מאמר שיטה

בידוד וטיהור תאי אנדותל מיקרו-וסקולריים ומקרו-וסקולריים מדגימות שמקורן בריאה

DOI:

10.3791/64885

⸱

3 בפברואר 2023

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Medical, Oral and Biotechnological Sciences, “G. d’Annunzio” University of Chieti-Pescara, 2Center on Advanced Studies and Technology (CAST), “G. d’Annunzio” University of Chieti-Pescara, 3Department of Medicine and Aging Sciences, University “G. d’Annunzio” of Chieti-Pescara, 4U.O. di Chirurgia Toracica e dei Trapianti di Polmone, Fondazione IRCCS Ca’ Granda - Ospedale Maggiore Policlinico di Milano, 5Dipartimento di Fisiopatologia Medico-Chirurgica e dei Trapianti, Università degli Studi di Milano, 6Department of Pharmaceutical Sciences, Università degli Studi di Milano, 7Unit of Cell and Molecular Biology in Cardiovascular Diseases, Centro Cardiologico Monzino IRCCS

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למרות שהוא מאתגר, הבידוד של תאי אנדותל ריאתיים חיוני למחקרים על דלקת ריאות. הפרוטוקול הנוכחי מתאר הליך לבידוד בעל תפוקה גבוהה וטוהר גבוה של תאי אנדותל מקרו-וסקולריים ומיקרו-וסקולריים.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

זמינותם של תאים שבודדו מרקמות ואיברים בריאים וחולים מהווה מרכיב מפתח בגישות של רפואה מותאמת אישית. למרות שביובנקים יכולים לספק אוסף רחב של תאים ראשוניים ואימורטליים למחקר ביו-רפואי, אלה אינם מכסים את כל צרכי הניסוי, במיוחד אלה הקשורים למחלות או גנוטיפים ספציפיים. תאי אנדותל וסקולריים (ECs) הם מרכיבים מרכזיים של התגובה הדלקתית החיסונית, ולכן ממלאים תפקיד מרכזי בפתוגנזה של מגוון הפרעות. יש לציין כי ECs מאתרים שונים מציגים תכונות ביוכימיות ותפקודיות שונות, מה שהופך את הזמינות של סוגי EC ספציפיים (כלומר, כלי דם, כלי דם, עורקים וורידים) חיונית לתכנון ניסויים אמינים. כאן, הליכים פשוטים להשגת תפוקה גבוהה, כמעט טהור אנושי תאי אנדותל microvascular מן העורק הריאה ואת parenchyma הריאות מתוארים בפירוט. מתודולוגיה זו ניתנת לשכפול בקלות בעלות נמוכה יחסית על ידי כל מעבדה כדי להשיג עצמאות ממקורות מסחריים ולקבל פנוטיפים / גנוטיפים EC שעדיין אינם זמינים.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנדותל כלי הדם מצפה את פני השטח הפנימיים של כלי הדם. הוא ממלא תפקידי מפתח בוויסות קרישת הדם, טונוס כלי הדם ותגובות דלקתיות של מערכת החיסון 1,2,3,4. למרות שתרבית תאי אנדותל (ECs) שבודדו מדגימות אנושיות חיונית למטרות מחקר, יש לציין כי ECs מכלי דם שונים (עורקים, ורידים, נימים) יש פונקציות ספציפיות. אלה אינם ניתנים לשחזור מלא על ידי תאי אנדותל ורידים טבוריים אנושיים (HUVEC), אשר זמינים בקלות ונמצאים בשימוש נרחב במחקרים על פתופיזיולוגיה של אנדותל כלי דם 5,6. לדוגמה, תאי אנדותל מיקרו-וסקולריים של הריאה האנושית (HLMVECs) ממלאים תפקידי מפתח בדלקת ריאות על ידי שליטה בגיוס והצטברות לויקוציטים 4,7. לפיכך, הגדרה ניסיונית שמטרתה לשחזר דלקת ריאות עם נאמנות גבוהה צריך לכלול HLMVECs. מצד שני, תפקוד לקוי של EC ניתן לראות במספר פתולוגיות; לכן, ECs מן המטופל הם היסוד לבניית מודל אמין במבחנה של המחלה. לדוגמה, הבידוד של שברי ECs מעורק הריאה (HPAECs), שנותחו מהריאות המושתלות של אנשים שנפגעו מסיסטיק פיברוזיס (CF), איפשר לנו לחשוף מנגנונים של תפקוד לקוי של האנדותל במחלה זו 8,9.

