מאמר שיטה

ספקטרומטריית מסות טנדם ברזולוציה גבוהה לחקר מרכיבים כימיים של Gynura bicolor DC

1.4K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/66612

⸱

2 בפברואר 2024

 ,  ,  ,  ,  , 
1Chongqing Clinical Research Center for Dermatology, Chongqing Key Laboratory of Integrative Dermatology Research, Key Laboratory of External Therapies of Traditional Chinese Medicine in Eczema, Department of Dermatology, Chongqing Hospital of Traditional Chinese Medicine, 2General Surgery, Chongqing Hospital of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

אנו מתארים פרוטוקול כללי המשלב ניתוח ספקטרומטריית מסה ברזולוציה גבוהה ועגינה מולקולרית במחקר הרפואה הסינית המסורתית.

תקציר

ההפרדה והניתוח של המרכיבים הכימיים הרצויים הם נושאים חשובים למחקר הבסיסי של הרפואה הסינית המסורתית (TCM). כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים במיוחד Quadrupole זמן טיסה טנדם ספקטרומטריית מסה (UPLC-Q-TOF-MS/MS) הפכה בהדרגה לטכנולוגיה מובילה לזיהוי רכיבי TCM. Gynura bicolor DC. (BFH), צמח רב-שנתי ללא גזע המשמש לרפואה ולמזון בסין יש השפעות רפואיות כגון פינוי חום, הרטבת הריאה, הקלה על שיעול, פיזור קיפאון והקלה על נפיחות. פוליפנולים ופלבנואידים מכילים איזומרים רבים, המעכבים את זיהוי התרכובות המורכבות ב-BFH. מאמר זה מציג פרוטוקול שיטתי לחקר מרכיבים כימיים של BFH המבוסס על מיצוי ממס ונתונים משולבים באמצעות UPLC-Q-TOF-MS.

השיטה המתוארת כאן כוללת פרוטוקולים שיטתיים לטיפול מקדים בדגימה, כיול טרשת נפוצה, רכישת טרשת נפוצה, עיבוד נתונים וניתוח תוצאות. טיפול מקדים לדוגמה כולל איסוף, ניקוי, ייבוש, ריסוק ומיצוי. כיול טרשת נפוצה מורכב מתיקון רב-נקודתי וחד-נקודתי. עיבוד נתונים כולל ייבוא נתונים, הקמת שיטות, עיבוד ניתוח והצגת תוצאות. תוצאות מייצגות של דפוס הפיצול האופייני של חומצות פנוליות, אסטרים וגליקוזידים ב- Gynura bicolor DC. (BFH) מוצגות במאמר זה. בנוסף, בחירת ממס אורגני, מיצוי, שילוב נתונים, בחירת אנרגיית התנגשות ושיפור השיטה נדונים בפירוט. פרוטוקול אוניברסלי זה יכול להיות בשימוש נרחב לזיהוי תרכובות מורכבות ב- TCM.

מבוא

הרפואה הסינית המסורתית (TCM) מיושמת קלינית בסין כבר אלפי שנים, והיא ממלאת תפקיד חיוני בשמירה על בריאותם של הסינים1. הרכב ה-TCM מגוון ומורכב, וה-TCM דווח רבות במחקרים איכותניים רבים המתמקדים בהרכב הכימי2. ניתן לחלק באופן גס את המרכיבים הכימיים ברפואה סינית מסורתית לקטגוריות הבאות כגון אלקלואידים, חומצות אורגניות, פנילפרופנואידים, קומרין, ליגננים, קווינונים, פלבנואידים, טרפנואידים, ספונינים טריטרפנואידים, ספונינים סטרואידים, גליקוזידים לבביים וטאנינים3. בהתחשב במספר הגדול של רכיבים לא ידועים ואיזומרים בלתי ניתנים להבחנה ב- TCM, ההפרדה והניתוח של המרכיבים הכימיים הרצויים הם נושאים חשובים למחקר הבסיסי של TCM4.

כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים במיוחד Quadrupole זמן טיסה ספקטרומטריית מסה (UPLC-Q-TOF-MS) יושמה לניתוח חומרים ברפואה הסינית המסורתית (TCM), אשר ניתן להפריד על ידי כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים במיוחד 5,6. הרזולוציה הגבוהה של MS יכולה לספק מידע יונים נרחב, המשמש לניתוח מסד נתונים עם שגיאה פחות מ 5 עמודיםלדקה 7. לאחר הפעלת אנרגיית ההתנגשות, מצב MS המשני יכול לקבל יוני פרגמנט משניים, שעוצמתם ומספרם מושפעים מגודל האנרגיה8.

Gynura bicolor DC. (BFH), צמח רב-שנתי חסר גזע שנמצא בשימוש נרחב לרפואה ולמזון (איור 1A), הוא צמח נדיר שנמצא בסכנת הכחדה ייחודי לסין9. BFH עשיר באנתוציאנינים, פוליפנולים, פלבנואידים ויכולת נוגדת חמצון חזקה10. ל-BFH יש השפעות רפואיות הכוללות פינוי חום, קירור דם, הרטבת ריאות, הקלה על שיעול, פיזור קיפאון, הקלה על נפיחות, הקלה על חום הקיץ וסילוק חום. מחקרים מעטים התמקדו בהרכב הכימי של BFH11. פוליפנולים ופלבנואידים מכילים איזומרים רבים, מה שמקשה על זיהוי התרכובות המורכבות ב-BFH. יש לפתח שיטה אוניברסלית לזיהוי רכיבים כימיים, אשר ניתן ליישם על כל מיני TCM. מחקר זה נועד לדווח על פרוטוקול שיטתי לחקר מרכיבים כימיים של BFH המבוסס על מיצוי ממס ונתונים משולבים באמצעות UPLC-Q-TOF-MS.

פרוטוקול

1. טיפול מקדים לדוגמה

  1. לשטוף את כל העשב של BFH במים טהורים עד שאין פיקדונות גלויים וזיהומים. הניחו את ה-BFH הנקי בתבנית ולאחר מכן הכניסו אותו לתנור (איור 1B). מכוונים את התנור ל-50 מעלות למשך 24 שעות.
    הערה: כל המפעל של BFH נאסף במחוז סצ'ואן, סין.
  2. למחוץ BFH מיובש במגרסה רב תכליתית במהירות גבוהה. העבירו את האבקה הגסה למסננת בעלת 50 רשתות (איור 1C). אספו את האבקה הדקה בשקית אטומה, ואחסנו אותה במגדל ייבוש.
  3. שקלו במדויק שש דגימות BFH של 0.25 גרם כל אחת, והניחו אותן בשש צלוחיות חרוטיות. הוסיפו 30 מ"ל של ממס אורגני (50% אתנול-מים, 70% אתנול-מים, כלורופורם, אתר נפט, אתיל אצטט ו-n-בוטיל אלכוהול) לכל בקבוק חרוטי (איור 1D).
  4. מעבירים את התערובת לסוניק אמבט אולטרסאונד למשך 30 דקות מיצוי ב-25°C. צנטריפוגה את הדגימה ב 14,000 x גרם במשך 5 דקות. הכינו מזרק הזרקה ומסנן קרום מיקרונקבובי אורגני 0.22 מיקרומטר. סננו את כל הסופרנאטנטים לבקבוקי דגימה של 2 מ"ל.

