Method Article

הקמה והערכה של מודל מתקדם מבוסס מבחנה לפיברוזיס ריאתי

DOI:

10.3791/67845

⸱

July 22nd, 2025

 ,  ,  ,  ,  , 
1State Key Laboratory of Respiratory Disease, The First Affiliated Hospital, Guangzhou Medical University, 2Guangzhou National Laboratory

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פותחה שיטת הדמיה להערכת הפעלת פיברובלסטים בפרוסות ריאה אנושיות שנחתכו במדויק על סמך חלבון הפעלת פיברובלסטים (FAP). מתודולוגיה זו מבססת פלטפורמה חזקה וניתנת לשחזור לשלב התקדמות פיברוטית, ומקדמת מודלים תרגומיים במבחנה לפיתוח טיפולי תוך שמירה על נאמנות המיקרו-סביבה של הרקמה האנושית.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פיברוזיס ריאתי מאופיין בהרס בלתי הפיך של מבנה המכתשית ושקיעה מוגזמת של מטריצה חוץ-תאית. למרות שמודלים של בעלי חיים היו בשימוש נרחב במחקר פיברוזיס ריאתי, אף אחד מהמודלים הזמינים כיום אינו מסכם באופן מלא את האופי המתקדם של IPF או את התכונה ההיסטולוגית המגדירה אותו, כגון מוקדים פיברובלסטיים. מודלים מתקדמים במבחנה , כולל פרוסות ריאה בחיתוך מדויק (PCLS), נחשבים לעתים קרובות למערכת בדיקת הריאות הרלוונטית ביותר מבחינה פיזיולוגית ושימשו בהצלחה לבדיקת תרופות. עם זאת, חוסר היכולת להבדיל בין מידת הפיברוזיס בריאה של ה-IPF הביא לסמרון ואי ודאות ב-PCLS שהושג. מחקרים קודמים הראו כי חלבון הפעלת פיברובלסטים (FAP) יכול להעריך את הפעילות הפרו-פיברוטית של ILD, מה שעשוי לתרום לאבחון מוקדם ולבחירת חלונות טיפוליים מתאימים. במחקר זה, 600 מיקרומטר PCLS יתקבלו מתורמים בריאים וחולי IPF באמצעות פורס זעזועים ויוערכו באמצעות בדיקות מולקולריות המכוונות ל-FAP כדי לקבוע את מידת הפעילות הפיברובלסטים על סמך עוצמת האות הפלואורסצנטי. גישה זו מספקת מודל מבחנה מתקדם וטכניקת הערכה לחקר פיברוזיס ריאתי, ומשפרת את היכולת לחקור מנגנוני מחלה ולהעריך התערבויות טיפוליות.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פיברוזיס ריאתי (PF) היא צורה שכיחה עם אטיולוגיה לא ידועה ופרוגנוזה גרועה במיוחד, עם שיעור הישרדות חציוני של חמש שנים של 25% בלבד1. מודל מתן בלאומיצין תוך-קנה הוא כיום מודל בעלי החיים הנפוץ ביותר למחקרים פרה-קליניים2. עם זאת, פיברוזיס הנגרמת על ידי בלאומיצין היא חולפת ונפתרת עם הזמן, מה שעומד בניגוד חד לאופי הבלתי הפיך של IPF3. יתר על כן, מודל הבלאומיצין התוך-קנה מציב אתגרים משמעותיים בשל החומרה ההטרוגנית של פיברוזיס הנובעת ממתן אנדוטרכאלי, בין אם כירורגי או לא כירורגי. מגבלות אלה של מודלים נוכחיים של בעלי חיים תורמות לשיעור הכישלון הגבוה של ניסויים קליניים המכוונים ל-IPF4.

