מחקר זה מציג הליך דיסקציה קהה ייחודי לשמירה על שלמות הג'לי של וורטון (WJ), וכתוצאה מכך WJ פחות פגום וכמות וכדאיות גדולה יותר של תאי גזע מזנכימליים שנקטפו (MSC). השיטה מפגינה תפוקה ויכולת שגשוג גבוהות בהשוואה לשיטות דיסקציה חדות קונבנציונליות.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
בידוד תאי גזע מזנכימליים שמקורם בחבל הטבור עם יבולים גבוהים ונזק נמוך
במאמר זה
סיכום
תקציר
תאי גזע מזנכימליים (MSCs) הם אוכלוסייה של תאים רב-פוטנטיים בעלי תכונות רגנרטיביות ואימונומודולטוריות יוצאות דופן. הג'לי של וורטון (WJ) מחבל הטבור (UC) זכה להתעניינות גוברת בתחום הביו-רפואי כמקור יוצא מן הכלל של MSCs. עם זאת, התעוררו אתגרים כגון היצע מוגבל וחוסר סטנדרטיזציה בשיטות הקיימות. מאמר זה מציג שיטה חדשנית לשיפור תפוקת MSC על ידי ניתוח WJ שלם מחבל הטבור. השיטה משתמשת בדיסקציה קהה כדי להסיר את שכבת האפיתל, תוך שמירה על שלמות ה- WJ כולו וכתוצאה מכך כמות וכדאיות מוגברת של MSCs שנקטפו. גישה זו מפחיתה באופן משמעותי את פסולת WJ בהשוואה לשיטות דיסקציה חדות קונבנציונליות. כדי להבטיח את טוהר WJ-MSCs ולמזער את ההשפעה התאית החיצונית, בוצע הליך המשתמש במתח פנימי כדי לקלף את האנדותל לאחר היפוך UC. בנוסף, צלחת הפטרי הפכה לזמן קצר במהלך תרבית הצמחים כדי לשפר את ההתקשרות ואת צמיחת התאים. ניתוח השוואתי הראה את עליונותה של השיטה המוצעת, והראה תשואה גבוהה יותר של WJ ו- WJ-MSCs עם כדאיות טובה יותר מאשר שיטות מסורתיות. המורפולוגיה ודפוס הביטוי הדומים של סמני פני התא בשתי השיטות מאשרים את אפיונם וטוהרם עבור יישומים שונים. שיטה זו מספקת גישה בעלת תפוקה גבוהה וכדאיות גבוהה לבידוד WJ-MSC, ומדגימה פוטנציאל גדול ליישום קליני של MSCs.
מבוא
מאז הבידוד הראשון של תאי גזע מזנכימליים (MSCs) מהג'לי של וורטון (WJ) בשנת 1991, תאי גזע רב-פוטנטיים אלה זכו לתשומת לב משמעותית מצד חוקרים בשל תכונות ההתחדשות שלהםויכולת התמיינות רב-שושלות 1. MSCs ניתן לבודד ממקורות שונים, כולל מח עצם, דם היקפי, מוך השן, רקמת שומן, עובר (הפלה אנושית), ורקמות הקשורות ללידה2. חבל הטבור (UC) התגלה כמאגר מבטיח בשל אופיו הלא פולשני, תפוקת התאים השופעת ויכולת ההתמיינות שלו, המציג קצב גבוה של התפשטות, פוטנציאל התמיינות ותכונות אפנון חיסוני3. MSCs עובריים מפגינים גבעול חזק ותכונות חיסוניות, מה שהופך אותם למוקד העיקרי של ניסויים קליניים ומחקר בסיסי שנערך בשני העשורים האחרונים 2,4,5. MSCs הנגזרים מ- UC הם בעלי פוטנציאל טיפולי מעולה בהשוואה למקורות אחרים של MSC, כגון מח עצם או רקמת שומן 6,7.