לפיכך, פרוטוקולים שמטרתם לייעל את הבידוד של ECs ממקורות / איברים שונים גם במצבי מחלה חיוניים כדי לספק לחוקרים כלי מחקר יקרי ערך, במיוחד כאשר כלים אלה אינם זמינים מסחרית. פרוטוקולי בידוד HLMVEC ו-HPAEC דווחו בעבר 10,11,12,13,14,15,16,17,18,19. בכל המקרים, העיכול האנזימטי של דגימות הריאה הביא לאוכלוסיות תאים מעורבות, שטוהרו באמצעות מדיה סלקטיבית אד-הוק ומיון תאים מבוססי חרוזים מגנטיים או ציטומטריים. אופטימיזציות נוספות של פרוטוקולים אלה חייבות לטפל בשתי בעיות עיקריות בבידוד EC: (1) זיהום תאים ורקמות, שיש לפתור במעברי התרבית המוקדמים ביותר האפשריים כדי למזער את ההזדקנות המשוכפלת של EC20; ו-(2) התשואה הנמוכה של מבודדי EC ראשוניים.

מחקר זה מתאר פרוטוקול חדש לבידוד בעל תפוקה גבוהה וטוהר גבוה של HLMVECs ו-HPAECs. הליך זה יכול להיות ישים בקלות ולתת ECs macrovascular ו microvascular טהור בכמה צעדים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה אושר, והפרוטוקול פעל בהתאם להנחיות ועדת האתיקה של המחקר האנושי של אוניברסיטת קייטי-פסקארה (#237_2018bis). איור 1 מדגים את הבידוד של תאי אנדותל ממקטעים (באורך 1-3 ס"מ) של פרנכימה ריאתית או עורק ריאתי מנבדקים אנושיים לא מזוהים (בהסכמה בכתב) שעברו ניתוחי חזה מסיבות שונות, כגון דלקת ריאות או לובקטומיה. במקרה האחרון, המנתחים אספו גם קטע עורק ריאתי. יש לציין כי המנתחים הונחו במדויק לאסוף דגימות נקיות מסרטן. הפרוטוקול המוצג הותאם להשגת התשואה והטוהר הגדולים ביותר האפשריים.

1. הכנה ניסיונית

  1. הרכבה מחדש של Collagenase
    1. יש להמיס אבקת קולגנאז במי מלח חוצצי פוספט ללא CaCl 2 ו-MgCl 2 (PBS−−, ראו טבלת חומרים) בריכוז של2 מ"ג/מ"ל, ולסנן את התמיסה באמצעות מסנן נקבוביות של 0.22 מיקרומטר.
    2. הכינו 5 מ"ל aliquots, ולאחסן אותם ב -20 ° C. הפשירו וחממו מראש את האליציטוטים ל-37°C לפני השימוש.
  2. ציפוי פלטה
    1. עבור ציפוי צלחת, פיפטה 1.5% תמיסת ג'לטין או 50 מיקרוגרם / מ"ל פיברונקטין (ראה טבלה של חומרים) לתוך צלחת התרבית (500 μL מספיק כדי לכסות את פני השטח של כל באר של צלחת 6 בארות), לדגור במשך 1 שעה ב 37 ° C.
    2. לאחר הדגירה, להסיר את הג'לטין העודף, ולשטוף את הבארות עם PBS−−. שאפו את ה-PBS, ותנו לצלחת להתייבש במכסה מנוע סטרילי.
      הערה: להרכבה מחדש של ג'לטין, יש להמיס את האבקה במים כדי ליצור תמיסה של 1.5%, ולאחר מכן לבצע אוטוקלבה ולאחסן בטמפרטורה של 4°C. ג'לטין ב 1.5% אינו נוזלי ב 4 ° C; לכן, יש לחמם אותו לפני ציפוי הצלחת. לחילופין, ניתן להשתמש בכל תמיסת ג'לטין מסחרית המתאימה לתרביות תאים לצורך ציפוי הצלחת.

