מאמר שיטה

שינוי מבחן המספר הסביר ביותר לכימות סלמונלה במוצרי עוף גולמיים ומוכנים לבישול

1.4K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/67910

⸱

31 בינואר 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Characterization and Interventions for Foodborne Pathogens, Eastern Regional Research Center, Agricultural Research Service (ARS), United States Department of Agriculture (USDA)

במאמר זה

סיכום

כימות מדויק של סלמונלה בעופות ברמות נמוכות הוא אתגר תעשייתי ורגולטורי עכשווי. פרוטוקול זה מתאר בדיקת MPN המאפשרת כימות של סלמונלה במוצרי עופות גולמיים ומוכנים לבישול. שיטה זו מהירה, רגישה ותואמת את הנחיות FSIS, משפרת את בטיחות המזון ותומכת במאמצי בריאות הציבור.

תקציר

סלמונלה היא גורם מוביל למחלות הנישאות במזון בארצות הברית, במיוחד במוצרי עופות. שיטות מסורתיות לאיתור סלמונלה מתמקדות בשכיחות ולא בכמות, מה שמגביל את התועלת שלהן בהערכת רמות הזיהום והסיכונים. מחקר זה מציג בדיקת מספר סביר ביותר (MPN) חדשה שנועדה לכמת סלמונלה במוצרי עופות מוכנים לבישול, כגון קורדון בלו עוף. השיטה כוללת שטיפת דגימת העופות, ריכוז השטיפה באמצעות צנטריפוגה ודילול סדרתי בבלוק של 48 בארות. בדיקת MPN משולבת בשיטת הגברה איזותרמית בתיווך לולאה (LAMP) כדי לספק כימות רגיש, מדויק ומהיר של זיהום סלמונלה באותה מסגרת זמן כמו פרוטוקולי שירות בטיחות ופיקוח מזון (FSIS) קיימים. התוצאות מראות מתאם ליניארי חזק בין מדידות MPN-LAMP לבין רמות החיסון התיאורטיות (R² = 0.933). עם זאת, שונות בריכוזים נמוכים יותר מדגישה אתגרים בזיהוי מדויק של סלמונלה ברמות אלה, כאשר גבול הזיהוי התחתון המעשי מוערך בכ-300 CFU/g. שיפורים פוטנציאליים לשיפור תחולת הפרוטוקול כוללים הגדלת הכמות שנדגמה כדי לשפר עוד יותר את גבול הזיהוי, אופטימיזציה של פורמולציות חומרי העשרה והרחבת הזיהוי המולקולרי כדי להתמקד במספר סרוברים של סלמונלה . בסך הכל, מחקר זה מציג כלי מעשי לתעשיית המזון, המאפשר כימות אמין של זיהום סלמונלה במוצרי עופות, ותורם לשיפור בטיחות המזון ובריאות הציבור.

מבוא

כגורם מוביל למחלות הנישאות במזון, אשפוז ומוות בארה"ב, לסלמונלה יש השפעה משמעותית על בריאות הציבור והכלכלה. הנטל הכלכלי המשוער של הפתוגן בשנת 2013 לבדה היה 3.67מיליארד דולר. למרות שיוזמות רגולטוריות אחרונות שואפות להפחית את הסלמונלוזיס ב-25% עד 20302, פערים באסטרטגיות הזיהוי וההפחתה הנוכחיות נותרו ברורים, במיוחד בהתאמת המעקב אחר מפעלי העיבוד לתוצאות בריאות הציבור3 .

מוצרי עופות קפואים מוכנים לבישול, שהיו מעורבים בהתפרצויות סלמונלה מרובות, מהווים דאגה משמעותית לבריאות הציבור. בתגובה, שירות בטיחות המזון והפיקוח (FSIS) סיווג סלמונלה כחומר נואף במוצרים אלה. נכון לעכשיו, מדריך מעבדה למיקרוביולוגיה של FSIS (MLG) 4.15 מתמקד אך ורק בקביעת שכיחות הסלמונלה במוצרי עופות4. על פי הנחיה זו, דגימות שנאספו מועשרות למשך 18-24 שעות ולאחר מכן נבדקות באמצעות מערכת הזיהוי המולקולרי (MDS), המזהה נוכחות או היעדר סלמונלה אך אינה מציעה תובנה לגבי רמת הזיהום. בעוד שגישה זו חשובה לאיתור נוכחות של פתוגנים, היא אינה מספקת מידע כמותי שיכול לעזור למעבדי מזון להעריך את סיכוני הזיהום בצורה מדויקת יותר ולנקוט בפעולות מתקנות ממוקדות.

