הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

In Vivo הדמיה חושפת את ההתנהגות הנדידה של לויקוציטים בתוך המפרקים

1K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/68091

⸱

9 בדצמבר 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Frontier Medicine, Institute of Medical Science, St. Marianna University School of Medicine, 2Unit for Bioimaging, Institute of Medical Science, St. Marianna University School of Medicine, 3Department of Immunology and Parasitology, St. Marianna University School of Medicine, 4Nikon Solutions Co., Ltd

במאמר זה

סיכום

הדמיה ב-vivo של המפרקים היא טכניקה חשובה לחשיפת התנהגות הנדידה של לויקוציטים ודינמיקה מולקולרית בתוך המפרקים הדלקתיים. כאן, אנו מציגים פרוטוקול מפורט להדמיה בתוך המפרקים באמצעות מודל עכברי לדלקת מפרקים מסוג II המושרה על ידי קולגן (CIA).

תקציר

לויקוציטים הם תאים המועברים בדם שמקורם במח העצם וחייבים להגר לרקמות כדי לתווך דלקת. לפיכך, שליטה בהגירה זו מהווה נקודה קריטית לפיתוח אסטרטגיות טיפוליות חדשות להפחתת דלקת. מחקרי קצה מסורתיים לא אפשרו לנו לנתח באופן מלא את התנהגות ההגירה של לויקוציטים ב-vivo. עם זאת, התקדמות עדכנית בטכנולוגיית ההדמיה סיפקה תובנות חסרות תקדים לגבי נדידת תאי מערכת החיסון בבעלי חיים חיים, והעשירה מאוד את הבנתנו את הוויסות המולקולרי של סחר בתאי החיסון.

כאן אנו מציגים פרוטוקול מפורט להדמיה ב-in vivo של המפרקים באמצעות מודל CIA (דלקת מפרקים מונעת קולגן מסוג II בעכברים). העכברים מחוסנים בקולגן מסוג II אמולסיפיק באדג'ובנט פרוינד מלא, והתקדמות דלקת מפרקים מנוטרת באמצעות ניקוד קליני ומדידות עובי כפות הרגליים. בשיא דלקת מפרקים, לויקוציטים מוצגים ב-vivo באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית בעכברים טרנסגניים המבטאים חלבונים פלואורסצנטיים או בעכברים פראיים לאחר הזרקה תוך-ורידית של נוגדנים מסומנים פלואורסצנטי ודקסטרון בעל משקל מולקולר גבוה לצביעת כלי דם. חשיפה ניתוחית מדויקת של המפרק, יישום אגרוז ומיקום נכון של הרגל מאפשרים הדמיה יציבה לטווח ארוך, שלרוב נמשכת מספר שעות. גישה זו מאפשרת ניתוח בזמן אמת של עצירה של לויקוציטים, זחילה והגירה טרנסאנדותלית בתוך מפרקים מודלקים.

פרוטוקול זה יהיה בעל ערך לקבוצות מחקר החוקרות סחר לויקוציטים בדלקת מפרקים ומחלות דלקתיות נוספות. הוא עשוי גם לשמש פלטפורמה להערכה פרה-קלינית של טיפולים המתמקדים בנדידת תאי מערכת החיסון.

מבוא

מכיוון שלויקוציטים הם תאים המועברים בדם שמקורם במח העצם, הם חייבים להיכנס לרקמה כדי לגרום לדלקת1. השליטה בתהליך זה מהווה נקודה מרכזית שבה ניתן לפתח תרופות חדשות להחלשת דלקת2. באופן כללי, העברת לויקוציטים לרקמות מודלקות מתרחשת בוורידים הפוסט-קפילריים ועוקבת אחר מפל ההיצמדות, החל מלכידת לויקוציטים זורמים בחופשיות על ידי דופן כלי הדם. בנוסף, התהליך מלווה בלויקוציטים המתגלגלים לאורך דופן כלי הדם בכיוון הזרימה, עצרת לויקוציטים באנדותליום, שחרור מההידבקות, וזחילה לכל הכיוונים על פני הכלי כדי לאתר אתר קליטה להגירה טרנסאנדותלית (TEM) למיקום מסוים בתוך הרקמה 1,3.

