הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

השראת מושבות קטנות בקנדידה מבריקה באמצעות טיפול פוטודינמי בתיווך בנגל

1.5K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/66549

⸱

29 במרץ 2024

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Microbiology and Immunology, College of Medicine, National Cheng Kung University, 2Department of Dermatology, National Cheng Kung University Hospital, College of Medicine, National Cheng Kung University, 3Department of Ophthalmology, National Cheng Kung University Hospital, College of Medicine, National Cheng Kung University, 4National Institute of Infectious Diseases and Vaccinology, National Health Research Institutes, 5Department of Internal Medicine, National Cheng Kung University Hospital, College of Medicine, National Cheng Kung University, 6Insititute of Basic Medical Sciences, College of Medicine, National Cheng Kung University, 7Department of Biochemistry and Molecular Biology, College of Medicine, National Cheng Kung University, 8Center of Applied Nanomedicine, National Cheng Kung University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

המשמעות של מושבות קטנות בקנדידה spp. עמידות לתרופות לא נחקרה במלואה. טיפול פוטודינמי אנטי-מיקרוביאלי (aPDT) מציע אסטרטגיה מבטיחה נגד זיהומים פטרייתיים עמידים לתרופות. מחקר זה מדגים כי aPDT בתיווך בנגל ורד מבטל ביעילות קנדידה גלברטה וגורם למושבות קטנות, ומציג הליך ייחודי.

תקציר

מול שיעור תמותה של 40% בחולי קנדידמיה, קנדידה עמידה לתרופות והמוטציות הקטנות שלהם נותרו אתגר טיפולי גדול. טיפול פוטודינמי אנטי-מיקרוביאלי (aPDT) מכוון למבנים פטרייתיים מרובים, בניגוד לאנטיביוטיקה/אנטי-פטרייתיות, מה שעלול לסכל עמידות. שיטות מסורתיות לגרימת מושבות קטנות מסתמכות על אתידיום ברומיד או פלוקונזול, שיכולים להשפיע על רגישות לתרופות ותגובות לחץ. מחקר זה בדק את היישום של אור ירוק (שיא 520 ננומטר) ופוטונסיטייזר ורד בנגלי (RB) כדי להילחם במבודד קנדידה גלברטה עמיד לתרופות. הממצאים הראו כי טיפול ב- aPDT עיכב באופן משמעותי את צמיחת התאים (הפחתה של ≥99.9%) וגרם ביעילות להיווצרות מושבות קטנות, כפי שמעידה הקטנת גודל ואובדן צביעת מחוון חיזור מיטוכונדריאלי. מחקר זה מספק ראיות ראשוניות לכך ש-aPDT יכול לגרום למושבות קטנות בזן C. glabrata עמיד לתרופות במבחנה, ומציע גישה בעלת פוטנציאל טרנספורמטיבי למאבק בזיהומים פטרייתיים עמידים.

מבוא

זיהומים פטרייתיים, במיוחד אלה הנגרמים על ידי קנדידה אלביקנס וקנדידה גלברטה עמידה יותר ויותר לתרופות, מהווים איום עולמי רציני1. זיהומים אלה יכולים להיות קטלניים, במיוחד עבור חולים מאושפזים ואלה עם מערכת חיסונית מוחלשת. עלייה בעמידות האנטי פטרייתית מאיימת על השליטה בקנדידה פולשנית, זיהום פטרייתי חמור עם תמותה גבוהה, במיוחד מקנדידה אלביקנס2. זנים עמידים מעכבים טיפול יעיל, מה שעלול להגדיל הן את המורכבות והן את שיעורי התמותה. במחוז אלאמדה, קליפורניה, ארה"ב, C. glabrata הפך למין הפולש הנפוץ ביותר3. שינוי זה בשכיחות ובתפוצה של מיני קנדידה עשוי להיות מושפע משיטות בריאות מקומיות, דמוגרפיה של מטופלים, שימוש בחומרים אנטי פטרייתיים ושכיחות גורמי סיכון לזיהומי קנדידה.

