 44 (1), 6-21 (2003).
  28. Schilling, M. A., et al. Transcriptional innate immune response of the developing chicken embryo to Newcastle disease virus infection. Frontiers in Genetics. 9, 61(2018).
  29. Directives originating from the EU. Directive 2010/63/EU of the European Parliament and of the Council of 22 September 2010 on the protection of animals used for scientific purposes (Text with EEA relevance). The National Archives. , Available from: https://www.legislation.gov.uk/eudr/2010/63/contents (2010).
  30. Dolmans, M. -M., et al. A review of 15 years of ovarian tissue bank activities. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 30 (3), 305-314 (2013).
  31. Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections. Cold Spring Harbor Protocols. 2008 (5), 4986(2008).
  32. Anderson, R. A., McLaughlin, M., Wallace, W. H. B., Albertini, D. F., Telfer, E. E. The immature human ovary shows loss of abnormal follicles and increasing follicle developmental competence through childhood and adolescence. Human Reproduction. 29 (1), 97-106 (2014).
  33. Sharrow, A. C., Ishihara, M., Hu, J., Kim, I. H., Wu, L. Using the chicken chorioallantoic membrane in vivo model to study gynecological and urological cancers. Journal of Visualized Experiments. (155), e60651(2020).
  34. Lokman, N. A., Elder, A. S. F., Ricciardelli, C., Oehler, M. K. Chick chorioallantoic membrane (CAM) assay as an in vivo model to study the effect of newly identified molecules on ovarian cancer invasion and metastasis. International Journal of Molecular Sciences. 13 (8), 9959-9970 (2012).
  35. Sys, G. M. L., et al. The In ovo CAM-assay as a xenograft model for sarcoma. Journal of Visualized Experiments. (77), e50522(2013).
  36. Li, M., et al. The in ovo chick chorioallantoic membrane (CAM) assay as an efficient xenograft model of hepatocellular carcinoma. Journal of Visualized Experiments. (104), e52411(2015).
  37. Cloney, K., Franz-Odendaal, T. A. Optimized ex-ovo culturing of chick embryos to advanced stages of development. Journal of Visualized Experiments. (95), e52129(2015).
  38. Yalcin, H. C., Shekhar, A., Rane, A. A., Butcher, J. T. An ex-ovo chicken embryo culture system suitable for imaging and microsurgery applications. Journal of Visualized Experiments. (44), e2154(2010).
  39. Schomann, T., Qunneis, F., Widera, D., Kaltschmidt, C., Kaltschmidt, B. Improved method for ex ovo-cultivation of developing chicken embryos for human stem cell xenografts. Stem Cells International. 2013, 960958(2013).
  40. Beck, K., Singh, J., Dar, M. A., Anzar, M. Short-term culture of adult bovine ovarian tissues: chorioallantoic membrane (CAM) vs. traditional in vitro culture systems. Reproductive Biology and Endocrinology. 16 (1), 21(2018).
  41. Israely, T., Nevo, N., Harmelin, A., Neeman, M., Tsafriri, A. Reducing ischaemic damage in rodent ovarian xenografts transplanted into granulation tissue. Human Reproduction. 21 (6), 1368-1379 (2006).
  42. Donnez, J., et al. Livebirth after orthotopic transplantation of cryopreserved ovarian tissue. The Lancet. 364 (9443), 1405-1410 (2004).
  43. Dolmans, M. -M., et al. Short-term transplantation of isolated human ovarian follicles and cortical tissue into nude mice. Reproduction. 134 (2), 253-262 (2007).
  44. Baird, D. T., Webb, R., Campbell, B. K., Harkness, L. M., Gosden, R. G. Long-term ovarian function in sheep after ovariectomy and transplantation of autografts stored at −196 C. Endocrinology. 140 (1), 462-471 (1999).
  45. Ribatti, D., Vacca, A., Roncali, L., Dammacco, F. The chick embryo chorioallantoic membrane as a model for in vivo research on anti-angiogenesis. Current Pharmaceutical Biotechnology. 1 (1), 73-82 (2000).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

מודל CAM של אפלוחיהפעלת זקיקיםקריושימור של רקמותוסקולריזציה של השתלהטכניקת השתלה זרההישרדות זקיקיםמודל אנגיוגנזהמניפולציה של ביצה עובריתחיוניות השתלה
מודל הממברנה הכוריאואלנטואית של אפרוח (CAM) ככלי לחקר השתלת רקמת שחלה
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.