2. הכנת מדגם

  1. פרנכימה ריאתית
    1. שטפו את הדגימות שנאספו על ידי טבילתן בצינור של 50 מ"ל המכיל PBS−−.
    2. מעבירים את הדגימות לצלחת פטרי סטרילית, וקוצצים ידנית באמצעות מספריים כירורגיים (גודל אופטימלי: >2 ס"מ) למקטעים קטנים של כ-3-4 מ"מ כל אחד.
  2. מקטעי עורקים
    1. שטפו את הדגימות שנאספו על ידי טבילתן בצינור של 50 מ"ל המכיל PBS−−.
    2. העבירו אותו לצלחת פטרי סטרילית ללא קיצוץ, שכן פיצול יגדיל את שטח הפנים של חתך הרוחב של קטע העורק, ובכך יגדיל את האפשרות לבודד שאינם ECs.

3. עיכול אנזימטי

  1. שטפו את פרנכימת הריאה הקצוצה או את מקטע עורק הריאה פעמיים עם PBS−−. צעד זה יסיר חלק גדול מהדם השיורי.
  2. מניחים את הדגימות בצינורות של 15 מ"ל, ודגרים עם 5 מ"ל של collagenase מסוג 2 (ראה טבלת חומרים) למשך 10 דקות ב 37 ° C ו 5% CO2. במהלך דגירה זו, ההתפרקות של המטריצה החוץ תאית משחררת תאים בודדים וצברי תאים.

4. התאוששות של תאים מעוכלים

  1. הניחו מסננת פלדה / מתכת סטרילית (כלומר, מסננת תה בגודל רשת ~ 1 מ"מ) על החלק העליון של צינור איסוף של 50 מ"ל.
  2. יוצקים את כל התוכן מצינורית 15 מ"ל על המסננת, מעסים בעדינות את הרקמה המעוכלת עם מרית, ושוטפים את הדגימה עם PBS−− עד שצינורית האיסוף מתמלאת.
    הערה: שלב זה יבטל שברי רקמות גדולים בקנה מידה מילימטרי, ויבטיח יעילות רבה יותר של שלבי הסינון הבאים.

5. הסרה שאינה EC על ידי סינון

  1. סנן את הזרימה שנאספה בשלב 4.2 באמצעות מסננת תאים בגודל רשת של 70 מיקרומטר, ואסוף את הזרימה בצינור טרי של 50 מ"ל.
  2. לאחר מכן, השתמש במסננת תאים בגודל רשת של 40 מיקרומטר, ואסוף את הזרימה החוצה בצינור טרי של 50 מ"ל. תייג צינור זה כ"צינור 1".
    הערה: סינונים אלה בשלב 5.1 ובשלב 5.2 יסירו צברי תאים גדולים, המורכבים לעתים קרובות מאוכלוסיות תאים מעורבות.

6. שקיעה של צבירי תאים וזריעת תאים

  1. צנטריפוגה את הדגימות ב 30 x גרם במשך 5 דקות בטמפרטורת החדר כדי לשקע את אשכולות התא.
  2. מוציאים בזהירות את הסופרנאטנט בעזרת פיפטה סטרילית (לא שופכים), ומניחים אותו בצינור טרי של 50 מ"ל ("צינור 2").
  3. השהה את הגלולה ב"צינור 1", ומלא את הצינור עד 50 מ"ל עם PBS−−. מלא "צינור 2" עד 50 מ"ל עם PBS−−.
    הערה: משלב זה ואילך, שני הצינורות מטופלים באותו אופן.
  4. צנטריפוגה את הדגימות ב 300 x גרם במשך 5 דקות בטמפרטורת החדר.
  5. להשהות את הכדוריות עם 2 מ"ל של מדיום צמיחה (ראה טבלת חומרים), ולזרוע את התרחיף בשתי בארות נפרדות של צלחת מצופה מראש 6 בארות (שלב 1.2).
    הערה: משלב זה, הזן את התאים כל יומיים עם מדיום הגידול עד שהם מגיעים למפגש (כשבוע, בהתאם לגודל המדגם) על מנת לקבל מספר סביר של תאים למיון.