במחקר זה, פיתחנו שיטה להגברת הזיהוי משכיחות לכימות של פתוגנים מיקרוביאליים. הוא תוכנן לשילוב חלק בתהליכים קיימים לאיתור סלמונלה במוצרי עופות עם הפרעה מינימלית לפרוטוקולי FSIS הנוכחיים. במקום פשוט להעשיר את הדגימה בתפזורת, השיטה מתחילה בשטיפת מוצרי העופות באמצעות מדיה התואמת את שיטות FSIS הנוכחיות. לאחר מכן השטיפה מופצת לעמודה הראשונה של גוש באר בעומק 48. דילולים סדרתיים מבוצעים על פני חמש העמודות הנותרות, והבלוק מודגר למשך 18-24 שעות, בהתאם לפרוטוקול MLG 4.15. לאחר הדגירה, הבארות נבדקות לסלמונלה, והתוצאות משמשות לחישוב המספר הסביר ביותר (MPN)5,6. גישה זו מאפשרת לכמת את הזיהום באותה מסגרת זמן כמו תהליך ה-FSIS הנוכחי, מה שהופך אותו לאופציה מעשית הן לשימוש בתעשייה והן לשימוש רגולטורי. איור 1 מתאר דיאגרמת בלוקים המסכמת את מבחן ה-MPN שהשתנה. האיור כולל תצלומים שצולמו בשלבים ספציפיים, גוש 48 הבארות המשמש לדילול וגידול של שכפולים, ושלוש הטכניקות המשמשות כאמות מידה להערכת המספר הסביר ביותר של סלמונלה הקיימת בעוף טחון. בשלב הראשון של מחקר זה, השתמשנו בעוף טחון מוקרן כדי למזער את ההשפעה של מיקרופלורת הרקע ואי הוודאות של מדידות ביחס לחיסון מאומת לפני החלת הפרוטוקול על דגימות עוף שלא הוקרנו.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

הערה: כל העבודה הקשורה לפרוטוקול זה צריכה להתבצע במעבדה ברמת בטיחות ביולוגית 2 (BSL-2). במידת הצורך, יש לבצע פרוטוקול זה בתוך ארון בטיחות ביולוגי (BSC) כדי לשמור על תנאים אספטיים ולמזער את הסיכון לזיהום דגימה או לחשיפת המפעיל לפתוגנים מיקרוביאליים. בעת העברת דגימות מחוץ ל-BSC, השתמש במיכלים אטומים כדי לשמור על שלמות הדגימה ולמנוע שפיכה במקרה של נפילות בשוגג. רצוי להשתמש ברכיבים חד פעמיים לאורך כל ההליך כדי להפחית את האפשרות של זיהום צולב. במקרים שבהם כלים חד פעמיים אינם אפשריים, ודא שכל הציוד והחומרים סטריליים לפני השימוש. ניהול פסולת נכון הוא קריטי; יש להשליך את כל הרכיבים החד פעמיים המשומשים כפסולת ביולוגית. חומרים לשימוש חוזר לפני שימוש חוזר כדי להבטיח עיקור והכלה נאותים של חומרים שעלולים להיות מסוכנים. הקפדה על אמצעי זהירות אלה לא רק שומרת על שלמות הדגימה אלא גם ממזערת את הסיכון לחשיפת המפעיל לפתוגנים מיקרוביאליים.

