הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

ייצור סרום מותנה אוטולוגי מותאם והערכת Ex Vivo של פוטנציאל הריפוי שלו באפיתל הקרנית

3.3K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/64911

⸱

24 במרץ 2023

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Education, Chang Gung Memorial Hospital Linkou, 2School of Medicine, Chang Gung University, 3Department of Chemical Engineering and Biotechnology, National Taipei University of Technology, 4Cell Therapy Center, Tri-Service General Hospital, 5Department of General Surgery, Bo-Ai Clinic, 6Department of Ophthalmology, Chang Gung Memorial Hospital Linkou, 7Institute of Clinical Medicine, National Yang Ming Chiao Tung University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

מאמר זה מתאר פרוטוקול כדי לפשט את התהליך ולהפוך את הכנת סרום מותנה אוטולוגי (ACS) לפחות יקר. אין צורך במזרקים מיוחדים או בחרוזי זכוכית מצופים פני שטח. יתר על כן, ACS שונה (mACS) יש יתרונות תחרותיים על פני סרום אוטולוגי קונבנציונאלי ריפוי פצע הקרנית של העיניים murine ex vivo.

תקציר

טיפולים מקומיים שמקורם בדם אנושי היו ברכה לרופאים בעשורים האחרונים. סרום אוטולוגי (AS) ופלזמה עשירה בטסיות דם (PRP) מועשרים בגורמי גדילה אפיתליאוטרופיים החיוניים לריפוי פצעים בקרנית. בניגוד ל-AS, PRP מבוסס על מערכת צנטריפוגות דיפרנציאלית, המניבה יותר גורמי גדילה שמקורם בטסיות. סרום אוטולוגי מותנה (ACS) לא רק משמר את הכנת AS ו- PRP, אלא גם מתמקד בתכונות מווסתות חיסון, החשובות במחלות דלקתיות.

היעדר פרוטוקולים סטנדרטיים ועלויות הכנה גבוהות הם מגבלות ליישום קליני של ACS. ניסוי וידאו זה מדגים הליך הפעלה סטנדרטי להכנת טיפות עיניים מסוג סרום מותנה אוטולוגי (mACS). ראשית, גליצרול נוסף למזרקי הפרין כמייצב תאי הדם במהלך דגירה היפוקסית. כדי להפעיל את תאי הדם, החלה דגירה של 4 שעות ב 37 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, דגימות הדם היו צנטריפוגות ב 3,500 × גרם במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר סינון הסופרנאטנט דרך מסנן של 0.22 מיקרומטר, טיפות העיניים mACS הוכנו במלואן.

ניסוי טנטטיבי של ההשפעה הטיפולית של mACS הראה כי עשויים להיות לו יתרונות תחרותיים על פני AS קונבנציונלי בריפוי פצע הקרנית בעיני עכבר ex vivo . ה- AS המשמש במחקר זה הוכן על פי מחקרים שפורסמו והפרקטיקה הקלינית בבית החולים שלנו. לכן, ניתן להעריך את היעילות של mACS על מחלות פני השטח של העין במחקר עתידי באמצעות מחקרים בבעלי חיים in vivo וניסויים קליניים.

מבוא

ההשפעות הטיפוליות של סרום אוטולוגי (AS) במחלות עיניים יבשות דווחו לראשונה בשנות השמונים על ידי פוקס ואחרים1. הוא האמין כי הן את תכונת סיכה ואת המרכיבים הביוכימיים epitheliotropic חיוני AS, מחקה דמעות טבעיות, לטובת התפשטות של תאי אפיתל הקרנית. במהלך העשורים האחרונים בוצעו מספר מחקרים על בסיס זה. מרכיבים טרופיים כוללים גורם גדילה אפידרמיס (EGF), ויטמין A, גורם גדילה טרנספורמטיבי β (TGF- β), וציטוקינים אחרים. באופן מעניין, הסרום עשיר ב-TGF-β ובוויטמין A, אשר מאמינים כי יש להם תפקיד מרכזי בהתפשטות האפידרמיס 2,3,4,5. בנוסף, כאשר מטפלים בחולים עם מחלות פני העין, מספר מחקרים הראו כמה יתרונות של טיפות עיניים AS בתוצאות המדווחות על ידי המטופלים, פרמטרים אובייקטיביים אחרים של עין יבשה 6,7, וממצאים מיקרוסקופיים כגון צפיפות תאים8. מחקרי מטא-אנליזה גילו כי עשויים להיות כמה יתרונות בשיפור תסמונות המטופל עם טיפול בטיפות עיניים AS, אך תוצאות ותצפיות ארוכות טווח עדיין חסרות 9,10.