UC מורכב אפיתל מי שפיר, שלושה כלי דם (שני עורקים ווריד אחד), ואת החומר הג'לטיני המכונה WJ3. באופן מסקרן, UC מהווה כלי דם פשוט, המורכב רק אנדותל ומזותליום, אבל לא טוניקה adventitia; WJ אינו מכיל לימפה או עצבים8. UC מציג מבנה ייחודי אידיאלי להפרדה מגזרית. UC-MSCs ממוקמים בעיקר ב- WJ. MSCs יכולים להיות מבודדים ממדורים שונים של WJ, כולל מי שפיר, subamnion (מי השפיר והתת-אמניון המוגדרים גם כאזור רירית הטבור), והאזור הפרי-וסקולרי של WJ8. לכל אזור ב-WJ יש מבנה משלו, מאפיינים אימונוהיסטוכימיים ותפקוד 3,6.
MSCs שבודדו מה- WJ של UC נחשבים באופן נרחב כבעלי תועלת קלינית טובה יותר בהשוואה לאלה מאזורים אחרים3. WJ-MSCs נחקרו בהרחבה במסגרות פרה-קליניות וקליניות לטיפול במחלות שונות בשל פוטנציאל ההתמיינות הרב-קווי שלהם, תכונות אימונומודולטוריות, השפעות פרקריניות, השפעות אנטי דלקתיות ותכונות חסויות חיסון 2,3. WJ-MSCs הוכחו כמבטיחים בטיפול במגוון מחלות, כולל מחלת השתל נגד המאכסן (GvHD), דחיית שתלים, מחלת קרוהן, מחלות אוטואימוניות ומחלות לב וכלי דם 9,10,11,12,13,14. ככל שהביקוש הקליני ל-WJ-MSCs ממשיך לגדול, היצע המחסור בחבל הטבור מהווה כיום מכשול ליישומים הנרחבים שלהם.
התפוקה של WJ-MSCs תלויה בשיטה המשמשת לחילוץ תאים15. בעוד WJ-MSCs ניתן לבודד באמצעות תרבית explant או עיכול אנזימים, השיטה האחרונה יש זמן התפשטות ארוך יותר שעלול להגדיל את הסיכון של נזק לתאים ולהפחית את הכדאיות התא16. עם זאת, מחקרים רבים הראו כי שיטת תרבית explant מגבירה את תפוקת התאים ואת הכדאיות, וכי גורמים paracrine שוחרר רקמות explant גם לעזור לקדם את התרבות תאים17,18.
מחקר זה יישם גישת דיסקציה ייחודית להשגת WJ שלם, והניב MSCs עם יכולת שגשוג משופרת, כדאיות וכמות, תוך מזעור הנזק ל- WJ. שיטה חדשנית זו מציעה אסטרטגיה יעילה לבידוד WJ-MSCs, תוך מתן מענה לצרכים קריטיים ביישומי MSC.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
דגימות נלקחו מהתורמים הבריאים בהסכמה מבית החולים לבריאות יולדות וילדים במחוז שנג'ן לונגגנג, גואנגדונג, סין. השימוש בדגימות אנושיות למחקר אושר על ידי ועדת האתיקה של בית החולים שנזן, אוניברסיטת בייג'ינג לרפואה סינית (SZLDH2020LSYM-095) וועדת האתיקה הרפואית של בית החולים ליולדות וילדים במחוז שנג'ן לונגגנג (LGFYYXLLS-2020-005). כל הניסויים נערכו בהתאם להנחיות שאושרו. פרטי הריאגנטים והציוד בו נעשה שימוש מפורטים בטבלת החומרים.
1. איסוף חבל הטבור האנושי
- יש להשיג דגימות חבל טבור אנושי מבית החולים השיתופי בתנאים סטריליים.