פרוסות ריאה בחיתוך מדויק (PCLS) שימשו במגוון מחלות מכיוון שהן משמרות נאמנה רשתות הצלבה תאיות ספציפיות למחלה ואת המיקרו-סביבה 5,6,7. בפיברוזיס ריאתי, PCLS מריאות IPF שומר על ארכיטקטורת רקמות טבעית והטרוגניות תאית, ומאפשר תצפית על סוגי תאים שונים ואינטראקציות מטריצה חוץ-תאיות 8,9, ומבסס אותם כמודל ex vivo מייצג לחקירת פתופיזיולוגיה ריאתית. עם זאת, מכיוון שפיברוזיס ריאתי מאופיין בנגעים פיברוטיים הטרוגניים בריאות, דגימת PCLS היא עיוורת מטבעה. לא ניתן להבחין חזותית אם החלקים המתקבלים מייצגים אזורים פיברוטיים בשלב השקט, השלב הפעיל או רקמת ריאה תקינה. מגבלה זו מדגישה את הצורך בכלי הערכה וסינון חזותיים. מחקר קודם מצא כי חלבון הפעלת פיברובלסטים (FAP) התבטא באופן גבוה וספציפי ברקמת הריאה של חולי IPF, מה שמצביע על כך ש-FAP יכול להעריך את הפעילות הפרו-פיברוטית של ILD10.

במחקר זה, נוגדן חד-שרשרת נגד FAP סומן באינדוציאנין ירוק (ICG) כדי לפתח בדיקת הדמיה מולקולרית ממוקדת עם חדירה משופרת לרקמות. 600 מיקרומטר PCLS שהתקבלו מתורמים בריאים וחולי IPF צולמו באמצעות בדיקה זו, ופעילות הפיברובלסטים הוערכה על סמך עוצמת האות הפלואורסצנטי. שיטת הדמיה זו עולה על טכניקות הערכת פיברוזיס קונבנציונליות (Western Blotting, qPCR, צביעת טריכרום של מאסון או אימונופלואורסצנטיות) על ידי פשטות הפעולה, שמירה על שלמות הציטו-ארכיטקטונית והכדאיות תוך מתן אפשרות למעקב אורכי אחר התקדמות פתוגנית. חשוב מכך, הוא קל לתפעול ודורש 90 דקות בלבד. זה מספק כלי סינון מתקדם למודל PCLS במבחנה , המקל על מחקר פיברוזיס ריאות.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחקר אושר על ידי ועדת האתיקה של בית החולים הראשון של האוניברסיטה הרפואית גואנגג'ואו (2021G-29). IPF אובחן על סמך בדיקה גופנית וממצאי טומוגרפיה ממוחשבת ברזולוציה גבוהה של החזה, בהתאם לקריטריונים האבחנתיים שנקבעו על ידי ATS/ERS/JRS/ALAT (2022). כל דגימות חולי ה-IPF התקבלו מהשתלת ריאות או ביופסיית ריאות. דגימות רקמת ריאה בריאות נלקחו מתורמי איברים שאובחנו עם מוות מוחי10. הסכמה בכתב לאיסוף רקמות התקבלה מכל מטופל או ממשפחתו של המטופל לפני האיסוף. לפרטים לגבי כל החומרים, הפתרונות והמכשירים המשמשים בפרוטוקול זה, עיין בטבלת החומרים.

1. הכנת PCLS אנושיים

הערה: חולים נבדקים באופן שגרתי לאיתור וירוסים כגון HIV, HCV או עגבת לפני השתלת ריאות או ביופסיה, ועליהם להיבדק שלילי לפני שהם ממשיכים בניסויים הבאים כדי להבטיח את בטיחותם התעסוקתית של אנשי המעבדה.

