מאמר שיטה

פיתוח מודל פגיעת ריאות חריפה של חזרזיר יילודים המשחזר את הסביבה המוקדמת של ריאות פגים

1.2K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/68058

⸱

31 באוקטובר 2025

 ,  ,  ,  ,  , 
1Sinclair Centre for Regenerative Medicine, Ottawa Hospital Research Institute, 2Division of Neonatology, Karolinska University Hospital, 3Division of Neonatology, Children's Hospital of Eastern Ontario, 4Department of Obstetrics, Gynecology and Newborn Care, University of Ottawa, 5Faculty of Medicine, University of Ottawa

במאמר זה

סיכום

פרוטוקול זה מתאר את הפיתוח של מודל חזרזיר יילודים של פגיעה ריאתית חריפה המדגים אירועים פתוגניים מוקדמים המתרחשים בריאה המוקדמת, כולל כמות פעילי שטח תת-מספקת, היפראוקסיה, אוורור בלחץ גבוה ודלקת, כדי להקל על הבנת הטריגרים המולקולריים של דיספלזיה ברונכופולמונרית ולשפר את התרגום הטיפולי.

תקציר

לידה מוקדמת היא גורם עיקרי לתחלואה ותמותה בילדים. דיספלזיה ברונכופולמונרית (BPD) היא תוצאה חמורה של פגות קיצונית, המובילה לשינויים בצמיחת הריאות ולהשפעות התפתחותיות ארוכות טווח. הפתוגנזה של הפרעת אישיות גבולית היא רב-גורמית, כולל הנשמה מכנית, היפראוקסיה ודלקת כמניעים העיקריים להתפתחותה. נכון לעכשיו, אין טיפול להפרעת אישיות גבולית. במחקר זה, מוצג מודל חזרזיר חדש אפשרי וניתן לשחזור של פגיעה ריאתית חריפה (ALI), המחקה את הגירויים הקליניים העומדים בפני הריאה המוקדמת האנושית. מודל חזרזירי היילודים מרובה ההיטים של ALI - המשלב דלדול פעילי שטח, היפראוקסיה, אוורור בלחץ גבוה ומתן ליפופוליסכריד תוך קנה הנשימה (LPS) גורם לפגיעה בחמצון, הפרעות בתפקוד הריאות, דלקת עם הסננת נויטרופילים ופגיעה ריאתית היסטולוגית. היתרונות העיקריים שלו הם שימוש בגירויים מזיקים הידועים כמניעים פתוגנזה של הפרעת אישיות גבולית ותחזוקה נמוכה שלה. הוא מייצר ALI בנאמנות גבוהה, העומד בקריטריונים של האגודה האמריקאית לרפואת חזה. מודלים של בעלי חיים גדולים, כמו מודל חזרזיר זה, הם קריטיים להבנת גורמים פתוגניים מוקדמים, זיהוי מטרות טיפוליות והקלה על תרגום קליני למטופלים.

מבוא

פגות קיצונית היא גורם מוות עיקרי בילדים לפני גילחמש שנים. הסיבוך החמור השכיח ביותר של פגות הוא דיספלזיה ברונכופולמונרית (BPD), מחלת ריאות כרונית, עם תורמים רב-גורמיים כולל דלקת, מתח חמצוני מהיפרוקסיה וטראומה הנגרמת על ידי מכונת הנשמה2. מיקרו-סביבה זו מובילה לפגיעה בצמיחת הריאות, שיכולה להשפיע לאורך זמן על הגדילה וההתפתחות של פגים3. נכון לעכשיו, אין טיפול להפרעת אישיות גבולית.

סקירה שיטתית שנערכה לאחרונה על השימוש בתאי סטרומה מזנכימליים כטיפול פוטנציאלי להפרעת אישיות גבולית מצאה שנתונים פרה-קליניים היו אך ורק במכרסמים4. תופעה זו נפוצה בהתחשב בזמינות הרחבה, קלות השימוש והתחזוקה של דגמי מכרסמים. עם זאת, שכפול מחקרים במודלים של בעלי חיים גדולים הוא קריטי כדי להבטיח הצלחה במאמצי התרגום לטיפולים חדשים ועתידיים לפגים. ניסויים קליניים רבים נכשלים בגלל מחקרים פרה-קליניים לא מספקים5, מה שמאט את פיתוח הטיפול לחולים. בעוד ששימוש במודל פרימטים לא אנושיים הוא מודל פרה-קליני מועדף להנחת היסודות לניסויים קליניים בבני אדם, הוא מייגע, יקר ואינו נגיש בקלות. מודל חזרזיר היילודים הוא יתרון, עם שימוש בתרופות וציוד הדומים לטיפול בילודים, המחקה את סביבת הטיפול הנמרץ הקליני בילודים, מה שמוביל להיתכנות משופרת לתרגום קליני. יתר על כן, מערכת החיסון של ריאות החזיר דומה מאוד לזו של בני אדם 6,7,8,9, וחולקת יותר מ-80% מהשונות הגנטית של קולטן דמוי טול 4 10, כאשר מקרופאגים מגיבים לליפופוליסכרידים (LPS)11,12 וייצור תחמוצת החנקן13 - תורמים פוטנציאליים לדלקת בריאה האנושית14. יתר על כן, פעילי שטח ריאה שמקורם בחזיר הוא טיפול מבוסס קליני המשמש למחלת ריאות חריפה בפגים15.

פרוטוקול זה מציג את הדור של מודל חדש של פגיעה ריאתית חריפה (ALI) של בעלי חיים גדולים ליום אחד בחזרזירים שזה עתה נולדו עם תוצאות עקביות, סטנדרטיות וניתנות לתרגום בהתאם לקריטריונים של האגודה האמריקאית לרפואת חזהALI 16,17,18. שטיפת ריאות חוזרת ונשנית של מי מלח לדלדול פעילי שטח עם אוורור בלחץ גבוה ולאחר מכן LPS או חשיפה רעילה אחרת שימשו בחזירים בוגרים כדי לגרום לפגיעה ריאתית18. עם זאת, דגמים דומים הזמינים בחזירונים בילודים הם נדירים19,20. פרוטוקול זה מתאר כיצד לגרום לפגיעה ריאתית עם פרוטוקול מותאם של שטיפת ריאות של דלדול פעילי שטח 21,22,23 תחת אוורור היפראוקסי ולחץ גבוה, ואחריו טריגר דלקתי באמצעות LPS המוזרק ישירות לריאות. מודל זה מוכן למתן טיפול בחירה מקומי (תוך-קנה - IT) או מערכתי (תוך ורידי - IV) לאחר הפגיעה הריאתית המושראת, עם ניטור השפעתו במשך 5 שעות. המסגרת הכוללת מחקה מקרוב את מצב ריאות הפגים. דלדול פעילי השטח משחזר את תסמונת מצוקה נשימתית, המאופיינת במחסור בחומר פעילי שטח בלידה. מחלה זו יכולה להיות קשורה לבעיות ברוטראומה, אטלקטוטראומה וחמצון הדורשות רמות גבוהות של חמצן והנשמה מכנית. לבסוף, רוב הפגים נולדים בסביבה דלקתית עקב כוריואמניוניטיס או זיהום, מאפיינים שניסו לשכפל על ידי מתן LPS במודל חזרזיר זה. מודל מרובה פגיעות זה של ALI יוצר גירויים קליניים דומים העומדים בפני הריאה המוקדמת האנושית אשר יציעו תובנות יקרות ערך לגבי תהליכים פתוגניים מוקדמים של הפרעת אישיות גבולית ואופטימיזציה פוטנציאלית של מתן טיפול לתרגום קליני יעיל24.

פרוטוקול

כל הניסויים מבוצעים על ידי צוות מוסמך בהסכמה לתקנות הלאומיות והמוסדיות (https://ccac.ca/en/guidelines-and-policies/) לאחר אישור הוועדה האזורית לטיפול בבעלי חיים והשירות הווטרינרי לטיפול בבעלי חיים (פרוטוקול OHRIe-3731). חזרזירים שזה עתה נולדו משני המינים, בני 0-3 ימים, עם גזע מעורב של יורקשייר, לנדרייס ודורוק שימשו לדגם זה. תיאור מפורט של השלבים (מספר השלב המזוהה בסוגריים) להכנה, הרדמה, ניהול נוזלים ותרופות וניטור המשמשים לכל אורך הניסוי (1-3), פרוצדורות כירורגיות (4) כולל תקופת ייצוב (5) לפני גרימת הפגיעה הריאתית מרובת הפגיעות (7), עם תצפית לאחר הפציעה ואוורור תחזוקה (6, 8) המסתיימים בהמתת חסד והשלמת הניסוי (10). מוצג גם הליך סטנדרטי אופציונלי לטיפול תוך-קנה (9). הזמן הכולל מהחווה ועד סוף הניסוי ואיסוף הדגימות הוא כ-12-15 שעות. הריאגנטים והציוד המשמשים במחקר זה מפורטים בטבלת החומרים.