שלא כמו AS, פלזמה עשירה בטסיות דם (PRP) נגזרת מהוספת נוגד קרישה במהלך ההכנה, עם צנטריפוגה דיפרנציאלית נוספת והפעלה כימית של טסיות הדם. בהשוואה ל- AS, כימיקלים וגורמי גדילה רבים, כגון TGF- β, גורם גדילה אנדותל כלי דם (VEGF) ו- EGF, נמצאים ב- PRP. זה כבר מיושם גם על מחלות פני השטח של העין עם יתרונות קליניים בהקלה על סימפטומים11.

הקשר הצולב, בין פגמים אפיתליאליים לדלקת, הוא מורכב. יש לציין כי אימונופתופיזיולוגיה היא נושא חשוב נוסף במחלות פני העין. מאמינים כי ציטוקינים מעודדי דלקת, כגון IL-1β ו-IFN-γ, הם מתווכים מרכזיים במפל דלקתי12. כך נפתחים אפיקי טיפול חדשים המבוססים על הבנת מנגנון החיסון. אסטרטגיות לעצור את התהליך הדלקתי הזה, כולל ייצור אנטגוניסט קולטן אינטרלוקין-1 (IL-1Ra) וציטוקינים אנטי דלקתיים אחרים, עשויות גם לשחק תפקיד חשוב במחלות פני השטח של העין13,14,15.

מאז 1998, אורתוקין, סרום אוטולוגי מותנה מסחרי (ACS), נמצא בשימוש קליני בחולים אורתופדיים הסובלים מאוסטאוארתריטיס (OA), דלקת מפרקים שגרונית (RA) והפרעות בעמוד השדרה13. בהשוואה ל- AS ו- PRP, טיפול בחרוזי זכוכית מצופים כימית ודגירה היפוקסית להפעלת מונוציטים הם התכונות הספציפיות של ACS16. תיאורטית, ניתן להפריש יותר גורמים אנטי דלקתיים על-ידי הוספת עקה הישרדותית לתאים, וכתוצאה מכך ריכוז גבוה יותר של רכיבים חיוניים המווסתים את מערכת החיסון, כולל IL-1Ra. היתרונות הטיפוליים המשופרים של ACS ב- OA, בהשוואה ל- AS, דווחו גם הם17. מחלות פני השטח של העין חולקות רקע חיסוני דומה עם מחלות דלקתיות אורתופדיות במובנים מסוימים. לכן, בהתבסס על התוצאות המוצלחות של טיפול שמקורו בדם אנושי בתחום האורתופדי, ACS עשוי להיות בעל יתרונות על פני טיפולים קונבנציונליים בקליניקה על ידי תכונות אפיתליאוטרופיות ומווסתות חיסון. למרות ACS כבר בשימוש נרחב במחלות דלקתיות אורתופדיות, היישומים הקליניים שלה ברפואת עיניים עדיין צריך להיחקר, אשר עשוי להיות מעוכב על ידי העלות הגבוהה שלה, חוסר תמיכה ספרותית, וחוסר סטנדרטיזציה של תהליך ההכנה, וכתוצאה מכך ביצועים מגוונים.

במאמר וידאו זה, הודגמה שיטה חדשנית, חסכונית ונוחה ליצירת ACS שונה (mACS), או פלזמה עשירה בגורמי גדילה (PRGF), המייצרת פתרון טיפות עיניים עם ערך מעשי דומה ל- ACS ממוסחר. רעיונות המפתח של הוספת נוגדי קרישה והפעלת תאי הדם להפריש ציטוקינים אנטי דלקתיים על ידי דגירה בלחץ נשמרו, אך בניגוד לשיטות המושרות כימית, כגון אלה המבוססות על חרוזי זכוכית מצופים CrSO4 וערכות מסחריות, מצב הלחץ הקריטי נגרם פיזית על ידי דגירה היפוקסית בשיטה זו. יתר על כן, גליצרול נוסף כדי לספק יתרונות נוספים, כולל עלייה ביציבות הממברנה של תאי הדם, שמירה על לחץ נוזל חוץ תאי אוסמוטי תקין18, ומקור מתאים של חומרים מזינים בתנאים היפוקסיים המונעים עומס יתר על התאים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