  1. הכנת פתרונות
    1. הכן תמיסת חוצץ פוספט (1× PBS), וקירור מראש ב-4 מעלות צלזיוס.
    2. הכן תמיסת אגרוז 2%. שוקלים 2 גרם אגרוז ומעבירים אותו לבקבוק ארלנמאייר. מוסיפים 100 מ"ל PBS, מערבבים היטב ומחממים במיקרוגל עד שהתערובת מגיעה לרתיחה נמרצת (≥95 מעלות צלזיוס), הופכת צלולה לחלוטין, הומוגנית וללא חלקיקים או פסים גלויים. מערבבים את הבקבוק מדי פעם במהלך החימום כדי למנוע רתיחה מוגזמת. מניחים את התמיסה באמבט מים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עד לשימוש.
  2. פרוסות ריאה בחיתוך מדויק
    1. שטפו את המשטח החיצוני של רקמת הריאה עם PBS כדי להסיר עודפי זיהומים ודם.
    2. השתמש במזרק של 20 מ"ל (מחט 1.2 מ"מ) כדי לשאוב נפח מתאים של אגרוז ולהכניס אותו לקנה הנשימה. יש להזריק אגרוז לאונות הריאה באיטיות עד לניפוח מלא. יש להפסיק את ההזרקה כאשר נתקלים בהתנגדות ניכרת כדי למנוע דליפת אגרוז.
      הערה: נדרשים כ-10 מ"ל אגרוז לכל גוש רקמות של 5 × 2 ×-1 ס"מ, תוך הימנעות מהצפת יתר. עבור חתיכות רקמה קטנות יותר, השתמש במזרק של 5 מ"ל ובתבניות הטבעה (למשל, תבניות סיליקון, מגשי פלסטיק או צינורות צנטריפוגה חתוכים לגודל) כדי לסייע בהטמעה. יוצקים לתבנית שכבת בסיס בעובי 1-2 מ"מ של אגרוז ומניחים לה להתמצק למחצה. הניחו בעדינות את רקמת הריאה על האגרוז המוצק למחצה, ולאחר מכן שפכו לאט אגרוז נוסף כדי לכסות את הרקמה במלואה, תוך הימנעות מבועות. הניחו לאגרוז להתמצק לחלוטין.
    3. הניחו את הריאות על קרח למשך כ-30 דקות כדי לאפשר פילמור אגרוז. בדוק את הצדר אם יש קשיות וקרירות כדי לאשר פילמור; המשיכו לצנן במידת הצורך.
    4. חותכים את רקמת הריאה ללוחות של 1-2 ס"מ בעזרת להב חד.
    5. מרכז את מגש אמבט הקרח על ספסל החיתוך ומלא אותו בקוביות קרח מראש לקירור מראש.
    6. הפעל את מתג ההפעלה ולחץ והחזק את כפתור UP כדי להעלות את הדגימהtagה למצב מתאים.
    7. טען בזהירות את הלהב על מחזיק הסכין.
      הערה: טפל בלהב בזהירות כדי למנוע פציעה. השלך להבים משומשים למיכלים חדים ייעודיים.
    8. חותכים פיסת סרט באורך של כ -3 ס"מ ורוחב של 1 ס"מ. חבר את הצד הדביק למגש וצפה באופן שווה את הצד הלא דביק בדבק ציאנואקרילט.
    9. הרם חתיכת רקמת ריאה באמצעות מלקחיים. כתם את המשטח יבש בנייר סופג והניח אותו על הסרט המצופה דבק. לחץ בעדינות כדי להבטיח הידבקות יציבה.
    10. לאחר שהדבק מתייצב, טען את המגש על מגש אמבט הקרח. ממלאים ב-PBS מקורר מראש עד שגוש הרקמה שקוע.
    11. הגדר את תדר הרטט ל-"10" ואת מהירות החיתוך ל-"2". לחץ על כפתור FWD כדי להתחיל בחיתוך. לאחר חיתוך מלא של הפרוסה הראשונה, לחץ על כפתור STP כדי לעצור, ולאחר מכן לחץ על כפתור RVE כדי למשוך את הלהב. השלך את הפרוסה הראשונה.
    12. סובב ידנית את הפטיפון 6 פעמים כדי להגדיר את עובי הקטע ל-600 מיקרומטר. לחץ על כפתור FWD כדי לחדש את החיתוך, ולחץ על כפתור STP לאחר חיתוך הקטע. לחץ על RVE כדי למשוך את הסכין ולשלוף את פרוסת הריאה באמצעות פינצטה. מניחים את הפרוסה ב-PBS המכילה 1% פניצילין/סטרפטומיצין (P/S) ושומרים אותה על קרח.
    13. חזור על שלבי החיתוך לעיל כדי לקבל PCLS נוספים, כל אחד בעובי של כ-600 מיקרומטר.
    14. כאשר גוש הרקמה הנוכחי כמעט מוצה, החליפו אותו בבלוק רקמה חדש וחזרו על שלבים 1.2.4 עד 1.2.13.

2. טיהור נוגדן FAP

הערה: צור את הנוגדן היחיד הספציפי ל-FAP המכיל מסוף C תג His כפי שתואר קודם לכן11,12.