הערה: בחר תורם מתחת לגיל 35, רצוי פרימיפרה, ללא היסטוריה של הפטיטיס, מחלות המועברות במגע מיני או הפרעות גנטיות. תוצאות בדיקת הקבלה עבור וירוס הפטיטיס B, וירוס הפטיטיס C וציטומגלווירוס צריכות להיות שליליות. בחר ניתוח קיסרי כמצב הלידה. - בחר פיסת UC ישרה ושלמה באורך של כ-10-15 ס"מ.
- סוגרים את שני הקצוות במלקחיים המוסטטיים וסוגרים קשרים כירורגיים בקצה הפנימי בין המלקחיים מיד לאחר לידת יילוד מלא בניתוח קיסרי. (UC נאסף כפי שמוצג באיור 1, שלב 1).
הערה: הפעלת הניתוח הקיסרי מבטיחה שהאיסוף יהיה סטרילי. השתמש בקשרים כירורגיים בתפר בגודל 0 או 2-0 לחוזק מתיחה טוב יותר. - חתכו את חבל הטבור הקשור בין המלקחיים לקשרים באמצעות מספריים כירורגיים (איור 1, שלב 1).
- שטפו אותו בתמיסת מלח כדי להסיר קרישי דם מזהמים על פני השטח והעבירו מיד לצינור פלסטיק סטרילי של 50 מ"ל המכיל 20 מ"ל של מלח סטרילי חוצץ פוספט (PBS).
הערה: לא נעשה שימוש באנטיביוטיקה במהלך ההעברה. - אטמו את הצינור. הניחו אותו על קרח בקופסת פוליסטירן ואחסנו אותו בטמפרטורה של 4°C לפני העברתו למעבדה.
הערה: נתח את הכבל תוך 4 שעות מרגע האיסוף.
2. בידוד הג'לי של וורטון מחבל הטבור
- עבד את חבל הטבור לפי השלבים הבאים:
- הכינו מגש מעוקר עם כלי ניתוח, כלים ארוזים אספטית בקוטר 90 מ"מ, פיפטות 1000 מיקרוליטר, PBS סטרילי, תמיסת אתנול 75% ומדיום תרבית MSC אנושי נטול קסנו.
הערה: המלקחיים עם השיניים ומהדקי היתושים מאפשרים לטפל בכבל החלקלק ביעילות. - יש לטהר את הפריטים הנדרשים ואת אזור העבודה לפני הנחת הפריטים בתוך ארון הבטיחות הביולוגית.
הערה: אפשר לאוויר באזור העבודה להתנקות למשך מספר דקות לפני תחילת העבודה. - יש לחטא את פני השטח של הצינור ולהסיר את הדגימה לתוך צלחת פטרי בארון הבטיחות הביולוגית. טבלו את הדגימה עם הקשרים באתנול 75% למשך 30 שניות ולאחר מכן שטפו אותה מספר פעמים עם PBS סטרילי בצלחת פטרי חדשה.
הערה: יש לקשור את הכבל לפני טבילה באתנול 75%, ויש להגביל את זמן הטבילה ל-30 שניות עד דקה כדי לחטא את הכבל במלואו ללא נזק. - חותכים את הקשרים וחותכים את החוט בין שני קשרים לרוחב לחתיכות קצרות באורך של כ-2 ס"מ בעזרת מספריים ומלקחיים כירורגיים.
הערה: יש להיפטר מקצות הכבל עם קשרים. אורך ה- UC לא צריך להיות ארוך מדי או קצר מדי; שני התנאים עשויים להגביר את הקושי של הניתוח. - מחוררים את הווריד (כלי גדול יותר) עם PBS באמצעות פיפטות 1000 μL עד שהנוזל היוצא מהקצה השני של החוט הופך לשקוף לחלוטין19.
- הכינו מגש מעוקר עם כלי ניתוח, כלים ארוזים אספטית בקוטר 90 מ"מ, פיפטות 1000 מיקרוליטר, PBS סטרילי, תמיסת אתנול 75% ומדיום תרבית MSC אנושי נטול קסנו.
- לנתח את חבל הטבור.
- מעבירים את אחת החתיכות שכבר נחתכו לצלחת פטרי חדשה.