1. הכנת דגימות בשר

  1. רכישה ועיבוד דגימות בשר
    1. בשר טרי
      1. רכשו עוף טחון ממחלקת הבשר הטרי של קמעונאים מקומיים. העבירו את כל הדגימות לאחסון בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס ועבדו תוך 24 שעות לאחר הקבלה. מחלקים את הבשר באופן אספטי לדגימות של 25 גרם.
      2. אטום ואקום והקרין את הדגימה. כאן, המרכז הלאומי של טקסס A&M AgriLife לחקר קרן אלקטרונים הקרין בשר הנתון למינון של ~25 kGy.
        הערה: בעוד שהקרנה שימשה כאמצעי בקרה במחקר זה כדי להבטיח את חיסול המיקרופלורה ברקע, היא אינה תנאי מוקדם לפרוטוקול ביישומים מעשיים כפי שמוצג על ידי המוצרים המוכנים לבישול שאינם מוקרנים המשמשים בסעיף הבא. בהגדרות שדה, שיטות חלופיות כגון מדיה סלקטיבית או ספציפיות של אבחון מולקולרי יכולות לטפל בהפרעות פוטנציאליות ממיקרואורגניזמים שאינם מטרה.
    2. מוצרי עוף מוכנים לבישול
      1. רכשו מוצרי עוף מוכנים לבישול ממדור המזון הקפוא של הקמעונאים המקומיים. מחלקים אספטית לדגימות של 25 גרם.
      2. אסוף דגימות ממרכז החלקים הבודדים כדי להבטיח שכל המרכיבים (למשל, לחם וגבינה) כלולים.
  2. הכנת מדיה
    1. הכן מי פפטון חוצצים (BPW) על ידי המסת 25 גרם אבקת BPW ב-1 ליטר של ננו-טהור H2O.
    2. הכן צלחות עירוי לב מוח (BHI). לשם כך, ממיסים 37 גרם אבקת BHI ב-1 ליטר של ננו-טהור H2O ומוסיפים 15 גרם אגר לתמיסת BHI. עקרו את כל המדיה על ידי חיטוי ב-121 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות. יוצקים 20 עד 25 מ"ל מדיה לצלחות פטרי עם מכסה שקוף (100 מ"מ על 15 מ"מ).
      הערה: עדיף לשפוך את הצלחות בתוך ארון בטיחות ביולוגי כדי לשמור על תנאים אספטיים.

2. תרבית תאים

  1. הכן את התרבית הראשונית על ידי פס סלמונלה אנטריקה , serovar Typhimurium ATCC 14028 על צלחת אגר BHI ודגירה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך הלילה.
  2. הכינו תרביות לילה על ידי חיסון 25 מ"ל של מרק BHI במושבה אחת של סלמונלה טרייה. גידול אירובי של תרביות בן לילה ב-37 מעלות צלזיוס עם טלטול ב-100 סל"ד.

3. חיסון דגימות עופות

  1. דילול וציפוי תרבות
    1. הכן סדרה של דילולים פי 10 של תרבית הלילה ב-BPW כדי להשיג ריכוזים סופיים של כ-1 x 108 עד 1 x 101 CFU/mL. נניח שריכוז תרבית הלילה של סלמונלה הוא 1 x 109 CFU/mL.
    2. העבירו 0.5 מ"ל מתרבית הלילה ל-4.5 מ"ל BPW, ערבבו ואז העבירו 0.5 מ"ל מהדילול ל-4.5 מ"ל BPW עבור כל דילול נוסף.
      1. מורחים 10 מיקרוליטר של דילול 1 x 103 CFU/mL על צלחת אגר BHI בשלוש עותקים לספירת תאים כדי לחשב את ריכוז תרבית הלילה.
  2. חיסון דגימות בשר
    1. העבירו באופן אספטי 25 גרם עוף טחון מוקרן לשקית בטן סטרילית בשכפול. התיק הוא 7.5 על 12 אינץ' ומסומן כ-1.63 ליטר. התיק מכיל מחיצת פילטר בקוטר חור של 330 מיקרומטר, ויש 285 לס"מ מרובע.
    2. חסנו כל דגימה ב-1 מ"ל של דילול ריכוז היעד. לדוגמה, הוסף 1 מ"ל של תרבית מדילול של 1 x 10³ CFU/mL כדי להשיג רמת זיהום של כ-1,000 תאים/25 גרם עוף. מחלקים בעדינות את החיסון הנוזלי על פני דגימות העוף באמצעות מפזר תאים סטרילי ומניחים לו לעמוד שעה ב-4 מעלות צלזיוס.
    3. הכן דגימות בקרה שליליות על ידי הוספת 1 מ"ל של BPW סטרילי.