  1. בצע תצוגת פאג'ים כדי לאפשר בחירה בתפוקה גבוהה של שברי נוגדנים ספציפיים ל-FAP (scFv) על ידי גלילה חוזרת ונשנית של ספריות קומבינטוריות כנגד מטרות משותקות או בשלב הפתרון. שחזר פאג'ים קשורים באמצעות שטיפה ופליטה קפדניים. להגביר פאג'ים על ידי הדבקה חוזרת של E. coli ולהעשיר את קלסרי המטרה במשך 3-4 מחזורים. אמת שיבוטים באמצעות פאג' ELISA וריצוף DNA כדי לזהות נוגדנים בעלי זיקה גבוהה12.
  2. שכפל את רצף ה-DNA המקודד את מקטע המשתנה היחיד של ה-FAP לתוך וקטור pET-28a(+) שהתמזג עם תג His לביטוי ב-E. coli13.
  3. הפוך את הפלסמיד הרקומביננטי לתאי E. coli BL21 (DE3). לעודד ביטוי חלבון באמצעות איזופרופיל-β-D-1-תיוגלקטופירנוזיד (IPTG) בתרביות בקבוק שייק שהודגרו למשך הלילה בטמפרטורה של 20 מעלות צלזיוס14.
  4. טהר את נוגדן ה-FAP מהסופרנטנט באמצעות חרוזי חומצה ניקל-ניטרילוטריאצטית (Ni-NTA). בצע החלפת מאגר עם PBS עבור יישומים במורד הזרם.
  5. הערכת טוהר הנוגדנים על ידי אלקטרופורזה של ג'ל פוליאקרילאמיד נתרן דודציל סולפט (SDS-PAGE). פס דומיננטי יחיד במשקל המולקולרי הצפוי מעיד על טוהר גבוה.

3. הערכת זיקה של נוגדנים FAP

  1. תרבית תאי כליה עוברית אנושית 293T (HEK 293T) במדיום הנשר המותאם (DMEM) של Dulbecco בתוספת 10% סרום בקר עוברי (FBS) ו-1% פניצילין-סטרפטומיצין.
  2. הוסף חלבון הפעלת פיברובלסטים אנושי (hFAP) ל-293T במפגש של 90%. דגירה למשך 96 שעות כדי ליצור קו תאים יציב של 293T-hFAP.
  3. עיכול תאי 293T ו-293T-hFAP עם 0.25% טריפסין-EDTA ואיסוף התאים.
  4. שטפו את התאים עם PBS ודגרו עם נוגדן FAP ואחריו Alexa Fluor 488-conjugated anti-His IgG.
  5. נתח את עוצמת הקרינה באמצעות ציטומטר זרימה NovoCyte15,16.

4. תיוג מולקולות scFv-FAP-ICG

  1. התאם את הריכוז של FAP-scFv ל-2 מ"ג/מ"ל באמצעות PBS.
  2. הוסף אסטר NHS ירוק אינדוציאנין (ICG-NHS) כדי להשיג יחס מולרי של 5:1 (ICG-NHS:FAP-scFv).
  3. מערבבים היטב על ידי מערבולת וניעור.
  4. דגרו את התגובה בחושך בטמפרטורת החדר למשך שעתיים.
  5. הסר צבע לא קשור באמצעות עמוד התפלה. אחסן את המוצר המצומד הסופי בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס בחושך.