1. הכנה לניסויים

  1. הפעל וכייל את המוניטורים ואת מכונת ההנשמה לפני הגעת החזרזיר. ודא שכרטיסי זיכרון מוכנסים לצג לצורך הקלטת נתונים שוטפת במהלך הניסוי.
  2. הגדר את מכונת ההנשמה עם לחץ שאיבה שיא (PIP) של 15 סמ"ש2O, לחץ נשיפה חיובי (PEEP) של 6 ס"מ H2O, זרימת שאיפה של 8 ליטר לדקה, קצב נשימה (RR) של 30 לדקה, זמן שאיבה (Tinsp) של 0.4 שניות, חלק של חמצן בהשראה (FiO2) של 1.0 וחבר מעגל אוורור ומכשיר אדים חדשים.
  3. הכן חבילות כירורגיות סטריליות, וילונות, חומרים מתכלים (כולל תרופות - ראה טבלת חומרים), קטטרים ואת ה-CRF המודפס. הגדל את טמפרטורת חדר הניתוח ל-25 מעלות צלזיוס ומעלה לפי הצורך על ידי צוות המחקר. הפעל את שמיכת החימום/מזרן מים ל-39 מעלות צלזיוס. הכן מערכת חימום אוויר מאולץ המוכנה לשימוש אם נדרשת ויסות טמפרטורה נוסף.
  4. יש להניח שקית של 1 ליטר של מי מלח רגילים באמבט מים חמים (39 מעלות צלזיוס) כדי להכין את שטיפת הריאות.
  5. הקימו משאבות עירוי תרופות (קטמין ופרופופול) והוסיפו שקיות חדשות של טבעות חלב ודקסטרוז בטמפרטורת החדר למשאבות נוזלים.
  6. חזרזיר נשאר עם הזרע בחווה המקומית ויש לו גישה חופשית אליו עד שהוא נאסף על ידי חבר צוות המחקר. שימו לב למין, לגיל, לגודל ההמלטה ולזמן הלידה.
    הערה: ברכב הובלה אוניברסיטאי מאושר עם נהג מוסמך, חבר צוות מנוסה נוכח לאורך כל ההובלה. החזרזיר מונח במנשא רך גדול וסגור, המאפשר לחזרזיר לנוע בבטחה, בחופשיות ולשכב בצורה בלתי מוגבלת (עם כרית חום מגומי מים חמים עטופה בשמיכות במידת הצורך). זה מבטיח שהחזרזיר יישאר רגוע (לעתים קרובות נרדם) בסביבה מרגיעה זו. המנשא המכיל את החזרזיר מאובטח במקומו באמצעות חגורת הבטיחות. לחבר הצוות יש תפקיד להרגיע את החזרזיר ברכות ולהימנע מרעשים חזקים כדי לשמור על רמת הלחץ של החזרזיר למינימום.
  7. עם ההגעה למוסד המחקר, יש לצמצם את הרעש למינימום ולהחזיק בעדינות את החזרזיר תוך הנחת חרוט האף המרדם על פניו.

2. הכנת בעלי חיים

הערה: סעיף זה כולל זירוז ותחזוקה של הרדמה (בהתאם לפרוטוקולים שאושרו על ידי המוסד).

  1. התחל זרימת O2 ללא איזופלורן בעת הנחת חרוט האף במקומו. כאשר החזרזיר רגוע, התחל איזופלורן והגדל עד למתן איזופלורן 3% (כ -60 שניות). עקוב אחר הנשימה בזהירות והתאם איזופלורן בהתאם.
  2. ודא את חוסר התגובה של החזרזיר באמצעות צביטה בבוהן קשה.
  3. ברגע שהחזרזיר אינו מגיב, שקלו ומדדו אותו למינון תרופתי מתאים.
  4. הזרקת בופרנורפין HCL (0.04 מ"ג/ק"ג) דרך מסלול תוך שרירי (IM) עם מחט של 25 גרם ברגל האחורית לשיכוך כאבים.
  5. חבר את אוקסימטר הדופק לפרסה הימנית העליונה (קדם צינורית), שרוול לחץ דם לא פולשני (עד לניתוק עורק הירך) ומובילי א.ק.ג.
  6. הכנס 24 גרם אנגיוקטים לשתי האוזניים. חבר ערכות הארכה בגודל 6 אינץ' עם פקקי עצירה ל-4 כיוונים. תמכו באוזן עם מדכא לשון כדי למנוע חסימת מיקום.
  7. השג דם מצנתר האוזן המוחדר למדידת גלוקוז בדם (BG) עם גלוקומטר מכויל לפי הוראות היצרן.
  8. יש להתחיל עירוי D5W תוך ורידי (IV) ב-5 מ"ל/ק"ג/שעה ולהתאים בהתאם לרמות הגלוקוז בדם כדי לכוון לרמת סוכר של 4-5 ממול/ליטר.
  9. מתן זריקות בולוס של משככי כאבים/הרדמה בווריד האוזן השנייה.
    הערה: נדרשת הבנה קריטית של המאפיינים ותופעות הלוואי של תרופות אלו לשימוש אופטימלי ובטוח בהן.
    1. יש לתת בולוס של 2 מ"ג/ק"ג IV של קטמין מדולל (10 מ"ג/מ"ל) ובולוס של 5 מ"ג/ק"ג IV של פרופופול (10 מ"ג/מ"ל, 1%) הניתן במספר בולוסים בנפח קטן יותר. היזהרו מהאפשרות של דום נשימה לאחר בולוס של פרופופול. המשך במתן זהיר של בולוסים של פרופופול (בסך הכל 5 מ"ג/ק"ג) עד שהחזרזיר אינו מגיב לבדיקת הצביטה בבוהן הקשה ועירוי פרופופול מתמשך.
    2. הפסק את האיזופלורן (לאחר תחילת עירוי פרופופול לווריד) והמשך בהרדמה IV רציפה לאורך שאר הניסוי.
  10. התחל עירוי רציף של משטר ההרדמה הבא עם טיטרציה זהירה המבוססת על קצב הלב ולחץ הדם, כולל רפלקס נסיגה כדי להגיע לעומק הניתוחי היציב של ההרדמה:
    1. פרופופול (10 מ"ג/מ"ל) בקצב של 10-30 מ"ג/ק"ג/שעה (שווה ערך ל-1-3 מ"ל/ק"ג/שעה) IV.
    2. קטמין (100 מ"ג/מ"ל) בשיעור של 5-10 מ"ג/ק"ג/שעה (שווה ערך ל-0.05-0.1 מ"ל/ק"ג/שעה) IV.
      הערה: קווי עירוי משככי כאבים/הרדמה מחוברים לצנתר האוזן הנגדי של עירוי D5W. ייתכן שתידרש התאמה לצריכת הנוזלים הכוללת ולטמפרטורת הסביבה כדי להבטיח תמיכה והומאוסטזיס מתאימים.

3. נוזלים, תרופות וניטור

הערה: סעיף זה מספק מידע כיצד לשמור על הידרציה, אספקת גלוקוז, שיכוך כאבים/הרדמה, ולהבטיח סקירה נאותה של נתוני ניסוי, חששות או בעיות.

  1. ודא שקצב עירוי הנוזל המשולב הכולל (LRS ו-D5W) IV להומאוסטזיס הוא בדרך כלל 5-8 מ"ל/ק"ג/שעה.
    1. יש לתת D5W לצנתר ורידי באוזן במהירות של 5-10 מ"ל לשעה (מותאם מדי שעה על סמך ערכי גלוקוז בדם העורקי (BG) - יעד 4-5 ממול/ליטר).
    2. יש לתת LRS דרך הצנתר הוורידי של עצם הירך בקצב של 1-6 מ"ל/ק"ג/שעה כדי לשמור על הומאוסטזיס נוזלי. כדי למנוע קרישה של גישה עורקית וורידית כאחד, חבר שקית עירוי NS בלחץ למתמר, ושמור על לחץ בין 250-300 psi.
    3. הקפידו על עומק הרדמה כללית ושיכוך כאבים נאותים לאורך כל הניתוח ולפני תחילת תקופת הייצוב (שלב 5.1) והשראת הרפיית שרירים.
  2. מעקב אחר הפרמטרים השונים (עבודה במשרה מלאה לאדם אחד לאורך כל הניסוי).
    הערה: ניטור ותיעוד של סימנים חיוניים, הגדרות מכונת הנשמה, התערבויות, דגימות שנלקחו, תרופות, עם מינונים וזמנים, ב-CFR מודפס שהוכן מראש (ראה קובץ משלים 1) במהלך כל הניסוי. הנתונים הרציפים המוקלטים ממד הלחץ וממכונת ההנשמה נשמרים בסוף הניסוי לניתוח מאוחר יותר.
    1. עקוב אחר ריווי החמצן (SpO2) - ודא אות אוקסימטר דופק קדם-דוקטי (פרסה עליונה ימנית).
    2. עקוב אחר הדופק (HR) - חבר את מובילי האק"ג לחזרזיר.
    3. כדי לפקח על הטמפרטורה, הכנס את מדחום פי הטבעת המשומן בעומק 3-4 ס"מ ואבטח אותו לזנב בעזרת סרט. שמור על טמפרטורת פי הטבעת של החזרזיר על 38-39 מעלות צלזיוס על ידי התאמת כרית החימום וטמפרטורת החדר הסביבתית (25 מעלות צלזיוס). אם אתה משתמש במקור חימום חשמלי, ודא ששמיכה נוספת מונחת בין החזרזיר לשטיח החימום כדי למנוע כוויות.
      הערה: השתמש במקור התחממות נוסף כגון מערכת חימום אוויר מאולץ (כגון שמיכה המונחת מעל החזרזיר) אם הומאוסטזיס הטמפרטורה אינו מושג כראוי.
    4. עבור לחץ הדם, בצע ניטור לא פולשני עם שרוול בגודל מתאים עד לאחר הניתוח, ולאחר מכן קבע את לחץ הדם הפולשני, כולל לחץ עורקי ממוצע (MAP) ולחץ ורידי מרכזי (CVP), ותעד על ה-CRF.
      הערה: ודא שכיפות מתמר עורקי וורידי ממוקמות ומאופסות בגובה הלב לקריאות מדויקות.
    5. בצע דגימת דם בנקודות זמן מוגדרות מראש באמצעות צנתר עורקי מרכזי או ורידי. בצע ניתוח גזי דם של 0.1 מ"ל דם עורקי הפריני באמצעות מנתח דם נייד (מכשיר שיכול להעריך במינימום pH, PCO2, PO2, HCO3, BE, BG, לקטט, קריאטינין, Na, K, Cl - יש לציין ב-CRF) כדי לנהל אוורור ובקרה מטבולית לאורך כל הניסוי.
    6. לבצע דגימה ביולוגית לניסויים וניתוח עתידיים: לאסוף דם מלא, פלזמה ושתן מתמשכים בנקודות זמן רלוונטיות במהלך פרוטוקול הניסוי, בהתאם למטרות המחקר. אסוף גם דגימות נקודת קצה, כולל נוזל שטיפת סימפונות (BALF), רקמת ריאות ורקמות אחרות16,17, כרלוונטיות למטרות המחקר.
      1. הגבל אנמיה יאטרוגנית והיפווולמיה:
        1. שאב לאט (שווה ערך פי שלושה מנפח השטח המת) דם במזרק, הניח בצד ושאב מספיק נפח לניתוח ניסיוני עתידי (0.4-1.5 מ"ל)25 כגון סמני עקה דלקתית וחמצונית. התאם את נפחי הדגימה למשקל הגוף, רמת ההמוגלובין ויציבות החזרזיר.
          הערה: דם החלל המת מוחזר לבעל החיים, והקו נשטף במי מלח בנפח שווה ערך לפחות שנלקח לדגימת דם (גז דם ± דם לניסויים עתידיים) כדי לנקות את קו הדם, מה שמגביל את החסימה האפשרית עקב קריש דם.
    7. רשום את כל המדדים החיוניים והפרמטרים הנשימתיים ב-CRF במרווחי זמן קבועים כל 15-30 דקות, בתדירות גבוהה יותר במהלך השראת הרדמה וניתוח, או אם החזרזיר אינו יציב.
    8. שימו לב לשינויים בתרופות מתחילת ההרדמה לאורך כל הניסוי על ידי ציון שעת ההתחלה והסיום וכן שינויים במינון.
    9. העריכו את עומק ההרדמה על ידי הערכת צביטה בבוהן/פס כלילי לרפלקס נסיגה בתחילה בתדירות קבועה. לאחר השגת הרפיית שרירים מלאה, עקוב אחר קצב הלב ולחץ הדם להמשך הערכת עומק ההרדמה.
    10. כוונו לדברים הבאים, אם לא נאמר דבר אחר, לאורך כל הניסוי: HR: 120-180 פעימות לדקה, MAP: 50-80 מ"מ כספית, CVP: 3-10 ס"מ H2O, טמפרטורת גוף: 38-39 מעלות צלזיוס, BG: 4-5 ממול/ליטר, PaCO2: 35-45 מ"מ כספית, התאם RR (מקסימום 60 נשימה/דקה), נפח גאות (VT): 7 מ"ל/ק"ג, כוונן את ה-PIP.

