פרוטוקול זה מתאר טכניקת ניהול הריון והאכלה לארנבים שהועברו בעוברים והונדסו גנטית, שמטרתה להפחית את תמותת הארנבים שזה עתה נולדו ולשפר את יעילות ההכנה של ארנבים שעברו עריכה גנטית.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
* These authors contributed equally
פרוטוקול זה מתאר טכניקת ניהול הריון והאכלה לארנבים שהועברו בעוברים והונדסו גנטית, שמטרתה להפחית את תמותת הארנבים שזה עתה נולדו ולשפר את יעילות ההכנה של ארנבים שעברו עריכה גנטית.
עם התקדמות המחקר המדעי, הביקוש למודלים של ארנבים ערוכים גנטית הולך וגובר. עם זאת, ישנן מערכות ניהול הריון והזנה מוגבלות לארנבים שעברו עריכה גנטית, מה שמוביל לשיעורי הישרדות נמוכים בקרב ארנבים ערוכים גנטית שהוכנו על ידי חוקרים חסרי ניסיון רבים. לכן, הדרכה נכונה היא חיונית. מאמר זה מסכם את שיטות ההריון וההאכלה של ארנבים מהונדסים גנטית שפותחו במעבדתו של המחבר ומתאר מערך של תהליכים בסיסיים. אלה כוללים אבחון הריון, טיפול טרום לידה, מיילדות, סיוע בהנקה, גמילה והליכים אחרים, יחד עם הצלה וטיפול בארנבות חלשות שזה עתה נולדו. בהשוואה לשיטות הלידה והטיפוח הטבעיות המסורתיות המשמשות בחוות ארנבות, גישה זו כוללת ניהול מעודן יותר, הדורש זמן ומאמץ נוספים אך מגדיל משמעותית את שיעור ההישרדות של ארנבים יונקים. השיטות המתוארות במאמר זה מתאימות לרוב תרחישי הרבייה במעבדה הכוללים ארנבים שעברו עריכה גנטית או העברת עוברים ומספקות התייחסות ישירה ויעילה לחוקרים אחרים.
ארנבים הם מודל חיות קלאסי למחקר ביו-רפואי והופכים יותר ויותר למודל התרגום המועדף כדי לגשר על הפער בין מודלים של מכרסמים למודלים של בעלי חיים גדולים 1,2. בהשוואה לבעלי חיים גדולים, לארנבים יש גודל גוף בינוני, מרחב האכלה קטן, עלות האכלה נמוכה ואיסוף דם נוח, התורמים לאיסוף חוזר של נתוני מחקר ופעולות כירורגיות. ארנבים מאופיינים ביכולת רבייה טובה, תקופת הריון קצרה (28-32 יום לארנבים לבנים ניו זילנדים), מספר רב של לידות וצמיחה מהירה 3,4. בהשוואה למכרסמים, ארנבים קרובים יותר לבני אדם בפילוגנזה5. זהו תחליף ניסיוני חסכוני ומעשי לחזירים ופרימטים שאינם אנושיים6. בהשוואה לבעלי חיים גדולים ובינוניים אחרים לעריכת גנים (חזירים, בקר, כבשים, חתולים, כלבים, קופים), עלות ההכנה של ארנבות עריכת גנים נמוכה, והמחזור קצר. עם התפתחות ריפוי גנטי 7,8,9, טיפול בתאי גזע 10,11,12,13, חקר מדעי המוח14 ותחומים מדעיים אחרים 1,15,16,17,18, הביקוש למינים שאינם מכרסמים בעריכת גנים הולך וגובר.
ארנבים לעריכת גנים נחשבו בעבר לאחד מבעלי החיים הבינוניים לעריכת גנים שיכולים לממשיישומים תעשייתיים. עם זאת, עד היום, ארנבים עורכי גנים לא הצליחו להשיג ייצור בקנה מידה גדול. אחת הסיבות העיקריות לכך היא שהייצור והרבייה של ארנבים עורכי גנים הם מאתגרים, והקושי גדול בהרבה מזה של עכברים או חולדות עורכי גנים. אין הרבה מעבדות שיכולות לגדל ביעילות ארנבים לעריכת גנים. לעתים קרובות קשה למתחילים להכין בהצלחה ארנבים לעריכת גנים, ולעתים קרובות הם נתקלים בבעיות לא נעימות כמו שיעור הריון נמוך19, הפלה20, דיסטוציה21, סירוב הנקה על ידי ארנבותנקבות 22 ומוות של ארנבות יונקות23. עם זאת, יש מעט נתונים שיטתיים או הנחיות ספרות על הריון והאכלה של ארנבים עורכי גנים או ארנבים שהועברו בעוברים. רובם מבוססים על הניסיון של חוות ארנבים רגילות.