5. בדיקה מולקולרית scFv-FAP-ICG להערכת מידת הפעילות הפיברובלסטים ב-PCLS

  1. לאחר חיתוך ה-PCLS, הניחו קטע אחד לכל באר לצלחת של 12 בארות. יש לשטוף כל באר פעמיים עם 1 מ"ל PBS כדי להסיר שאריות דם ופסולת.
  2. טבלו את ה-PCLS ב-1 מ"ל DMEM ללא FBS. הוסף scFv-FAP-ICG בריכוז סופי של 5 מיקרוגרם/מ"ל. דגירה על שייקר בטמפרטורת החדר למשך שעה עם ניעור עדין, מוגן מפני אור.
  3. שוטפים את הדגימות עם PBS שלוש פעמים, כל אחת למשך 5 דקות.
  4. רכוש תמונות פלואורסצנטיות ICG של PCLS באמצעות מערכת הדמיית בעלי חיים in vivo עם ההגדרות הבאות: אורך גל עירור ב-785 ננומטר ואורך גל פליטה ב-810 ננומטר.
  5. הערכת פעילות פיברוזיס של PCLS על סמך עוצמת הקרינה. הגדר אזורי עניין (ROI) באמצעות תוכנה תואמת, עם קרינת הקרינה המתבטאת כפוטונים/s/cm2/sr.
    1. לחץ על כפתור בחר החזר ROI כדי לאפשר לתוכנה לשרטט אוטומטית את האזור הפסאודו-צבעוני. אם מיקום ההחזר על ההשקעה אינו מדויק, התאם ידנית. לחץ על חשב כדי לקבוע את עוצמת האות באזור. אם נבחרו אזורי משנה מרובים, סכם את הערכים מכל אזורי המשנה.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הליך ההכנה ל-PCLS של רקמת ריאה אנושית מתואר באיור 1. רקמת ריאה אנושית הוטמעה באגרוז ולאחר מכן נחתכה לגושי רקמה בגודל של כ-1 ס"מו-3 באמצעות סכין גילוח. רקמות גזומות ומשוטחות הוצמדו לפלטפורמה לחיתוך בעובי של 600 מיקרומטר באמצעות מיקרוטום (איור 1A,B). PCLS הודגרו בצלחות של 12 בארות (איור 1C).

הכנה ואפיון זיקה של scFv-FAP, נוגדן חד-שרשרת המכוון לחלבון הפעלת פיברובלסטים (FAP), מוצג

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

באמצעות שיטות המחקר הנ"ל הוכנו PCLS מתורמים בריאים וחולי IPF. במקביל, תאי יונקים שימשו לביטוי שברים משתנים חד-שרשרת של FAP, ואומתו טוהרם וסגוליותם. בדיקה מולקולרית המכוונת ל-FAP ומסומנת ב-ICG שימשה לאיתור רמות ביטוי FAP, המשקפות את מידת הפעלת הפיברובלסטים. גישה זו מספקת שיטת הערכה מתקדמת לטיפול בפיברוזיס ריאתי.

PCLS משמר את ההרכב התאי הטבעי, האינטראקציות הבין-תאיות ויחסי התא-מטריצה תוך שמירה על כדאיות הרקמה 5,6,7

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין ניגודי אינטרסים לחשוף.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו אסירי תודה על כך שעבודה זו נתמכה על ידי מענקים מהקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (82470061), תוכנית המדענים הצעירים של מעבדת גואנגג'ואו (QNPG23-15), והפרויקט העצמאי של מעבדת המפתח הממלכתית למחלות נשימה (SKLRD-Z-202305).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
0.25 % טריפסין-EDTAGibco15050-057
2&; צבע SYBR ירוק qPCR Master Mix (ROX2)EZBioscienceA0012-R2
20 מ"ל מזרקWinnerV532159
תא 293TBeyotimeC6008
502 דבקZhuolideD-40
Agarose, טמפרטורת ג'ל נמוכהSigma AldrichA9414-25G
אנטי-קולגן I נוגדןabcam ab138492
נוגדן נגד פיברונקטיןabcamab2413
אנטי-היס-tag mAb-Alexa Fluor 488MBLD291-A48
BL21BeyotimeD1009S
להבג'ילט7in83a7Q
ערכת שעתוק הפוך צבעוני (עם מסיר gDNA)EZBioscienceA0010CGQ
Coomassie כחול סופר מהיר תמיסת מכתיםBeyotimeP0017F
DMEMGibco12800017
בקבוק Erlenmeyerסצ'ואן ShunboGG-17
FAP ארנב mAbCST66562
FBSGibco10099-141
מלקחייםRobozRS-5135
ICG-NHSRuixibioR-TE-157
IPTGMCE367-93-1
מיקרו-איזוןSecuraSecura225D-1CN
מיקרוגלMideoPM2002
Multi-Mode In Vivo מערכת הדמיה של בעלי חייםBioLightAniView600
Ni-NTAGenscriptL00250
NovoCyte זרימה ציטומטרACEA  BiosciencesNovocyte
PBSGibco10010023
פניצילין-סטרפטומיציןGibco15140122
SDS-PAGEBeyotimeP00528
טיהור RNA אוניברסליEZBioscienceEZB-RN4
VibratomeDOSAKADTK-1000N
β-actin Rabbit pAbYeasen30102ES
פריימר
&בטא;-פריימר אקטין-FiGenebook BiotechCATGTACGTTGCTATCCAGGC
β-פריימר אקטין-RiGenebook BiotechCTCCTTAATGTCACGCGAT
FAP primer-FiGenebook BiotechTTGAGTGGATGGAGGAT
FAP primer-RiGenebook BiotechGCTGTGCTCGTGGTGT
פריימר קולגן-I-FiGenebook BiotechGAGGGCCAAGACGAAGACATC
פריימר קולגן-IiGenebook BiotechCAGATCACGTCATCGCACAAC
פריימר פיברונקטין-FiGenebook BiotechCGGTGGCTCTCAGTCAAAG
פריימר פיברונקטין-RiGenebook BiotechAAACCTCCTCTCTCCATAA