הערה: שני עורקים ווריד אחד צריכים להיות חשופים באופן גלוי בחתך8 (איור 2B). - הוסף את הכמות המתאימה של PBS כדי לשמור על הכבל רטוב לאורך כל הפעולה.
- אחזו בחוט במלקחיים ומשכו את העורקים לאורך צירו הראשי בעזרת מלחציים ליתושים.
הערה: נסה למשוך מהקצה השני של החוט אם העורק נקרע, מכיוון שלדופן העורק יש גמישות רבה. - קבע את הכבל אופקית כאשר הצד העבה פונה כלפי מעלה על ידי הכנסת להב אחד של המלקחיים לווריד הטבור ולאחר מכן הידוק חזק, תוך הקפדה על הידוק המלקחיים בצד העבה יותר.
- בצעו חתך ליניארי בשכבת אפיתל מי השפיר מקצה אחד לשני לאורך קצה הלהב השני של המלקחיים באמצעות אזמל (איור 3).
הערה: שמור על שלמות הג'לי של וורטון על ידי חיתוך WJ קטן ככל האפשר. - התחילו בפינה אחת של מרווח החיתוך. הרימו את פינת אפיתל מי השפיר עם מלחציים בשיניים והמשיכו לחתוך אופקית עוד קצת עם מספריים בקרנית לאורך המשטח הפנימי של האפיתל.
- להפריד את הג'לי של וורטון ואת אפיתל מי השפיר עם מלחציים ובהדרגה להרחיב לכל המעגל של קצה אחד של UC. קלפו את שכבת האפיתל לאורכה (איור 3).
הערה: הג'לי של וורטון הוא רקמת חיבור רירית המוקפת באפיתל מי השפיר הצפוף8. הפעולה כולה צריכה להיות חלקה, אך ניתן להשתמש במלחציצי יתושים לדיסקציה קהה אם נתקלים בקשיים במהלך הקילוף.
- להפריד את הג'לי של וורטון ואת אפיתל מי השפיר עם מלחציים ובהדרגה להרחיב לכל המעגל של קצה אחד של UC. קלפו את שכבת האפיתל לאורכה (איור 3).
- הכניסו את שני הלהבים של המלקחיים לתוך הווריד, הדקו חלק מ-WJ, ואז הפכו אותו מבפנים החוצה כדי לחשוף את האפיתל של וריד הטבור (איור 3).
- קלפו את אפיתל הווריד בקלות, שכן המתח הפנימי יוצר הפרדה בין אפיתל הווריד לבין ה-WJ הפריווסקולרי (איור 3).
- מעבירים את אחת החתיכות שכבר נחתכו לצלחת פטרי חדשה.
- נתח את UC באמצעות השיטה המקובלת להשוואה20.
- בחרו דגימה נוספת שכבר נחתכה במשקל כמעט זהה לזה של החוט הקודם והעבירו אותה לצלחת פטרי חדשה.
- חותכים לאורך וריד הטבור לאורכו עם מספריים ומפיצים את UC כדי לחשוף את כלי הדם ואת WJ.
- הסר את וריד הטבור ושני עורקים, והסר את ה- WJ משכבת האנדותל בעזרת מספריים ואזמל.
3. בידוד ותרבות של UC-MSCs
- מניחים את WJ שנאסף בצלחת פטרי 90 מ"מ מסומנת מראש וחותכים אותו לחתיכות 1-3 מ"מ עם מספריים ומלקחיים.
- הפכו את המנה עם המכסה בתחתית והניחו אותה באינקובטור 5% CO2 בטמפרטורה של 37°C למשך 30 דקות כדי לחזק את החיבור בין החתיכות למשטח הפלסטיק.
- הופכים את המנה, ומוסיפים בעדינות כמות מתאימה של מדיום תרבית MSC אנושי לתרבית נוספת.