המחקר בוצע בהתאם להנחיות המוסדיות בתחילת פרק הפרוטוקול. כל הפרוטוקולים והנהלים בוצעו על פי הצהרת הלסינקי ונבדקו ואושרו על ידי ועדת הביקורת המוסדית של הקרן הרפואית צ'אנג גונג. כל המתנדבים קיבלו מידע על אופי המחקר וחתמו על טופס הסכמה מדעת לפני הכללתם. החומרים המתכלים הדרושים לכל הליך הניסוי מוצגים באיור 1 ובאיור 2, כמו גם בטבלת החומרים.

1. הכנת החומרים הדרושים לייצור טיפות עיניים mACS

  1. הכינו 250 מ"ל של תמיסת גליצרול 10% והחזיקו ערכת עירוי 21 גרם כנפי פרפר, מזרק 3 מ"ל ללא המחט, ושישה צינורות vacutainer 10 מ"ל המכילים הפרין 158 יחידות USP מוכנות (איור 1).
  2. חבר את מחט איסוף הדם 21 גרם למזרק 3 מ"ל ומשוך 3 מ"ל של תמיסת גליצרול 10% לתוך המזרק המוכן.
    הערה: יש לעקר את כל החומרים לפני החדרת המחט.
  3. פזרו את תמיסת הגליצרול 10% לתוך צינורות הוואקוטאיינר ברצף, עם כ-0.5 מ"ל של תמיסת גליצרול 10% בכל אחד מהם (איור 3A).
    הערה: בגלל הלחץ השלילי במבחנה, המחט חייבת לצאת מיד לאחר שהיא נכנסת כדי להפיץ באופן שווה 3 מ"ל של תמיסת גליצרול לשש המבחנות.
  4. לעקר את העור של המטופל עם 75% אלכוהול צמר גפן סטרילי. לנקב את הווריד השטחי של הגפיים העליונות של המטופל עם מחט איסוף הדם 18 G. צייר 60-70 מ"ל של דם ורידי מן הווריד השטחי בסך הכל.

2. הכנה לטיפות עיניים mACS

  1. הזריקו ברצף 10 מ"ל של הדם הוורידי הנשאב לתוך כל אחד מששת צינורות ה-vacutainer (איור 3B).
    הערה: שלב זה מסתמך על הלחץ השלילי של הוואקום כדי למלא את הצינורות. כדי למנוע הפרעה לתאי הדם והמוליזה, אין להפעיל לחץ חיובי.
  2. הניחו את ששת צינורות הוואקוטיינר באינקובטור עם טמפרטורה קבועה של 37°C למשך 4 שעות (איור 3C).
    הערה: המצב ההיפוקסי נשמר ומיוצב על ידי הלחץ השלילי שנותר בצינור אטום שקיבל גליצרול.
  3. מוציאים את הצינורות מהאינקובטור לאחר 4 שעות וצנטריפוגות אותם ב-3,500 × גרם למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר.
  4. בשלב זה, הכינו את החומרים למיצוי mACS, כולל בקבוקי טיפות עיניים מעוקרים, מזרק 3 מ"ל עם המחט, מסנן 0.22 מיקרומטר, מחט 18 גרם וזוג כפפות סטריליות (איור 2).
    הערה: יש לנגב את שולחן הניתוחים עם 75% אלכוהול כדי להבטיח סביבה אספטית. הסופרנטנט, אחרי הצנטריפוגה, הוא כבר מוצר חצי מוגמר של mACS.
  5. הניחו את ששת הצינורות על מדף הצינור ופתחו את הפקקים לאחר צנטריפוגה מלאה (איור 3D).
    הערה: עקרות אינה נדרשת בשלב זה.
  6. שים כפפות סטריליות ולשלוף את mACS אחד אחד באמצעות מזרק 3 מ"ל עם מחט 18 גרם.
    הערה: היזהרו לא למשוך את שכבת תאי הדם התחתונה במהלך השלב הזה (איור 3E).
  7. משכו את המחט, חברו אותה למסנן של 0.22 מיקרומטר, וחברו את מחט איסוף הדם 23 G, 1.5 אינץ' עם מזרק 3 מ"ל המקורי לשקע למטה (איור 3F).
  8. דחפו את המחט בעדינות דרך מסנן 0.22 מיקרומטר לתוך בקבוקי טיפות העיניים הסטריליים המוכנים (איור 3G).
  9. חזרו על השלבים לעיל עד שכל ה-mACS יסונן ויאוחסן בבקבוקי טיפות עיניים (איור 3H).
  10. יש לאחסן את טיפות העיניים mACS בטמפרטורה של 4°C לשימוש מיידי; יש לאחסן בטמפרטורה של -20°C לשימור לטווח ארוך.
    הערה: אין לשמור אותם במשך יותר משבועיים ב 4 ° C או במשך יותר מ 3 חודשים ב -20 ° C 9,19.