2. כיול טרשת נפוצה

  1. באמצעות פיפטה בטווח של 1,000 μL, העבירו 500 μL של תמיסת נתרן הידרוקסידי 0.1 M לבקבוק נפחי של 100 מ"ל ולאחר מכן העבירו 450 μL של מים דה-יוניים או אולטרה-טהורים לבקבוק הנפח של 100 מ"ל (איור 2).
  2. באמצעות פיפטה בטווח של 200 μL, הוסף 50 μL של חומצה פורמית לצלוחית נפחית של 100 מ"ל. צור נפח כולל של 100 מ"ל עם 90:10 2-פרופנול:מים, וסוניק את התמיסה במשך 5 דקות. תייגו את הבקבוק כתמיסת נתרן 0.5 מ"מ ב-90:10 2-פרופנול:מים ואחסנו אותה במקרר.
    הערה: תמיסת נתרן פורמט פג בעוד שבוע אחד בטמפרטורת החדר.
  3. הפעל את תוכנת הבקרה UPLC-Q-TOF-MS ולאחר מכן פתח את חלון MS tune . בחלונית Sample Flow Control , קבעו 25 μL/min באפשרות Infusion Flow Rate ובחרו C באפשרות Reservoir . המתן כדקה לטיהור האוטומטי עד הסוף.
  4. לחץ על Flow כפתור כדי להתחיל לספק פתרון פורמט נתרן. לחץ על כפתור חיובי כדי לעבור למצב יונים חיוביים, ולחץ על כפתור רגישות כדי לעבור למצב רגישות.
    הערה: המשך לשלב הבא עד שהפסגות האופייניות של פורמט נתרן יופיעו בחלון הספקטרום בזמן אמת.
  5. בתוכנת הבקרה UPLC-Q-TOF-MS, פתח את חלון MS Console . במיקום השמאלי, בחר אפשרויות SYNAPT XS ו - Intellistart ברצף.
  6. סמן את צור כיול ולחץ על לחצן התחל . לחץ על הבא כפתור ובחר פרופיל כיול בתפריט הנפתח. לחץ על כפתור הבא , ובחר את מצב רגישות בקוטביות חיובית . לחץ על הבא כוונון דף כפתורים, הבא והתחל בתורו.
  7. עבור לחלון כוונון MS ולחץ על הלחצן שלילי כדי לעבור למצב יון שלילי. חזור לחלון MS Console .
  8. סמן את צור כיול ולחץ על לחצן התחל . לחץ על הבא כפתור ובחר פרופיל כיול בתפריט הנפתח. לחץ על כפתור הבא , ובחר את מצב רגישות בקוטביות שלילית . לחץ על הבא כוונון דף כפתורים, הבא והתחל בתורו.
  9. בלוח בקרת הזרימה של LockSpray , הגדר קצב זרימה של 50 μL/min ולחץ על כפתור Flow כדי לאפשר לתמיסת LE להיכנס לספקטרומטר המסות. עבור לחלון המנגינה של MS , סמן את הגדרת המקור של LockSpray ולחץ על לחצן התחל כדי להתחיל בכיול.

3. רכישת טרשת נפוצה

  1. עבור לממשק הראשי ולחץ באמצעות לחצן העכבר הימני על קובץ כניסה עמודה כדי לפתוח את שיטת הכרומטוגרפיה הנוזלית.
  2. לחץ על כפתור הכניסה ולאחר מכן הגדר פרמטרים כולל זמן ריצה ומעבר צבע. לחץ על כפתור Autosampler ולאחר מכן הגדר פרמטרים כולל זמן ריצה, עמודה ודגימה. לחץ על להציל לחצן.
  3. לחץ לחיצה ימנית על העמודה MS Method כדי לפתוח את שיטת ספקטרומטריית המסות.
  4. לחץ על כפתור המידע ולאחר מכן הגדר פרמטרים כולל שעת סיום, קוטביות, מצב אנלייזר, מסה נמוכה, מסה גבוהה ואנרגיית התנגשות העברת רמפה. לחץ על בסדר כפתור ולאחר מכן על להציל לחצן.
  5. מלא את טבלת הרצפים כולל שם הקובץ, בקבוקון וכרך. לחץ על להציל לחצן.
  6. בחר את השורה בטבלת הרצף עבור המדגם שברצונך להפעיל. לחץ על כפתור הפעלה , ולחץ על בסדר כפתור בחלון שפשוט צץ.