הערה: השתמש במהירות הנמוכה ביותר כדי לוודא שהחלקים עדיין מחוברים. - שנה את מדיום התרבות האנושי של MSC כל 3 ימים. להחליף שני שלישים של המדיום ולראות את המראה של outgrowth של תאים סיביים כל 2 ימים ב 7 הימים הראשונים, לשנות את המדיום המלא, ולצפות בו על בסיס יומי לאחר מכן.
הערה: הימנעו מהזזת צלחת הפטרי במשך 7 הימים הראשונים. הצמיחה המובחנת של תאים דמויי פיברובלסטים נצפתה תוך כ -4 ימים. - תת-תרבות עד שהמפגש מגיע ל-80%.
הערה: שלב זה נמשך 7-10 ימים.- חממו מראש את PBS, 0.25% טריפסין, ותרבית MSC אנושית נטולת קסנו בינונית ל-37°C באמבט מים.
- יש לשטוף עם PBS לאחר שאיפת הסופרנטנט עם פיפטה, ולנתק את התאים עם 0.25% טריפסין שחומם מראש עד שניתן יהיה לעקור את התאים על ידי הקשה על צלחת הפטרי.
- נטרל את הטריפסין על-ידי ערבוב מדיום תרבית MSC שחומם מראש ביחס של 4:1, אסוף את מתלה התא ואת הצנטריפוגה ב-300 x גרם למשך 5 דקות ב-4°C.
הערה: תאים אלה נחשבים למעבר 0 (P0). - יש להשליך את הסופרנאטנט עם פיפטה, להשהות מחדש את התאים בתווך תרבית MSC האנושי, ולחסן לצלחות פטרי חדשות בצפיפות זריעה של 1x104 תאים לסמ"ר2 לצורך התפשטות.
- באמצעות המוציטומטר, ספור את מספר התא הכולל של שתי השיטות לאחר הגברה במעבר הראשון, השני והשלישי. קבע את המורפולוגיה של התא תחת המיקרוסקופ במעברים הראשון, השלישי והחמישי.
הערה: המורפולוגיה של תאים אלה צריכה להיות דומה לתאי P0. - השתמש בתאים במעבר החמישי עבור ציטומטריית זרימה וניסויים אחרים.
4. ביטוי סמני פני התא על ידי ציטומטריית זרימה
- נתק תאי מעבר 5 (P5) עם 0.25% טריפסין, שטוף את התאים עם חיץ צביעת תאים, וצנטריפוגה ב 300 x גרם במשך 5 דקות ב 4 ° C. השהה מחדש את הכדוריות עם חיץ צביעת התא ל 100 μL כל אחת.
- סמן כל צינור והוסף את הכמויות המתאימות של נוגדנים, אשר צומדו עם Allophycocyanin (APC), fluorescein isothiocyanate (FITC) או phycoerythrin (PE): CD44-APC, CD73-APC, CD90-FIFC, CD105-FIFC, CD11B-PE, CD19-PE, CD43-PE, HLA-DR-PE בהתאם להוראות היצרן21. יש לדגור במשך 15-20 דקות בחושך בטמפרטורת החדר.
- צנטריפוגו את התאים המוכתמים ב 300 x גרם במשך 5 דקות ב 4 ° C, לשאוף את supernatant עם פיפטה, ולשטוף פעם אחת עם חיץ צביעת התא.
- חזור על הצנטריפוגה וההשעיה של התאים עם 300 μL של חיץ צביעת התא.
- הריצו את התאים דרך ציטומטר הזרימה ונתחו את התאים המוכתמים בנוגדנים בהתאם להוראות היצרן.
5. קביעת עקומת גדילת תאים בשיטת ספירת התאים
- הכינו תרחיף חד-תאי של תאי P5 בשתי שיטות על ידי דילולם במדיום תרבית MSC אנושי.
- זרעו 8,000 תאים לבאר בצלחת בת 24 בארות, ובסך הכל נזרעו 21 בארות מכל שיטה.