3. מודל ריפוי פצע Ex vivo של אפיתל הקרנית מורין

הערה: המודל הבא של בעלי חיים ex vivo התבסס על ניסיון קודם של Hung et al. על פציעות מכניות של אפיתל הקרנית20. את השלבים הבאים יש לבצע תחת המיקרוסקופ כדי ליצור פצע אפיתל קרנית מוגבל היטב ועקבי.

  1. מרדימים עכברי C57BL/6 עם איזופלורן 3%-4%. הכניסו פנימה את אגרוף ביופסיית העור מעל הקרנית המרכזית של מורין, והותירו עיגול רדוד על האפיתל כשולי פצע אחידים.
    הערה: היו עדינים כדי למנוע קרע בגלגל העין.
  2. יש להוריד את אפיתל הקרנית בתוך האזור המאושר עד לשכבת באומן, בעזרת מסיר טבעת חלודה בקרנית המצויד בבור בקוטר 0.5 מ"מ.
  3. כדי לבסס את מודל בעלי החיים ex vivo של פצע הקרנית מכני, לקצור את גלגל העין ולהכין את התרבות היטב.
    1. להרדים תחילה את העכברים; לאחר מכן, לחץ בעדינות על שולי המסלול העליונים והנחותים של העכברים, הכנס את קצה המלקחיים מעל חלל הרטרובולבר, והחוצה את גלגל העין והחזק אותו במלקחיים.
    2. חותכים את עצב הראייה ואת הרקמה הרכה periorbital עם מספריים הקרנית כדי לבודד את גלגל העין בצורה מושלמת.
    3. מכינים צלחת 96 בארות עם שעווה מומסת בתוכה. צור במהירות חור עגול באמצעות קצות המלקחיים ולאחר מכן המתן להתמצקות.
  4. הכינו את המדיה לבדיקה: 0.5% mACS, 0.5% AS להשוואה, מי מלח רגילים כבקרה שלילית, ותווך הנשר המותאם של דולבקו (DMEM).
    הערה: mACS מתקבל באמצעות הפרוטוקול שהוזכר לעיל.
  5. לתרבות ex vivo , הניחו את גלגל העין שנקטף על צלחת מוכנה בת 96 בארות. הוסף 200 μL של כל מדיום לתוך צלחת 96 בארות.
  6. הכניסו את צלחת התרבית בת 96 הקידוחים לאינקובטור בטמפרטורה של 37°C עם 5% CO2. ודא כי מדיה תרבותית משתנה כל 24 שעות.
  7. כדי לאשר את אפקט ריפוי הפצע הרציף, עקוב אחר אזור פצע האפיתל מתחת למיקרוסקופ כל 8 שעות על ידי צביעת פלואורסצאין.
    1. ממיסים את הפלואורסצאין על נייר הפלואורסצאין במי מלח רגילים.
    2. זרקו את הצבע הפלואורסצאין על הקרנית המרכזית של המורין, ואז התבוננו ותיעדו אותו במיקרוסקופ. תוצאה אופיינית מוצגת באיור 4.
      הערה: טיפה אחת (כ-0.05 מ"ל) של צבע פלואורסצאין מספיקה לתצפית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