4. עיבוד מדגם

  1. הוסף 225 מ"ל BPW לכל דגימה. היחס בין נפח למדיה נבחר כדי להתאים ל-FSIS MLG 4.154.
  2. הומוגניזציה של הדגימות באמצעות Stomacher7 במהירות רגילה ומשך של 120 שניות.
  3. צנטריפוגה והשעיה מחדש
    1. הסר בזהירות את הנוזל מהצד המסונן של השקית באמצעות פיפטה של 50 מ"ל. מפצלים את הנוזל לשני בקבוקי צנטריפוגה סטריליים.
    2. אזנו את הבקבוקים עם BPW סטרילי כדי להבטיח משקלים שווים. צנטריפוגה את הדגימות ב-10,000 x גרם למשך 10 דקות. השליכו את הסופרנטנט. השעו מחדש את כדור התא ב -3 מ"ל מרק BPW בעזרת מרית סטרילית.
    3. מוסיפים עוד 27 מ"ל מרק BPW ומערבבים היטב על ידי ערבוב בעזרת מרית. שלב את התוכן של שני בקבוקי הצנטריפוגות לבקבוק אחד עבור כל דגימה.

5. הגדרת בלוק MPN

הערה: טבלה 1 מתארת סכימה של הדילולים בגוש של 48 בארות.

  1. הוסף 3 מ"ל מהדגימה המושעה לכל באר בעמודה 1 של בלוק 48 הבארות (8 חזרות).
  2. הכן סדרה של דילולים פי 10 על פני עמודים 1-6 בתוך הבלוק באמצעות פיפטה בעלת שמונה ערוצים.
  3. הוסף 0.3 מ"ל דגימה ל-2.7 מ"ל של פיפטה BPW לערבוב. חזור על הפעולה עבור כל דילול. דגירה של בלוקים למשך הלילה (~18 שעות) ב-37 מעלות צלזיוס עם טלטול ב-~100 סל"ד.

6. ציפוי וספירה

  1. ספירת לוחית טיפה שונה
    1. לוח 7 מיקרוליטר של דגימה שגדלה בלילה של כל דילול ברשת של 4 x 6 על צלחת אגר באמצעות פיפטה רב-ערוצית (איור 2). שימוש ברשת 4X6 על שתי צלחות מתאים יותר ל-8 דגימות, בניגוד לרשת הטיפוסית של 6X6 של טיפות8.
    2. הניחו לצלחות להתייבש באוויר במשך 10 דקות לפני הדגירה. דגרו את צלחות האגר למשך הלילה (~18-24 שעות) בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. לאחר הדגירה יש לספור את מספר המושבות בכל צלחת.

7. זיהוי qPCR של סלמונלה

  1. מיצוי DNA באמצעות ערכה מסחרית
    1. ערבבו תרביות בבלוק 48 הבארות על ידי פיפטינג למעלה ולמטה מספר פעמים. פיפטה 200 מיקרוליטר מכל תרבית לצלחת PCR של 96 בארות.
    2. אוטמים ואז צנטריפוגה את הצלחת ב 6,600 x גרם למשך 10 דקות. הסר את הסופרנטנט והוסף 20 מיקרוליטר של מגיב הערכה לגלולה.
    3. השעו מחדש את הכדור על ידי פיפטינג למעלה ולמטה. אוטמים ומחממים את הצלחת בחום של 99 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות, ולאחר מכן מצננים ל-20 מעלות צלזיוס.
    4. שוב צנטריפוגה ב 6,600 x גרם למשך 10 דקות. השתמש ב-2 מיקרוליטר של הסופרנטנט לניתוח qPCR.
  2. הגדרת צלחת
    1. הכן את תערובת תגובת ה-qPCR על פי פרוטוקול9 שנקבע כדלקמן: 10 מיקרוליטר של 2x Master Mix; 0.4 מיקרוליטר מכל פריימר ובדיקה (פתרון עבודה של 10 מיקרומטר): invA קדימה: 5'-GTTGAGGATGTTATTCGCAAAG-3', invA הפוך: 5'-GGAGGCTTCCGGGTCAAG-3', invA בדיקה: 5'-CCGTCAGACCTCTGGCAGTACCTTCCTC-3' מסומן בצבע Cal Fluor Orange 560 fluorenes; 0.2 מיקרוליטר של תבנית בקרת הגברה פנימית (IAC) (6 x 104 עותק/מיקרוליטר)9; 0.4 מיקרוליטר מכל פריימר ובדיקה IAC (10 מיקרומטר): IAC קדימה: 5'-GGCGCGCCTAACACATCT-3', IAC הפוך: 5'-TGGAAGCAATGCCAAATGTA-3', בדיקה IAC: 5'-TTACAACGGGAAGACAATGCCACCA-3' מסומן בצבע TAMRA. כוונן את עוצמת הקול עם ddH2O עד 20 μL בסך הכל.
    2. בצע PCR בזמן אמת עם תנאי הרכיבה הבאים9: 95 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות (דנטורציה ראשונית של DNA והפעלה של פולימראז התחלה חמה), 40 מחזורים של 95 מעלות צלזיוס למשך 15 שניות ו-60 מעלות צלזיוס למשך דקה אחת, השתמש בהגדרות ברירת המחדל של Ct כדי לייצא תוצאות לניתוח.