הערה: מערבבים את התאים בעדינות על ידי ניפוח ויניקה עם פיפטות לפני הזריעה. - קציר תאים משלוש בארות לאחר 24 שעות של זריעה. בצע ספירת תאים באמצעות המוציטומטר כדי לחשב את הערך הממוצע.
הערה: נער את הצלחת לפני ספירת התא. ניתן להאריך את משך הרעידות כדי למנוע היווצרות של צברי תאים. - חזור על ספירת התאים כל 24 שעות למשך זמן כולל של 7 ימים. התווה עקומת גדילה באמצעות זמן (d) על ציר X וספירת תאים (x104/mL) על ציר Y.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
הנהלים לאיסוף וטיפוח UC-MSCs, כמו גם הניתוח הבא שלהם, מסוכמים באיור 1. ה-UC חולק בצורה מסודרת למספר חלקים בשיטה הייחודית; תרשים הפעולה הספציפי של ההליכים העיקריים מתואר באיור 2. צמיחתם של תאים מתרביות צמחים נוטרה ותועדה באופן שגרתי. תאים דבקים בצורת ציר נצפו כ -4 ימים לאחר תרבית הצמחים וזחלו יותר ויותר לצורת מערבולת. תאים אלה זוהו גם כ-P0 והמשיכו להתרבות לאחר מכן תוך שמירה על גודל ומורפולוגיה אחידים במהלך ההתרבות והמעבר. השיטות הקונבנציונליות והשיטות הנוכחיות הצ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
MSCs מייצגים תחום דינמי של מחקר עם השלכות עמוקות על רפואה רגנרטיבית22. תכונותיהם הייחודיות הופכות אותם למוקד מחקר מדעי וטומנים בחובם פוטנציאל לחולל מהפכה בטיפול במגוון רחב של מחלות ופציעות7. WJ-MSCs הם תת-קבוצה נפרדת של MSCs, אשר ניתן לקבל מרקמת החיבור הג'לטינית בתוך UC הממוקם בין אפיתל בין כלי הדם ומי השפיר23. היישום הקליני של MSCs טמון בהשגת מספר תאים מספיק24. עם זאת, ככל שמספר המעבר גדל, התאים החלו להראות מידה מסוימת של תופ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים אינם מדווחים על ניגודי עניינים.
תודות
עבודה זו נתמכה כספית על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (82172107), הקרן למדעי הטבע של מחוז גואנגדונג, סין (2021A1515011927, 2021A1515010918, 2020A1515110347), קרן המחקר הרפואי של שנזן (SMRF. D2301015), ועדת החדשנות העירונית למדע וטכנולוגיה של שנזן (JCYJ20210324135014040, JCYJ20220530172807016, JCYJ20230807150908018, JCYJ20230807150915031) והקרן המיוחדת של מחוז לונגגאנג לפיתוח כלכלי וטכנולוגי (LGKCYLWS2022007).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| נוגדן CD44 אנטי אנושי APC | ביולג'נד | ||
| צלחות תרבית תאים 24 בארות | Thermo Scientific | 142475 | |
| APC אנטי-אנושי CD73 (Ecto-5'-nucleotidase) נוגדן | ביולג'נד | ||
| עכבר APC IgG1, κ איזוטייפ Ctrl (FC) נוגדן | Biolegend | ||
| 400122 אוטוקלאב | HIRAYAMA | HVE-50 | |
| אוטומטי מונה תאים | Countstar | FL-CD | |
| BAMBANKER פתרון שימור הקפאה | Wako | 302-14681 | |
| מאגר צביעת תאים | Biolegend | ||
| 420201 מכונה צנטריפוגלית | Eppendorf | 5424R | |
| ספסל נקי | שנחאי ZhiCheng | C1112B | |
| CO2 חממה | תרמו מדעית | HERAcell 150i | |
| D-PBS | Solarbio | D1040 | |
| תנור פיצוץ אלקטרו-תרמוסטטי | שנחאי JingHong | DHG-9423A | |
| נוגדן CD105 אנטי אנושי FITC | ביולג'נד | ||
| 323204 נוגדן CD90 (Thy1) אנטי-אנושי של FITC | ביולג'נד | ||
