הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

אופטימיזציה של תרבית תאי אפיתל בעדשה הראשית של עכבר: מדריך מקיף לטריפסיניזציה

3.6K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/65912

⸱

21 ביוני 2024

 ,  , 
1Pharmaceutical Sciences, College of Pharmacy, University of North Texas Health Science Center, 2North Texas Eye Research Institute, University of North Texas Health Science Center

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

כתב יד זה מתאר פרוטוקול וידאו מפורט לגידול תאי אפיתל ראשוניים של עדשה (LECs), במטרה לשפר את יכולת השחזור ולסייע במחקר בקטרקט ובפסיפיקציה של קפסולה אחורית (PCO). הוא מציע הוראות שלב אחר שלב על דיסקציה של עדשות, בידוד LECs ותיקוף, ומשמש כמדריך רב ערך, במיוחד עבור מצטרפים חדשים בתחום.

תקציר

תאי אפיתל עדשה (LECs) ממלאים תפקידים חשובים רבים בשמירה על ההומאוסטזיס ותפקוד תקין של העדשה. LECs קובעים את צמיחת העדשה, התפתחותה, גודלה ושקיפותה. לעומת זאת, LECs לא מתפקדים יכולים להוביל להיווצרות קטרקט ו opacification קפסולה אחורית (PCO). כתוצאה מכך, הקמת מערכת תרבית LEC ראשונית חזקה חשובה לחוקרים העוסקים בפיתוח עדשות, ביוכימיה, טיפולי קטרקט ומניעת PCO. עם זאת, טיפוח LECs ראשוניים הציב זה מכבר אתגרים בשל זמינותם המוגבלת, קצב ההתרבות האיטי ואופיים העדין.

מחקר זה מתמודד עם מכשולים אלה על ידי הצגת פרוטוקול מקיף לתרבות LEC ראשונית. הפרוטוקול כולל שלבים חיוניים כגון גיבוש מדיום תרבית אופטימלי, בידוד מדויק של קפסולות עדשה, טכניקות טריפסיניזציה, נהלי תת-תרבית, פרוטוקולי קציר והנחיות לאחסון ומשלוח. לאורך כל תהליך התרבית, המורפולוגיה של התא נוטרה באמצעות מיקרוסקופ ניגודיות פאזה.

כדי לאשר את האותנטיות של LECs בתרבית, נערכו בדיקות immunofluorescence כדי לזהות את הנוכחות ואת ההתפלגות התת-תאית של חלבוני עדשה קריטיים, כלומר αA ו-γ-crystallins. פרוטוקול מפורט זה מצייד את החוקרים במשאב רב ערך לטיפוח ואפיון LECs ראשוניים, ומאפשר התקדמות בהבנת הביולוגיה של העדשה ופיתוח אסטרטגיות טיפוליות להפרעות הקשורות לעדשות.

מבוא

עדשת העין ממלאת תפקיד מכריע בראייה על ידי מיקוד האור הנכנס על הרשתית. הוא מורכב ממבנה שקוף, אווסקולרי המורכב מתאים מיוחדים, ביניהם תאי אפיתל עדשה (LEC) הם שחקני מפתח. LECs ממוקמים על פני השטח הקדמיים של העדשה והם אחראים על שמירה על שקיפותה, ויסות מאזן המים, והשתתפות בצמיחה ופיתוח העדשה 1,2. LECs הם סוג ייחודי של תאים הממוקמים בחלק הקדמי של העדשה, וממלאים תפקיד קריטי בשמירה על בהירות העדשה ותפקודה על ידי ייצור רציף של סיבי העדשה לאורך כל החיים.

קטרקט מאופיין על ידי עכירות מתקדמת של העדשה, וכתוצאה מכך עיוות ופיזור של אור, המוביל ראייה לקויה 3,4. המנגנונים המדויקים העומדים בבסיס היווצרות הקטרקט הם מורכבים ורב-גורמיים, וכוללים תהליכים תאיים ומולקולריים שונים כגון קרינת UV, נזקי חמצון וסכרור 5,6. LECs נמצאו לתרום באופן משמעותי להתפתחות של קטרקט, מה שהופך אותם מוקד חיוני של מחקר 1,2,7,8,9.