8. זיהוי באמצעות בדיקת MDS של 3M

  1. עקוב אחר פרוטוקול ערכת הסלמונלה של בדיקת זיהוי מולקולרי. ערבבו תרביות בבלוק 48 הבארות על ידי פיפטינג למעלה ולמטה מספר פעמים. פיפטה 20 מיקרוליטר מכל דגימה לתוך צינור הליזיס המסופק על ידי הערכה.
  2. מחממים את הדגימות בחום של 100 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות. הפתרון יהפוך מוורוד לצהוב. דגרו את הדגימות למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. הפתרון ישתנה מצהוב לוורוד.
  3. העבירו 20 מיקרוליטר ליזאט לתוך צינור ריאגנט וטענו את צינורות הריאגנט לתוך המחזיק.
  4. הוסף את המחזיק למכשיר MDS והגדר את התוכנה כדי להעביר את המידע על הערכה והדגימה. המכשיר דורש שכל באר תסומן עם מספר האצווה עבור הבדיקה ושם מדגם. הפעל את תוכנת MDS וייצא את הדוח.

9. ניתוח נתונים

  1. סיווג תוצאות חיוביות ושליליות.
    1. עבור ציפוי טיפות 4X6, העריכו כתמים על צלחות אגר עם לפחות מושבה אחת כחיובית וכתמים על צלחות אגר ללא צמיחה כשליליים.
    2. עבור qPCR, העריכו בארות שיש להן Ct קטן או שווה ל-30 כחיוביות ובארות עם Ct גדול מ-30 כשליליות.
    3. עבור MDS, השתמש בתוצאות ממערכת MDS, המדווחות כחיוביות או שליליות.
  2. חישוב MPN
    1. נתח תוצאות חיוביות ושליליות מוערות באמצעות שיטת רזולוציית ההסתברות המקסימלית הפשוטה (SMPR) שתוארה קודם לכן6 או מחשבוני MPN מאומתים חלופיים. 10

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

בשר מוקרן
בניתוח רגרסיה, שיפוע של 1 מצביע על כך שעבור כל יחידת עלייה במשתנה הבלתי תלוי (ציר x), המשתנה התלוי (ציר y) גדל ביחידה אחת בדיוק. זה מצביע על קשר פרופורציונלי בין שני המשתנים, כלומר השינוי במשתנה התלוי משקף את השינוי במשתנה הבלתי תלוי. יירוט של 0 פירושו שכאשר המשתנה הבלתי תלוי הוא 0, המשתנה התלוי הוא גם 0. זה מצביע על כך שאין היסט קבוע או הטיה בקשר בין שני המשתנים. יחד, שיפוע של 1 ויירוט של 0 מרמזים על הסכמה בין המשתנים 11,12. תרחיש א...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

משמעות הפרוטוקול
סלמונלה נותרה דאגה מרכזית בבטיחות המזון, במיוחד במוצרי עופות, המעורבים לעתים קרובות בהתפרצויות מחלות הנישאות במזון13,14. כגורם מוביל למחלות חיידקיות הנישאות במזון בארצות הברית, שיטות אמינות לאיתור סלמונלה במוצרי עופות טריים ומוכנים לבישול הן קריטיות להבטחת בטיחות המזון15. היכולת לכמת סלמונלה ברמות נמוכות חיונית לזיהוי זיהום שאחרת עלול לא להתג...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

כל המחברים מצהירים שאין ניגוד אינטרסים.