4. הליך כירורגי (זמן: ~30-40 דקות)

  1. שמור על אוורור במהלך הניתוח.
    1. שמור על RR של 30 נשימות לדקה, כוון את ה-VT הנשיפה ב-10 מ"ל/ק"ג מותאם על ידי PIP, PEEP קבוע של 6 סמ"ש2O,T insp של 0.4 שניות ו-FiO2 ב-1.0.
  2. הקמת שדה סטרילי על ידי ביצוע קרצוף עור אספטי מועדף בצוואר לטרכאוטומיה ומפשעה לגישה לכלי הירך באמצעות טכניקות קרצוף סטנדרטיות.
    1. בצע את חתך הצוואר.
      1. בצע חתך עור בצוואר בעזרת אזמל בין הסחוס הקריקואיד לחריץ החזה (גודל משוער של 10 ס"מ). השתמש בדיסקציה קהה כדי לבודד את קנה הנשימה.
      2. השחילו שני קשרי טבור בגודל 12 אינץ' מתחת לקנה הנשימה.
      3. בצע חתך של 5 מ"מ בין טבעות קנה הנשימה לחלק הקדמי ביותר של קנה הנשימה, ממש מתחת לסחוס הקריקואיד. הכנס את הצינור האנדוטרכיאלי (ETT). קשרו את הקשר הראשון על גבי קנה הנשימה הקרוב ביותר לחתך.
      4. נפח את שרוול ה-TT, משוך בעדינות את ה-ETT עד שהשרוול נעצר על ידי העניבה. הדק את התיקו הראשון, והבטיח תיקו שני ל-ETT. שיטה זו מבטיחה שהקצה נמצא מעל הקרינה, מאושר על ידי האזנה של צלילי נשימה סימטריים ודו-צדדיים.
        הערה: סימפונות האונה הימנית של הגולגולת מתעוררים קרוב להתפצלות קנה הנשימה. היזהר מחסימה של סימפונות אלה אם ה- ETT ממוקם עמוק מדי. אם מתרחשות בעיות באוורור או שינויים פתאומיים, שקול להתאים את הצינור. תא המטען הוואגוסימפתטי ועצבי הגרון שוכנים באזור זה של הצוואר. יש לנקוט בזהירות כדי למנוע גירוי או פגיעה בעצבים אלה.
    2. בצע את החתך במפשעה.
      1. למשש את עורק הירך, לבצע חתך עור שטחי במפשעה הימנית בעזרת אזמל (כ-8-10 ס"מ).
      2. השתמש בדיסקציה קהה כדי לבודד את עורק הירך והווריד.
      3. השחילו שני תפרים (3.0 משי) מתחת לכל אחד מעורק הירך והווריד כדי לבודד אותם26. הכן צנתרים להחדרה.
        1. לצנתור וריד הירך הימני, הרם את שני התפרים כדי לחסום כל זרימת דם. קושרים את וריד הירך הדיסטלי לאתר ההחדרה המוצע.
          1. הכנס את הצנתר במלואו, משוך מעט לאחור את הסטילט וקשר את העניבה הדיסטלית כדי להדק את הצנתר במקומו. הסר את הסטילט והצמד את סט ההארכה בגודל 6 אינץ' עם פקק תלת כיווני שהוכנס למי מלח.
          2. לפני אבטחת הקטטר, יש לשאוב כמות קטנה של דם כדי להבטיח סבלנות. אבטח את הקטטר בכלי הדם באמצעות עניבת התפר הפרוקסימלית, ומנע מהקטטר להחליק החוצה.
          3. חבר את היציאה המשנית לאספקת נוזל תחזוקה ועירוי תרופות. חבר את היציאה הראשית ללחץ ורידי מרכזי.
        2. עבור צנתור עורק הירך הימני, השתמש באותם שלבים בעורק הירך כמו עבור הווריד המתואר בשלבים 4.2.2.3.1.1 עד 4.2.2.3.1.3.
          1. חבר את היציאה הראשונה של תא העצירה התלת-כיווני לניטור לחץ דם פולשני ואבד חתכים במפשעה ובצוואר בעזרת סיכות כירורגיות.
    3. בצע את החדרת קטטר שלפוחית השתן העל-ערובית לגישה למתן שתן.
      1. שלפוחית השתן ממוקמת באופן שטחי בבטן התחתונה, מעט משמאל לקו האמצע הסגיטלי. נקו את הבטן בטכניקה אספטית.
      2. הכנס צנתר אנגיו-צנתר סטרילי 18 גרם (2 אינץ') במקביל לדופן הבטן, גולגולת לזוג הפטמות התחתון (5-6 ס"מ מתחת לטבור), מכוון לכיוון הטבור ואילו ביד אחת, הפעל לחץ קל משני צידי שלפוחית השתן כדי לייצב ולהגדיל מעט (פרוטוקול אופציונלי לשאיפה על-ערובית ניתן למצוא במקום אחר27).
      3. לאחר אישור זרימת השתן, הדביקו את הקטטר לבטן כדי להבטיח את מיקומו. חבר סט הארכה בעל קדח גדול לקטטר. הנח את הקצה הדיסטלי בצינור של 50 מ"ל הממוקם מתחת לבעל החיים.

5. ייצוב וגיוס ריאות סטנדרטי לאחר הניתוח (זמן: ~30-60 דקות)

הערה: הייצוב מתחיל עם השלמת כל ההליכים הכירורגיים. עומק שיכוך כאבים/הרדמה מספיק חיוני לפני הרפיית שרירים, מכיוון שהוא מבטיח שגורמים חיוניים, כגון MAP ו-HR, נמצאים בטווח התקין ובהיעדר רפלקסים נסיגה. MAP ו-HR ינוטרו באופן רציף לאורך כל הפרוטוקול כדי להבטיח עומק הרדמה מתאים.