מוטנטים קטנים בקנדידה, חסרי מיטוכונדריה פונקציונלית, חושפים כיצד אברון זה משפיע על התגובה לתרופות, אלימות ועמידות ללחץ 4,5. C. glabrata יוצר בקלות מושבות אלה, רוכש רגישות לפוליאנים תוך שהוא מאבד אותו לאזולים6. רגישות לאזול ותפקוד נשימתי קשורים זה לזה באופן מורכב, עם נשימה מופחתת המובילה להתנגדות באמצעות אובדן DNA מיטוכונדריאלי7. מושבות קטנות של C. glabrata עם עמידות לאזול בודדו מדגימות צואה אנושיות ממושתל מח עצם שעבר טיפול פלוקונזול8 ומבקבוקי תרבית דם של חולים עם זיהומים בזרם הדם9. ההשלכות האפשריות שלהם על עמידות לתרופות, אלימות ותגובה ללחץ מדגישות את המשמעות הקלינית שלהם. בנוסף, התכונות הייחודיות שלהם הופכות אותם לכלים רבי ערך לחקר שאלות בסיסיות בביולוגיה מיטוכונדריאלית5. ככל שהמחקר על מוטנטים קטנים נמשך, היישומים שלהם במחקר קליני ובסיסי כאחד צפויים להתרחב.

מחקר זה גילה כי טיפול פוטודינמי (PDT) יכול לגרום למושבות קטנות ב - C. glabrata, להרחיב את מגוון השיטות מעבר לטכניקות המסורתיות של חשיפת C. glabrata לאתידיום ברומיד או fluconazole.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. טיפוח של C. glabrata

הערה: C. glabrata עמיד לתרופות מרובות (C2-1000907) העמיד לרוב הסוכנים האנטי פטרייתיים, כולל fluconazole, משמש לניסויים. ייתכן שיהיה צורך להתאים את תנאי הניסוי לזן הספציפי, שכן ייתכנו שינויים בין זנים שונים. כל הניסויים השתמשו בקנדידה לוג-פאזה שגדלה ב-25 מעלות צלזיוס (מחקה זיהום טבעי) לעקביות. חוסר הקורים של C. glabrata מפשט את הכימות בהשוואה ל - C. albicans, היוצר קורים ב- 37 ° C10.

  1. כדי להכין תרבית לוג-פאזה של C. glabrata, בחרו מושבה בודדת מצלחת אגר והעבירו אותה למבחנה מזכוכית עם 3 מ"ל של שמרים סטריליים פפטון דקסטרוז (YPD) בינוני (ראו טבלת חומרים). יש לדגור במשך 14-16 שעות ב-25°C עם רעידות (155 סל"ד, זווית של 45° כדי להגביר את העברת האוויר לתווך).
  2. לאחר הדגירה, יש לדלל את התרבית עם YPD טרי ל-OD600 של 0.1 בטכניקה סטרילית. יש לדגור ב-25°C למשך 6 שעות עם רעידות ב-155 סל"ד. אמת את שלב היומן של C. glabrata על ידי מדידת OD600. כוון 0.65-1.00, אשר מתאים 1 × 10 7-1.5 × 107 תאים / מ"ל.