שלבים מובחנים אלו מוסדרים על ידי שילוב של אותות מולקולריים, כולל סלקטינים (לגלגול), אינטגרינים (לעצירה, זחילה), וכימואטרקנטים (CAs) (לעצירה, אולי זחילה, ו-TEM)3. CAs מפעילים לויקוציטים באמצעות שבעה קולטני כימואטרטנט משולבים עם חלבון G (CARs) החוצים ממברנה, וממלאים תפקידים קריטיים במפל ההיצמדות על ידי הגברת האפיניות באינטגרין (מה שמוביל לעצירה) והשראת TEM. עם זאת, המנגנונים המדויקים של TEM אינם מובנים במלואם. מחקרי קצה מסורתיים וניסויים במבחנה לא סיפקו תובנות כיצד איתות CA-CAR מווסת באופן דינמי התנהגות נדידת לויקוציטים ב-vivo.

התקדמות אחרונה בטכנולוגיית הדמיה סיפקה תצוגות חסרות תקדים על נדידת תאי חיסון בבעלי חיים חיים, מה שהעשיר מאוד את הבנתנו את הוויסות המולקולרי של תנועת תאי החיסון ב-vivo 4,5,6. לדוגמה, טכנולוגיה זו הבהירה את הבקרה המולקולרית של תנועת נויטרופילים לאתרים של דלקת רקמה, כגון פגיעת כבדתרמית 7 ופציעת עור בלייזר8. לכן, פנינו לחקור את המנגנונים המולקולריים השולטים בתנועת נויטרופילים לאתרי דלקת מפרקים9. התמונה של המפרקים ב-in vivo שתוארה כאן הראתה כי רכיב המשלים C5a קולטן 1 (C5aR1) חיוני להתחלת היצמדות נויטרופילים לאנדותליום המפרק, ומדליק דלקת בתוך המפרקים. C5aR1 סייע לעצירת נויטרופילים תלויים באינטגרין ובהתפשטותם, ולאחר מכן TEM בתיווך קולטן לויקוטריאן B4, וזחילה מונעת על ידי קולטן כימוקיני CC 1 (CCR1). קולטן כימוקין CXC 2 (CXCR2) שיחק תפקיד בשלבים המאוחרים של TEM נויטרופילים במפרקים הדלקתיים10. בנוסף, הדמיית מפרקים ב-vivo חשפה פרדיגמה חדשה בתגובות רגישות יתר מסוג III בתוך המפרק, שבה C5a משמש כיוזם דלקת, בעוד שתאי רקמה תושבי רקמה ממלאים תפקידים משמעותיים יותר בדלקת בפרדיגמה הנוכחית של תגובות רגישות יתר מסוג III10,11.

בנוסף, השתמשנו בהדמיה ב-vivo של המפרק כדי לחקור את הדינמיקה המולקולרית של C5a בתוך המפרק. C5a שנטען על רקמת המפרק בעכברים מסוג בר הועבר במהירות ללומן הווסקולרי, בעוד בעכברים חסרי C5aR2, C5a נשאר כולו בתוך רקמת הסינוביאלית12. נתונים אלו מראים ש-C5aR2, המובע על אנדותל המפרק, מעביר את C5a אל לומן כלי הדם, תהליך הכרחי להידבקות נויטרופילים תלויה ב-C5aR1 במפרקים13.

