מאמר שיטה

צביעה אדומה של פיקרוזיריוס להערכה היסטופתולוגית כמותית למחצה של שקיעת קולגן במודלים עכבריים של דחיית אלוגרפט ריאה כרונית

2K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/66395

⸱

21 במרץ 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Thoracic Surgery, Medical Center - University of Freiburg, Faculty of Medicine, University of Freiburg, 2Department of Plastic and Hand Surgery, Medical Center - University of Freiburg, Faculty of Medicine, University of Freiburg, 3Department of Thoracic Surgery, Kyoto University Hospital, 4Department of Otolaryngology, Medical Center - University of Freiburg, Faculty of Medicine, University of Freiburg

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

צביעה אדומה של פיקרוזיריוס היא שיטה כמותית למחצה להערכה אובייקטיבית של שקיעת קולגן בשיפוץ פיברוטי ריאתי של עכברים באופן פתור מרחבי. מלבד הערכת שקיעת הקולגן הכוללת, צביעת Picrosirius Red מאפשרת להבדיל בין סיבי קולגן בעוביים שונים.

תקציר

פיברוזיס הוא סימן ההיכר הפתופיזיולוגי של דחייה כרונית לאחר השתלת ריאות והמכשול העיקרי להישרדות הנמען לטווח ארוך. מספר מודלים להשתלת ריאות עכברים זמינים לחקר דחייה כרונית. עם זאת, הם מציגים תוצאות הטרוגניות לגבי שינויים פיברוטיים של השתל, וההיקף ההיסטולוגי של פיברוזיס מדווח בעיקר באופן איכותי. לכן, גישה שנפתרה מרחבית המאפשרת ניתוח סטטיסטי יכולה לסייע בהערכת פיברוזיס במודלים אלה. מחקר זה מציג צביעת Picrosirius Red להערכה כמותית למחצה של ארגון הקולגן בהשתלות ריאה של עכברים ומשווה אותו לכתמי המטוקסילין ואאוזין סטנדרטיים, טריכרום מאסון וכתמי הרוביצ'י. הצביעה בוצעה על קטעים משני מודלים שונים של השתלת עכברים בהתבסס על אי התאמות קלות וגדולות של קומפלקס תאימות היסטולוגית (MHC). השיטה הוקמה לניתוח כמותי למחצה של ארגון הקולגן בקטעי ריאה שלמים. לפיכך, הוא יכול לשמש ככלי למודלים ניסיוניים של עכברים של מחלות ריאה פיברוטיות.

מבוא

השתלת ריאות היא האופציה הטיפולית המובהקת לחולים הסובלים ממחלת ריאות סופנית. עם זאת, הישרדות לטווח ארוך נפגעת על ידי דחייה כרונית, המשפיעה על 50% מהמושתלים בחמש השנים הראשונות לאחר הניתוח1. שיפוץ פיברוטי של דרכי הנשימה הקטנות ופרנכימת הריאות הוא סימן ההיכר ההיסטולוגי העומד בבסיס האובדן המתקדם של תפקוד הריאות בדחיית השתלת ריאות כרונית2. באופן ניסיוני, ניתן לעצב דחיית השתלת ריאות כרונית עם השתלת ריאות אורתוטופית של עכברים בין זני עכברים שאינם תואמים ל-MHC. שילובי זנים שונים הוצעו כדי להשיג את הפנוטיפ של דחייה כרונית3. ביניהם, שילוב ההשתלה של תורם MHC לא תואם C57BL/10 ומקבל C57BL/6 משמש לעתים קרובות4. לחלופין, ניתן להשתיל ריאות של תורם BALB/c למושתלי C57BL/6 המקבלים טיפול יומי מדכא חיסון5. מודלים אלה מביאים לדרגות שונות מבחינה היסטולוגית של שינויים פיברוטיים6. שינויים אלה מדווחים לעתים קרובות באופן איכותי באמצעות המטוקסילין ואאוזין הסטנדרטיים, וצביעה טריכרום של מאסון.