יתר על כן, אחד הנושאים הדחופים ביותר ברפואת עיניים כיום הוא שכיחות גבוהה יחסית של opacification קפסולה אחורית (PCO), הידוע גם בשם קטרקט משני. PCO נותר הסיבוך השכיח ביותר לאחר ניתוח קטרקט, המשפיע על עד 20-40% מהמטופלים המבוגרים ו -100% מהילדים בתוך 5 שנים לאחר הניתוח10. PCO נגרמת בעיקר על ידי LECs שיורית שנותרו בשקית הקופסית לאחר מיצוי קטרקט. תאים אלה עוברים טרנספורמציה פתופיזיולוגית רבת פנים הכוללת לא רק מעבר אפיתל למזנכימלי (EMT) אלא גם התמיינות של LECs לסיבי עדשה, וכתוצאה מכך אוכלוסיית תאים שהיא תערובת של LECs, סיבים ומיופיברובלסטים 11,12,13. התאים שעברו טרנספורמציה מתרבים ונודדים על פני קפסולת העדשה האחורית, מה שמוביל לליקוי ראייה. הבנת ההתנהגות ומנגנוני הבקרה של LECs במודלים של תרבות יכולה לספק תובנות חשובות לגבי מניעה וניהול של PCO. לכן, פרוטוקול זה של טיפוח LECs מציג כלי חיוני לחוקרי עיניים שמטרתם ללמוד, להבין ובסופו של דבר להילחם בסיבוך נפוץ זה לאחר הניתוח.

כדי לפענח את המורכבויות של ביולוגיית LEC ואת תפקידה בהיווצרות קטרקט ו- PCO, חיוני להקים מערכות חזקות וניתנות לשחזור במבחנה של תרביות תאים ראשוניות. תרבית LEC ראשונית מספקת לחוקרים סביבה מבוקרת לחקר הפונקציות, האיתות והמאפיינים המולקולריים של LECs. יתר על כן, הוא מאפשר לחקור תהליכים תאיים ואת ההשפעות של תנאי ניסוי שונים, ומספק תובנות יקרות ערך על הפיזיולוגיה והפתולוגיה של העדשה.

מחקרים קודמים העשירו את הבנתנו של טכניקות תרבות LEC 14,15,16,17,18,19,20. למרות שמחקרים אלה השתמשו במתודולוגיות שונות והניבו ממצאים משמעותיים על התנהגות ומאפייני LEC, פרוטוקול הקלטת וידאו מקיף ונגיש לטיפוח LECs נעדר בספרות הנוכחית. מגבלה זו עלולה לעכב את יכולתם של חוקרים מתחילים לשחזר במדויק את הטכניקות ועלולה להוביל לחוסר עקביות ושינויים בתוצאות הניסוי. על ידי מתן פרוטוקול הקלטת וידאו, מאמר מחקר זה נועד לגשר על פער זה ולספק משאב סטנדרטי שיכול לשפר את יכולת השחזור ולהקל על העברת ידע בתחום תרבות LEC.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות האגודה לחקר הראייה והעיניים לשימוש בבעלי חיים בחקר העיניים והראייה. אישור פרוצדורלי ניתן על ידי הוועדה לטיפול ושימוש בבעלי חיים של המרכז למדעי הבריאות באוניברסיטת צפון טקסס (מספר פרוטוקול: IACUC-2022-0008). עכברי C57BL/6J צעירים, בדרך כלל מתחת לגיל שבועיים, שימשו במחקרים אלה.