הדמיה ב-in vivo של המפרקים מתאימה לכל המודלים של דלקת מפרקים דלקתית ומאפשרת תצפית ארוכת טווח (בדרך כלל כמה שעות), אם כי הדמיה של רקמות עמוקות (>1 מ"מ) עשויה להיות מוגבלת בהתאם למיקרוסקופ בו משתמש. ביחד, טכניקה זו מספקת כלי עוצמתי לחקר התנהגות הנדידה של לויקוציטים ודינמיקה מולקולרית בתוך המפרקים הדלקתיים. אנו משתפים פרוטוקול זה להדמיית מפרקים ב-in vivo כדי לתמוך בקבוצות מחקר החוקרות תהליך זה במפרקים מודלקים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הניסויים בבעלי חיים אושרו על ידי ועדת הטיפול והשימוש בבעלי חיים המוסדית של בית הספר לרפואה של אוניברסיטת סנט מריאנה (אישור מס' TG240926-2 ו-TG250801-2) ונוהל בהתאם להנחיות מוסדיות וארציות.

1. הכנת מודל העכבר לדלקת מפרקים

הערה: מודלים של בעלי חיים לדלקת מפרקים סיפקו כלים חשובים להבנת הפתוגנזה של המחלה ולפיתוח טיפולים חדשים14. בעוד שלמספר מודלים של עכברים לדלקת מפרקים יש יתרונות ומגבלות ייחודיים, דלקת מפרקים מסוג II הנגרמת על ידי קולגן (CIA) שימשה רבות במחקרים על פתוגנזה של דלקת מפרקים שגרונית (RA)14. בחלק זה אנו מתארים את הפרוטוקול של מודלים של CIA לדלקת מפרקים (הציוד והכלים מוצגים באיור 1).

  1. הכינו דילול של קולגן פר סוג II ב-0.05 מ' חומצה אצטית (ריכוז סופי 4 מ"ג/מ"ל) על ידי ניעור למשך הלילה בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.
  2. כדי ליצור את האמולסיה, ערבבו את דילול הקולגן (4 מ"ג/מ"ל ב-0.05 מ' חומצה אצטית) עם האדג'ובנט המלא של פרוינד (CFA) ביחס של 1:1 במזרק זכוכית. זה מניב ריכוז קולגן סופי של 2 מ"ג/מ"ל באמולסיה. ערבבו ביד בעוצמה במשך כ-20 דקות. תהליך זה מייצר חום, לכן קרר את מזרק הזכוכית המכיל את האמולסיה על הקרח. השתמש בבקבוק כדי לבדוק את מרקם האמולסיה במהלך ההכנה.
    הערה. שמרו את כל הדילול הקולגן שנותר בטמפרטורה של -80°C. ניתן להשתמש בזה לחיסונים השני.
  3. העבר את האמולסיה למזרק זכוכית בנפח 1 מ"ל המצויד במחט 26x1/2G, והשאיר אותה על הקרח עד לחיסון.
  4. הרדמו עכברים בני 8 שבועות DBA1/J (זכרים או נקבות) בהזרקות תוך-פריטונאליות של מדטומידין (0.3 מ"ג/ק"ג), מידזולם (4 מ"ג/ק"ג) ווטורפל (5 מ"ג/ק"ג).
    הערה. לעכברים טרנסגניים יש לעיתים רקע C57BL6. קולגן עוף משמש בדרך כלל ל-CIA בעכברי C57BL6; עם זאת, שכיחות וחומרת ה-CIA בעכברי C57BL6 נמוכות יותר מאשר בעכברי DBA/1J. אם משתמשים בעכברים טרנסגניים על רקע C57BL6, שקול לבצע מחקר פיילוט להערכת שכיחות וחומרת ה-CIA.
  5. גלח את השיער סביב הזנב באמצעות מכונת תספורת כדי להתכונן לחיסון.
  6. הזריקו בהדרגה נפח של 100 מיקרוליטר של האמולסיה (המכיל 200 מיקרוגרם קולגן) למרחב התת-עורי לאורך הגב הזנבי (ליד בסיס הזנב) (איור 2).
  7. חזרו על צעדים 1.2 עד 1.6 ביום ה-21 עבור החיסון השני (איור 2).