הצביעה ההיסטולוגית הסטנדרטית עם המטוקסילין ואאוזין מאפשרת סקירה כללית של הדגימה מכיוון שהיא צובעת גרעינים בכחול, בעוד שציטופלזמה וסיבי קולגן נראים אדומים. עם צביעת הטריכרום של מאסון, הגרעינים נצבעים בשחור, סיבי הקולגן נצבעים בירוק עד כחול, והרקע, כולל ציטופלזמה, פיברין ושרירים, אדום. מכיוון שכתם הטריכרום של מאסון עלול להוביל לערכים מוערכים בחסר, שימוש בכתם אדום פיקרוזיריוס נחשב למועיל7. Picrosirius Red הוא צבע אניוני ליניארי המתקשר לסיבי קולגן קטיוניים ארוכים ומספק צביעה אדומה עשירה בניגודיות. יתר על כן, צביעה אדומה של Picrosirius משפרת את השבירה הטבעית של סיבי קולגן באור מקוטב8. כך ניתן להעריך את עובי סיבי הקולגן ואת אריזתם. באמצעות פילטר מקטב, הרקע הופך כהה, וניתן להבחין בעובי הקולגן המופקד. בעוד שסיבי קולגן עבים נראים אדומים, סיבי קולגן דקים יוצאים ירוקים תחת קיטוב. קשר ישיר בין שבירה כפולה לתת-סוג קולגן מתואר לעתים קרובות בספרות, כאשר שבירה כפולה אדומה מיוחסת לקולגן I ושבירה כפולה ירוקה לקולגן III9.

פרוטוקול זה מתאר את השימוש בצביעה אדומה של פיקרוזיריוס כדי להעריך פיברוזיס בהשתלות ריאה של עכברים. בנוסף לצביעה היסטולוגית קונבנציונלית, היא מאפשרת הערכה כמותית למחצה של שינוי פיברוטי במודלים של דחייה כרונית בעכברים, מספקת אמצעי להבחנה בין סיבי קולגן עבים ודקים בצביעה אחת בלבד, חסכונית וקלה לביצוע. ניתן ליישם שיטה זו באותה מידה על מודלים ניסויים אחרים של עכברים המאופיינים בשיפוץ פיברוטי של פרנכימת הריאות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הפרוטוקולים של בעלי חיים עומדים בעקרונות האתיים של 3Rs למחקר הומני בבעלי חיים ואושרו על ידי הוועדה האתית הווטרינרית המקומית (Veterinäramt Kanton Zürich, Switzerland, מחקר מספר 45/2014). כמו כן, על הקוראים לקבל אישור מהמוסדות הרלוונטיים לפני ביצוע הליכים כלשהם בחיות מעבדה.

1. רכישת מדגם

  1. לערוך ניסויים בבעלי חיים בהתאם לצרכים האישיים ולאישור האתי המתאים. מיקרוכירורג יחיד מבצע את כל הניתוחים ללא זמני איסכמיה ממושכים נוספים.
    הערה: לשחזור התוצאות המייצגות שלנו, השג עכברי C57BL/6J, C57BL/10J ו-BALB/c זכרים בוגרים ספציפיים ללא פתוגן במשקל 27-30 גרם ממעבדות צ'ארלס ריבר. עבור איזוגרפטים, השתמש בבעלי חיים C57BL/6J כתורמים ומקבלים. במודל הלא תואם הקטן, השתלת ריאות תורם C57BL/10J למושתלי C57BL/6J. במודל העיקרי הלא תואם, השתלת ריאות תורם BALB/c למושתלי C57BL/6J והזרקה לאחר הניתוח ציקלוספורין (10 מ"ג/ק"ג/יום) ומתילפרדניזולון (1.6 מ"ג/ק"ג/יום) תת עורית ביום5. השתמש בתמיסת מלח לזלוף ואחזר את הריאות לאחר 8 שבועות (56 ימים).
  2. להמתת חסד, יש להחדיר את בעל החיים עם קטטר 20G ולאוורר אותו עם O2 בתוספת 2%-3% איזופלורן. אשר עומק מספיק של הרדמה על ידי היעדר תגובה לצביטת כף.
  3. בצע כריתת לפרוסטרנומיה חציונית על ידי חיתוך דופן הבטן במספריים כירורגיים וחיתוך אורך עצם החזה כדי לחשוף את הלב. זהה את הווריד הנבוב התחתון ואת הנספח הפרוזדורי השמאלי לפי מיקומם האנטומי.
  4. ברצף מהיר, חתכו את הווריד הנבוב התחתון ואת נספח הפרוזדורים השמאלי במספריים כירורגיים והחדירו את החיה עם 3-5 מ"ל של 0.9% NaCl דרך שורש עורק הריאה בעזרת מזרק כדי להסיר את כל הדם ממחזור הדם הריאתי.
    הערה: המתת חסד צריכה להתבצע על פי האישור האתי המתאים. ניתן ליישם שיטות אחרות באותה מידה. מומלץ להסיר ביסודיות דם ממחזור הדם הריאתי, אשר יכול להתבצע גם על ידי זלוף לאחר דום הדם.
  5. הסר את הריאות המעוותות בעזרת מספריים.
  6. לשימור יש לדגור את הדגימות בפורמלין 4%. יש להזריק את תמיסת הפורמלין ישירות לתוך הסימפונות וכלי הדם הריאתיים. טבלו את הדגימות בפורמלין ותנו להן לדגור לפחות 6 שעות.
    הערה: לניפוח הריאה עם פורמלין, יש ליישם הליך סטנדרטי כדי להשיג תוצאות דומות. פרוטוקולים לדוגמה להליכים כאלה מתפרסמים במקום אחר10,11.
  7. חתוך את האיבר בהתאם לצרכי הניסוי. חותכים לרוחב את הריאות לשניים כדי ללכוד את כל חלקי עץ הסימפונות בקטע.
  8. העבירו דגימות למעבד רקמות אוטומטי להתייבשות ברצף אלכוהול, ניקוי בציפוי קסילול ופרפין באופן הבא: 70% אתנול, 70% אתנול, 80% אתנול, 96% אתנול, 100% אתנול (שעה כל אחד), 100% אתנול, 100% אתנול, קסילול (שעתיים כל אחד), קסילול (שעה אחת) ופרפין 3x למשך שעתיים.
  9. ממיסים פרפין ומטמיעים דגימות בכיוון הנכון בקלטות הטבעה של פוליאוקסימתילן. הקפד להטמיע את הדגימות כשהמשטח החתוך פונה כלפי מטה. השתמש במיקרוטום סיבובי כדי לחתוך קטעים של 5 מיקרומטר ברציפות. הניחו לשקופיות להתייבש במשך 24 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס לפני עיבוד נוסף.