1. הכנת מדיום תרבית ודיסקציה של עדשה

  1. הכן מדיום תרבית על ידי הוספת 50 מ"ל של סרום בקר עוברי (FBS) ו 0.1 מ"ל של 50 מ"ג / מ"ל גנטמיצין ל 450 מ"ל של DMEM.
  2. המתת חסד אנושית של עכברי C57BL/6J מתחת לגיל שבועיים.
    הערה: ביצענו המתת חסד בשיטת שאיפתCO2 . קצב זרימה אופטימלי עבור מערכות המתת חסד CO2 צריך להזיז 30% עד 70% מנפח התא או הכלוב לדקה.
  3. הסירו בעדינות את העפעפיים באמצעות מספריים כירורגיים והפעילו לחץ עדין עם פינצטה מעוקלת משני הצדדים של ארובת העין, מה שגורם לעין לבלוט החוצה. בצעו חתך זהיר בקרנית באמצעות סכין הקטרקט וחלצו בזהירות את העדשה באמצעות פינצטה מעוקלת, כדי להבטיח שלא ייגרם נזק לעדשה או לקפסולה שלה.
    הערה: יש לנקוט משנה זהירות בעת ביצוע שלבים אלה כדי לשמור על שלמות כמוסת העדשה. בשל האופי העדין של העדשה, חשוב להשתמש בכלי ניתוח עם קצוות מעוקלים וקהים כדי למזער את הסיכון לנזק לעדשה.
  4. השתמשו בפינצטה מעוקלת עם קצוות קהים כדי להעביר את העדשות לצלחת תרבית רקמת פלסטיק בקוטר 60 מ"מ המלאה בתמיסת מלח חוצצת פוספט (DPBS) מחוממת מראש וסטרילית של Dulbecco המכילה 10 מיקרוגרם/מ"ל גנטמיצין.
  5. שטפו בעדינות את העדשות בתמיסת DPBS המכילה 10 מיקרוגרם/מ"ל גנטמיצין כדי להסיר לכלוך או מזהמים פוטנציאליים, להכין את העדשות להמשך עיבוד ולשמור על סביבת תרבית סטרילית.
  6. כדי לקבל מספר מספיק של LECs, אגרו ארבע עדשות עבור צלחת תרבית של 24 בארות ושש עדשות עבור צלחת תרבית של 6 בארות.

2. בידוד LECs

  1. לאחר השלמת תהליך השטיפה, הניחו את העדשה על פיסת נייר פילטר ואפשרו לה להתייבש.
  2. לאחר שהעדשה יבשה מספיק, העבירו אותה בזהירות לכיסוי של צלחת פטרי כהכנה להסרת קפסולת העדשה.
  3. סובבו את העדשה כלפי מעלה, וודאו שהמקטע הקדמי פונה כלפי מעלה. בעת השימוש בפינצטה כדי להחזיק את הקפסולה הקדמית, השתמש במלקחיים capsulorhexis ביד הדומיננטית כדי ליצור קרע קטן בכמוסה. משוך בעדינות את שני הכלים בכיוונים מנוגדים כדי להסיר את הקפסולה והכנס אותה ל- DPBS עד להשלמת כל נתיחות העדשה.
    הערה: כדי למנוע אי התאמות, החוקרים צריכים לנתח מיד כל כמוסת אפיתל עדשה ולאחסן אותם באופן זמני ב- DPBS. רק לאחר השלמת כל הדיסקציות מועברות הכמוסות באופן קולקטיבי לטריפסין הנשמר בטמפרטורה של 37°C, מה שמבטיח חשיפה מסונכרנת ואחידה.
  4. מעבירים בזהירות את קפסולת העדשה לצלחת בעלת 6 בארות. הוסף 1 מ"ל של תמיסת טריפסין 0.05% לכל באר כדי להתחיל את תהליך העיכול האנזימטי.
  5. בעדינות לעורר את תמיסת הטריפסין כדי להבטיח חלחול אחיד. מניחים את הצלחת באינקובטור תרבית תאים ומניחים לקפסולה להתעכל במשך 8-10 דקות בטמפרטורה של 37°C.
    הערה: שלב זה מקל על פירוק רקמת כמוסת העדשה ושחרור לאחר מכן של תאי אפיתל בודדים.
  6. לאחר הדגירה, טחנו בזהירות את קפסולת העדשה המעוכלת באמצעות מספריים מנתחים כדי לפרק את גושי הרקמה שנותרו ולקדם את הפרדת התאים.
    הערה: מודגשת יסודיות בטחינת רקמות כדי להבטיח שחרור תאים יעיל מקפסולות העדשה המעוכלת.
  7. הוסף 0.5 מ"ל של מדיום התרבית המכיל 10% FBS כדי להרוות את טריפסין. מעבירים את דגימות הרקמה לצינור צנטריפוגה וצנטריפוגה ב-1,000 × גרם למשך 5 דקות.
  8. הסר בזהירות את הסופרנאטנט מבלי להפריע לכדורית התא. השתמש 1 מ"ל של מדיום תרבית כדי להשעות מחדש את התאים ולזרוע את התאים בצלחת 24 בארות.
  9. שנה את מדיום התרבות כל 2-3 ימים.