7. הרחבת תאים

  1. שטפו את התאים עם 2 מ"ל PBS עם CaCl 2 ו-MgCl2 (PBS++, ראו טבלת חומרים) כדי להסיר את שאריות תאי הדם (שימוש ב-PBS++ חשוב כדי למנוע ניתוק תאים).
  2. הסר את PBS++ והוסף מדיום תרבית רענן.
  3. חזור על שלב 7.1 ושלב 7.2 עד שהתאים מגיעים למפגש (כשבוע, בהתאם לגודל הדגימה).

8. מיון תאים

  1. נתק את התאים באמצעות 500 μL של טריפסין-EDTA (0.05%, ראה טבלת חומרים), צנטריפוגה, והשהה מחדש את הגלולה עם 190 μL של PBS−−.
  2. הוסף 10 μL של נוגדן CD31-FITC מצומד פלואורסצנטי אנטי-אנושי (דילול 1:20, ראה טבלת חומרים), ודגור על תרחיף התא ב -4 ° C למשך 30 דקות.
  3. שטפו את התאים באמצעות 10 מ"ל של PBS−−, צנטריפוגה ב 300 x גרם במשך 5 דקות בטמפרטורת החדר, והשעו מחדש את הגלולה ב 300 מיקרוליטר של PBS−−−.
  4. בודד ואסוף תאים חיוביים CD31 (CD31+) על ידי מיון תאים המופעלים על ידי פלואורסצנטיות (FACS), באמצעות פייה של 100 מיקרומטר, ואסוף אותם בצינור.
    1. בהתאם לאסטרטגיית הגאט, הגדר תחילה את המורפולוגיה של התא באמצעות פרמטרי אזור פיזור הצד, SSC-A ו- FSC-A. לאחר מכן, בחר תאים בודדים באמצעות תרשים נקודות FSC-Area/FSC-Height או SSC-Area/SSC-Height, הגדר את התאים החיוביים במדגם המסומן לעומת דגימת הבקרה הלא מוכתמת, וכוון את התאים הפלואורסצנטיים לתוך צינור האיסוף21.
  5. צנטריפוגה את תרחיף התא ב 300 x גרם במשך 5 דקות בטמפרטורת החדר, ולהשעות את הגלולה ב 2 מ"ל של מדיום צמיחה לזריעה בבארות מצופות מראש של צלחת 6 בארות.

9. הרחבה לאחר מיון

  1. יומיים לאחר מיון התאים, החליפו את המדיום המותנה במדיום גידול טרי.
  2. חזור על שלב 7.1 ושלב 7.2 כל יומיים לצורך הרחבת תאים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בידוד HLMEC
הבעיה העיקרית במהלך הבידוד של HLMVECs היא נוכחות של תאים מזהמים, שכן נימים מיקרוסקופיים לא ניתן להפריד בקלות מרקמת סטרומה. לכן, השגת טוהר גבוה ככל האפשר בשלבים המוקדמים ביותר של תהליך הבידוד היא חיונית על מנת להפחית את מעברי התרבית, ובכך את הזדקנות התא. כמו כן, פרוטוקול בידוד אופטימלי אמור לתת את התשואה הגבוהה ביותר האפשרית של HLMVECs טהורים. כדי להשיג מטרות אלה, נקבע נוהל חדש המבוסס על פרוטוקולים 10,11,12,14,15 שתוארו קודם לכן.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

התפקידים המרובים שממלאים תאי אנדותל וסקולריים בפתופיזיולוגיה האנושית הופכים תאים אלה לכלי חיוני למחקרים פתוגנטיים ופרמקולוגיים במבחנה . מכיוון שECs מאתרים / איברים שונים של כלי דם מציגים תכונות ותפקודים מוזרים, הזמינות של ECs בריאים וחולים מהאיבר המעניין תהיה אידיאלית למטרות מחקר. לדוגמה, HLMVECs חיוניים למחקרים על דלקת ריאות; לכן, מתודולוגיה לבידוד בעל תפוקה גבוהה וטוהר גבוה של תאים אלה תועיל לתחומי מחקר שונים.