| עכבר FITC IgG1, κ איזוטייפ Ctrl (FC) נוגדן | Biolegend | 400110 | |
| זרימה ציטומטריה | בקמן | CytoFLEX | |
| המוציטומטר | מעולה מרינפלד | 640410 | |
| מאגר שטיפת פרמיביליזציה תוך תאי (10&) | ביולג'נד | ||
| מיקרוסקופ ביולוגי הפוך | ZEISS | Axio Vert. A1 | |
| מיכל אחסון חנקן נוזלי | Thermo Scientific | CY50935-70 | |
| תמיסת מלח רגילה (NS) | Meilunbio | MA0083 | |
| PBS | Solarbio | P1032 | |
| PE אנטי אנושי CD11b נוגדן | Biolegend | ||
| 393112 נוגדן CD19 אנטי אנושי PE | ביולג'נד | ||
| PE אנטי-אנושי CD34 נוגדן | Biolegend | ||
| PE אנטי אנושי CD45 נוגדן | Biolegend | 368510 | |
| PE נוגדן HLA-DR אנטי אנושי | ביולג'נד | ||
| PE Mouse IgG1, κ איזוטייפ Ctrl (FC) נוגדן | Biolegend | ||
| PE Mouse IgG2a, κ איזוטייפ Ctrl (FC) נוגדן | Biolegend | ||
| דיוק אלקטרוני איזון | Satorius | PRACTUM313-1CN | |
| מכונת קרח פתית שלג | ZIEGRA ZBE | 30-10 | |
| מעוקר 50 מ"ל צינור פלסטיק | Greniner | 227270 | |
| אמבט מים תרמוסטטי | שנחאי YiHeng | HWS12 | |
| טריפסין 1:250 | Solarbio | T8150 | |
| UltraGRO-Advanced | Helios | ||
| HPCFDCGL50 מערכת טיהור מים טהורים וטהורים | במיוחד Milli-Q | Milli-Q התייחסות | |
| לתרבית MSC אנושית ללא קסנו מדיום | FUKOKU |
מקורות
- Abbaszadeh, H., et al. Regenerative potential of Wharton's jelly-derived mesenchymal stem cells: A new horizon of stem cell therapy. J Cell Physiol. 235 (12), 9230-9240 (2020).
- Liau, L. L., Ruszymah, B. H. I., Ng, M. H., Law, J. X. Characteristics and clinical applications of Wharton's jelly-derived mesenchymal stromal cells. Curr Res Transl Med. 68 (1), 5-16 (2020).
- Kim, D. -W., et al. Wharton's jelly-derived mesenchymal stem cells: Phenotypic characterization and optimizing their therapeutic potential for clinical applications. Int J Mol Sci. 14 (6), 11692-11712 (2013).
- Drobiova, H., et al. Wharton's jelly mesenchymal stem cells: A concise review of their secretome and prospective clinical applications. Front Cell Dev Biol. 11, 1211217(2023).
- Joerger-Messerli, M. S., et al. Mesenchymal stem cells from Wharton's jelly and amniotic fluid. Best Pract Res Cl Ob. 31, 30-44 (2016).
- Pera, M., Subramanian, A., Fong, C. -Y., Biswas, A., Bongso, A. Comparative characterization of cells from the various compartments of the human umbilical cord shows that the Wharton's jelly compartment provides the best source of clinically utilizable mesenchymal stem cells. Plos One. 10 (6), 0127992(2015).
- Petrenko, Y., et al. A comparative analysis of multipotent mesenchymal stromal cells derived from different sources, with a focus on neuroregenerative potential. Sci Rep. 10 (1), 4290(2020).
- Davies, J. E., Walker, J. T., Keating, A. Concise review: Wharton's jelly: The rich, but enigmatic, source of mesenchymal stromal cells. Stem Cells Transl Med. 6 (7), 1620-1630 (2017).