  1. יש לתת רוקורוניום (0.3 מ"ג/ק"ג) בולוס IV (דרך גישה לווריד האוזן D5W) וליזום עירוי רציף של רוקורוניום (5.5 מ"ג/ק"ג/שעה) להרפיית שרירים לפני תמרון גיוס הריאות. עירוי זה יימשך למשך כל הניסוי כדי לתקנן את הליך השטיפה ולמנוע אסינכרוני עם מכונת ההנשמה.
  2. בצע תמרון גיוס ריאות סטנדרטי.
    1. עלייה בשלבים של PEEP: התחל ב-PEEP 6 ס"מ H2O, עלה ב-1 ס"מ H2O כל דקה עד להשגת PEEP 10 ס"מ H2O. התאם את PIP כדי לשמור על VT 10 מ"ל/ק"ג.
    2. הישאר ב-PEEP 10 סמ"ש2O למשך 2 דקות לפני שתחזור ל-PEEP 6 ס"מH 2O באופן הפוך (כמו בשלב 5.2.1) תוך שמירה על VT 10 מ"ל/ק"ג.
    3. כאשר הוא יציב ב-VT 10 מ"ל/ק"ג ב-PEEP 6 ס"מ2O, רשום את הגדרות הנשימה, הפרמטרים הפיזיולוגיים וקח גז דם עורקי (נקודת זמן VT 10 מ"ל/ק"ג ב-CRF).
      1. ודא ש-PaO2 הוא >400 מ"מ כספית (תגובה צפויה להיפראוקסיה בבעל חיים עם ריאות בריאות). FiO2 1.0 משמש בשלבים הראשונים של הניסוי כדי להבטיח תגובה מתאימה להיפראוקסיה כקריטריון הכללה.
      2. אם לא מגיעים לאפשרות זו:
        1. בדוק את מיקום הצינור האנדוטרכיאלי, הגדרות מכונת ההנשמה, אספקת חמצן וטכניקת דגימת דם נכונה. חזור על תמרון גיוס הריאות פעם אחת כדי להבטיח גיוס נכון.
        2. אם עדיין לא השתפר, יש להוציא את בעל החיים ולהמית אותו מיד (בהתאם לפרוטוקולים שאושרו על ידי המוסד) עקב בעיה מהותית פוטנציאלית של הריאה (ריאה לא בריאה מחשיפה קודמת לא ניסויית - כלומר, בחווה).
      3. כוונן את ה-RR כדי לשמור על PaCO2 בין 35-45 מ"מ כספית.
      4. הורד את ה-PIP כדי להגיע ל-VT 7 מ"ל/ק"ג, תוך שמירה על FiO2 1.0 ו-PEEP 6 סמ"ק2O.
      5. לאחר הייצוב, רשום קריאות בסיס של נקודת זמן עבור VT 7 מ"ל/ק"ג על גיליון ה-CRF עם פרמטרים פיזיולוגיים ודגימות, כולל גז דם עורקי וורידי. הייצוב כולל סימנים חיוניים, כמו בשלבים 3.2.10, וערכי גז בדם של: PaO2: 400-500 מ"מ כספית, PaCO2: 35-45 מ"מ כספית, pH: 7.35-7.45, BG: 4-5 ממול/ליטר.

6. אוורור לבעלי חיים בקרה

  1. השתמש באוורור מבוקר נפח עם נפח גאות של 7 מ"ל/ק"ג, PEEP של 6 סמ"ק2O ו-FiO2 של 1.0. אין לגרום לפגיעה ריאתית בחיות ביקורת (כלומר, אין לבצע דלדול פעילי שטח או החדרת אנדוטוקסין).
  2. המשך אוורור במשך כ-90 דקות כדי להתאים למשך הממוצע הנדרש כדי לגרום לפגיעה ריאתית בחיות ניסוי (ראה שלב 7 ואיור 1). לאחר תקופה זו, המשך ישירות לשלב 10.

7. אינדוקציה של פגיעה ריאתית חריפה (מודל רב פגיעות)

  1. לבצע דלדול פעילי שטח (זמן: 1-2 שעות)
    1. לפני תחילת שטיפת הריאות, הפעל את מכשיר היניקה וודא שהוא מוכן לשימוש. הנח את דלי איסוף השטיפה במקומו. מקם רפידות סופגות מתחת לראש החיה ומתחת לשולחן הניתוחים כדי ללכוד את כל הנוזלים שדלפו והתאוששו במהלך השטיפה.
      1. שקלו את הרפידות לפני ואחרי השטיפה. הגדר את המאוורר ל-PEEP 5 ס"מ2O, PIP 25 ס"מ2 O,RR 25 לדקה ו-FiO2 1.0. שמור על הגדרות אוורור מבוקרות לחץ אלה לאורך כל הליך השטיפה. צפו לירידה ב-VT בכ-35%-45% במהלך השטיפה המלאה.
    2. נתק את מעגל האוורור מה-ETT וחבר את מנגנון משפך השטיפה (ראה משלים file 1).
    3. יש להחדיר 30 מ"ל/ק"ג של מי מלח איזוטוני חמים (NS) לריאות על ידי שפיכה עדינה של NS לתוך המשפך המוחזק כ-30 ס"מ מעל החזרזיר.
    4. עסו את כלוב הצלעות על ידי לחיצה דו-צדדית על ההיבט הצדדי כדי לספק "לחיצה" מכנית. עזרו להעביר מי מלח לריאות ולהזרים אותם בתוך מנגנון השטיפה. אפשר 2-3 שניות בין עיסויים.
      הערה: הימנע מעיסוי מהיר מדי או לאט מדי כדי למנוע הסרה לא מספקת של חומרים פעילי שטח או פגיעה בהחזרת ורידים. אין לחרוג מ-30 שניות לסבב שטיפה.
      1. הסר את נוזל השטיפה על ידי הורדת המשפך מתחת לחזרזיר. נתק מעט את המשפך מה- ETT כדי לאפשר לנוזל להתנקז לדלי האיסוף שעל הרצפה.
      2. בצע יניקה אקטיבית לא יותר מ -10 שניות. הכנס את קטטר היניקה לתוך ה-ETT תוך המשך עיסוי כלוב הצלעות כדי להקל על ניקוז הנוזלים. עקוב אחר MAP ו-HR, וחבר מחדש את האוורור מוקדם אם אחד מהפרמטרים יורד משמעותית.
      3. חבר מחדש את מעגל האוורור. אם נשאר עודף נוזלים ב-ETT, בצע יניקה שנייה.
    5. אפשר לחזרזיר להתאושש לפחות 3 דקות בין סבבי שטיפה כדי להפחית את הלחץ ואת הסיכון לחוסר סובלנות.
    6. התחל את סבב השטיפה הבא ברגע ש-SpO2 יחזור ל-100%. אם SpO2 לא חוזר ל-100%, בדוק את PaO2באמצעות גז דם לאחר ש-SpO2 התייצב
      1. אם PaO2 >100 מ"מ כספית - חזור על שטיפת הריאות (שלבים 7.1.2-7.1.6).
      2. אם PaO2 <100 מ"מ כספית - המתן 15 דקות תוך שמירה על הגדרות אוורור השטיפה, ולאחר מכן חזור על ניתוח גזי הדם.
      3. אם PaO2 >100 מ"מ כספית - המשך בשטיפה והמשך לשלב 7.1.6 כדי להעריך מחדש את היקף הפגיעה.
    7. ודא שפגיעה בדלדול פעילי שטח מושגת כאשר PaO2 נשאר <100 מ"מ כספית למשך 15 דקות. עצרו את השטיפה והמשיכו לשלב הבא.
  2. החדרת אנדוטוקסין תוך קנה הנשימה (זמן: 15 דקות)
    1. הכן ליפופוליסכריד (LPS) מ- Escherichia coli (1.5 מ"ג/ק"ג) על ידי דילול ב- NS לנפח כולל של 2 מ"ל במזרק של 3 מ"ל.
      הערה: בחר זן ומינון בהתאם לצורך, תוך הכרה בשונות פוטנציאלית תלוית זן.
    2. המתן 15 דקות לאחר שטיפת הריאות האחרונה, ולאחר מכן החדיר LPS תוך קנה הנשימה (IT) כשהחזרזיר במצב שכיבה.
    3. שפר את התפלגות ה-LPS ההומוגנית בריאה האטלקטית באמצעות השלבים הבאים:
      1. החלף את קצה ה-ETT הסטנדרטי במתאם יציאת Y כדי לאפשר אוורור ומתן LPS בו זמנית באמצעות קטטר דרך יציאת הצד עם השסתום.
      2. החל PEEP של 10 ס"מ H2O למשך דקה אחת. התאם את PIP כדי לשמור על VT של 7 מ"ל/ק"ג והגדר את RR ל-40 נשימות לדקה.
      3. הכנס קטטר דרך יציאת הצד לתוך ה-ETT לעומק שנמדד מראש כך שהקצה משתרע 1-2 מ"מ מעבר ל-ETT.
      4. הזריק את ה-LPS דרך הצנתר. שטוף את הצנתר עם 1 מ"ל NS ואחריו בולוס אוויר של 9 מ"ל כדי להבטיח אספקה מלאה.
      5. הסר את הקטטר וסגור את יציאת הצד.
      6. המשך לאוורר עם PEEP 10 ס"מH 2O (התאם את PIP כדי לשמור על VT 7 מ"ל/ק"ג) למשך 3 דקות לאחר מתן LPS.
      7. נתק את מעגל ההנשמה מה-ETT למשך 30 שניות כדי להפוך כל גיוס לא מכוון של רקמת ריאה.
      8. במהלך הניתוק, התאם את הגדרות מכונת ההנשמה ל-FiO2 0.5, PEEP 6 ס"מ2O, PIP כדי לשמור על VT 7 מ"ל/ק"ג, והגדל את RR ל-40-60 נשימות/דקה כדי להשיג PaCO2 של 35-45 מ"מ כספית.
      9. לאחר ייצוב ה-VT על 7 מ"ל/ק"ג, רשום את המדידות הפיזיולוגיות של נקודת הזמן של 0 שעות והשלם את גיליון ה-CRF. התאם RR על סמך PaCO2 מניתוח גזי דם.

8. אוורור במהלך תקופת התצפית (זמן: ~6 שעות)

  1. עבור לאוורור מבוקר נפח עם FiO2 ב-0.5 ו-PEEP ב-6 סמ"ק2O. כוונן את PIP לפי הצורך כדי לשמור על VT ב-7 מ"ל/ק"ג (אל תגדיר PIP מקסימלי). התאימו את ה-RR, עד למקסימום של 60 נשימות/דקה, כדי לשמור על PaCO2 תקין.
  2. השתמש במדידות גזי דם מדי שעה כדי להנחות את התאמות ה-RR לאורך שארית הניסוי. כוונן באופן רציף את PIP כדי לשמור על VT ב-7 מ"ל/ק"ג.
  3. ליישם את פרמטרי האוורור האלה באופן אחיד הן על חיות ביקורת והן על חיות מרובות פגיעות במשך כל תקופת התצפית של 6 שעות (ראה איור 1).