תודות

מחקר זה נתמך על ידי משרד החקלאות של ארה"ב, שירות המחקר החקלאי (USDA-ARS), התוכנית הלאומית 108, מספרי מערכת המידע המחקרית הנוכחית 8072-42000-093-000-D ו-8072-42000-094-000-D. אזכור שמות מסחריים או מוצרים מסחריים במאמר זה נועד אך ורק למטרת מתן מידע ספציפי ואינו מרמז על המלצה או תמיכה של משרד החקלאות האמריקאי. USDA הוא ספק ומעסיק שוויון הזדמנויות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
48 בלוק באר עמוק 4.6 מ"לפישר סיינטיפיק אינטרנשיונל, בע"NC1964628
אגר - חומר ממצק (Difco)בקטון, דיקינסון ושות' (BD)281230
איזון אנליטימטלר טולדוJL602-G/Lציוד 
ציוד איזון אנליטימטלר טולדוAB54-S 
אוטוקלאב - Amsco Lab250, מעקר קיטור מעבדהSteris plcLV-250ציוד 
ארון בטיחות ביולוגי, סוג A2, מטהר לוגיקה+ציוד 302411101 של תאגיד Labconco 
מרק עירוי לב מוח (BHI) בקטון, דיקינסון ושות' (BD)237500
מי פפטון חומצייםBio-Rad Laboratories Inc.
מפזר תאים 3564684 - בצורת LVWR76208-438
צנטריפוגה מיקרוצנטריפוגה 5424Eppendorf5424
צנטריפוגה ציוד, Avanti J-25Beckman Coulter, Inc. ציוד
מיצוי DNA - PreMan Ultra Sample Preparation Reagent תרמו פישר סיינטיפיק בע"מ 
עוף טחון קמעונאים מקומיים
IAC forward  פריימר: 5'-GGCGCGCCTAACACATCT-3'IntegratedDNA Technologies 
בדיקת IAC: 5'-TTACAACGGGAGAAGACAATGC
CACCA-3' מסומן ב-5' TAMRA/3' BHQ-2		Biosearch Technologies
IAC פריימר הפוך: 5'-TGGAAGCAATGCCAAATGTA-3'טכנולוגיותDNA משולבות 
אינקובטור - שייקר אינקובטור Inova 4230ברונסוויק סיינטיפיק4230ציוד 
לולאת חיסון - לולאת קומבי  10µ L ו-1µ L פישר סיינטיפיק אינטרנשיונל, בע"מ22-363-602
invA פריימר קדימה: 5'-GTTGAGGATGTTATTCGCAAAG
G-3'טכנולוגיות		DNA משולבות 
בדיקה invA: 5'-CCGTCAGACCTCTGGCAGTAC
CTTCCTC-3' מסומן ב-5'Cal Fluor Orange 560/3' BHQ-1		Biosearch Technologies
invA פריימר הפוך: 5'-GGAGGCTTCCGGGTCAAG-3'טכנולוגיותDNA משולבות 
טיפול בקרינהטקסס A& M Agrilife Research National Center for Electron BeamResearch
Service Luria Bertani (LB) BrothBecton, Dickinson and Company (BD)244620
פיפטה ידנית Pipet-Lite LTS פיפטה L-1000XLS+ציוד 17014382 מטלר טולדו
פיפטה ידנית Pipet-Lite LTS פיפטה L-100XLS+ציוד 17014384
מטלר טולדופיפטה ידנית Pipet-Lite LTS פיפטה L-10XLS +ציוד 17014388 של מטלר טולדו
פיפטה ידנית פיפטה Pipet-Lite LTS פיפטה L-200XLS +ציוד 17014391 של מטלר טולדו