שיטות לבידוד HLMVECs דווחו על ידי קבוצות שונות 10,11,12,14,15,17,18,19.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים כי המחקר נערך ללא כל יחסים מסחריים או פיננסיים שיכולים להתפרש כניגוד עניינים פוטנציאלי.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה על ידי כספים ממשרד האוניברסיטה והמחקר האיטלקי (לשעבר 60% 2021 ו -2022) ל- R. P. ועל ידי מענקים מקרן סיסטיק פיברוזיס האיטלקית (FFC #23/2014) וממשרד הבריאות האיטלקי (L548/93) ל- M. R.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
0.05% טריפסין-EDTA 1XGIBCO25300-054משמש לניתוק תאים מלוחות התרבות
נוגדן נגד CD31, שיבוט WM59DakoM0823משמש לצביעה CD-31 באימונוציטוכימיה. דילול בשימוש: 1:50
Anti vWF AntibodyThermo Fisher ScientificMA5-14029משמש לצביעת פקטור פון ווילברנד באימונוציטוכימיה. דילול עבודה: 1:100
מספריים כירורגיים הניתנים לחיטויכל משמשלקיצוץ דגימות
מסנני תאים 40 ומיקרו; מקורנינג431750בשימוש במהלך הסינון השני
מסנני תאים 70 ומיקרו; mCorning431751שימוש במהלך הסינון הראשון
קולגנאז, סוג 2וורת'ינגטוןLS004177סוג 2 קולגנאז המשמש לעיכול אנזימטי. ריכוז עבודה: 2 מ"ג/מ"ל
מצומד אנטי CD31 נוגדןBD Biosciences555445משמש למיון תאים (דילול 1:20)
Dulbecco ′ s תמיסת מלח חוצצת פוספט (PBS) עם  CaCl2 ו-MgCl2Sigma-AldrichD8662משמש לשטיפת תאים לפני שינוי בינוני
Dulbecco′ s פוספט חוצץ מלח (PBS) ללא CaCl2 ו-MgCl2Sigma-AldrichD8537משמש לשטיפת דגימות ותאים כירורגיים לפני טריפסיניזציה
מדיום גידול תאי אנדותל MVPromoCellC-22020מדיום גידול HLMVEC
פיברונקטיןסיגמא-אולדריץ'F0895פיברונקטין מפלזמה אנושית המשמשת לציפוי צלחות. ריכוז עבודה: 50 ומיקרו; g/mL
ג'לטין מעור חזיר, סוג ASigma-AldrichG2500משמש לציפוי צלחת
סוג A ג'לטיןSigma-Aldrichg-2500מעור חזיר המשמש לציפוי צלחות. ריכוז עבודה: 1.5%