9. הליך טיפול - אופציונלי (זמן: ~10-20 דקות)

  1. למחקרי התערבות פוטנציאליים, העבירו את החומר הטיפולי דרך מסלול רלוונטי מבחינה קלינית כגון תוך-קנה הנשימה (IT), תוך ורידי (IV), תת עורי, תוך שרירי או תוך אף. בחר את תזמון הטיפול על סמך תכנון הניסוי. אם לא ניתן טיפול, דלג לשלב 10. דוגמה לניהול IT ניתנת להלן:
    1. מקם את החזרזיר בשכיבה רוחבית ימנית.
    2. שמור על PEEP ב-6 סמ"ש2O. התאם את PIP כדי להשיג VT של 7 מ"ל/ק"ג.
    3. הכנס את הצנתר לפתח הצד עם השסתום לאורך שנקבע מראש (כמתואר בשלב 7.2.3.3). יש להחדיר מחצית מהמינון או הנפח המיועד של ההתערבות. לאחר מכן יש בולוס של 1 מ"ל NS ו-9 מ"ל אוויר. הגבל את הנפח הכולל ל-2.5 מ"ל/ק"ג כדי למזער את הסיכון לחסימת אוורור לאחר הזרקת הבולוס.
    4. אטום את יציאת הצד עם השסתום עם המכסה כדי למנוע דליפת אוורור.
    5. מקם מחדש את החזרזיר לשכיבה לרוחב שמאל וחזור על שלבים 9.1.3-9.1.4.
    6. החזירו את החזרזיר למצב שכיבה. התאם את PIP כדי לשמור על VT של 7 מ"ל/ק"ג.
    7. המשך באוורור כמתואר בשלב 8.

10. המתת חסד והשלמת הניסוי

  1. בצע את ההקלטות הפיזיולוגיות הסופיות ואיסוף הדגימות לאחר 6 שעות של אוורור במהלך תקופת התצפית (שלב 8).
  2. המתת חסד של בעל החיים עם 120 מ"ג/ק"ג פנטוברביטל נתרן IV (240 מ"ג/מ"ל) הניתן כבולוס (בהתאם לפרוטוקולים שאושרו על ידי המוסד).
  3. הקפידו על מותו של בעל חיים בהיעדר סימנים חיוניים (דופק, לחץ דם ונשימה). האזנה להיעדר דופק וצלילי נשימה עם סטטוסקופ לאישור המוות. המוות מאושר עוד יותר על ידי איסוף רקמות סופניות של הלב והריאות.
  4. אסוף את דגימות הרקמה ונוזלי הגוף להמשך ניתוח ביוכימי, מולקולרי ו/או היסטולוגי14,17 לניסויים עתידיים.
  5. שמור את כל הנתונים בציוד הניטור ובמכונת ההנשמה, ודא שעותקי גיבוי מועלים לכונן המקומי ולכונן המשותף וכבה את כל הציוד.
  6. השלך את כל החומרים החדים/מסוכנים ביולוגית בהתאם להנחיות המדיניות המקומית.
  7. נקה את כל המשטחים עם מוצר החיטוי המועדף.
  8. שוטפים את כל המכשירים ומניחים לייבוש למשך הלילה.

תוצאות

נקודות הקצה של מודל זה תואמות את הקריטריונים של האגודה האמריקאית לבית החזה עבור ALI (מינימום 3 מתוך 4), הכוללים שינויים פיזיולוגיים, היסטולוגיים, דלקתיים ומחסום הנימיםהמכתשית 16,17. ניתן לכלול נקודות קצה נוספות בהתאם למחקר ולפי שיקול דעתה של כל קבוצת מחקר המעוניינת ליישם מודל זה. פגיעה ריאתית בינונית מוגדרת כיחס בין חלק חלקי של חמצן בדם העורקי לחלק החמצן הנשאב (PaO2/FiO2, הידוע גם בשם יחס P/F) <-200 מ"מ כספית, וחמור <-100 מ"מ כספית17. מדד החמצן (OI) מחושב באמצעות הנוסחה הבאה: OI = (לחץ דרכי הנשימה הממוצע (mAWP) * %O2)/PaO2, וערכים בין 8-16 מסווגים כפציעה בינונית28. בהשוואה לחיות ביקורת, חיות מרובות פגיעות הראו פגיעה ריאתית חמורה עד בינונית עקב מדד החמצון הלקוי שלהן, יחס P/F וירידה בתאימות מערכת הנשימה (איור 2). סימנים ברורים של פגיעה היסטולוגית נמצאו באמצעות ציון פגיעה ריאתית היסטולוגית ב-5 מודאליות16,17 (איור 3), עם זרם נויטרופילים בחלל המכתשית והאינטרסטיציאלית, פסולת חלבונית הממלאת את חללי האוויר ועיבוי מחיצת המכתשית. זרם הנויטרופילים ב-BALF מספק אינדיקציה לתהליכים דלקתיים לצד עלייה בציטוקין IL-6 ברקמת הריאה (איור 4).

figure-results-1
איור 1: תרשים זרימה של פגיעה ריאתית חריפה בחזירונים שזה עתה נולדו. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-2
איור 2: ALI בינוני עד חמור נצפה על ידי מעקב אחר הפגיעה מרובת הפגיעות המוצגת בפרוטוקול זה. (A,B) אינדקס חמצון מוגבר (בין 8-12) ויחס PaO2/FiO2 (P/F) נמוך מתקבלים במודל מרובה הפגיעות המוצג כאן (קו אדום) בהשוואה לביקורת (קו כחול), בהתאם לפגיעה ריאתית בינונית עד חמורה. (C) תפקוד הריאות נפגע בחיות מרובות פגיעות, וכאן מוצג כירידה של >50% בהיענות למערכת הנשימה. מספר בעלי חיים (N): ביקורת (N = 5) ורב פגיעות (זן LPS O55: B5, 1.5 מ"ג/ק"ג) (N = 3). כל הערכים שבהם נעשה שימוש פירושם ± SD. לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-3
איור 3: מודל ALI מרובה פגיעות מציג פגיעה היסטולוגית הטרוגנית. (A,B) נצפתה עדות מקרוסקופית לפגיעה ריאתית טלאית המשפיעה באופן מועדף על ההיבט המרכזי האחורי של הריאה מרובת הפגיעות. (ג,ד) תמונות מייצגות (פי 100) של קטעי ריאות מוכתמים בהמטוקסילין ואוזין (H&E) המראים זרימה נויטרופילית במרחב המכתשית והאינטרסטיציאלית, עם עיבוי המכתשית והמחיצה בריאה מרובת המכות. (ה,ו) תמונות מייצגות (400x) של קטעי ריאה מוכתמים ב-H&E מדגישות פגיעה בשלמות המבנית, חדירה נויטרופילית ושקיעה של פסולת בחלל המכתשית של הריאה מרובת הפגיעות. ריבועים כחולים מייצגים את האזור המוגדל ב- (E,F). פס הסולם השחור מייצג 100 מ"מ (C,D) ו-50 מ"מ (E,F). אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-4
איור 4: מודל מרובה פגיעות מראה תגובה דלקתית לאחר ALI. (A) זרם נויטרופילים עם נויטרופילים שמגיע ליותר מ-75% מכלל התאים בנוזל שטיפת הסימפונות (BALF) 6 שעות לאחר פגיעה ריאתית מושרית (רב-פגיעות) בהשוואה לחיות ביקורת. (B) ציטוקין פרו-דלקתי IL-6 מוגבר בנוזל שטיפת הסימפונות (BALF) ו-(C) ברקמת הריאה 6 שעות לאחר השראת ALI. מספר בעלי החיים (N) משתנה עקב החומר הזמין בנקודת הזמן לניתוח. עבור BALF (B), נעשה שימוש בבדיקת אימונוסורבנט מקושר לאנזים, ואילו עבור רקמת ריאה (C), בוצעה טכנולוגיית חרוזי לייזר מולטיפלקס. כל הערכים מוצגים כ-± SD ממוצעים. לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

קובץ משלים 1: טופס ניטור מקרה למודל פגיעה ריאתית חריפה של חזרזיר יילודים. אנא לחץ כאן כדי להוריד את הסרט הזה.

