מחקר זה מציג הליך דיסקציה קהה ייחודי לשמירה על שלמות הג'לי של וורטון (WJ), וכתוצאה מכך WJ פחות פגום וכמות וכדאיות גדולה יותר של תאי גזע מזנכימליים שנקטפו (MSC). השיטה מפגינה תפוקה ויכולת שגשוג גבוהות בהשוואה לשיטות דיסקציה חדות קונבנציונליות.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
בידוד תאי גזע מזנכימליים שמקורם בחבל הטבור עם יבולים גבוהים ונזק נמוך
במאמר זה
סיכום
תקציר
תאי גזע מזנכימליים (MSCs) הם אוכלוסייה של תאים רב-פוטנטיים בעלי תכונות רגנרטיביות ואימונומודולטוריות יוצאות דופן. הג'לי של וורטון (WJ) מחבל הטבור (UC) זכה להתעניינות גוברת בתחום הביו-רפואי כמקור יוצא מן הכלל של MSCs. עם זאת, התעוררו אתגרים כגון היצע מוגבל וחוסר סטנדרטיזציה בשיטות הקיימות. מאמר זה מציג שיטה חדשנית לשיפור תפוקת MSC על ידי ניתוח WJ שלם מחבל הטבור. השיטה משתמשת בדיסקציה קהה כדי להסיר את שכבת האפיתל, תוך שמירה על שלמות ה- WJ כולו וכתוצאה מכך כמות וכדאיות מוגברת של MSCs שנקטפו. גישה זו מפחיתה באופן משמעותי את פסולת WJ בהשוואה לשיטות דיסקציה חדות קונבנציונליות. כדי להבטיח את טוהר WJ-MSCs ולמזער את ההשפעה התאית החיצונית, בוצע הליך המשתמש במתח פנימי כדי לקלף את האנדותל לאחר היפוך UC. בנוסף, צלחת הפטרי הפכה לזמן קצר במהלך תרבית הצמחים כדי לשפר את ההתקשרות ואת צמיחת התאים. ניתוח השוואתי הראה את עליונותה של השיטה המוצעת, והראה תשואה גבוהה יותר של WJ ו- WJ-MSCs עם כדאיות טובה יותר מאשר שיטות מסורתיות. המורפולוגיה ודפוס הביטוי הדומים של סמני פני התא בשתי השיטות מאשרים את אפיונם וטוהרם עבור יישומים שונים. שיטה זו מספקת גישה בעלת תפוקה גבוהה וכדאיות גבוהה לבידוד WJ-MSC, ומדגימה פוטנציאל גדול ליישום קליני של MSCs.
מבוא
מאז הבידוד הראשון של תאי גזע מזנכימליים (MSCs) מהג'לי של וורטון (WJ) בשנת 1991, תאי גזע רב-פוטנטיים אלה זכו לתשומת לב משמעותית מצד חוקרים בשל תכונות ההתחדשות שלהםויכולת התמיינות רב-שושלות 1. MSCs ניתן לבודד ממקורות שונים, כולל מח עצם, דם היקפי, מוך השן, רקמת שומן, עובר (הפלה אנושית), ורקמות הקשורות ללידה2. חבל הטבור (UC) התגלה כמאגר מבטיח בשל אופיו הלא פולשני, תפוקת התאים השופעת ויכולת ההתמיינות שלו, המציג קצב גבוה של התפשטות, פוטנציאל התמיינות ותכונות אפנון חיסוני3. MSCs עובריים מפגינים גבעול חזק ותכונות חיסוניות, מה שהופך אותם למוקד העיקרי של ניסויים קליניים ומחקר בסיסי שנערך בשני העשורים האחרונ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
דגימות נלקחו מהתורמים הבריאים בהסכמה מבית החולים לבריאות יולדות וילדים במחוז שנג'ן לונגגנג, גואנגדונג, סין. השימוש בדגימות אנושיות למחקר אושר על ידי ועדת האתיקה של בית החולים שנזן, אוניברסיטת בייג'ינג לרפואה סינית (SZLDH2020LSYM-095) וועדת האתיקה הרפואית של בית החולים ליולדות וילדים במחוז שנג'ן לונגגנג (LGFYYXLLS-2020-005). כל הניסויים נערכו בהתאם להנחיות שאושרו. פרטי הריאגנטים והציוד בו נעשה שימוש מפורטים בטבלת החומרים.
1. איסוף חבל הטבור האנושי
- יש להשיג דגימות חבל טבור אנושי מבית החולים השיתופי בתנאים סטריליים.