3. תת-תרבות LECs

  1. ברגע שהתאים מגיעים למפגש, מוציאים את המדיום מצלחת התרבית. המשך לשטוף את התאים 2x עם 1 מ"ל של DPBS.
  2. הוסף 200 μL של תמיסת טריפסין-EDTA ומקם את התאים באינקובטור למשך 5 דקות.
  3. לאחר הדגירה, מוציאים את התאים מהאינקובטור ובודקים אותם תחת מיקרוסקופ כדי לוודא שהם התנתקו מצלחת התרבית והחלו לצוף.
  4. מוסיפים 1 מ"ל מדיום תרבית ומפיפטים בעדינות את התאים פי 3-5 כדי לנתק את כל התאים.
  5. מעבירים את התאים לצינורות צנטריפוגות וצנטריפוגות ב-1,000 × גרם למשך 5 דקות.
  6. בזהירות להסיר את supernatant ו resuspend את התאים במדיום הצמיחה המלא.
  7. במידת הצורך, ספור את מספר התא באמצעות המוציטומטר.
  8. חלק את תרחיף התא ביחס של 1:2 או 1:3 למטרות תת-תרבית.
  9. כאשר התרבות הופכת שוב למשתלבת, חזור על ההליכים הנ"ל.
    הערה: LECs פורחים בתנאי תרבות בצפיפות גבוהה. הימנע דילול יתר על המידה את התאים, כמו זה עלול לעכב את הצמיחה שלהם.

4. אחסון ומשלוח

הערה: מספר התא האידיאלי לאחסון הוא ~ 1 × 106.

  1. ביסודיות לשטוף את התאים 3x עם 1 מ"ל של DPBS. לאחר שטיפה, להוסיף 1 מ"ל של פתרון trypsin-EDTA ומניחים את התאים באינקובטור במשך 5 דקות.
  2. מוסיפים 2 מ"ל של מדיום תרבית שלם ומעבירים את מתלה התא לצינור הצנטריפוגה ולצנטריפוגה ב-1,000 × גרם למשך 5 דקות.
  3. השליכו את הסופרנאטנט והשהו מחדש את התאים בתווך הקפאה המורכב מ-90% FBS ו-10% DMSO, במטרה להגיע לצפיפות תאים של 1 × 106 תאים/מ"ל. העבר את תרחיף התא לקריוביאל.
  4. העבירו מיד את התאים לסביבה של -20°C למשך שעה אחת, ולאחר מכן 80°C למשך הלילה, לפני אחסון קבוע בחנקן נוזלי.
    הערה: אם חנקן נוזלי אינו זמין, ניתן לאחסן את התאים ב -80 °C לאחר שעה ראשונית ב -20 °C.
  5. אם נדרש משלוח, שלח את התאים בהקפאה בחבילה עם קרח יבש למשלוח בן לילה.
  6. עם קבלת התאים יש להבטיח החלמה מהירה ולמקם את התאים בתת-תרבית. אם תרבית מיידית אינה אפשרית, העבירו את התאים לחנקן נוזלי לאחסון ממושך.
    הערה: אם רוצים לשלוח את התאים, ודא שהדגימות קבורות עמוק בקרח היבש כדי למנוע נזק פוטנציאלי מתנודות טמפרטורה.