דיון

מודל ALI של חזרזיר יילודים מורכב ממודל מרובה פגיעות הכולל שטיפת ריאות להסרת חומרים פעילי שטח (חיקוי תסמונת מצוקה נשימתית המובילה לאטלקטוטראומה), חשיפה גבוהה לחמצן (המובילה למיני חמצן תגובתיים), הנשמה מכנית (בארו/וולו-טראומה), כמו גם מתן IT של LPS כגירוי דלקתי, המשקף את המרכיבים השונים הנחשבים מעורבים בפתוגנזה של הפרעת אישיות גבולית בפגים2. במהלך תהליך דלדול פעילי השטח, יש עלייה מכוונת בלחץ ובחמצן כדי לתרום לפציעה. החשיפה להיפראוקסיה עם FiO2 1.0 היא כ-3 שעות, ולחץ גבוה מתווסף למשך כ-90 דקות במהלך שלב הפגיעה הריאתית המושרה (שטיפת דלדול פעילי שטח והתקנת אנדוטוקסין). רמות חמצן גבוהות במהלך החייאה (FiO2 0.9 גבוה לעומת FiO2 0.3 נמוך) בתינוקות שנולדו פגים מאוד גרמו לעקה חמצונית ודלקת גבוהות יותר, עם חשיפה להיפראוקסיה פחות משעה29. עם דלדול פעילי שטח במודל החזרזירים, הריאות יקרסו / וכתוצאה מכך אטלקטזיס, והיכולת לשמור על סבלנות המכתשית תפחת לצורך אוורור וחמצון מתאימים. ככזה, למרות שההגדרות מצטמצמות בתקופת התצפית, הסרת פעילי השטח תגרום לצורך בלחץ גבוה יותר על מנת להשיג נפח גאות של 7 מ"ל/ק"ג. הריאות יוכלו לייצר פעילי שטח ככל שהזמן יעבור, והיקף התהליך הפוגעני המתמשך עשוי להצטמצם עם הזמן. עם זאת, מודל חזרזיר יילודים חדש זה של ALI מראה התאוששות מועטה (איור 2) של תפקוד הריאות (תאימות) וחמצון (יחס PF) במהלך תקופת התצפית במשך 6 שעות לאחר הפגיעה הריאתית המושרת. מודל זה דומה מאוד לנסיבות הראשוניות הנפוצות ביותר לאחר הלידה שתינוקות פגים מאוד מתמודדים איתן, מה שהופך אותו לרלוונטי מאוד למאמצי תרגום. המודל יוצר פגיעה ריאתית חריפה בינונית (100-200 מ"מ כספית) עד חמורה (<100 מ"מ כספית) המוגדרת על ידי יחס P/F28. אפקט ה-LPS עם דלקת מגיע לשיא לאחר שעה עד שעתיים לאחר הפציעה30. מודל זה יכול לשמש כפיגום שניתן לתמרן על ידי קבוצות אחרות על ידי שינוי משך התצפית או הטיפול המשמשים לתוכנית המחקר שלהם.

שלבים קריטיים בפרוטוקול

למרות תעדוף הנגישות, מודל בעלי החיים הגדולים הזה נותר מורכב, ודורש צוות מיומן מאוד שיעבוד בשיתוף פעולה כדי להביא את הניסוי הזה לסיומו. ישנם שלבים קריטיים בפרוטוקול הדורשים זהירות יתרה. שיקולים אלה הם קריטיים כדי להבטיח את הצלחתה של מסגרת ניסויית מורכבת זו.

הובלת החיה

ניתוק מוקדם מהאם צפוי להיות תקופה מלחיצה ביותר עבור החיה, מה שעלול להוביל לחוסר יכולת לשמור על יציבות הלב וכלי הדם ולמוות אפשרי במהלך ההובלה. עם זאת, פרוטוקול ההובלה (ראה שלב 3) המוצג כאן איפשר לחיות רגועות מאוד (חלקן אפילו נרדמות), מה שאפשר ניסויים מלאים. אמנם קשה להציע המלצות ברורות לגבי אורך ההובלה המקסימלי, אך החזירונים הצליחו לעמוד בנוחות בהובלה של כ-60 דקות מניסיוננו.

אופטימיזציה של אוורור

יש להגדיר את מכונת ההנשמה כדי לפצות על תאימות המעגל כדי להבטיח שנפח הגאות המלא מועבר לריאות. זה חשוב במיוחד במהלך דלדול פעילי שטח, מכיוון שהחזרזיר יכול להיות לא יציב מבחינה המודינמית אם נפח הגאות והשפל הולך לאיבוד במעגל. החוקרים צריכים לאשר כי מכונת ההנשמה הזמינה תאפשר אספקת נפח גאות מתאים ליילוד. מכונות הנשמה למבוגרים לרוב לא יוכלו להשיג נפחי גאות מתאימים לתינוקות. PIP משמש לשמירה על ערכי נפח גאות נשיפה (7 מ"ל/ק"ג המשמשים בפרוטוקול זה כפי שתואר קודם לכן על ידי אחרים 14,19,20,21,31,32, למעט במהלך שטיפת ריאות - ראה סעיף הבא). השימוש הסטנדרטי במתאם הצינור האנדוטרכיאלי עם יציאת צד שסתום במהלך מתן LPS, או לכל טיפול IT, מאפשר לשמור על לחץ דרכי הנשימה על ידי הימנעות מניתוק ממעגל ההנשמה.

אסטרטגיית גיוס ריאות סטנדרטית לאחר ניתוח

אטלקטזיס יכול להתפתח בריאות החזרזיר בשלבי ההכנה והניתוח. תמרון "גיוס ריאות" לאחר הרפיית שרירים ניתן33 כדי להבטיח אוורור תקין של הריאות. לאחר תמרון הגיוס, הלחץ החלקי של החמצן בדם העורקי צפוי להיות יותר מ-400 מ"מ כספית, בהתחשב בתגובה ההיפראוקסית הרגילה בריאות בריאות ופתוחות. אם זה לא מושג, החוקר צריך לשקול אם הריאות לא גויסו כראוי בגלל תנאי ניסוי לא אופטימליים או אם החזרזיר עשוי להיות במצב קיים (למשל, אם החזרזיר מתקבל מחווה שבה עלולות להתרחש חשיפות לא ידועות). הפרוטוקול מאפשר לבחון את ההסבר הראשון עם התחלה מחדש של תמרון הגיוס פעם אחת כדי לראות אם ניתן להשיג מטרה זו. אם יש כישלון להגיע ל-400 מ"מ כספית של PaO2 בפעם השנייה, קחו בחשבון את הדרת החיה, כמצב קיים שיכול להתקיים, אשר ישפיע באופן לא הולם על תוצאות הניסוי.

יש חשיבות עליונה להומאוסטזיס נוזלי ומטבולי מספיק

זה יגביל את ההשפעות המבלבלות החשובות הקשורות להידרציה לקויה ולשליטה מטבולית. לחזרזירים הללו, שנולדו בדרך כלל לתוך המלטה גדולה, לא תהיה הזדמנות דומה לינוק. ככאלה, הם עשויים להיחשף לרמה מסוימת של התייבשות לאחר הלידה לפני השימוש בהם בניסוי. אספקת צריכת נוזלים כוללת של 5-8 מ"ל/ק"ג/שעה מספיקה כדי לשמור על נפח תוך-וסקולרי טוב14,34. הבטחת שליטה מטבולית מתרחשת עם שמירה על רמת גלוקוז בדם בין 4-5 מילימול לליטר (טווח פיזיולוגי תקין לחזירונים שזה עתה נולדו35,36). לקטט גבוה בדם הוא התייחסות נוספת המשמשת לשקף אספקת חמצן לקויה ועשויה לשקף מצב נוזלים תוך וסקולרי נמוך לפני היפוקסיה. משטר נוזלים מספיק ובעל חיים מיובש היטב עומדים בפני דלדול פעילי שטח, שטיפות עם יציבות לב וכלי דם ואינם מייצרים חמצת חמורה. ערכי הייחוס של המוגלובין ופרמטרים ביוכימיים אחרים משתנים בהתאם לגיל ולמין37,38. המוגלובין נמוך יותר עשוי להשפיע על החמצון, הדורש דגימת דם אופטימלית ושמרנית39,40. כל לקיחת דם מפוצה בנפח שווה של NS. רמות אלקטרוליטים, אוריאה וקריאטינין בדם שימשו כדי להקפיד על משטר נוזלים מספיק.

מתן זמן התאוששות מספיק במהלך הליך שטיפת הריאות

במהלך שטיפת הריאות נדרש חלון התאוששות חשוב של לפחות 3-5 דקות בין כל שטיפה כדי לאפשר החזרה ורידית תקינה כדי למנוע גודש כבד מסוכן41, דימום בכבד ואי ספיקת לב ימנית. תופעה זו נצפתה בכמה בעלי חיים בקבוצת הניסוי. ניהול נוזלים נכון ופרואקטיבי הוא הכרחי לשמירה על היציבות הקלינית. על ידי יצירה מחדש של מסגרת טיפול נמרץ קטנה למודל חזרזיר זה, החשיבות של קלינאי, ניאונטולוג או טכנאי וטרינר בכיר שיכול להקל על תרגום הידע בין חברי הצוות כדי לזהות מצבים חשובים ותוכניות המגירה הקשורות אליהם היא חיונית.

פתרון בעיות מומלץ

החזרזיר יהיה תחת הרדמה כללית ומשככי כאבים במשך כל זמן הניתוח והניסוי. אדם אחד מוקדש לניטור החזרזיר במשך כל הניסוי. כל בעל חיים שונה ברגישותו ובתגובתו לחומרי הרדמה. ניטור מצבו של בעל החיים מיד לאחר השראת ההרדמה עם חיוניים וגז דם לפי שעה הוא קריטי. הוא יספק מידע על רמת ההרדמה והיציבות המטבולית, בנוסף להערכה הגופנית לפי הצורך. קיימת שונות במספר שטיפות הריאות (מ-6 עד 20) ולכן בזמן (בין 28-115 דקות), הנדרש כדי להגיע לדלדול פעילי שטח.

בעיות ופתרונות פוטנציאליים במהלך השראת הרדמה, ייצוב וניתוח: (1) אם מתפתח דום נשימה, יש לכבות את גז ההרדמה, ולתמוך בנשימה עם אוורור מסכת שקית עד להחזרת הנשימה הספונטנית. (2) אם קיימים סימנים של היפווולמיה באמצעות HR גבוה, MAP נמוך או CVP נמוך, יש לתת בולוס נוזלים של 10 מ"ל/ק"ג של NS, ויש לשקול קצב מוגבר של נוזל תחזוקה. (3) כאשר תת לחץ דם עם ירידה ב-MAP ל-30-40 מ"מ כספית, שאינו נפתר עם בולוס הנוזלים, יש להקטין/להפסיק את משאבות ההרדמה, ולהעריך מחדש את סימני הזלוף ויתר לחץ הדם לאחר 10-15 דקות. ניתוח גזי דם לרמות המוגלובין כדי להעריך דימום פנימי אפשרי. (4) אם התסמינים הנשימתיים מצביעים על פנאומוטורקס (דה-רוויה חריפה או ברדיקרדיה >20%), החזרזיר מורדם מיד.