4. עיבוד נתונים

  1. הפעל את תוכנת ניתוח הנתונים. בעמודה העבודה שלי , לחץ על הלחצן Import MassLynx Data כדי לפתוח חלון חדש.
  2. לחץ על כפתור סימן הפלוס , ובדוק את כל חמשת הקבצים הגולמיים מהמצב החיובי. הזינו שם קבוצה ולחצו על הלחצן Create UNIFI Sample Set כדי להתחיל בייבוא נתונים (איור 3A).
  3. לחץ פעמיים על קובץ שיטת הניתוח במצב חיובי. לחץ על תווית עיבוד ולחץ על יעד לפי מסה כפתור. הזן את המספר של 5 עמודים לדקה בתיבת הקלט לאחר סובלנות התאמת יעד וסובלנות התאמת פרגמנט.
  4. לחץ על כפתור הבית , ולחץ על כפתור Adducts . בחר את השורות של +H ו- +Na, ולחץ על הלחצן הימני בצורת חץ . לחצו על כפתור השמירה (איור 3B).
  5. לחץ פעמיים על קובץ שיטת הניתוח במצב שלילי. לחץ על תווית עיבוד ולחץ על יעד לפי מסה כפתור. הזן את המספר של 5 דפים לדקה בתיבת הקלט לאחר סובלנות התאמת יעד וסובלנות התאמת שברים.
  6. לחץ על כפתור הבית ולאחר מכן לחץ על כפתור Adducts . בחר את השורות של -H ו- +HCOO ולחץ על הלחצן הימני בצורת חץ . לחץ על להציל לחצן.
  7. בעמודה העבודה שלי, לחץ על לחצן ניתוח כדי לפתוח חלון חדש. בחר את הנתונים שיובאו זה עתה ואת השיטה שנוצרה זה עתה ולאחר מכן לחץ על הבא לחצן. הזן את שם הקובץ. בחר את התיקיה שבה מאוחסנים נתוני הניתוח ולאחר מכן לחץ על לחצן סיום
  8. לחצו על כפתור התהליך והמתינו כמה דקות עד שהתוצאות יופיעו (איור 3C).
  9. העתק את טבלת התוצאות לטופס ריק (איור 3D).

5. ניתוח תוצאות

  1. בחר מתחם בטבלת התוצאות. ספקטרום המסה המשני המתאים יוצג בפינה הימנית התחתונה (איור 4A).
  2. לחצו על הכפתור בצורת טבלה ובחרו באפשרות High Energy Fragments כדי להציג את טבלת יוני המקטעים המשניים (איור 4B).
  3. בחר יון שבר משני בטבלה. העבר את העכבר מעל שיא היונים המתאים לספקטרום המסה המשני, והשבר המבני המתאים יוצג על המסך (איור 4C).
    הערה: להעריך ידנית את סבירות הפיצוח שניתן על ידי התוכנה, ולהבחין בין איזומרים בהתבסס על יוני השבר המשניים.
  4. צייר ידנית את תבנית הפיצול בתוכנת הציור.
    הערה: דוגמאות לדפוסי פיצול מתוארות בפירוט בסעיף תוצאות מייצגות.

תוצאות

זיהוי ההרכב הכימי של BFH שימש כמודל להצגת התוצאות המייצגות. כרומטוגרמות שיא בסיס של Gynura bicolor DC שחולץ ממס. מוצגים בקובץ משלים 1-משלים איור S1-S6, וזמן השמירה שנצפה (RT), שם הרכיב, הנוסחה, יחס המסה לטעינה (m/z) ושגיאת המסה מפורטים בטבלאות S1-S6. ב-ZBTK זוהו כל 35 סוגי התרכובות מפסגות מופרדות ב-UPLC-TOF-MS. כפי שמוצג בקובץ משלים 1-טבלה משלימה S1, הכימיקלים העיקריים הכילו חומצה (חומצה קווינית, חומצה DL-מאלית, חומצת לימון, חומצה O-קומרית וחומצה 3-O-trans-coumaroylquinic), גליקוזידים (gentiopicrin, picroside II, suffruticoside J, copoline, and borneol-2-O-β-D-apiofuranosyl-(1→6)-β-D-glucoside), ואזרים (bilobalide, trimethyl citrate ו- trans-O-glucosyl-methyl-trans-cinnamate). ב- ZBTK-CT התגלו 25 סוגים של תרכובות נוספות (קובץ משלים 1 - טבלה משלימה S2), ונצפו 45 סוגים של תרכובות בסך הכל.