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Raghu, G., et al. An official ATS/ERS/JRS/ALAT statement: Idiopathic pulmonary fibrosis: Evidence-based guidelines for diagnosis and management. Am J Respir Crit Care Med. 183 (6), 788-824 (2011).
  2. Jenkins, R. G., et al. An official American Thoracic Society workshop report: Use of animal models for the preclinical assessment of potential therapies for pulmonary fibrosis. Am J Respir Cell Mol Biol. 56 (5), 667-679 (2017).
  3. Moore, B. B., Hogaboam, C. M. Murine models of pulmonary fibrosis. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 294 (2), L152-L160 (2008).
  4. Spagnolo, P., Maher, T. M. Clinical trial research in focus: Why do so many clinical trials fail in IPF. Lancet Respir Med. 5, 372-374 (2017).
  5. Rosales Gerpe, M. C., et al. Use of precision-cut lung slices as an ex vivo tool for evaluating viruses and viral vectors for gene and oncolytic therapy. Mol Ther Methods Clin Dev. 10, 245-256 (2018).
  6. Ferren, M., et al. Hamster organotypic modeling of SARS-CoV-2 lung and brainstem infection. Nat Commun. 12, 5809(2021).
  7. Bai, Y., et al. Cryopreserved human precision-cut lung slices as a bioassay for live tissue banking: A viability study of bronchodilation with bitter-taste receptor agonists. Am J Respir Cell Mol Biol. 54 (5), 656-663 (2016).
  8. Price, A. R., Green, A. J., Brown, K. Precision-cut tissue slices: Applications in pharmacology and toxicology. Life Sci. 57 (21), 1887-1901 (1995).
  9. MacKenzie, B., et al. Pre-clinical proof-of-concept of anti-fibrotic activity of caveolin-1 scaffolding domain peptide LTI-03 in ex vivo precision cut lung slices from patients with idiopathic pulmonary fibrosis. bioRxiv. 28, (2024).
  10. Yu, P., et al. Comprehensive analysis of fibroblast activation protein expression in interstitial lung diseases. Am J Respir Crit Care Med. 207 (2), 160-172 (2023).
  11. Han, Y., et al. Efficient generation of recombinant anti-HER2 scFv with high yield and purity using a simple method. Biotechnol J. 19 (7), e2300745(2024).
  12. Seo, P., Song, E. W. Phage display screening of therapeutic peptide for cancer targeting and therapy. Protein Cell. 10 (11), 787-807 (2019).
  13. Neuhaus, V., et al. Precision-cut lung slices: An integrated ex vivo model for studying lung physiology, pharmacology, disease pathogenesis and drug discovery. Respir Res. 25, 231(2024).
  14. Huang, Z., et al. ImmunoPET imaging of human CD8+ T cells with novel 68Ga-labeled nanobody companion diagnostic agents. J Nanobiotechnol. 19 (1), 42(2021).
  15. Cossarizza, A., et al. Guidelines for the use of flow cytometry and cell sorting in immunological studies (second edition). Eur J Immunol. 49 (10), 1457-1973 (2019).
  16. Rosen, O., et al. A high-throughput inhibition assay to study MERS-CoV antibody interactions using image cytometry. J Virol Methods. 265, 77-83 (2019).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Pulmonary FibrosisIn Vitro ModelPrecision Cut Lung SlicesFibroblast Activation ProteinExtracellular MatrixFibroblastic FociDrug ScreeningMolecular ProbesFluorescent SignalFibroblast Activity
Video Coming Soon

Related Articles