ידנית Pipet-Lite LTS פיפטה L-20XLS +ציוד 17014392 של מטלר טולדו
פיפטה ידנית פיפטה Lite Multi Pipette L8-200XLS +Mettler Toledo17013805ציוד
פיפטה ידני Pipet-Lite Multi Pipette L8-20XLS +Mettler Toledo17013803
ציוד בקבוק אחסון מדיה -PYREX 1L זכוכית מרובעת  בקבוק, עם פקק בורג GL45Corning Inc.לציוד1396-1L
-בקבוק פה רחב עגול PYREX 2L, עם מכסה בורג GLS80Corning Inc.ציוד1397-2L
, צלחת 96 בארות, תחתית שטוחה, פוליסטירן, 0.34 ס"מ, סטרילי, מערבל Z707902MilliporeSigma
- Vortex Genie 2Scientific Industries Inc.ציוד SI-0236
בדיקת זיהוי מולקולרי 2-ערכת סלמונלהמכשיר
nbsp;ציוד NeogenMDS100 
בקר פיפטה ממונע, PIPETBOY2INTEGRA Biosciences Corp.ציוד
155019 PCR Mastermix 2&Times; ביטוי גנים של TaqMan תרמו פישר סיינטיפיק בע"מ 
פטרי צלחת מסובב -  bioWORLD חיסון פטיפוןפישר סיינטיפיק אינטרנשיונל, בע"3489E20ציוד
צלחות פטרי עם מכסה שקוף (100 מ"מ x 15 מ"מ)פישר סיינטיפיק אינטרנשיונל, בע"
טיפים לפיפטה GP LTS 1000µ L S 768A/8מטלר טולדו 
30389273 קצות פיפטה GP LTS 20µ L 960A/10מטלר טולדו30389270
קצות פיפטה GP LTS 200µ L F 960A/10Mettler Toledo30389276
מוכן לבישול מוצרי עוףריאגנטים לקמעונאים מקומיים
, מאגר סטרילי של 25 מ"ל המשמש עם פיפטורים רב-ערוצייםThermo Fisher Scientific Inc. 8093-11
PCR בזמן אמת - 7500 מערכת PCR בזמן אמת (אפלייד ביוסיסטמס, פוסטר סיטי, קליפורניה)2750036476ציוד
פיפטות סרולוגיות, פיפטות סרולוגיות נונק (10 מ"ל)תרמו פישר סיינטיפיק בע"מ 170356N
פיפטות סרולוגיות, פיפטות סרולוגיות Nunc (2 מ"ל)תרמו פישר סיינטיפיק בע"מ 170372N
פיפטות סרולוגיות, פיפטות סרולוגיות Nunc (25 מ"ל)תרמו פישר סיינטיפיק בע"מ 170357N
פיפטות סרולוגיות, פיפטות סרולוגיות Nunc (50 מ"ל)תרמו פישר סיינטיפיק בע"מ 170376N
מפזר - פישרברנד מפזרי תאים בצורת Lפישר סיינטיפיק אינטרנשיונל, בע"14-665-230
שקית בטן, Nasco Whirl-Pak Write-On הומוגנייזר בלנדר שקיות סינון ThermoFisher Scientific Inc. 01-812
Stomacher 80 Biomaster Lab בלנדרSewardציוד
30010019 Thermocycler (מערכת GeneAmp PCR 9700)ציוד 535028293 יישומי ביוסיסטמס
סינון מים - Elga Veolia Purelab Flex Elga LabWaterPF2XXXXM1-USציוד
שקיות Whirlpak 1.63L VWR11216-777
מ 4318930 ניו פיפטה בקבוק אחסון מדיה צלחת מיקרוטיטר 108/cs זיהוי מולקולרי Neogen MDA2SAL96&4369542מ מ FB0875713 מאגר מ