2. אינדוקציה של מושבות קטנות על ידי אתידיום ברומיד, fluconazole וטיפול פוטודינמי

  1. השראת מושבה קטנה Ethidium bromide
    1. התאם תרחיף שמרים ל- OD600 של 0.1 (5 × 106 תאים/מ"ל) עם YPD לנפח סופי של 3 מ"ל, ולאחר מכן הוסף 30 מיקרוליטר של ציר אתידיום ברומיד (10 מ"ג/מ"ל) (ראה טבלת חומרים) לקבלת ריכוז סופי של 100 מיקרוגרם/מ"ל.
    2. יש לדגור על מתלי השמרים למשך הלילה (16-18 שעות) ב-25°C, 155 סל"ד, זווית של 45°. התאם ל- OD600 של 0.65 (1 × 10,7 תאים/מ"ל). בצע סדרת דילול פי 10 בצלחת של 96 בארות על ידי הוספת 20 μL של תרחיף השמרים המותאם ל- 180 μL של PBS לכל באר. זה יוצר שישה דילולים הנעים בין 10-1 ל 10-5.
    3. בחר 4 גורמי דילול (למשל, 100, 101, 102 ו- 103) וצלחת 3 טיפות (20 μL) כל אחד על 4 רבעים של לוחות אגר YPD (משולש).
    4. לדגור על צלחות לילה ב 37 °C (77 °F). בחר רבעים עם 5-80 מושבות מהדילולים שנבחרו בעבר עבור צביעת טריפנילטטרזוליום כלוריד (TTC)11 (ראה שלב 3). סרוק לוחות ברזולוציה של 1,200 dpi באמצעות סורק אופטי בצבע מלא של 48 סיביות.
  2. אינדוקציה של מושבה קטנה Fluconazole
    הערה: כדי לזרז את התהליך, השתמש בתאי T3 (תערובת של תאים נורמליים וקטנים המתקבלים לאחר 3 טיפולי RB-PDT; ראה שלב 2.3) להיווצרות מושבה קטנה הנגרמת על ידי פלוקונזול. הסיבה לכך היא שטיפול סטנדרטי בדרך כלל גורם להיווצרות איטית יותר.
    1. הכינו וכווננו תרחיף של תאי שמרים כמתואר בשלב 2.1.1.
    2. לדגור לילה (16-18 שעות) ב 25 °C (75 °F). התאם שוב את OD600 ל- 0.1.
    3. העבר 1 מ"ל של המתלה המותאם לצינור סטרילי של 5 מ"ל.
    4. טבלו צמר גפן סטרילי (באורך 15 ס"מ, עם קצה בגודל 0.9X2.6 ס"מ, ראו טבלת חומרים) בתרחיף השמרים, תוך הקפדה על מגע עם תחתית הצינור ופיתול לסילוק עודפי נוזלים מדופן הצינור.
    5. מכינים את הצלחות במכסה המנוע בעזרת אגר מולר-הינטון (ראו טבלת חומרים).
    6. ספוג את הכותנה קדימה ואחורה על האגר, סובב 60° פעמיים, ולאחר מכן ספוג את ההיקף לקבלת כיסוי אחיד.
    7. עקרו מלקחיים מעל להבה במשך 1-2 שניות, אפשרו להם להתקרר לזמן קצר, ואז השתמשו בהם כדי להרים את הדיסקים הריקים.
    8. חלק את הלוח לשלושה סקטורים שווים באמצעות סמן. מקם דיסק ריק אחד במרכז כל מגזר.
    9. הוסף 12.5 μL fluconazole ציר (2 מ"ג / מ"ל, ראה רשימת חומרים) לכל דיסק (25 מיקרוגרם / דיסק), לערבב היטב כדי למנוע בועות, ולדגור ב 37 ° C במשך 20-24 שעות.
    10. בצע את צביעת TTC (ראה שלב 3). סרוק לוחות ברזולוציה של 1,200 dpi באמצעות סורק אופטי בצבע מלא של 48 סיביות.
  3. PDT מושבה קטנה אינדוקציה
    הערה: פטריות שונות עשויות לייצר מספר שונה של מושבות קטנות לאחר PDT. זנים מסוימים עשויים שלא לייצר כלל.
    1. הכן את מערכת aPDT.
      הערה: הליך ההתקנה עבור התקן מערכת aPDT עוקב אחר השיטה שדווחה על-ידי Hung et al12. בקצרה, מערכת aPDT מורכבת ממערך LED ירוק עם שיא של 520 ננומטר (ראה טבלת חומרים), אור מאיר מלמטה עם יישור טוב עם כל באר של צלחת 96 בארות.
    2. כוונן את תרחיף תאי השמרים בתווך YPD ל- OD600 של 0.65 (כ- 1 × 107 תאים/מ"ל).
    3. ערבבו 1 מ"ל של תרחיף שמרים עם 111 מיקרוליטר של 2% ורד בנגלי (RB, איור 1) (ראו טבלת חומרים) בצינור עגול כדי לתת ריכוז RB סופי של 0.2%. דוגרים על התערובת ב-25°C למשך 15 דקות, ומסובבים אותה בזווית של 45° ב-155 סל"ד.
    4. מעבירים את התערובת לצינור מיקרו-צנטריפוגה בנפח 1.5 מ"ל וצנטריפוגה במהירות של 16,100 x גרם למשך 2.5 דקות (בטמפרטורת החדר).
    5. השליכו את הסופרנאטנט וגרדו בעדינות את הצינור חמש פעמים על רצפת מכסה המנוע כדי לתלות מחדש את הכדור.
    6. שטפו את המתלים עם 1x PBS ארבע פעמים כדי להסיר את כל ה-RB. כל שטיפה מלווה בהשעיה של הגלולה עם מערבולות קצרות או פיפטינג להשעיה יסודית.
      1. לאחר הכביסה הסופית, להוסיף 1000 μL של PBS. הפתרון הוא בצבע ורוד בהיר. מעבירים 200 μL של תרחיף שמרים שטוף RB לכל אחת משלוש בארות בצלחת 96 בארות (משולש).
    7. מקם את לוח 96 הקידוחים על מערכת התאורה הפוטודינמית עם נורות LED המאירות אור ירוק מלמטה. כבו את אורות החדר כדי להבטיח תאורה אחידה ולמנוע הפרעות. הפעל את מערכת תאורת ה- LED כדי לספק מינון PDT של 4.38 J/cm2 במשך 2 דקות; ודא שהמערכת מיושרת כראוי עם הבארות.
    8. לאחר הקרנה, לדלל את תרחיף השמרים בצלחת 96 באר. הוסף 20 μL של תרחיף שמרים לבאר המכילה 180 μL PBS, ויוצר דילול פי 10. חזור על הפעולה עבור שאר הדילולים כדי להשיג טווח של 10-1 עד 10-5.
    9. בחר ארבעה גורמי דילול (למשל, 10-2 עד 10-5) בהתבסס על התאמת ריכוז תאי השמרים.
    10. עבור כל גורם דילול, צלחת 3 טיפות (20 μL כל אחד) לכל רביע על לוחות אגר YPD.
    11. לאחר שתרחיף השמרים נספג לחלוטין, בסביבות 10 דקות על ידי צלחות אגר, להפוך ולדגור לילה ב 37 מעלות צלזיוס.
    12. הגדר T0 כקבוצת הביקורת ההורית C. glabrata ללא טיפול PDT. הכינו פטריות T0 בשלב צמיחת היומן כמתואר לעיל וחשפו אותן לאור ירוק של 4.38 J/cm2 בנוכחות 0.2% RB. מצב PDT זה מעכב באופן עקבי 3 עד 3.5 לוגים של צמיחה פטרייתית.
      1. ציינו את הפטריות ששרדו כ-T1 וחשפו אותן שוב לאותו מינון PDT לאחר שהן מורחבות במבחנה לשלב גדילת בולי עץ. הפטריות ששרדו לאחר ה-PDT השני מסומנות כ-T2 וכן הלאה.
    13. למחרת, בחר רבעים עם ספירת מושבות בין 5 ל -80. ספור את מספר המושבות בכל רביע וחשב את הטיטר באמצעות הנוסחה הבאה: יחידה יוצרת-מושבה (CFU)/מ"ל = מספר מושבות (ממוצע של משולש) × גורם דילול × 50.
    14. בצע את צביעת TTC (ראה שלב 3). סרוק את הצלחת כפי שתואר קודם לכן (שלב 2.2).