כאשר כלורופורם שימש כחומר מיצוי, נמצאו כל 50 התרכובות. ביניהם, 28 סוגים של תרכובות נוספות כללו חומצה כלילית, חומצה sanleng, agrimol A, ומתיל artemisate (קובץ משלים 1 - טבלה משלימה S3). כאשר אתר נפט שימש כמיצוי, נצפו 44 סוגים של תרכובות בסך הכל. מצאנו 17 סוגים של תרכובות נוספות כולל notopterol, onjisaponin, ו cnideol B (קובץ משלים 1 - טבלה משלימה S4). בסך הכל התקבלו 65 תרכובות בממס באמצעות אתיל אצטט כחומר מיצוי. בהשוואה לארבע התמציות הקודמות, נצפו 37 תרכובות נוספות כגון דפנטין, אצטובנילון B וסטיגמסטרול-3-O-β-D-גלוקוזיד (קובץ משלים 1-טבלה משלימה S5). במיצוי אלכוהול בוטיל מצאנו 67 סוגים של תרכובות סה"כ, שהכילו 26 סוגים של תרכובות נוספות, כולל rengyoside C, כרומונים, aturametelin F ו-deacetylmatricarin-8-O-β-D-glucopyranoside (קובץ משלים 1-טבלה משלימה S6). לסיכום, מצאנו 168 תרכובות המבוססות על כל התוצאות המורכבות של שישה חומרי מיצוי.

כדי להבין לעומק את מסלול המחשוף של סוגי תרכובות ב- UPLC-TOF-MS, בחרנו שלוש תרכובות כדוגמאות. עבור חומצות, חומצה 3-O-trans-coumaroylquinic עם m/z = 337.09222 עלולה לאבד קבוצת C7H10O5 או C9H8O2 באמצעות תגובת הידרוליזה ליצירת מתווכים עם m/z = 163.04116 או 199.05557, בהתאמה (איור 4D). עבור אסטרים, trans-O-glucosyl-methyl-trans-cinnamate עם m/z = 385.11308 יכול להיות מומר לביניים עם m/z = 153.07485 או 135.04679 באמצעות מחשוף C-C באתרים שונים (איור 4E). עבור גליקוזידים, הדר C עם m/z = 385.11308 הפך לביניים עם m/z = 272.09174 באמצעות מחשוף קשר C-C בשרשרת האליפטית, ואילו אובדן קבוצת C7H6O2 הביא לביניים עם m/z = 113.02534 (איור 4F). במסלול אחר, שבירת הקשר C-O-C על טבעת הבנזן הובילה להיווצרות ביניים עם m/z = 163.11245, בעוד יחידת ההקסוס נעלמה.

התוצאות המייצגות של עגינה מולקולרית חשפו מבנים דו-ממדיים ותלת-ממדיים באיור 4G,H, בהתאמה. ניתוח העשרה של אונטולוגיה גנטית הראה את התוצאות של תפקוד גנים במונחים של תהליך ביולוגי (BP), רכיב תאי (CC) ותפקוד מולקולרי (MF; איור 4I). ניתוח ביאור המסלול של אנציקלופדיית קיוטו לגנים וגנומים הראה את תוצאות המסלול של גנים המבוטאים באופן דיפרנציאלי, אשר יכולים לשמש להבנה נוספת של תפקוד הגנים (איור 4J). התוצאות המפורטות של עגינה מולקולרית מוצגות בקובץ משלים 1-טבלה משלימה S7 ובקובץ משלים 1-איור משלים S7-S9.