2. דה-פרפיניזציה והידרציה של שקופיות פרפין

  1. הסר פרפין על ידי דגירה של הדגימות פי 2 ב-100% קסילול למשך 5 דקות כל אחת.
    זהירות: קסילול דליק ומסוכן לבריאות. השתמש רק מתחת למכסה האדים.
  2. לחות את הדגימות ב-100% אתנול, 100% אתנול, 95% אתנול, 70% אתנול ו-50% אתנול למשך 2 דקות כל אחת. לאחר מכן, שטפו במשך 2 דקות במים מזוקקים.

3. מכתים באדום פיקרוזיריוס

  1. כתמים מחליקים, למשך 8 דקות, בתמיסת ההמאלום של מאייר. שטפו את המגלשות למשך 10 דקות מתחת למי ברז זורמים.
  2. דגירה של שקופיות למשך שעה בתמיסת Picrosirius Red. עבור תמיסת Picrosirius Red, השתמש בתמיסת צביעה מעורבת מראש או השתמש ב-0.1% של Direct Red 80 או Sirius Red F 3B (CI 35780) מדולל בחומצה פיקרית רוויה.
    זהירות: חומצה פיקרית היא דליקה ונפיצה מאוד ויש לטפל בה בזהירות.
    הערה: ישנם ספקים רבים ושונים עבור ערכות צביעה של Picrosirius Red זמינים, כמפורט בטבלת החומרים. היו מודעים להבדלים במחיר ובשיטות הצביעה, והקפידו תמיד על הוראות הספקים. מומלץ להשתמש רק בערכות צביעה עם אינדקס הצבע הספציפי עבור Sirius Red F 3B (CI 35780).
  3. טובלים את השקופיות 5x-10x בתמיסת חומצה אצטית (0.5%). נער בעדינות את השקופיות כדי להסיר פיזית את התמיסה.
  4. ייבשו את השקופיות ב-95% אתנול, 100% אתנול, 100% אתנול, 100% קסילול ו-100% קסילול למשך 5 דקות כל אחת.
  5. הטמע על ידי הוספת טיפה אחת של אמצעי הרכבה על כל דגימה וכסה בכיסוי. תן למגלשות להתייבש מתחת למכסה אדים.