5. אימות LECs

  1. לוחים את ה-LEC לצלחות תרבית בקוטר 35 מ"מ עם כוסות כיסוי ומזנקים אותן בתרבית במשך כ-48 שעות.
  2. לשטוף את התאים 2x עם PBS ולתקן את התאים עם מתנול קר במשך 10 דקות ב -20 ° C.
  3. שטפו את התאים הקבועים במשך 3 x 5 דקות עם PBS ודגרו על התאים הקבועים עם מאגר חוסם למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר כדי למנוע קשירה לא ספציפית.
  4. לאחר החסימה, יש לדגור על התאים למשך הלילה בטמפרטורה של 4°C כאשר הנוגדנים הראשוניים (αA-crystallin, γ-crystallin ו-PROX1) מדוללים בנפרד ביחס של 1:50 במאגר מדלל.
  5. לשטוף את התאים במשך 3 x 5 דקות עם PBS ולדגור את התאים עם נוגדן משני מדולל 1:100 בחיץ מדלל במשך 1 שעות.
  6. שטפו את התאים במשך 3 x 5 דקות עם PBS והכתימו את התאים עם 5 מיקרוגרם / מ"ל Hoechst 33342 ב- PBS למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר כדי לדמיין את הגרעינים.
  7. שטפו את התאים במשך 2 x 5 דקות עם PBS כדי להסיר תמיסת כתמים עודפת וללכוד תמונות פלואורסצנטיות של התאים באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי באמצעות ערוץ DAPI עבור גרעינים וערוץ FITC עבור αA, γ-crystallins ו-PROX1.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

כפי שניתן לראות באיור 2, על-ידי ביצוע פרוטוקול זה, LECs ראשוניים מעכברי C57BL/6J נצמדו לצלחות בתוך פרק זמן של 4 שעות. יש לציין כי נמצאו שרידים גלויים של רקמות אחרות כגון חלקים של הקפסולה האחורית ותאי סיבי העדשה. עם זאת, אלמנטים לא מכוונים אלה לא נצמדו למנה ולכן ניתן היה להסיר אותם על ידי שינוי מדיום התרבות. לאחר מכן, בין היום השלישי לחמישי, החלו ה-LECs בשלב ההתפשטות שלהם. צמיחה מהירה, האופיינית לשלב ההתפשטות הלוגריתמית, ניתן היה לראות בין היום השביעי ליום העשירי. במקרים בהם התאים אינם מתקדמי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

הפרוטוקול המוצג במאמר זה מספק מדריך מקיף, שלב אחר שלב, לבידוד, תרבות ותת-תרבות מוצלחים של LECs ראשוניים, יחד עם תיעוד וידאו נלווה. המדריך החזותי המפורט לצד ההוראות הכתובות משפר את הבהירות והנגישות של הפרוטוקול, ומקדם את השימוש בו ואת יכולת השחזור שלו בקרב חוקרים בתחום. המטרה הסופית היא לתרום לגוף הידע המתרחב סביב תפקידם של LECs בהיווצרות קטרקט ו- PCO, סיבוך שכיח לאחר ניתוח קטרקט.