figure-results-1
איור 1: שיטת קדם-טיפול ברפואה סינית מסורתית. (A) Gynura bicolor DC. (ב) ניקוי וייבוש. (ג) כתישת. (D) תוספת ממס אורגני. (E) שאיבת אולטרסאונד. (ו) צנטריפוגה של תערובת. (ז) סינון של סופרנטנט. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-2
איור 2: הליך הפעולה של UPLC-Q-TOF-MS/MS. (A) הכנת נתרן פורמטה. (B) כיול ציר המסה. (C) מנגינה של MS. (ד) מיקום מדגם. (E) רכישת ספקטרום מסה. (F) תצוגת ספקטרום מסה. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-3
איור 3: עיבוד נתונים ואינטגרציה. (A) המרת נתונים. (ב) שינוי שיטה. (ג) עיבוד נתונים. (ד) ניתוח סטטיסטי של התוצאות. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-4
איור 4: ניתוח תוצאות עמוק. (A) ספקטרום מסה משני. (B) תצוגת יון מקטע משני. (ג) תצוגת אתר שבר. (D) תבנית פיצול 1. (ה) תבנית פיצול 2. (ו) תבנית פיצול 3. (ז) הדגמה של יעד הפעולה של החומר הפעיל. (H) מבנה תלת-ממדי של יעד הפעולה של החומר הפעיל. (I) ניתוח העשרה GO. (J) ניתוח ביאור מסלול KEGG. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

קובץ משלים 1: זיהוי תרכובות, תוצאות עגינה מולקולרית, כרומטוגרמות שיא בסיס וניתוח רשתות. אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.

דיון

מלבד מרתח מים12, מיצוי ממס אורגני הוא שיטה נפוצה נוספת של טיפול מקדיםTCM 13. על פי העיקרון של פירוק פאזה דומה, רכיבים רבים הופקו על ידי שילוב של ממיסים אורגניים שונים14. מיצוי בסיוע אולטראסוני הוא אחת השיטות העיקריות המשמשות להשגת רכיבים ב- TCM15. מיצוי פחמן דו-חמצני סופר-קריטי טוב למיצוי סוגים מסוימים של חומרים כגון ליגנאנים16. יתר על כן, מיצוי בסיוע מיקרוגל בנוזלים יוניים (ILs) נחקר כחלופה למיצוי ממס אורגני קונבנציונלי17. עם זאת, קשה להשיג שליטה מדויקת באנרגיית מיקרוגל, מה שעלול לגרום לתגובות משניות כגון התייבשות אתרית והתייבשות אסטריפיקציה.

הגדרות אופטימליות של אנרגיית התנגשות יכולות להניב מידע נוסף על מקטע MS מסדר שני. מידע מטנדם MS, כלומר מצב MSE , סופק על ידי שתי סריקות מקבילות לסירוגין תוך שימוש באנרגיה נמוכה כדי לקבל מידע על יונים מולקולריים או אנרגיה גבוהה כדי להשיג סריקה מלאה מדויקת של יוני שברמסה 18. במהלך הגדרת פרמטרים של אנרגיה גבוהה, הטווח של 10-35 V משמש בדרך כלל באנרגיית התנגשות העברת רמפה כדי לשפר את יעילות פיצול מבשר19.

הכמות העצומה של נתוני טרשת נפוצה גולמיים הופקה מטרשת נפוצה ברזולוציה גבוהה. נתוני MS גולמיים, שכללו שיאי יונים מולקולריים בספקטרום הטרשת הנפוצה ופסגות יון מקטעים בספקטרום MS/MS, חייבים להיות מעובדים ומשולבים היטב. תוכנת ניתוח נתונים MS נועדה לנתח את כל המטבוליטים במדגם ביולוגי באופן מקיף20. הסינון של מטבוליטים סולפטים התבסס על רכישה תלוית נתונים של סריקות טרשת נפוצה מלאות ונתוני מטבוליטים רב-ממדיים21. על בסיס הטכנולוגיה המתפתחת, חיזוי בינה מלאכותית יהיה כיוון פיתוח אפשרי לניתוח נתונים של MS.