2. הערכת ציון קליני של דלקת מפרקים ומדידת עובי כפות הרגליים

הערה: דירוג קליני של דלקת מפרקים ומדידת עובי כפות הרגליים חיוניים להערכת פעילות המחלה. בדרך כלל, מדידות קליניות לדלקת מפרקים ומדידות עובי כפות הרגליים נלקחות כל 1-3 ימים לאחר החיסון הראשון.

  1. ציון קליני לדלקת מפרקים: רשמו את סכום הציונים של כל ארבע כפות הרגליים של כל עכבר. השתמש במערכת הניקוד הבאה:
    0 = נורמלי
    1 = אדמיום ונפיחות של אצבע אחת
    2 = אדמיום ונפיחות של שתי אצבעות או אדמיום ונפיחות במפרק הקרסול
    3 = אדמיום ונפיחות של יותר משלוש אצבעות או נפיחות של שתי אצבעות ומפרקי קרסול
    4 = אדמיום ונפיחות חמורה בקרסול, בכף הרגל ובאצבעות עם עיוות.
    הערה. מפרק קרסול נפוח מוגדר כעובי כף רגל הגדול מ-4 מ"מ.
  2. מדידת עובי כפות הרגליים: מדדו את עובי כל כף רגל באמצעות קליפרים דיגיטליים עם סלייד. השתמש בעובי הממוצע של כף רגל על כל ארבע הרגליים של כל עכבר.

3. הדמיה בגוף חי של מפרקים

הערה: הדמיה ב-invivo של מפרקים מאפשרת לנו לצפות בנדידת לויקוציטים למפרקים ולנתח את התנהגותם בתוך הרקמה בעכברים חיים. כדי לדמיין תאים, משתמשים בעכברים טרנסגניים מהונדסים גנטית לביטוי חלבונים פלואורסצנטיים בתאים מסוימים, וכן בעכברים שהוזרקו לתוך וריד בנוגדני אנטי-סמן תאים. החומרים בהם משתמשים מוצגים באיור 3.