כאשר משווים LECs ראשוניים עם קווי תאי אפיתל עדשה, כגון HLE-B3 ו- SRA01/04, כל אחד מהם מציג יתרונות ואתגרים ייחודיים...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים כי אין להם ניגודי עניינים.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי NEI R21EY033941 (להונגלי וו); משרד ההגנה W81XWH2010896 (להונגלי וו); R15GM123463-02 (לקיילה גרין והונגלי וו)

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
0.05% טריפסין-EDTAתרמו פישר#25300054לדיסוציאציה של LECs
Alexa Fluor 488 נוגדן משני Jackson ImmunoResearch#715-545-150לאימות תאים
Alexa Fluor 647 AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)Jackson ImmunoResearch111-605-003לאימות תאים
מאגר דילול נוגדניםLicor#927-60001לאימות תאים
סכין בטיחותBeaver-Visitec International#3782235לדיסקציה
של עדשותחסימת חיץLicor#927-60001לאימות תאים
מלקחיים CapsulorhexisTitan Medical InstrumentsTMF-124לבידוד קפסולת עדשות
DMEMSigma AldrichD6429למדיום תרבית LECs
DMSOSigma Aldrich#D2650להכנת מדיום הקפאה 
תמיסת מלח פוספט בופר של Dulbecco תרמו פישר#J67802לדיסקציה של עדשות
פינצטה דומונטמכשיר כירורגי RobozRS-4976לבידוד קפסולת עדשות
EpiCGS-a (אופציונלי)ScienCell4182למדיום תרבית LECs
FBSSigma AldrichF2442למדיום תרבית LECs
ג'נטמיצין (50  מ"ג / מ"ל)Sigma-AldrichG1397עבור מדיום תרבית LECs
תמיסת Hoechst 33342תרמו פישר#62249לאימות תאים
מספריים מיקרו ניתוחמכשיר כירורגי Roboz RS-5983לדיסקציה של עדשות
פינצטה מיקרו ניתוחמכשיר כירורגי Roboz RS5137 לדיסקציה של עדשות
נוגדן PROX1Thermo Fisher11067-2-APלאימות תאים
Vannas מספריים קפיציים מיקרו-ניתוחיRoboz מכשיר כירורגיRS-5608לבידוד קפסולת עדשות
ואלפא; נוגדן א-קריסטליןסנטה קרוזsc-28306לאימות תאים 
γ-נוגדן גבישיסנטה קרוזsc-365256לאימות תאים