הערה: בחר תורם מתחת לגיל 35, רצוי פרימיפרה, ללא היסטוריה של הפטיטיס, מחלות המועברו....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
הנהלים לאיסוף וטיפוח UC-MSCs, כמו גם הניתוח הבא שלהם, מסוכמים באיור 1. ה-UC חולק בצורה מסודרת למספר חלקים בשיטה הייחודית; תרשים הפעולה הספציפי של ההליכים העיקריים מתואר באיור 2. צמיחתם של תאים מתרביות צמחים נוטרה ותועדה באופן שגרתי. תאים דבקים בצורת ציר נצפו כ -4 ימים לאחר תרבית הצמחים וזחלו יותר ויותר לצורת מערבולת. תאים אלה זוהו גם כ-P0 והמשיכו להתרבות לאחר מכן תוך שמירה על גודל ומורפולוגיה אחידים במהלך ההתרבות והמעבר. השיטות הקונבנציונליות והשיטות הנוכחיות הצ.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
MSCs מייצגים תחום דינמי של מחקר עם השלכות עמוקות על רפואה רגנרטיבית22. תכונותיהם הייחודיות הופכות אותם למוקד מחקר מדעי וטומנים בחובם פוטנציאל לחולל מהפכה בטיפול במגוון רחב של מחלות ופציעות7. WJ-MSCs הם תת-קבוצה נפרדת של MSCs, אשר ניתן לקבל מרקמת החיבור הג'לטינית בתוך UC הממוקם בין אפיתל בין כלי הדם ומי השפיר23. היישום הקליני של MSCs טמון בהשגת מספר תאים מספיק24. עם זאת, ככל שמספר המעבר גדל, התאים החלו להראות מידה מסוימת של תופ.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים אינם מדווחים על ניגודי עניינים.
תודות
עבודה זו נתמכה כספית על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (82172107), הקרן למדעי הטבע של מחוז גואנגדונג, סין (2021A1515011927, 2021A1515010918, 2020A1515110347), קרן המחקר הרפואי של שנזן (SMRF. D2301015), ועדת החדשנות העירונית למדע וטכנולוגיה של שנזן (JCYJ20210324135014040, JCYJ20220530172807016, JCYJ20230807150908018, JCYJ20230807150915031) והקרן המיוחדת של מחוז לונגגאנג לפיתוח כלכלי וטכנולוגי (LGKCYLWS2022007).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| נוגדן CD44 אנטי אנושי APC | ביולג'נד | ||
| צלחות תרבית תאים 24 בארות | Thermo Scientific | 142475 | |
| APC אנטי-אנושי CD73 (Ecto-5'-nucleotidase) נוגדן | ביולג'נד | ||
| עכבר APC IgG1, κ איזוטייפ Ctrl (FC) נוגדן | Biolegend | ||
| 400122 אוטוקלאב | HIRAYAMA | HVE-50 | |
| אוטומטי מונה תאים | Countstar | FL-CD | |
| BAMBANKER פתרון שימור הקפאה | Wako | 302-14681 | |
| מאגר צביעת תאים | Biolegend | ||
| 420201 מכונה צנטריפוגלית | Eppendorf | 5424R | |
| ספסל נקי | שנחאי ZhiCheng | C1112B | |
| CO2 חממה | תרמו מדעית | HERAcell 150i | |
| D-PBS | Solarbio | D1040 | |
| תנור פיצוץ אלקטרו-תרמוסטטי | שנחאי JingHong | DHG-9423A | |
| נוגדן CD105 אנטי אנושי FITC | ביולג'נד | ||
| 323204 נוגדן CD90 (Thy1) אנטי-אנושי של FITC | ביולג'נד | ||
| עכבר FITC IgG1, κ איזוטייפ Ctrl (FC) נוגדן | Biolegend | 400110 | |
| זרימה ציטומטריה | בקמן | CytoFLEX | |
| המוציטומטר | מעולה מרינפלד | 640410 | |
| מאגר שטיפת פרמיביליזציה תוך תאי (10&) | ביולג'נד | ||
| מיקרוסקופ ביולוגי הפוך | ZEISS | Axio Vert. A1 | |
| מיכל אחסון חנקן נוזלי | Thermo Scientific | CY50935-70 | |
| תמיסת מלח רגילה (NS) | Meilunbio | MA0083 | |
| PBS | Solarbio | P1032 | |
| PE אנטי אנושי CD11b נוגדן | Biolegend | ||
| 393112 נוגדן CD19 אנטי אנושי PE | ביולג'נד | ||
| PE אנטי-אנושי CD34 נוגדן | Biolegend | ||
| PE אנטי אנושי CD45 נוגדן | Biolegend | 368510 | |
| PE נוגדן HLA-DR אנטי אנושי | ביולג'נד | ||
| PE Mouse IgG1, κ איזוטייפ Ctrl (FC) נוגדן | Biolegend | ||
| PE Mouse IgG2a, κ איזוטייפ Ctrl (FC) נוגדן | Biolegend | ||
| דיוק אלקטרוני איזון | Satorius | PRACTUM313-1CN | |
| מכונת קרח פתית שלג | ZIEGRA ZBE | 30-10 | |
| מעוקר 50 מ"ל צינור פלסטיק | Greniner | 227270 | |
| אמבט מים תרמוסטטי | שנחאי YiHeng | HWS12 | |
| טריפסין 1:250 | Solarbio | T8150 | |
| UltraGRO-Advanced | Helios | ||
| HPCFDCGL50 מערכת טיהור מים טהורים וטהורים | במיוחד Milli-Q | Milli-Q התייחסות | |
| לתרבית MSC אנושית ללא קסנו מדיום | FUKOKU |
מקורות
- Abbaszadeh, H., et al. Regenerative potential of Wharton's jelly-derived mesenchymal stem cells: A new horizon of stem cell therapy. J Cell Physiol. 235 (12), 9230-9240 (2020).
- Liau, L. L., Ruszymah, B. H. I., Ng, M. H., Law, J. X.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