4. דיגיטציה ועיבוד תמונה

  1. מקד את הדגימות תחת מיקרוסקופ אור עם תוכנת הדמיה מתאימה עד שהתמונה הופכת ברורה וחדה. הוסף מסנן מקטב והתאם את מידת הקיטוב עד שהרקע כהה או שחור לחלוטין. כאשר הרקע כהה ככל האפשר, מושג הקיטוב הנכון.
    הערה: ניתן גם לדמיין צביעה אדומה של פיקרוזיריוס עם אור מועבר קונבנציונאלי וללא מסנן מקטב. לשם כך, מומלץ להשתמש באדום סיריוס עם ירוק מהיר, מכיוון שהוא הוכח כרגיש יותר מסיריוס אדום לבדו12,13. עם זאת, יש צורך במיקרוסקופיה מקטבת כדי להבחין בין סיבי קולגן עבים ודקים.
  2. סרוק את כל הדגימות לחלוטין בהגדלה של פי 20 וייצא .tiff. העבר לתוכנת פיג'י14. הקפד לנקות שקופיות כראוי מראש והשתמש בהגדרות סטנדרטיות לגבי זמן החשיפה ועוצמת מקור האור.
  3. הקף את הדגימה באופן ידני וחתוך אותה בתוכנה באמצעות ערוך > נקה בחוץ. מדוד את שטח הפנים הכולל על-ידי לחיצה על Analyze > Measure.
    הערה: בחירת התא למדידה היא צעד קריטי ביצירת תוצאות אמינות וניתנות להשוואה. על ידי דיגיטציה ובחירת הדגימה כולה, מוצג חתך טוב, ורקמות הטרוגניות נחשבות כמכלול. עם זאת, ניתן גם להגביל את עצמך לאזורים ספציפיים בתוך הדגימות, כגון פלורה או סמפונות בודדים. זכור תמיד לבחור תאים להשוואה בצורה סטנדרטית. אם הדגימות מראות שונות גדולה באוורור, רצוי לא לכלול את אזור המרחב האווירי מהתא המנותח15.
  4. מדוד את תכולת הקולגן הכוללת לדגימה באמצעות סף צבע על-ידי לחיצה על Image > Adjust > Color Threshold והתאם את ההגדרות על-ידי לחיצה על Analyze > Analyze Particles. הגדר גודל = 1 - אינסוף, נקה, סיכום. בהירות = 35 - 255. גוון = 2 - 130
    הערה: הגדרה סבירה של ספי הצבע היא קריטית להשגת תוצאות אמינות.
  5. יש לחזור על הפעולה עבור סיבי קולגן עבים ודקים על ידי התאמת הגוון לסיבי קולגן אדומים figure-protocol-1 עבים (גוון 2-30) וסיבי קולגן דקים צהובים-ירוקים figure-protocol-2 (גוון 31-130). התוצאה תהיה אזור הפיקסלים המוכתמים.
  6. הגדר את המאקרו לעיבוד אוטומטי על ידי לחיצה על תוספים > פקודות מאקרו > הקלט וחזור עם כל הדגימות.
  7. כדי לקבל ערכים סופיים המתוקננים לשטח הפנים של חתך הרוחב, חלקו את שטח הפיקסלים המוכתמים עבור כל הפרמטרים בשטח הפנים הכולל כפי שנמדד בשלבים 4.3 ו-4.5 עבור כל דגימה, בהתאמה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

הפרוטוקול המתואר לעיל מאפשר הערכה חצי כמותית אובייקטיבית של שקיעת קולגן ברקמת הריאה של העכבר. שיפוץ פיברוטי הוא סימן ההיכר הפתופיזיולוגי של דחייה כרונית לאחר השתלת ריאות. לכן, צביעת Picrosirius Red יושמה במודלים של דחיית השתלת ריאות כרונית באמצעות השתלת ריאות אורתוטופית של עכברים בצד שמאל. השתלת הריאות העיקרית שאינה תואמת MHC מתורם BALB/c למקבל C57BL/6 תחת דיכוי חיסוני קל מביאה לשינויים פיברוטיים הדומים לתפקוד לקוי של השתלת ריאות כרונית אנושית5. לעומת זאת, השתלה קלה שאינה תואמת MHC מתורם C57BL/10 ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

שיטות היסטולוגיות סטנדרטיות כגון המטוקסילין ואאוזין, וצביעה טריכרום של מאסון נמצאות בשימוש נרחב לאיתור שינויים פיברוטיים בריאות עכברים באופן שנפתר מרחבית16,19. עם זאת, לעתים קרובות יש צורך בשיטות נוספות כדי לכמת את השינויים הללו ולהעריך את הרכב הקולגן של הרקמה.