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Muller, W. A. Leukocyte-endothelial-cell interactions in leukocyte transmigration and the inflammatory response. Trends in Immunology. 24 (6), 326-333 (2003).
  2. Sumpio, B. E., Timothy Riley, J., Dardik, A. Cells in focus: Endothelial cell. The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. 34 (12), 1508-1512 (2002).
  3. Lüscher, T. F., Tanner, F. C. Endothelial regulation of vascular tone and growth. American Journal of Hypertension. 6, 283-293 (1993).
  4. Marki, A., Esko, J. D., Pries, A. R., Ley, K. Role of the endothelial surface layer in neutrophil recruitment. Journal of Leukocyte Biology. 98 (4), 503-515 (2015).
  5. Crampton, S. P., Davis, J., Hughes, C. C. W. Isolation of human umbilical vein endothelial cells (HUVEC). Journal of Visualized Experiments. (3), e183(2007).
  6. Ganguly, A., Zhang, H., Sharma, R., Parsons, S., Patel, K. D. Isolation of human umbilical vein endothelial cells and their use in the study of neutrophil transmigration under flow conditions. Journal of Visualized Experiments. (66), e4032(2012).
  7. Dejana, E., Corada, M., Lampugnani, M. G. Endothelial cell-to-cell junctions. FASEB Journal. 9 (10), 910-918 (1995).
  8. Plebani, R., et al. Establishment and long-term culture of human cystic fibrosis endothelial cells. Laboratory Investigation. 97 (11), 1375-1384 (2017).
  9. Totani, L., et al. Mechanisms of endothelial cell dysfunction in cystic fibrosis. Biochimica Et Biophysica Acta. Molecular Basis of Disease. 1863 (12), 3243-3253 (2017).
  10. Gaskill, C., Majka, S. M. A high-yield isolation and enrichment strategy for human lung microvascular endothelial cells. Pulmonary Circulation. 7 (1), 108-116 (2017).
  11. Hewett, P. W. Isolation and culture of human endothelial cells from micro- and macro-vessels. Methods in Molecular Biology. 1430, 61(2016).
  12. van Beijnum, J. R., Rousch, M., Castermans, K., vander Linden, E., Griffioen, A. W. Isolation of endothelial cells from fresh tissues. Nature Protocols. 3 (6), 1085-1091 (2008).
  13. Comhair, S. A. A., et al. Human primary lung endothelial cells in culture. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 46 (6), 723-730 (2012).
  14. Visner, G. A., et al. Isolation and maintenance of human pulmonary artery endothelial cells in culture isolated from transplant donors. The American Journal of Physiology. 267, 406-413 (1994).
  15. Mackay, L. S., et al. Isolation and characterisation of human pulmonary microvascular endothelial cells from patients with severe emphysema. Respiratory Research. 14 (1), 23(2013).
  16. Ventetuolo, C. E., et al. Culture of pulmonary artery endothelial cells from pulmonary artery catheter balloon tips: considerations for use in pulmonary vascular disease. The European Respiratory Journal. 55 (3), 1901313(2020).
  17. Wang, J., Niu, N., Xu, S., Jin, Z. G. A simple protocol for isolating mouse lung endothelial cells. Scientific Reports. 9 (1), 1458(2019).
  18. Wong, E., Nguyen, N., Hellman, J. Isolation of primary mouse lung endothelial cells. Journal of Visualized Experiments. (177), e63253(2021).
  19. Kraan, J., et al. Endothelial CD276 (B7-H3) expression is increased in human malignancies and distinguishes between normal and tumour-derived circulating endothelial cells. British Journal of Cancer. 111 (1), 149-156 (2014).
  20. Khan, S. Y., et al. Premature senescence of endothelial cells upon chronic exposure to TNFα can be prevented by N-acetyl cysteine and plumericin. Scientific Reports. 7 (1), 39501(2017).
  21. Cossarizza, A., et al. Guidelines for the use of flow cytometry and cell sorting in immunological studies (second edition). European Journal of Immunology. 49 (10), 1457(2019).
  22. Miron, R. J., Chai, J., Fujioka-Kobayashi, M., Sculean, A., Zhang, Y. Evaluation of 24 protocols for the production of platelet-rich fibrin. BMC Oral Health. 20 (1), 310(2020).
  23. Lenting, P. J., Christophe, O. D., Denis, C. V. von Willebrand factor biosynthesis, secretion, and clearance: Connecting the far ends. Blood. 125 (13), 2019-2028 (2015).
  24. Thompson, S., Chesher, D. Lot-to-lot variation. The Clinical Biochemist Reviews. 39 (2), 51-60 (2018).
  25. Plebani, R., et al. Modeling pulmonary cystic fibrosis in a human lung airway-on-a-chip. Journal of Cystic Fibrosis. 21 (4), 606-615 (2021).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

מאמרים קשורים