איור 1 ואיור 2 מראים את החומרים הדרושים לניסוי, ואיור 3 מציג את השלבים הרציפים ואת תוצרי הביניים המוצלחים במהלך הכנת mACS. ראשית, 0.5 מ"ל של תמיסת גליצרול 10% נוספה לכל מבחנה סטרילית של 10 מ"ל (איור 3A). לאחר מכן, 60-70 מ"ל של דם ורידי התקבלו מהמטופל, ו-10 מ"ל דם הוזרקו לכל צינור (איור 3B). דמו של המטופל חייב להיות נתון לבדיקות מעבדה יסודיות וסדירות לפני ההכנה כדי להבטיח כי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

במחקר זה, פרוטוקול להכנת mACS מתואר והיתרון של טיפות עיניים mACS בריפוי פצעים של מודלים של בעלי חיים מוצג עוד יותר. השינוי המכריע של פרוטוקול mACS זה הוא תוספת של כ -0.5 מ"ל של תמיסת גליצרול 10% בכל מבחנה, היוצרת תנאים היפוקסיים מתאימים במהלך הדגירה של 4 שעות ב -37 מעלות צלזיוס. הגדרה זו מספקת ל- AS מתח מתאים ותאים מעודדים להפריש את גורמי הגדילה הדרושים המסייעים לריפוי פצעים. מסנן 0.22 מיקרומטר יכול לעזור לחסל את החלבונים המקרומולקולריים, תאי הדם והזיהומים, ובכך להפוך את המוצר הסופי לטהור ופחות דביק.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

כל המחברים מצהירים כי אין ניגוד עניינים.

תודות

המחברים מודים ל-Ya-Lan Chien ול-Chia-Ying Lee על הסיוע הטכני המצוין, ול-OnLine English Company על המהדורה הלשונית. מחקר זה מומן בחלקו על ידי פרויקט המחקר הרפואי צ'אנג גונג (מענק מס' CMRPG3L1491).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
  צלחת תרבית 96 בארותMerck KGaA, גרמניהCLS3997
Barraquer מכסהספקולוםkatena K1-535515 מ"מ
מחזיק מחט BarraquerKatenaK6-3310ללא נעילה 
בארון ואקום אגרוף 8.0 מ"מkatenaK20-2108לחיתוך נייר סינון
BD 10.0 מ"ל צינורות ואקום המכילים הפרין 158 יחידות USPBecton, Dickinson and Company, US367880לפחות 6 צינורות, הכרחיים לאיסוף דם לניסויים הבאים וכדי למנוע הצטברות דם
BD 21 G סט עירוי כנפי פרפרBecton, Dickinson and Company, US367281לפיזור אחיד של תמיסת גליצרול
עכברי C57BL/6 המרכז הלאומי לחיות מעבדהRMRC11005לעכברים דגם
מלקחיים Castroviejo 0.12 מ"מkatena K5-2500
צנטריפוגהאפנדורף, גרמניה58110004283,500 x גרם למשך 10 דקות
צ'נג יי 10.0 מ"ל בקבוק טפטפת מעוקרצ'נג יי כימיקלים, טייוואןCP405141חייב להיות סטרילי וכמיכל האחסון למוצר הסופי
מסיר טבעת חלודה קרנית עם 0.5 מ"מ קוציםAlgerbrush IITM; Alger Equipment Co., Inc. Lago Vista, TXCHI-675לניקוי אפיתל הקרנית
Dulbecco שונה מדיום חיונימינימלי Merck KGaA, גרמניהD6429
נייר סינון טויו רושי קאישה בע"מ1.11
רצועות עיניים נתרן פלואורסצאין U.S.POPTITECHOPTFL100 צביעה לפגם באפיתל הקרנית 
חממתFirstek, טייוואןS300S37 ° C לכפפות סטריליות של 4 שעות
KanamLatex Industries, הודוEN455לפעולה אספטית
Merck 0.22 ומיקרו; m filterMerck KGaA, גרמניהPR05359לפחות 2 מסננים לסינון mACS
נאנג קואנג 250 מ"ל 10% תמיסת גליצרולנאנג קואנג פרמצבטיקה, טייוואן19496כדי להציע אפקט ייצוב ממברנה מתאים ולחץ אוסמוטי חוץ-תאי לתאי דם
תמיסת מלח רגילהTAIWAN BIOTECH CO., LTD.100-120-1101
אגרוף ביופסיה של העור 2 מ"מSTIEFEL22650
סטריאומיקרוסקופקארל זייס מדיטק, דבלין, קליפורניהמיקרוסקופ SV11לניתוח
מחט Terumo 18 GTerumo, טייוואןמזרק SMACF0120-18BX3.0 מ"ל עם מחט 18 G לחילוץ הסופרנטנט לאחר צנטריפוגה
מזרק Terumo 20.0 מ"לTerumo, טייוואןMDSS20ESיכול לשמש לאיסוף סרום לאחר צנטריפוגה ראשונית ולהשתמש בו לצנטריפוגה משנית.
מזרק Terumo 3.0 מ"ל עם מחט 23 גרםמזרק Terumo, TaiwanMDSS03S23253.0 מ"ל משמש לחילוץ הסופרנטנט לאחר צנטריפוגה. לאחר מכן חבר את המסנן ואת מחט ה-23 גרם להזרקה לבקבוקי טיפות העיניים.
Westcott מספריים טנוטומיה בינוניתK4-3004