צביעה אדומה של פיקרוזיריוס תוארה לראשונה בשנת 1964 לזיהוי קולגן: במיקרוסקופ אור מועבר, קולגן נראה אדום ואילו שריר וציטופלזמה יוצאים צהובים

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

בירטה אוהם נתמכת על ידי תוכנית ברטה-אוטנשטיין למדענים קליניים, הפקולטה לרפואה, אוניברסיטת פרייבורג. סטפן או אייזנהרדט הוא פרופסור הייזנברג בקרן המחקר הגרמנית (DFG) ותמך בעבודה זו באמצעות מענקים אישיים. יתר על כן, ברצוננו להודות לשינה קרויזלר על הסיוע הטכני שלה. איור 1 נוצר בעזרת Biorender.com. ההדמיה בוצעה במתקן הליבה של המגדלור, הממומן בחלקו על ידי הפקולטה לרפואה, אוניברסיטת פרייבורג (מספרי פרויקט 2023/A2-Fol; 2021/B3-Fol), ה-DKTK וה-DFG (פרויקט מספר 450392965).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
חומצה אצטיתHoneywell, שארלוט, ארה"ב33209
Axio ObserverZeiss, Oberkochen, גרמניה4633000956 (מספר סידורי)
Coverslip 1.5Roth, קרלסרוהה, גרמניהKCY5.1
פורמלדהיד 37%Fisher Scientific, לסטרשייר, בריטניהF/1501/PB15
תמיסת ההמאלום של מאיירMerck, דרמשטדט, גרמניה109249
Picrosirius Red SolutionMorphisto, Offenbach am Main, גרמניה13422חלופות שניתן להשתמש בהן: ab150681, abcam, קיימברידג', בריטניה; SRS250 ScyTek Laboratories , לוגן סיטי ארה"ב
מסנן מקטבZeiss, Oberkochen, גרמניה000000-1121-813
מיקרוטום רוטרי, HistoCore AUTOCUTLeica, Wetzlar, גרמניה149AUTO00C1, 14051956472
ROTI Histokitt הרכבה בינוניתRoth , קרלסרוה, גרמניה6638.1
ROTI Plast ParaffinRoth , קרלסרוה, גרמניה6642.5
קלטות להטמעת רוטילבו, POMRoth, קרלסרוהה, גרמניהK113.1
Superfrost Plus הדבקה מיקרוסקופשקופית epredia, פורטסמות',
 לייקה, וצלר, גרמניהTP 1020
<>Software
Fiji תוכנה גרסת 2.14.0/1.54f תוכנתבקוד
ZEN 3.4.91Zeiss, Oberkochen, גרמניה
בריטניה מעבד רקמות J1800AMNZ הדמיה פתוח