3. ניתוח תפקוד מיטוכונדריאלי (בדיקת צביעת TCC)

הערה: TTC הוא מחוון חמצון-חיזור ומקבל אלקטרונים. הוא הופך לאדום כאשר תרכובות לבנות נשברות על ידי אלקטרונים11. שימו לב שלא כל התאים יוצרים בהכרח מושבות נראות לעין תוך 24 שעות לאחר התרבית על צלחת אגר. מושבות עם מיטוכונדריה פונקציונלית הופכות אדומות, ואילו מושבות עם מיטוכונדריה לא תפקודית נשארות לבנות. זה מאפשר הבחנה בין מושבות עם פונקציונליות מיטוכונדריאלית שונה.

  1. לאחר הטיפול, יש לדלל את מתלי הקנדידה על לוחות אגר YPD בהתאם לצפיפות התאים הרצויה כדי לקבל מושבות נפרדות להדמיה קלה ולהכתמה.
  2. לאחר 24 שעות של צמיחה ב 37 °C (77 °F), מושבות גלויות נוצרות מתא יחיד. פיפטה 20 μL של 20% TTC ישירות למרכז כל מושבה.
  3. לאחר ספיגה מלאה, בסביבות 10 דקות של TTC על ידי המושבות, לדגור ב 37 ° C במשך 30-40 דקות.

4. קינטיקה צמיחה של נורמלי וקטן C. glabrata

הערה: שלושה זנים של שמרים הושוו: C. glabrata C2-1000907 T0 (בידוד קליני ללא טיפול PDT), T3n (C. glabrata C2-1000907 לאחר 3 RB-PDT רצופים המציגים מושבות בקוטר ממוצע של 1.5 ± 0.8 מ"מ בדומה לתאי ההורים), ו- T3p (מושבות קטנות של C. glabrata C2-1000907 לאחר 3 RB-PDT רצופים).