מקורות

  1. Fox, R. I., Chan, R., Michelson, J. B., Belmont, J. B., Michelson, P. E. Beneficial effect of artificial tears made with autologous serum in patients with keratoconjunctivitis sicca. Arthritis and Rheumatology. 27 (4), 459-461 (1984).
  2. Noble, B. A., et al. Comparison of autologous serum eye drops with conventional therapy in a randomised controlled crossover trial for ocular surface disease. The British Journal of Ophthalmology. 88 (5), 647-652 (2004).
  3. Bradley, J. C., Bradley, R. H., McCartney, D. L., Mannis, M. J. Serum growth factor analysis in dry eye syndrome. Clinical & Experimental Ophthalmology. 36 (8), 717-720 (2008).
  4. Alshammari, T. M., Al-Hassan, A. A., Hadda, T. B., Aljofan, M. Comparison of different serum sample extraction methods and their suitability for mass spectrometry analysis. Saudi Pharmaceutical Journal. 23 (6), 689-697 (2015).
  5. Tsubota, K., et al. Treatment of dry eye by autologous serum application in Sjögren's syndrome. The British Journal of Ophthalmology. 83 (4), 390-395 (1999).
  6. Urzua, C. A., Vasquez, D. H., Huidobro, A., Hernandez, H., Alfaro, J. Randomized double-blind clinical trial of autologous serum versus artificial tears in dry eye syndrome. Current Eye Research. 37 (8), 684-688 (2012).
  7. Cui, D., Li, G., Akpek, E. K. Autologous serum eye drops for ocular surface disorders. Current Opinion in Allergy and Clinical Immunology. 21 (5), 493-499 (2021).
  8. Jirsova, K., et al. The application of autologous serum eye drops in severe dry eye patients; subjective and objective parameters before and after treatment. Current Eye Research. 39 (1), 21-30 (2014).
  9. Pan, Q., Angelina, A., Marrone, M., Stark, W. J., Akpek, E. K. Autologous serum eye drops for dry eye. Cochrane Database of Systematic Reviews. 2 (2), (2017).
  10. Wang, L., et al. Autologous serum eye drops versus artificial tear drops for dry eye disease: a systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials. Ophthalmic Research. 63 (5), 443-451 (2020).
  11. Soni, N. G., Jeng, B. H. Blood-derived topical therapy for ocular surface diseases. The British Journal of Ophthalmology. 100 (1), 22-27 (2016).
  12. Solomon, A., et al. anti-inflammatory forms of interleukin-1 in the tear fluid and conjunctiva of patients with dry-eye disease. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 42 (10), 2283-2292 (2001).
  13. Meijer, H., Reinecke, J., Becker, C., Tholen, G., Wehling, P. The production of anti-inflammatory cytokines in whole blood by physico-chemical induction. Inflammation Research. 52 (10), 404-407 (2003).
  14. Bielory, B. P., Shah, S. P., O'Brien, T. P., Perez, V. L., Bielory, L. Emerging therapeutics for ocular surface disease. Current Opinion in Allergy and Clinical Immunology. 16 (5), 477-486 (2016).
  15. Stevenson, W., Chauhan, S. K., Dana, R. Dry eye disease: an immune-mediated ocular surface disorder. Archives of Ophthalmology. 130 (1), 90-100 (2012).
  16. Yang, J., Guo, A., Li, Q., Wu, J. Platelet-rich plasma attenuates interleukin-1β-induced apoptosis and inflammation in chondrocytes through targeting hypoxia-inducible factor-2α. Tissue and Cell. 73, 101646(2021).
  17. Shakouri, S. K., Dolati, S., Santhakumar, J., Thakor, A. S., Yarani, R. Autologous conditioned serum for degenerative diseases and prospects. Growth Factors. 39 (1-6), 59-70 (2021).