מקורות

  1. Weigt, S., DerHovanessian, A., Wallace, W., Lynch, J., Belperio, J. Bronchiolitis Obliterans Syndrome: The Achilles' heel of lung transplantation. Semin Respir Crit Care Med. 34 (3), 336-351 (2013).
  2. Verleden, G. M., et al. Chronic lung allograft dysfunction: Definition, diagnostic criteria, and approaches to treatment-A consensus report from the Pulmonary Council of the ISHLT. J Heart Lung Transplant. 38 (5), 493-503 (2019).
  3. Lama, V. N., et al. Models of lung transplant research: A consensus statement from the National Heart, Lung, and Blood Institute workshop. JCI Insight. 2 (9), e93121(2017).
  4. Martinu, T., et al. Spectrum of chronic lung allograft pathology in a mouse minor-mismatched orthotopic lung transplant model. Am J Transplant. 19 (1), 247-258 (2019).
  5. de Vleeschauwer, S., et al. Chronic rejection pathology after orthotopic lung transplantation in mice: The development of a murine BOS model and its drawbacks. PLoS One. 7 (1), e29802(2012).
  6. Yamada, Y., et al. Chronic airway fibrosis in orthotopic mouse lung transplantation models-An experimental reappraisal. Transplantation. 102 (2), e49-e58 (2018).
  7. Whittaker, P., Kloner, R. A., Boughner, D. R., Pickering, J. G. Quantitative assessment of myocardial collagen with picrosirius red staining and circularly polarized light. Basic Res Cardiol. 89 (5), 397-410 (1994).
  8. Puchtler, H., Waldrop, F. S., Valentine, L. S. Polarization microscopic studies of connective tissue stained with picro-sirius red FBA. Beitr Pathol. 150 (2), 174-187 (1973).
  9. Junqueira, L. C. U., Cossermelli, W., Brentani, R. Differential staining of collagens type I, II and III by Sirius Red and polarization microscopy. Arch Histol Jpn. 41 (3), 267-274 (1978).
  10. Davenport, M. L., Sherrill, T. P., Blackwell, T. S., Edmonds, M. D. Perfusion and inflation of the mouse lung for tumor histology. J Vis Exp. (162), e60605(2020).
  11. Limjunyawong, N., Mock, J., Mitzner, W. Instillation and fixation methods useful in mouse lung cancer research. J Vis Exp. (102), e52964(2015).
  12. Segnani, C., et al. Histochemical detection of collagen fibers by Sirius Red/Fast Green is more sensitive than van Gieson or Sirius Red alone in normal and inflamed rat colon. PLoS One. 10 (12), e0144630(2015).
  13. Courtoy, G. E., et al. Digital image analysis of Picrosirius Red staining: A robust method for multi-organ fibrosis quantification and characterization. Biomolecules. 10 (11), 1585(2020).
  14. Schindelin, J., et al. Fiji: an open-source platform for biological-image analysis. Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).
  15. Ségard, B. D., et al. Quantification of fibrosis extend and airspace availability in lung: A semi-automativ ImageJ/Fiji toolbox. PloS. 2 (2), e0298015(2024).
  16. Zhou, X., Moore, B. B. Lung section staining and microscopy. Bio Protoc. 7 (10), e2286(2017).
  17. Herovici, C. Picropolychrome: histological staining technic intended for the study of normal and pathological connective tissue. Rev Fr Etud Clin Biol. 8, 88-89 (1963).
  18. Sweat, F., Puchtler, H., Rosenthal, S. Sirius Red F3BA as a stain for connective tissue. Arch Pathol. 78, 69-72 (1964).
  19. Cardiff, R. D., Miller, C. H., Munn, R. J. Manual hematoxylin and eosin staining of mouse tissue sections. Cold Spring Harb Protoc. 2014 (6), 655-658 (2014).
  20. Montes, G. S., Junqueira, L. C. The use of the Picrosirius-polarization method for the study of the biopathology of collagen. Mem Inst Oswaldo Cruz. 86, Suppl 3 1-11 (1991).
  21. Rittié, L. Method for Picrosirius Red-polarization detection of collagen fibers in tissue sections. Methods Mol Biol. 1627, 395-407 (2017).
  22. Diehm, Y. F., et al. Stem cell-enriched hybrid breast reconstruction reduces risk for capsular contracture in a hybrid breast model. Plast Reconstr Surg. 152 (3), 572-580 (2023).
  23. Rich, L., Whittaker, P. Collagen and Picrosirius Red staining: A polarized light assessment of fibrillar hue and spatial distribution. Braz J Morphol Sci. 22 (2), 97-104 (2005).
  24. Datar, U. V., et al. Clinicopathologic study of a series of giant cell fibroma using picrosirius red polarizing microscopy technique. Arch Iran Med. 17 (11), 746-749 (2014).
  25. Nishat, R., Kumar, H. Collagen fibers in oral submucous fibrosis - A polarizing microscopy study using two special stains. Indian J Pathol Microbiol. 62 (4), 537-543 (2019).
  26. Lattouf, R., et al. Picrosirius red staining: a useful tool to appraise collagen networks in normal and pathological tissues. J Histochem Cytochem. 62 (10), 751-758 (2014).
  27. López De Padilla, C. M. Picrosirius Red staining: Revisiting its application to the qualitative and quantitative assessment of collagen type I and type III in tendon. J Histochem Cytochem. 69 (10), 633-643 (2021).
  28. Junqueira, L. C. U., Bignolas, G., Brentani, R. R. Picrosirius staining plus polarization microscopy, a specific method for collagen detection in tissue sections. Histochem J. 11 (4), 447-455 (1979).
  29. Zheng, L., et al. Scar collagen deposition in the airways of allografts of lung transplant recipients. Am J Respir Crit Care Med. 155 (6), 2072-2077 (1997).
  30. Astbury, S., et al. Reliable computational quantification of liver fibrosis is compromised by inherent staining variation. J Pathol Clin Res. 7 (5), 471-481 (2021).
  31. Feingold, B., et al. Diffuse myocardial fibrosis among healthy pediatric heart transplant recipients: Correlation of histology, cardiovascular magnetic resonance, and clinical phenotype. Pediatr Transplant. 21 (5), 12986(2017).
  32. vander Ploeg, E. A., Melgert, B. N., Burgess, J. K., Gan, C. T. The potential of biomarkers of fibrosis in chronic lung allograft dysfunction. Transplant Rev (Orlando). 35 (3), 100626(2021).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Masson s Trichrome

מאמרים קשורים