ניתן לזהות את רוב התרכובות בשיטה זו. עם זאת, המקטעים המשניים המוגבלים אינם יכולים לזהות באופן מלא את כל האיזומרים כולל פלבנואידים וטאנינים. כדי להשיג זיהוי מבנים, חוקרים יכולים להשתמש בספקטרומטריית מסות טנדם כדי לספק מידע נוסף על יוני שברים, המסייעים בזיהוי מבנים מורכבים8. בהתחשב במגבלה של יון יינון אלקטרוספריי או מקור יינון כימי בלחץ אטמוספירה, טרשת נפוצה ברזולוציה גבוהה אינה מתאימה לניתוח מקרומולקולות. יינון ספיחה בלייזר בסיוע מטריצה יכול לקדם יינון של תרכובות מולקולריות גדולות, כגון חלבונים22. לסיכום, UPLC-Q-TOF-MS/MS היא אחת הטכניקות הישימות ביותר לזיהוי תרכובות TCM. יש לו פוטנציאל להיות מיושם בתחומים אחרים, כולל רפואה קלינית וכימיה אנרגיה.

גילויים

המחברים מצהירים כי אין אינטרסים כלכליים מתחרים.

תודות

עבודה זו מומנה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (82104881), צוות ירושה וחדשנות של טיפול TCM במחלות חיסוניות, פרויקט המחקר המדעי הרפואי של צ'ונגצ'ינג (פרויקט משותף של ועדת הבריאות של צ'ונגצ'ינג והלשכה למדע וטכנולוגיה) (2022DBXM007), פרויקט מיוחד לתמריץ ביצועים והדרכה של מכון המחקר המדעי של צ'ונגצ'ינג (cstc2022jxjl120005), פרויקט מיוחד עבור קרן המדע הפוסט-דוקטורט של צ'ונגצ'ינג (2022CQBSHTB3035), תוכנית כישרונות רפואיים בכירים של צ'ונגצ'ינג עבור יונג ובגיל העמידה, התוכנית למוסדות מדעיים של צ'ונגצ'ינג (פרויקט מחקר עצמאי מס '2022GDRC015).

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
כלורופורםSinopharm Chemical ReagentCo., LtdCAS 67-66-3
אתנולChuandongChemicalCAS 64-17-5
אתיל אצטטChuandongChemicalCAS 141-78-6
כרומטוגרףנוזלי WatersACQUITY Class 1 פלוס
MassLynxWatersV4.2MS תוכנת
בקרהn-בוטיל אלכוהולChuandongChemicalCAS 71-36-3
אתר נפטChuandongChemicalCAS 8032-32-4
ספקטרומטריית מסה של זמן טיסה מרובעווטרסSYNAPT XS
UNIFIווטרסתוכנה לניתוח נתונים