- Pan, Y., Wu, W., Jiang, X., Liu, Y. Mesenchymal stem cell-derived exosomes in cardiovascular and cerebrovascular diseases: From mechanisms to therapy. Biomed Pharmacother. 163, 114817(2023).
- Elshaer, S. L., Bahram, S. H., Rajashekar, P., Gangaraju, R., El-Remessy, A. B. Modulation of mesenchymal stem cells for enhanced therapeutic utility in ischemic vascular diseases. Int J Mol Sci. 23 (1), 249(2021).
- Wang, R., et al. Stem cell therapy for Crohn's disease: Systematic review and meta-analysis of preclinical and clinical studies. Stem Cell Res Ther. 12 (1), 463(2021).
- Shi, Y., et al. Immunoregulatory mechanisms of mesenchymal stem and stromal cells in inflammatory diseases. Nat Rev Nephrol. 14 (8), 493-507 (2018).
- Kassem, D. H., Kamal, M. M. Wharton's jelly MSCs: Potential weapon to sharpen for our battle against DM. Trends Endocrinol Metab. 31 (4), 271-273 (2020).
- Saleh, M., Fotook Kiaei, S. Z., Kavianpour, M. Application of Wharton jelly-derived mesenchymal stem cells in patients with pulmonary fibrosis. Stem Cell Res Ther. 13 (1), 71(2022).
- Varaa, N., Azandeh, S., Khodabandeh, Z., Gharravi, A. M. Wharton's jelly mesenchymal stem cell: Various protocols for isolation and differentiation of hepatocyte-like cells; narrative review. Iran J Med Sci. 44 (6), 437-448 (2019).
- Hassan, G., Kasem, I., Soukkarieh, C., Aljamali, M. A simple method to isolate and expand human umbilical cord derived mesenchymal stem cells: Using explant method and umbilical cord blood serum. Int J Stem Cells. 10 (2), 184-192 (2017).
- Naeem, A., et al. A comparison of isolation and culture protocols for human amniotic mesenchymal stem cells. Cell Cycle. 21 (15), 1543-1556 (2022).
- Yoon, J. H., et al. Comparison of explant-derived and enzymatic digestion-derived MSCs and the growth factors from Wharton's jelly. Biomed Res Int. 2013, 428726(2013).
- Reinisch, A., Strunk, D. Isolation and animal serum free expansion of human umbilical cord derived mesenchymal stromal cells (MSCs) and endothelial colony forming progenitor cells (CFCs). J Vis Exp. (32), e1525(2009).
- Beeravolu, N., et al. Isolation and characterization of mesenchymal stromal cells from human umbilical cord and fetal placenta. J Vis Exp. (122), e55224(2017).
- Dominici, M., et al. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement. Cytotherapy. 8 (4), 315-317 (2006).
- Samsonraj, R. M., et al. Concise review: Multifaceted characterization of human mesenchymal stem cells for use in regenerative medicine. Stem Cells Transl Med. 6 (12), 2173-2185 (2017).
- Sypecka, M., Bzinkowska, A., Sulejczak, D., Dabrowski, F., Sarnowska, A. Evaluation of the optimal manufacturing protocols and therapeutic properties of mesenchymal stem/stromal cells derived from Wharton's jelly. Int J Mol Sci. 24 (1), 652(2022).
- Binato, R., et al. Stability of human mesenchymal stem cells during in vitro culture: Considerations for cell therapy. Cell Prolif. 46 (1), 10-22 (2012).
- Mushahary, D., Spittler, A., Kasper, C., Weber, V., Charwat, V. Isolation, cultivation, and characterization of human mesenchymal stem cells. Cytometry A. 93 (1), 19-31 (2018).
- Hendijani, F. Explant culture: An advantageous method for isolation of mesenchymal stem cells from human tissues. Cell Prolif. 50 (2), 12334(2017).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