  1. כוונן את תרחיף תאי השמרים בתווך YPD ל- OD600 של 0.1 (5 × 10,6 תאים/מ"ל) בצינור של 3 מ"ל.
  2. מדוד באופן אוטומטי את OD600 של התרבית הסטטית כל 20 דקות באמצעות קורא המיקרו-לוחות הרב-מצבי (ראה טבלת חומרים) במשך 24 שעות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

הנתונים מוצגים כממוצע עם שגיאת תקן ± והתקבלו משלושה ניסויים בלתי תלויים, עם לפחות טריפליקטים בכל קבוצה. נתונים ניסיוניים, כולל ספירת מושבות, מדידות OD600 ותוצאות צביעת TTC, עברו גרפים ונותחו סטטיסטית באמצעות גרפים ותוכנות סטטיסטיות (ראה טבלת חומרים). ANOVA חד-כיווני או מבחן t שימש לניתוח הנתונים, וערך p <0.05 נחשב משמעותי. הסריקה בוצעה באמצעות סורק אופטי בצבע מלא של 48 סיביות ברזולוציה של 1200 dpi, והמדידות הבאות של קוטר המושבה נערכו באמצעות תוכנת ImageJ.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מחקר זה חושף את PDT כשיטה המדווחת הראשונה לגרימת היווצרות מושבות קטנות בקנדידה, העולה על ההשפעות המבוססות של אתידיום ברומיד ופלוקונזול. תצפית חדשנית זו מחייבת חקירה נוספת כדי לפענח את השלכותיה הן על מיגור פטריות על ידי הפחתת האלימות והן על הופעתם של מנגנוני התנגדות.

PDT בתיווך RB מעכב ביעילות את הצמיחה של C. glabrata, ומציע גישה טיפולית חלופית פוטנציאלית לזיהומי קנדידה. כפוטוסנסיטיזר המופעל על ידי אור, RB מייצר חמצן סינגלט ומיני חמצן תגובתי (ROS) כאשר הוא נחשף לאורך גל מסוים. עקה חמצו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים כי אין ניגוד עניינים.

תודות

עבודה זו קיבלה מימון ממשרד המדע והטכנולוגיה, טייוואן [MOST 110-2314-B-006-086-MY3], האוניברסיטה הלאומית צ'נג קונג [K111-B094], [K111-B095], בית החולים האוניברסיטאי הלאומי צ'נג קונג, טייוואן [NCKUH-11204031], [NCKUMCS2022057].

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
0.22 μ m פילטרMerck, טאיפיי, טייוואןMillex, SLGVR33RS
צינור מיקרופוגה 1.5 מ"לנפטון, סן דייגו, ארה"ב#3745
20% Triphenyltetrazolium chloride (TTC)סיגמא-אולדריץ', MO, ארה"בT8877
5 מ"ל צינור תחתון עגול פוליפרופילןקורנינג, אריזונה, ארה"ב352059
צינור תחתון עגול 5 מ"ל עם מכסה מסננת תאיםקורנינג, אריזונה, ארה"בפלקון, #352235
צלחת 96 בארותאלפא פלוס, טאויואן סיין, טייוואן#16196
אגרBRS, טיינאן, טייוואןAG012
דיסק ריקAdvantec, טוקיו, יפן49005040
צנטריפוגהאפנדורף, בריטניה5415R
תמיסת אתידיום ברומידסיגמא-אולדריץ', מיזורי, ארה"בE1510
פלוקונזול, 2 מ"ג/מ"לפייזר, ניו יורק, ארה"בBC18790248
GraphPad פריזמהGraphPad תוכנהגרסה 7.0
רצועת דיודה פולטת אור ירוק (LED)Nanyi electronics Co., Ltd, טיינאן, טייוואן5050גל עירור: 500 ~ 550 ננומטר
טמפרטורה נמוכה. חממות שייקYihder, טאיפיי, טייוואןLM-570D (R)
צמרגפן לטיפול בפהGood Verita Enterprise, טאיפיי, טייוואן161357
Muller Hinton II agarBD biosciences, קליפורניה, ארה"ב211438
קורא מיקרו-פלטות Multimodeהתקנים מולקולרייםSpectraMax i3x
Osub600 ספקטרופוטומטרBiochrom, לונדון, בריטניהUltrospec 10
Rose BengalSigma-Aldrich, ארה"ב330000ריכוז מלאי 40 מ"ג/מ"ל = 4%, מכינים ב-PBS, מאוחסן ב-4 מעלות; C
צינור זכוכית מעוקרSunmei, טיינאן, טייוואןAK45048-16100
תמצית שמרים פפטון דקסטרוז בינוניHIMEDIA, הודוM1363