מקורות

  1. Lin, P., et al. Qualitative and quantitative analysis of the chemical profile for gualou-xiebai-banxia decoction, a classical traditional chinese medicine formula for the treatment of coronary heart disease, by uplc-q/tof-ms combined with chemometric analysis. J Pharm Biomed Anal. 197, 113950(2021).
  2. Hui, D., et al. Uplc-q-tof/ms-based metabolomic studies on the toxicity mechanisms of traditional chinese medicine chuanwu and the detoxification mechanisms of gancao, baishao, and ganjiang. Chinese J Nat Med. 13 (9), 687-698 (2015).
  3. Newman, D. J. Modern traditional chinese medicine: Identifying, defining and usage of tcm components. Adv Pharmacol. 87, 113-158 (2020).
  4. Liu, S., Yi, L. Z., Liang, Y. Z. Traditional chinese medicine and separation science. J Sep Sci. 31 (11), 2113-2137 (2008).
  5. Yuan, L., et al. Rapid classification and identification of complex chemical compositions in traditional chinese medicine based on uplc-q-tof/ms coupled with data processing techniques using the kudiezi injection as an example. Anal Methods. 7 (12), 5210-5217 (2015).
  6. Wang, F., et al. Hplc coupled with chemical fingerprinting for multi-pattern recognition for identifying the authenticity of clematidis armandii caulis. JoVE. (189), e64690(2022).
  7. Gao, Y., et al. Ultra high-performance liquid chromatography-mass spectrometry and self-established database analysis of chinese herbal medicine components. JoVE. (201), e66091(2023).
  8. Fu, X., et al. Standardized identification of compound structure in tibetan medicine using ion trap mass spectrometry and multiple-stage fragmentation analysis. JoVE. (193), e65054(2023).
  9. Wang, Y., et al. Comparison of morphological and physiological characteristics in two phenotypes of a rare and endangered plant, begonia fimbristipula hance. Photosynthetica. 54, 381-389 (2016).
  10. Zhang, P., et al. Response of population canopy color gradation skewed distribution parameters of the rgb model to micrometeorology environment in begonia fimbristipula hance. Atmosphere. 13 (6), 890(2022).
  11. Yu, L., Ning, L., Youzhen, D. Studies on microwave extraction of the pigment from begonia fimbristipula hance. Guangdong Trace Elements Science. 11 (10), 60-63 (2004).
  12. Xiao, Q., et al. Novel fusion protein consisting of metallothionein, cellulose binding module, and superfolder gfp for lead removal from the water decoction of traditional chinese medicine. ACS Omega. 5 (6), 2893-2898 (2020).
  13. Huang, H., et al. Using multiple light scattering to examine the stability of phyllanthus emblica l. Extracts obtained with different extraction methods. JoVE. (194), e65130(2023).
  14. Miao, W. G., Tang, C., Ye, Y., Quinn, R. J., Feng, Y. Traditional chinese medicine extraction method by ethanol delivers drug-like molecules. Chin J Nat Med. 17 (9), 713-720 (2019).
  15. Olejar, K. J., et al. Ultrasonic-assisted extraction of cannabidiolic acid from cannabis biomass. JoVE. (183), e63076(2022).
  16. Zhu, H. Y., et al. Sedative and hypnotic effects of supercritical carbon dioxide fluid extraction from schisandra chinensis in mice. J Food Drug Anal. 24 (4), 831-838 (2016).
  17. Lin, X., Wang, Y., Liu, X., Huang, S., Zeng, Q. Ils-based microwave-assisted extraction coupled with aqueous two-phase for the extraction of useful compounds from chinese medicine. Analyst. 137 (17), 4076-4085 (2012).
  18. Wu, T., Lv, H., Wang, F., Wang, Y. Characterization of polyphenols from lycium ruthenicum fruit by uplc-q-tof/mse and their antioxidant activity in caco-2 cells. J Agric Food Chem. 64 (11), 2280-2288 (2016).
  19. Distler, U., et al. Drift time-specific collision energies enable deep-coverage data-independent acquisition proteomics. Nat Methods. 11 (2), 167-170 (2014).
  20. Sawada, Y., et al. Widely targeted metabolomics based on large-scale ms/ms data for elucidating metabolite accumulation patterns in plants. Plant Cell Physiol. 50 (1), 37-47 (2009).
  21. Zhang, X. M., et al. Data-dependent acquisition based high-resolution mass spectrum for trace alternaria mycotoxin analysis and sulfated metabolites identification. Food Chem. 364, 130450(2021).
  22. Downard, K. M. Indirect study of non-covalent protein complexes by maldi mass spectrometry: Origins, advantages, and applications of the "intensity-fading" approach. Mass Spectrom Rev. 35 (5), 559-573 (2016).

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

כרומטוגרפיה נוזלית בעוצמה גבוהה מאודקוואדרופול זמן מעוףהכנה מוקדמת של דגימהמיצוי בממסחומצות פנוליותאיזומרים של פלבנואידיםרפואה סינית מסורתית
ספקטרומטריית מסות טנדם ברזולוציה גבוהה לחקר מרכיבים כימיים של Gynura bicolor DC
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.