  18. Gull, M., Pasek, M. A. The role of glycerol and its derivatives in the biochemistry of living organisms, and their prebiotic origin and significance in the evolution of life. Catalysts. 11 (1), 86(2021).
  19. Drew, V. J., Tseng, C. L., Seghatchian, J., Burnouf, T. Reflections on dry eye syndrome treatment: therapeutic role of blood products. Frontiers in Medicine. 5, 33(2018).
  20. Hung, K. H., Yeh, L. K. Ex vivo and in vivo animal models for mechanical and chemical injuries of corneal epithelium. Journal of Visualized Experiments. (182), e63217(2022).
  21. Geerling, G., Maclennan, S., Hartwig, D. Autologous serum eye drops for ocular surface disorders. The British Journal of Ophthalmology. 88 (11), 1467-1474 (2004).
  22. Rutgers, M., Saris, D. B., Dhert, W. J., Creemers, L. B. Cytokine profile of autologous conditioned serum for treatment of osteoarthritis, in vitro effects on cartilage metabolism and intra-articular levels after injection. Arthritis Research & Therapy. 12 (3), R114(2010).
  23. Antebi, B., et al. Short-term physiological hypoxia potentiates the therapeutic function of mesenchymal stem cells. Stem Cell Research & Therapy. 9 (1), 265(2018).
  24. Chen, Y. M., Wang, W. Y., Lin, Y. C., Tsai, S. H., Lou, Y. T. Use of autologous serum eye drops with contact lenses in the treatment of chemical burn-induced bilateral corneal persistent epithelial defects. BioMed Research International. 2022, 6600788(2022).
  25. Diaz-Valle, D., et al. Comparison of the efficacy of topical insulin with autologous serum eye drops in persistent epithelial defects of the cornea. Acta Ophthalmologica. 100 (4), e912-e919 (2022).
  26. Metheetrairut, C., et al. Comparison of epitheliotrophic factors in platelet-rich plasma versus autologous serum and their treatment efficacy in dry eye disease. Scientific Reports. 12 (1), 8906(2022).
  27. NaPier, E., Camacho, M., McDevitt, T. F., Sweeney, A. R. Neurotrophic keratopathy: current challenges and future prospects. Annals of Medicine. 54 (1), 666-673 (2022).
  28. Garcia-Conca, V., et al. Efficacy and safety of treatment of hyposecretory dry eye with platelet-rich plasma. Acta Ophthalmologica. 97 (2), e170-e178 (2019).
  29. Gholian, S., et al. Use of autologous conditioned serum dressings in hard-to-heal wounds: a randomised prospective clinical trial. Journal of Wound Care. 31 (1), 68-77 (2022).
  30. Raeissadat, S. A., Rayegani, S. M., Jafarian, N., Heidari, M. Autologous conditioned serum applications in the treatment of musculoskeletal diseases: a narrative review. Future Science OA. 8 (2), 776(2022).
  31. Tokawa, P. K. A., Brossi, P. M., Baccarin, R. Y. A. Autologous conditioned serum in equine and human orthopedic therapy: A systematic review. Research in Veterinary Science. 146, 34-52 (2022).
  32. Evans, C. H., Chevalier, X., Wehling, P. Autologous conditioned serum. Physical Medicine and Rehabilitation. Clinics of North America. 27 (4), 893-908 (2016).
  33. Coskun, H. S., Yurtbay, A., Say, F. Platelet rich plasma versus autologous conditioned serum in osteoarthritis of the knee: clinical results of a five-year retrospective study. Cureus. 14 (4), e24500(2022).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

ריפוי פצעים בקרניתטיפות עיניים המכילות סרוםטיפולים מבוססי דםפלסמה עשירה בטבקיותמחלות של פני השטח של העיןניתוח ציטוקיניםצנטריפוגציה דיפרנציאלית
ייצור סרום מותנה אוטולוגי מותאם והערכת Ex Vivo של פוטנציאל הריפוי שלו באפיתל הקרנית
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.