מגבלות

המודל כאן מייצג ALI יילוד לטווח קצר (6 שעות) במודל של חיה גדולה. הכרוניות של פציעה המובילה להפרעת אישיות גבולית היא גורם חשוב שיש לקחת בחשבון. מודל זה עשוי שלא ללכוד במלואו היבט זה של פתוגנזה, ונתונים המודיעים על התקדמות הפגיעה הריאתית מעבר ל-6 שעות נותרו לא נקבעים. עם זאת, העקביות של מודל זה עומדת כבסיס חזק להתבסס עליו (הרחבת הפרוטוקול לאורך/שינוי), מה שמאפשר צדדיות לקבוצות מחקר שיישמו אותו. למרות הדגש שהושם על הנגישות וההיתכנות של מודל בעלי חיים גדולים זה במהלך הרעיון שלו, יש צורך במיומנויות ספציפיות לביצוע חלק של הניסוי. מומחיות קלינית עם בסיס חזק בפיזיולוגיה וידע לניהול שינויים/הידרדרות מהירים באמצעות תרופות/עירוי/וכו' נחוצה ליישום והשלמה מוצלחת בשלבים מוקדמים. לאחר מכן ניתן להעביר את מערך המיומנויות הזה לחברי הצוות לצורך תחזוקה שוטפת של המודל לאורך זמן. בנוסף, צוות המורכב מטכנאי וטרינרי, טכנאי מעבדה וסטודנטים לתארים מתקדמים שאיתם נוצרה תקשורת ושיתוף פעולה חזקים יכול להבטיח כיסוי הולם של כל מרכיבי כל ניסוי. צפוי שלפחות שלושה חברי צוות יידרשו לבצע את הניסוי מתחילתו ועד סופו כאשר זרימת העבודה מותאמת.

משמעות ויישומה הפוטנציאלי

תרגום קליני מסתמך על מחקרים בסיסיים חזקים ברמה הפרה-קלינית. עם זאת, ניסויים קליניים רבים נכשלים בשל חוסר ההתאמה בין המודל הפרה-קליני לפיזיולוגיה האנושית, מה שמדגיש את החשיבות של מודלים של בעלי חיים גדולים קרובים לחיזוק פוטנציאל התרגום. יצירת מודל חדש של חזרזיר יילודים של פגיעה ריאתית הוא קריטי להבנה טובה יותר של אירועים פתוגניים מוקדמים, ומטפח סביבה תומכת להתפתחות הפרעת אישיות גבולית בריאה מוקדמת אנושית. המודל המוצג כאן משחזר היבטים חשובים של מסגרת טיפול נמרץ (היפראוקסיה, הנשמה בלחץ גבוה ומחסור בפעילי שטח) עבור פגים במהלך הימים הראשונים לחייהם, המתוכננת באופן הדוק. מודל רב-תכליתי חדש ורב-תכליתי זה של חזרזירים ילודים יציע תובנה שלא תסולא בפז לגבי תהליכים פתוגניים מוקדמים של הפרעת אישיות גבולית, ידע מתקדם על מועמדים טיפוליים, כמו גם אופטימיזציה של האספקה הטיפולית שלהם לתרגום קליני יעיל. הוא ישמש כווקטור מצוין לשיתופי פעולה, ויטפח מסגרת לבדיקת השערות למחקרי הוכחת היתכנות המשתנים מבטיחות ליעילות, ויצירת ידע. מודל זה, המשמש כבסיס לניסויים עתידיים, יקדם משמעותית את מאמצי התרגום הקליני לפגיעה ריאתית חריפה שנראית בפגים.

גילויים

לכל המחברים האחרים אין אינטרסים מתחרים להצהיר עליהם.

תודות

אנו אסירי תודה לד"ר מרטין פוסט, בית החולים לילדים חולים, טורונטו, שהשאיל לנו בנדיבות מכונת הנשמה ליילודים ששימשה לאורך כל הפרויקט הזה. אנו מודים גם לדן דווט ולצוות שלו בשירות הווטרינרי לטיפול בבעלי חיים, מכון הלב, אוניברסיטת אוטווה, על כל הסיוע במהלך פיתוח המודל הזה. עבודה זו נתמכה על ידי קרן החדשנות CHAMO של CHEO, רשת תאי הגזע, אגודת הנסיכה לוביסה [HKH Kronprinsessan Lovisas förening], קרן דוד ואסטריד הגלן וקרן ריאות הלב השוודית.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
להב סכין #10חתך עור
מזרק של 1 מ"לבקטון דיקסוןBD309659טיפ החלקה  
מזרקים של 10 מ"לבקטון דיקסוןBD302995מזרקי שטיפה לקווים עורקיים וורידיים
18 G אנגיוקטטר אינסייטקנולציית שלפוחית השתן
מזרקים של 20 מ"לבקטון דיקסוןBD302830בולוס נוזל אם יש צורך
מחטים היפודרמיות של 22 גרםבקטון דיקסוןמזרק מילוי
אנגיוקטטרים של 24 Gאינסייט160465גישה ל-IV באוזן ועורק וריד ירך
מחטים היפודרמיות של 25 גרםבקטון דיקסוןהזרקת בופנאורפין תוך-שרירית (IM)
מזרקים של 3 מ"לבקטון דיקסוןהסרת קו הזרקת תרופות וניטור במרחב מת.
עניבות משי 3-0אתיקוןA304Hמשמש לאבטחת קטטרים עורקיים וורידיים
קוונים עם 4 כיווניםדיסקופיקס, בראוןD500456020מחובר לנוזל וקווי ניטור לשטיפה ודגימה
סט הרחבות 6 אינץ'SAI Infusion TechnologiesExt-6מחובר ל-IV/קווי עורקים 
סט הרחבות 60"BBV6223קווי עירוי תרופות
מתאם גישה לדרכי האוויר AirLife Neo-Verso Y לצינורות אנדוקטרכאלייםויארהCSC300משמש למתן חומר תוך-קנה הנשימה
בופנאורפין, 0.3 מ"ג/מ"לCDMV128140בולוס IM כמשכך כאבים
דקסטרוז, 5%בקסטרJB0063שמירת רמת הסוכר בדם
וילונות חד-פעמיים3M3M1050וילונות שדה סטריליים
אלקטרודות א.ק.ג3M220790אלקטרודות לשימוש חד-פעמי ל-ECG
קטטר מתן צינור אנדוטרכיאלי (ETT)
צינור אנדוטרכיאלי 3.5 טלפלקס5-10107משמש לטרכאאוסטומיה
אפינפרין, 1 מ"ג/מ"להוספירה07541L01מדולל במי מלח סטריליים רגילים ל-0.1 מ"ג/מ"ל להחייאה במידת הצורך
אנליסט גזי דם של Epoc  סימנס10736398מערכת ניתוח דם epoc עם מארח NXS
כרטיסי דוגמה של EpocסימנסBD309659מחסניות גז דם
פורמלין, 10% עם בופרפישר סיינטיפיקSF100-4קיבוע ריאות
כרית חימוםקנט סיינטיפיקTPZ-814EAשמיכת מחזור מים
משאבות עירוי תוך-ורידיות (IV) x 3סיגמא אולדריץ'Z401358עירוי של קטמין/פרופופול ורוקורוניום
קטמין, 10 מ"ג/מ"לוטוקווינול112170עירוי רציף (מדולל במי מלח סטריליים רגילים) במשאבת מזרק לצורך תחזוקת ההרדמה  
קטמין, 100 מ"ג/מ"לוטוקווינול112170משמש כבולוס לאינדוקציה של הרדמה כללית ומשאבת מזרק לתחזוקת הרדמה  
לקטאטד רינגרסבקסטרJB2323שמירת נפח הדם
ציוד שטיפה: משפך, מחבר תלת-כיווני, מחבר ETT, צינור באורך 4 רגללא זמיןלא זמיןצינורות ביתיים לשטיפה
ליפופוליסכריד, LPS (O55:B5), 100 מ"גסיגמא-אלדריץ'L2880-100mgפציעת ריאה שנייה
מכשיר אדים נשימתי MR850פישר ופייקלMR850JXX*
פנטוברביטל נתרן (אותניל), 240 מ"ג/מ"לוטוקווינול381בולוס IV להמתת חסד הומאנית
מתמר לחץציוד וטרינרי מקארתיV6402ללחצים עורקיים/ורידיים ב-Surgivet
פרופופול, 10 מ"ג/מ"למשמש כבולוס לאינדוקציה של הרדמה כללית ומשאבת מזרק לתחזוקת הרדמה  
מד חמצן פולסמייסמוNEOPT-500
רוקורוניום, 10 מ"ג/מ"לאורופארמה2498820משתמשים לאחר ניתוח ולפני תחילת השראת פציעת הריאות, ואחריהם עירוי רציף
סליין, 0.9%בקסטרJB1324שטיפות קו דם והחייאת נפח הדם
מים סטרילייםלא זמיןלא זמיןלמכשיר האדים של מכונת הנשמה
קטטר יניקה 10 CH/25 ס"ממדיפלסט608810251משמש לשטיפת אונות הריאה ברונכאואלוואולרי
קטטר יניקה 6 CH/40 ס"ממדיפלסט60880640הסר את עודפי מלח במהלך הכביסה
כלי ניתוח: ידית סכין, מלקחיים ליתושים, מלקחיים לאגודל, מספריים מטזנבאום, סיכות, מספריים כירורגיים, רטרקטורים, גזה, קערת נירוסטהלא זמיןלא זמיןאוטוקלב עם חבילת ניתוח
מנתח: שרוול ה-NIBP, בדיקת טמפרטורה,   2x לחץ דם פולשני, א.ק.ג, מד חמצן דופקציוד וטרינרי מקארתיv9203כולל: שרוול לחץ דם לא פולשני (NIBP), מדחום, לחץ דם פולשני כפול (BP), אלקטרוקרדיוגרפיה (ECG) ומד אוקסימטר דופק
משאבות מזרק x 3משאבות הרדמה
קלטתאבטחת קווי IV באוזניים
סרט טבוראתיקוןמאבטח צינור אנדוטרכיאלי בתוך קנה הנשימה
מכונת הנשמה (Servo-I)גטינגצריך שיהיו סביבות יילודים לנפח גאות תקין
מעגל אוורורפישר ופייקלRT265עם מכשיר אדים
מהדק חסימה של צינור וורסלא זמיןלא זמיןחוסם צינורות במהלך שטיפה