מקורות

  1. Soriano, A., et al. Invasive candidiasis: current clinical challenges and unmet needs in adult populations. J Antimicrob Chemother. 78 (7), 1569-1585 (2023).
  2. Pappas, P. G., Lionakis, M. S., Arendrup, M. C., Ostrosky-Zeichner, L., Kullberg, B. J. Invasive candidiasis. Nat Rev Dis Primers. 4, 18026(2018).
  3. Meyahnwi, D., Siraw, B. B., Reingold, A. Epidemiologic features, clinical characteristics, and predictors of mortality in patients with candidemia in Alameda County, California; a 2017-2020 retrospective analysis. BMC Infect Dis. 22 (1), 843(2022).
  4. Whittaker, P. A. The petite mutation in yeast. Subcell Biochem. 6, 175-232 (1979).
  5. Hatab, M. A., Whittaker, P. A. Isolation and characterization of respiration-deficient mutants from the pathogenic yeast Candida albicans. Antonie Van Leeuwenhoek. 61 (3), 207-219 (1992).
  6. Defontaine, A., et al. In-vitro resistance to azoles associated with mitochondrial DNA deficiency in Candida glabrata. J Med Microbiol. 48 (7), 663-670 (1999).
  7. Brun, S., et al. Relationships between respiration and susceptibility to azole antifungals in Candida glabrata. Antimicrob Agents Chemother. 47 (3), 847-853 (2003).
  8. Bouchara, J. P., et al. In-vivo selection of an azole-resistant petite mutant of Candida glabrata. J Med Microbiol. 49 (11), 977-984 (2000).
  9. Badrane, H., et al. Genotypic diversity and unrecognized antifungal resistance among populations of Candida glabrata from positive blood cultures. Nat Commun. 14 (1), 5918(2023).
  10. Shantal, C. -J. N., Juan, C. -C., Lizbeth, B. -U. S., Carlos, H. -G. J., Estela, G. -P. B. Candida glabrata is a successful pathogen: An artist manipulating the immune response. Microbiol Res. 260, 127038(2022).
  11. Gamarra, S., Mancilla, E., Dudiuk, C., Garcia-Effron, G. Candida dubliniensis and Candida albicans differentiation by colony morphotype in Sabouraud-triphenyltetrazolium agar. Rev Iberoam Micol. 32 (2), 126-128 (2015).
  12. Hung, J. H., et al. Rose bengal-mediated photodynamic therapy to inhibit Candida albicans. J Vis Exp. (181), e63558(2022).
  13. Cardoso, D. R., Franco, D. W., Olsen, K., Andersen, M. L., Skibsted, L. H. Reactivity of bovine whey proteins, peptides, and amino acids toward triplet riboflavin as studied by laser flash photolysis. J Agric Food Chem. 52 (21), 6602-6606 (2004).
  14. Hall, R. M., Trembath, M. K., Linnane, A. W., Wheelis, L., Criddle, R. S. Factors affecting petite induction and the recovery of respiratory competence in yeast cells exposed to ethidium bromide. Mol Gen Genet. 144 (3), 253-262 (1976).
  15. Chen, X. J., Clark-Walker, G. D. The petite mutation in yeasts: 50 years on. Int Rev Cytol. 194, 197-238 (2000).
  16. Piskur, J. Inheritance of the yeast mitochondrial genome. Plasmid. 31 (3), 229-241 (1994).
  17. Wong, T. W., Wang, Y. Y., Sheu, H. M., Chuang, Y. C. Bactericidal effects of toluidine blue-mediated photodynamic action on Vibrio vulnificus. Antimicrob Agents Chemother. 49 (3), 895-902 (2005).
  18. Wong, T. W., et al. Indocyanine green-mediated photodynamic therapy reduces methicillin-resistant Staphylococcus aureus drug resistance. J Clin Med. 8 (3), 411(2019).
  19. Warrier, A., Mazumder, N., Prabhu, S., Satyamoorthy, K., Murali, T. S. Photodynamic therapy to control microbial biofilms. Photodiagnosis Photodyn Ther. 33, 102090(2021).
  20. Hung, J. H., et al. Recent advances in photodynamic therapy against fungal keratitis. Pharmaceutics. 13 (12), 2011(2021).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

Candida Glabrataטיפול פוטודינמי אנטי-מיקרוביאליקנדידה עמידה לתרופותטיפול באור ירוקאינדיקטור חמצון-חיזור מיטוכונדריאליטיפול בזיהום פטרייתיפטריות עמידות למספר תרופות
השראת מושבות קטנות בקנדידה מבריקה באמצעות טיפול פוטודינמי בתיווך בנגל
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.