מקורות

  1. Batz, M., Hoffmann, S., Morris, J. G. Disease-outcome trees, eq-5d scores, and estimated annual losses of quality-adjusted life years (qalys) for 14 foodborne pathogens in the united states. Foodborne Pathogens and Disease. 11 (5), 395-402 (2014).
  2. The Grand Challenge: Salmonella. , United States Department of Agriculture. https://tellus.ars.usda.gov/stories/articles/the-grand-challenge-salmonella (2024).
  3. National Advisory Committee on Microbiological Criteria in Foods (NACMCF). Response to questions posed by the food safety and inspection service: Enhancing Salmonella control in poultry products. J Food Prot. 82 (4), 645-668 (2019).
  4. Food Safety and Inspection Service. 4.15 Isolation and identification of Salmonella from meat, poultry, pasteurized egg, siluriformes (Fish) products and carcass and environmental sponges. , (2024).
  5. Irwin, P., Reed, S., Brewster, J., Nguyen, L., He, Y. P. Non-stochastic sampling error in quantal analyses for campylobacter species on poultry products. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 405 (7), 2353-2369 (2013).
  6. Irwin, P., Tu, S., Damert, W., Phillips, J. A modified gauss-newton algorithm and ninety-six well micro-technique for calculating mpn using excel spreadsheets. Journal of Rapid Methods & Automation in Microbiology. 8 (3), 171-191 (2000).
  7. Ravishankar, S. Food microbiology: A laboratory manual. Food Microbiology. Ahmed, E. Y., Carlstrom, C. 21, wiley-interscience. singapore. 489(2004).
  8. Chen, C. Y., Nace, G. W., Irwin, P. L. A 6 x 6 drop plate method for simultaneous colony counting and mpn enumeration of campylobacter jejuni, listeria monocytogenes, and escherichia coli. J Microbiol Methods. 55 (2), 475-479 (2003).
  9. Suo, B., He, Y., Tu, S. I., Shi, X. A multiplex real-time polymerase chain reaction for simultaneous detection of salmonella spp., escherichia coli o157, and listeria monocytogenes in meat products. Foodborne Pathogens and Disease. 7 (6), 619-628 (2010).
  10. Jarvis, B., Wilrich, C., Wilrich, P. T. Reconsideration of the derivation of most probable numbers, their standard deviations, confidence bounds and rarity values. J Appl Microbiol. 109 (5), 1660-1667 (2010).
  11. Stevens, R., Poppe, K. Validation of clinical prediction models: What does the "calibration slope" really measure. Journal of Clinical Epidemiology. 118, (2019).
  12. Miller, M. E., Hui, S. L., Tierney, W. M. Validation techniques for logistic regression models. Statistics in Medicine. 10 (8), 1213-1226 (1991).
  13. Galán-Relaño, Á, et al. Salmonella and salmonellosis: An update on public health implications and control strategies. Animals. 13 (23), 3666(2023).
  14. Gorski, L., et al. Growth assessment of salmonella enterica multi-serovar populations in poultry rinsates with commonly used enrichment and plating media. Food Microbiology. 119, 104431(2024).
  15. Schmidt, J. W., et al. Evaluation of methods for identifying poultry wing rinses with salmonella concentrations greater than or equal to 10 cfu/ml. J Food Prot. 87 (11), 100362(2024).
  16. Gorski, A., Liang, L. S. Effect of enrichment medium on real-time detection of salmonella enterica from lettuce and tomato enrichment cultures. Journal of Food Protection. 73 (6), 1047-1056 (2010).
  17. Guillén, S., Nadal, L., Álvarez, I., Mañas, P., Cebrián, G. Impact of the resistance responses to stress conditions encountered in food and food processing environments on the virulence and growth fitness of non-typhoidal salmonellae. Foods. 10 (3), 617(2021).
  18. Rohde, A., Hammerl, J. A., Appel, B., Dieckmann, R., Al Dahouk, S. Sampling and homogenization strategies significantly influence the detection of foodborne pathogens in meat. BioMed Research International. 2015, (2015).
  19. Wang, D., Wang, Z., He, F., Kinchla, A. J., Nugen, S. R. Enzymatic digestion for improved bacteria separation from leafy green vegetables. Journal of Food Protection. 79 (8), 1378-1386 (2016).
  20. Pitard, F. F. Theory of sampling and sampling practice. , Chapman and Hall/CRC. (2019).
  21. Sharpe, A. in Detecting pathogens in food. , Elsevier. 52-68 (2003).
  22. Hannah, J., et al. Effect of stomaching on numbers of bacteria recovered from chicken skin. Poultry Science. 90 (2), 491-493 (2011).
  23. Mcmeekin, T., Thomas, C. Retention of bacteria on chicken skin after immersion in bacterial suspensions. Journal of Applied Bacteriology. 45 (3), 383-387 (1978).
  24. Rodrigues-Szulc, U., Ventoura, G., Mackey, B., Payne, M. Rapid physicochemical detachment, separation and concentration of bacteria from beef surfaces. Journal of Applied Bacteriology. 80 (6), 673-681 (1996).
  25. Vibbert, H. B., et al. Accelerating sample preparation through enzyme-assisted microfiltration of salmonella in chicken extract. Biotechnol Prog. 31 (6), 1551-1562 (2015).
  26. Armstrong, C. M., et al. Use of a commercial tissue dissociation system to detect salmonella-contaminated poultry products. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 416 (3), 621-626 (2024).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

DNAPCR

מאמרים קשורים