מקורות

  1. Perin, J., et al. regional, and national causes of under-5 mortality in 2000-19: An updated systematic analysis with implications for the sustainable development goals. Lancet Child Adolesc Health. 6 (2), 106-115 (2022).
  2. Thebaud, B., et al. Bronchopulmonary dysplasia. Nat Rev Dis Primers. 5 (1), 78(2019).
  3. Demauro, S. B., et al. Early motor development in infants with moderate or severe bronchopulmonary dysplasia. J Neonatal Perinatal Med. 15 (1), 55-62 (2022).
  4. Augustine, S., et al. Mesenchymal stromal cell therapy in bronchopulmonary dysplasia: Systematic review and meta-analysis of preclinical studies. Stem Cells Transl Med. 6 (12), 2079-2093 (2017).
  5. Contopoulos-Ioannidis, D. G., Ntzani, E., Ioannidis, J. P. Translation of highly promising basic science research into clinical applications. Am J Med. 114 (6), 477-484 (2003).
  6. Haworth, S. G., Hislop, A. A. Adaptation of the pulmonary circulation to extra-uterine life in the pig and its relevance to the human infant. Cardiovasc Res. 15 (2), 108-119 (1981).
  7. Rendas, A., Branthwaite, M., Reid, L. Growth of pulmonary circulation in normal pig--structural analysis and cardiopulmonary function. J Appl Physiol Respir Environ Exerc Physiol. 45 (5), 806-817 (1978).
  8. Starbaek, S. M. R., et al. Animal models for influenza a virus infection incorporating the involvement of innate host defenses: Enhanced translational value of the porcine model. ILAR J. 59 (3), 323-337 (2018).
  9. Schneberger, D., Aharonson-Raz, K., Singh, B. Pulmonary intravascular macrophages and lung health: What are we missing. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 302 (6), L498-L503 (2012).
  10. Thomas, A. V., Broers, A. D., Vandegaart, H. F., Desmecht, D. J. Genomic structure, promoter analysis and expression of the porcine (sus scrofa) TLR4 gene. Mol Immunol. 43 (6), 653-659 (2006).
  11. Islam, M. A., et al. Age-related changes in phagocytic activity and production of pro-inflammatory cytokines by lipopolysaccharide stimulated porcine alveolar macrophages. Cytokine. 60 (3), 707-717 (2012).
  12. Kapetanovic, R., et al. The impact of breed and tissue compartment on the response of pig macrophages to lipopolysaccharide. BMC Genomics. 14, 581(2013).
  13. Chen, L., He, H., Fernandez Mondejar, E., Hedenstierna, G. Cyclooxygenase inhibitor blocks rebound response after no inhalation in an endotoxin model. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 284 (1), H290-H298 (2003).
  14. Spengler, D., Rintz, N., Krause, M. F. An unsettled promise: The newborn piglet model of neonatal acute respiratory distress syndrome (nards). Physiologic data and systematic review. Front Physiol. 10, 1345(2019).
  15. Tridente, A., De Martino, L., De Luca, D. Porcine vs. bovine surfactant therapy for preterm neonates with RDS: Systematic review with biological plausibility and pragmatic meta-analysis of respiratory outcomes. Respir Res. 20 (1), 28(2019).
  16. Kulkarni, H. S., et al. Update on the features and measurements of experimental acute lung injury in animals: An official American Thoracic Society workshop report. Am J Respir Cell Mol Biol. 66 (2), e1-e14 (2022).
  17. Matute-Bello, G., et al. An official American Thoracic Society workshop report: Features and measurements of experimental acute lung injury in animals. Am J Respir Cell Mol Biol. 44 (5), 725-738 (2011).
  18. Matute-Bello, G., Frevert, C. W., Martin, T. R. Animal models of acute lung injury. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 295 (3), L379-L399 (2008).
  19. Preuss, S., et al. Inositol-trisphosphate reduces alveolar apoptosis and pulmonary edema in neonatal lung injury. Am J Respir Cell Mol Biol. 47 (2), 158-169 (2012).
  20. Spengler, D., et al. Novel therapeutic roles for surfactant-inositols and -phosphatidylglycerols in a neonatal piglet ARDS model: A translational study. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 314 (1), L32-L53 (2018).
  21. Von Bismarck, P., et al. Improved pulmonary function by acid sphingomyelinase inhibition in a newborn piglet lavage model. Am J Respir Crit Care Med. 177 (11), 1233-1241 (2008).
  22. Van Kaam, A. H., et al. Response to exogenous surfactant is different during open lung and conventional ventilation. Crit Care Med. 32 (3), 774-780 (2004).
  23. Lachmann, B., Robertson, B., Vogel, J. In vivo lung lavage as an experimental model of the respiratory distress syndrome. Acta Anaesthesiol Scand. 24 (3), 231-236 (1980).
  24. Thebaud, B., et al. Benefits and obstacles to cell therapy in neonates: The incubator (innovative neonatal cellular therapy for bronchopulmonary dysplasia: Accelerating translation of research). Stem Cells Transl Med. 10 (7), 968-975 (2021).
  25. Davies, M. W., Mehr, S., Morley, C. J. The effect of draw-up volume on the accuracy of electrolyte measurements from neonatal arterial lines. J Paediatr Child Health. 36 (2), 122-124 (2000).
  26. Ettrup, K. S., et al. Basic surgical techniques in the Gottingen minipig: Intubation, bladder catheterization, femoral vessel catheterization, and transcardial perfusion. J Vis Exp. (52), e2652(2011).
  27. Stenersen, E. O., et al. A piglet perinatal asphyxia model to study cardiac injury and hemodynamics after cardiac arrest, resuscitation, and the return of spontaneous circulation. J Vis Exp. (191), e64788(2023).
  28. Force, A. D. T., et al. Acute respiratory distress syndrome: The Berlin definition. JAMA. 307 (23), 2526-2533 (2012).
  29. Vento, M., et al. Preterm resuscitation with low oxygen causes less oxidative stress, inflammation, and chronic lung disease. Pediatrics. 124 (3), e439-e449 (2009).
  30. Vincent, D., et al. Intratracheal E. coli lipopolysaccharide induces platelet-dependent bronchial hyperreactivity. J Appl Physiol (1985). 74 (3), 1027-1038 (1993).
  31. Preuss, S., et al. 18:1/18:1-dioleoyl-phosphatidylglycerol prevents alveolar epithelial apoptosis and profibrotic stimulus in a neonatal piglet model of acute respiratory distress syndrome. Pulm Pharmacol Ther. 28 (1), 25-34 (2014).
  32. Von Bismarck, P., et al. Surfactant "fortification" by topical inhibition of nuclear factor-kappa b activity in a newborn piglet lavage model. Crit Care Med. 35 (10), 2309-2318 (2007).
  33. Pape, A., et al. Neuromuscular blockade with rocuronium bromide increases the tolerance of acute normovolemic anemia in anesthetized pigs. Eur Surg Res. 48 (1), 16-25 (2012).
  34. Gasthuys, E., et al. Repetitive urine and blood sampling in neonatal and weaned piglets for pharmacokinetic and pharmacodynamic modelling in drug discovery: A pilot study. Lab Anim. 51 (5), 498-508 (2017).
  35. Noblet, J., Dourmad, J. Y., Etienne, M., Le Dividich, J. Energy metabolism in pregnant sows and newborn pigs. J Anim Sci. 75 (10), 2708-2714 (1997).
  36. Keibl, C., Kerbl, M., Schlimp, C. J. Comparison of Ringer's solution with 0.4% glucose or without in intraoperative infusion regimens for the prevention of hypoglycemia in juvenile pigs. Lab Anim. 48 (2), 170-176 (2014).
  37. Perri, A. M., O'sullivan, T. L., Harding, J. C., Wood, R. D., Friendship, R. M. Hematology and biochemistry reference intervals for Ontario commercial nursing pigs close to the time of weaning. Can Vet J. 58 (4), 371-376 (2017).
  38. Egeli, A. K., Framstad, T., Morberg, H. Clinical biochemistry, haematology and body weight in piglets. Acta Vet Scand. 39 (3), 381-393 (1998).
  39. Linderkamp, O., et al. Blood volume in newborn piglets: Effects of time of natural cord rupture, intra-uterine growth retardation, asphyxia, and prostaglandin-induced prematurity. Pediatr Res. 15 (1), 53-57 (1981).
  40. Talbot, R. B., Swenson, M. J. Blood volume of pigs from birth through 6 weeks of age. Am J Physiol. 218 (4), 1141-1144 (1970).
  41. Berger, D., et al. Effect of PEEP, blood volume, and inspiratory hold maneuvers on venous return. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 311 (3), H794-H806 (2016).

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

pulmonary
פיתוח מודל פגיעת ריאות חריפה של חזרזיר יילודים המשחזר את הסביבה המוקדמת של ריאות פגים
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.