מקורות

  1. Bermbach, G., Mayer, U., Naumann, G. O. Human lens epithelial cells in tissue culture. Experimental Eye Research. 52 (2), 113-119 (1991).
  2. Reddy, V. N., Lin, L. R., Arita, T., Zigler, J. S. Jr, Huang, Q. L. Crystallins and their synthesis in human lens epithelial cells in tissue culture. Experimental Eye Research. 47 (3), 465-478 (1988).
  3. Lee, C. M., Afshari, N. A. The global state of cataract blindness. Current Opinion in Ophthalmology. 28 (1), 98-103 (2017).
  4. Khairallah, M., et al. Number of people blind or visually impaired by cataract worldwide and in world regions, 1990 to 2010. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 56 (11), 6762-6769 (2015).
  5. Beebe, D. C., Holekamp, N. M., Shui, Y. B. Oxidative damage and the prevention of age-related cataracts. Ophthalmic Research. 44 (3), 155-165 (2010).
  6. Lou, M. F. Redox regulation in the lens. Progress in Retinal and Eye Research. 22 (5), 657-682 (2003).
  7. Charakidas, A., et al. Lens epithelial apoptosis and cell proliferation in human age-related cortical cataract. European Journal of Ophthalmology. 15 (2), 213-220 (2005).
  8. Lou, M. F. Glutathione and glutaredoxin in redox regulation and cell signaling of the lens. Antioxidants (Basel). 11 (10), 1973(2022).
  9. Wilhelm, J., Smistik, Z., Mahelkova, G., Vytasek, R. Redox regulation of proliferation of lens epithelial cells in culture. Cell Biochemistry & Function. 25 (3), 317-321 (2007).
  10. Zhang, Y., et al. Research progress concerning a novel intraocular lens for the prevention of posterior capsular opacification. Pharmaceutics. 14 (7), 1343(2022).
  11. Konopinska, J., Mlynarczyk, M., Dmuchowska, D. A., Obuchowska, I. Posterior capsule opacification: A review of experimental studies. Journal of Clinical Medicine. 10 (13), 2847(2021).
  12. Pandey, S. K., Apple, D. J., Werner, L., Maloof, A. J., Milverton, E. J. Posterior capsule opacification: A review of the aetiopathogenesis, experimental and clinical studies and factors for prevention. Indian Journal of Ophthalmology. 52 (2), 99-112 (2004).
  13. Wei, Z., et al. Aged lens epithelial cells suppress proliferation and epithelial-mesenchymal transition-relevance for posterior capsule opacification. Cells. 11 (13), 2001(2022).
  14. Creighton, M. O., Mousa, G. Y., Miller, G. G., Blair, D. G., Trevithick, J. R. Differentiation of rat lens epithelial cells in tissue culture--iv. Some characteristics of the process, including possible in vitro models for pathogenic processes in cataractogenesis. Vision Research. 21 (1), 25-35 (1981).
  15. Creighton, M. O., Mousa, G. Y., Trevithick, J. R. Differentiation of rat lens epithelial cells in tissue culture. (i) effects of cell density, medium and embryonic age of initial culture. Differentiation. 6 (3), 155-167 (1976).
  16. Ibaraki, N., Ohara, K., Shimizu, H. Explant culture of human lens epithelial cells from senile cataract patients. Japanese Journal of Ophthalmology. 37 (3), 310-317 (1993).
  17. Sundelin, K., Petersen, A., Soltanpour, Y., Zetterberg, M. In vitro growth of lens epithelial cells from cataract patients - association with possible risk factors for posterior capsule opacification. The Open Ophthalmology Journal. 8, 19-23 (2014).
  18. Parreno, J., et al. Methodologies to unlock the molecular expression and cellular structure of ocular lens epithelial cells. Frontiers in Cell and Developmental Biology. 10, 983178(2022).
  19. Andjelic, S., et al. Morphological and proliferative studies on ex vivo cultured human anterior lens epithelial cells - relevance to capsular opacification. Acta Ophthalmologica. 93 (6), e499-e506 (2015).
  20. Andjelic, S., et al. A simple method for establishing adherent ex vivo explant cultures from human eye pathologies for use in subsequent calcium imaging and inflammatory studies. Journal of Immunology Research. 2014, 232659(2014).
  21. Andley, U. P., Rhim, J. S., Chylack, L. T. Jr, Fleming, T. P. Propagation and immortalization of human lens epithelial cells in culture. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 35 (7), 3094-3102 (1994).
  22. Zhou, M., Leiberman, J., Xu, J., Lavker, R. M. A hierarchy of proliferative cells exists in mouse lens epithelium: Implications for lens maintenance. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 47 (7), 2997-3003 (2006).
  23. Wolffe, A. P., Glover, J. F., Tata, J. R. Culture shock. Synthesis of heat-shock-like proteins in fresh primary cell cultures. Experimental Cell Research. 154 (2), 581-590 (1984).
  24. Haykin, V., et al. Bioimage analysis of cell physiology of primary lens epithelial cells from diabetic and non-diabetic cataract patients. Biotechnology & Biotechnological Equipment. 35 (1), 170-178 (2021).
  25. Menko, A. S., Klukas, K. A., Johnson, R. G. Chicken embryo lens cultures mimic differentiation in the lens. Developmental Biology. 103 (1), 129-141 (1984).
  26. Zelenka, P. S., Gao, C. Y., Saravanamuthu, S. S. Preparation and culture of rat lens epithelial explants for studying terminal differentiation. Journal of Visualized Experiments. (31), 1591(2009).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

תאי אפיתל של העדשהתרבית עדשת עכברתרבית תאים ראשוניתבידוד קפסולת העדשהטכניקת טריפסינציההיווצרות קטרקטעכירות של הקפסולה האחוריתמיקרוסקופיית ניגוד מופעבדיקת אימונופלואורסצנציהאנזימי נוגדי חמצון
אופטימיזציה של תרבית תאי אפיתל בעדשה הראשית של עכבר: מדריך מקיף לטריפסיניזציה
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.