לכן, מאמר זה מסכם את הניסיון הבוגר של ניהול הריון והנקה של ארנבים מהונדסים גנטית ממעבדתו של המחבר, ומציג מערך של תהליכים בסיסיים של ארנבים שהועברו בעוברים וארנבים מהונדסים גנטית, כולל אבחון הריון, טיפול טרום לידה, מיילדות, האכלה מלאכותית בסיוע, הנקה, כמו גם הצלה והנקה של ארנבים חלשים. תהליך זה הוקם במיוחד לגידול ארנבים עורכי גנים או ארנבים המועברים בעוברים. בהשוואה לשיטת הלידה והטיפוח הטבעית המסורתית של חוות ארנבות, מודל ניהול ההריון וההנקה לוקח יותר זמן ואנרגיה, אך הוא יכול להפחית מאוד את התמותה של ארנבים תינוקות, והמאמץ שווה את זה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כל פרוטוקולי הניסוי אושרו על ידי ועדת האתיקה לניסויים בבעלי חיים של מרכז חיות המעבדה הרפואית של גואנגדונג. מספר הסקירה האתית של גידול ארנבים מהונדסים גנטית MKRN3 המעורב במחקר זה הוא B202210-6. המחקר מקפיד על נהלים התואמים את הסטנדרטים האתיים המתוארים בהצהרת הלסינקי משנת 1975 (תוקנה בשנת 1983). הארנבים הניו זילנדים ששימשו במחקר זה התקבלו ממרכז חיות המעבדה הרפואית גואנגדונג בסין. תהליך ההיריון וההאכלה של ארנבים מהונדסים גנטית המתואר במאמר זה הוא סיכום של שיטות הגידול היומיומיות של בעלי חיים במעבדה של המחבר. פרטים על הריאגנטים והציוד המשמש מפורטים בטבלת החומרים.
1. אבחון הריון
2. טיפול טרום לידתי
3. לידה
הערה: יום 0 מתייחס זמן קצר לאחר ההפריה והיווצרות פרוקריוטית. ארנבים הם בעלי חיים מעוררי ביוץ המבייצים 10-12 שעות לאחר ההזדווגות. העוברים בשלב התא היחיד המתקבלים ביום שלאחר ההזדווגות נחשבים ליוםה-0.5 . אם עוברים בשלב חד-תאי מתורבתים במבחנה למשך 2-3 שעות בלבד ולאחר מכן מועברים לארנבות פונדקאיות, זה נחשב גם ליוםה-0.5 להריון.
4. מיילדות
5. טיפול לאחר לידה
6. הנקה
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מאמר זה מתאר הליך ניהול הריון והאכלה עבור ארנבים שהועברו בעוברים והונדסו גנטית. בסוף 2022 יזמה מעבדתו של המחבר פיתוח פלטפורמת הכנה לארנבים מהונדסים גנטית. במהלך תקופה זו, נתקלו במספר בעיות נפוצות, כולל הפלות, אי לידה במועד, דיסטוציה, אי מריטת שיער להכנת הקן לפני הלידה, חוסר נכונות של ארנבות אמהות להניק או תקריות של קניבליזם, חלב אם לא מספיק עקב גודל המלטה גדול, וארנבים תינוקות שאינם שותים חלב. אתגרים אלה הפחיתו משמעותית את יעילות הרבייה של ארנבים מהונדסים גנטית.
על ידי סיכום חוויות ולמידה מהנו...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
השלבים העיקריים בניהול ההיריון וההנקה של ארנבות שהועברו בעוברים והונדסו גנטית כוללים מיילדות והנקה מוקדמת. לידה קשה היא בעיה שכיחה אצל ארנבים19. זמני לידה ממושכים גורמים לעתים קרובות לאיסכמיה עוברית, היפוקסיה ומוות25. שימוש נכון באוקסיטוצין יכול לקצר ביעילות את זמני הלידה ולהפחית מקרים של דיסטוציה עוברית26. ארנבות אמהות קדמוניות רבות אינן מצליחות למרוט שיער כדי להכין קנים, מה שמגדיל את הסיכון לאובדן טמפרטורה ותמותה א...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
למחברים אין מה לחשוף.
מחקר זה נתמך על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מענק מס' 82101937), פרויקט קרן המחקר למדע וטכנולוגיה רפואית של גואנגדונג, סין (מענק מס' B2024069), ופרויקט תוכנית המדע והטכנולוגיה של גואנגג'ואו, סין (מענק מס. SL2023A04J02229, מטלה מס' 2024A04J4923).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| כותנה מלאכותית למטה | Yangzhou Anguang טקסטיל ושות', בע"מ, סין | 5490-Jinyu | |
| Cloprostenol הזרקת נתרן | שנחאי Quanyu ביוטכנולוגיה (Zhumadian) בעלי חיים פרמצבטיקה ושות', בע"מ, סין | 163232207 | |
| גרגירי קלחי תירס | גואנגדונג מרכז בעלי חיים מעבדה רפואית מחוזית, סין | YUMIXIN | |
| סולם פלטפורמה אלקטרונית | Yongkang Runjin שקילה מכשיר ושות', בע"מ, סין | rj-09 | |
| Gentamicin | Shanxi Jinfukang ביולוגי פרמצבטיקה ושות', בע"מ, סין | 041531504 | |
| הזרקת גלוקוז | Henan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd, סין | H41022251 | |
| חממה | Foshan Chancheng Hualong פלסטיק במפעל, סין | AAA-2 | לארנבים שזה עתה נולדו |
| קופסת חממה | Hebei mabao תיל רשת מוצרים ושות', בע"מ, סין | https://qr.1688.com/s/AJ1K7O3p | כקן לארנבות האם |
| Inslin מזרק | Becton, דיקינסון ושות', ארה"ב | אולטרה-עדין, 328421 | |
| הזרקת אוקסיטוצין | גואנגג'ואו Baiyunshan Mingxing פרמצבטיקה ושות', בע"מ | H44025245 | |
| הזרקת פניצילין | גואנגדונג Kangtaiyuan גידול בעלי חיים ושות', בע"מ, סין | ||
| 300012430 כלוב משלוח ארנב | Suzhou Suhang טכנולוגיה ציוד ושות', בע"מ, סוג'ואו, סין | RB42-8G | |
| מגבת | Zhejiang Jieliya Co., Ltd, סין | W3290 |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.