  1. הרדימו עכברים ארתריטוגניים תוך-פריטונלי עם מדטומידין (0.3 מ"ג/ק"ג), מידזולאם (4 מ"ג/ק"ג) ווטורפל (5 מ"ג/ק"ג).
  2. גלח את רגל העכבר עם קוצץ והשתמש בקרם הסרת שיער (<60 שניות) להסרת השיער שנותרה. הימנעו משימוש ממושך כדי למנוע גירוי בעור.
  3. הסר את הקרם עם גזה לחה (איור 4A). ודאו שכל השיער מוסר כדי למנוע אוטופלואורסצנציה לא רצויה באזור ההדמיה. חזור על זה אם צריך.
  4. מרחו חומר סיכה סטרילי לקרנית על שתי העיניים במהלך ההרדמה כדי למנוע ייבוש או כיב בקרנית.
  5. תחת כוונת ניתוח, יש לבצע חתך בגודל 1 ס"מ לאורך העור באמצעות מיקרוסיזורים (איור 4B).
    הערה. שלב זה קריטי. ניתוח יכול לגרום לגיוס לויקוציטים (במיוחד נויטרופילים). הימנע מכל נזק שעלול לגרום לפריטים. עקב אנגיוגנזה במפרקים הארטריטיים, מפרקים אלו נוטים לדימום. ייתכן שיידרשו מספר מפגשי תרגול כדי להצליח בניתוח.
  6. מקם את מפרקי הארטריטיס על הלוח הפלסטי (איור 4C).
    הערה. ניתן להשתמש בדבק רקמה כדי לעזור לקבע את רגל העכבר במקומה. מחקר זה עושה שימוש בחימר כדי לקבע מחסנית זכוכית לפלטת פלסטיק.
  7. כסו את אזור ההדמיה בכ-1 מ"ל של 1.5% אגרוז עם מלח בופר (PBS) (איור 4D).
    הערה. ודאו שהאגרוז התקרר כדי למנוע פגיעה ברקמות, מה שעלול לעודד גיוס לויקוציטים לאזור ההדמיה.
  8. הכינו את הבמה במיקרוסקופ.
    הערה. השתמש בכרית חימום לשמירת טמפרטורת הגוף של העכבר במהלך סשנים ממושכים של הדמיה.
  9. כוון את הגדרות מיקרוסקופ קונפוקלי (עוצמת לייזר, הגבר, הזזה, מיקום וכו'). כאן, בצע הדמיה במיקרוסקופ קונפוקלי עם עדשת אובייקטיב טבילה במים 25, NA 1.1. כוון את ההתרגשות של הלייזר ל-488 ננומטר, 561 ננומטר ו-640 ננומטר, ואסוף את הפליטה ב-488.0 ננומטר, 561.6 ננומטר ו-638.5 ננומטר.
    1. בדוק את קצב הסריקה של המיקרוסקופ. השתמש ברזולוציה פיקסלית של 512 x 512, עם 5 חלקים אופטיים, מחסנית Z של 4 מיקרון, וזמן מחזור של 15 שניות כדי לאפשר ניתוח של תאים ניידים בודדים לאורך זמן מספק לקבלת נתונים משמעותיים.
  10. לאחר זיהוי מיקום מתאים, התחילו ברכישת תמונה.
    הערה. אם משתמשים בנוגדני נוגדני סמן תאים לסימון לויקוציטים, הזרקו את הנוגדנים תוך-ורידי 3 דקות לפני תחילת ההדמיה. לצורך הדמיית כלי דם, הזרקו Qdots, נוגדן CD31 או דקסטרן בו-זמנית. לדוגמה, הזרקו כ-2 מיקרוגרם נוגדנים לעכבר של Ly6G לנויטרופילים ו-CD4 לתאי T, יחד עם כ-80 מיקרוגרם של 680-250k דקסטרן לעכבר לצביעת כלי דם. נוגדנים ודקסטרן בדרך כלל מומסים ב-100 מיקרוליטר של PBS סטרילי. שימו לב שחלק מהנוגדנים עלולים לרוקן את הלוקוציטים, לכן בדוק שהנוגדנים הנבחרים אינם מפחיתים את ספירת הלויקוציטים.
  11. עבדו את תמונות קובץ ND2 שנרשמו באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי באמצעות מודול General Analysis 3 (GA3) של תוכנת ניתוח תמונות NIS-Elements (גרסה 6.20.00). בצע חילוץ אזורים וסקולריים וחיסור רקע. לאחר עיבוד כל מסגרות הזמן, ייצא את התמונות כסרטון.
    הערה. במסגרת הניתוח, סופרים את מספר התאים הדביקים והתאים המופרטים.
  12. לאחר סיום ההדמיה, יש לאפשר לבעל החיים להתאושש כהליך הישרדות או להמתת אותו באופן הומני, בהתאם לעיצוב הניסוי. אם מתכוונים לשרוד, סגרו בעדינות את אתר הניתוח וספקו טיפול מתאים לאחר הניתוח בהתאם להנחיות הטיפול בבעלי חיים המוסדיים.
    הערה: במחקר זה, כל בעלי החיים הושמתו באופן הומני מיד לאחר ההדמיה, בהתאם להנחיות המוסדיות והלאומיות.

4. ניתוח סטטיסטי

  1. הצג את הנתונים כממוצע ± שגיאת תקן של הממוצע (SEM). לבצע ניתוח סטטיסטי באמצעות מבחן t של סטודנט להשוואות בין שתי קבוצות או ANOVA חד-כיווני עבור מספר קבוצות, ואחריו מבחן פוסט-הוק של טוקי. נחשוב על ערך p < 0.05 כמובהק סטטיסטית.
    הערה: כל הניתוח בוצע באמצעות גרסה 10 של GraphPad Prism.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

כאן, עכברים זכרים בני 8 שבועות DBA/1J מחוסנים באמולסיה המכילה קולגן פר מסוג II ו-CFA ביחס של 1:1 ביום 0 ויום 21. מדידות קליניות לדלקת מפרקים ומדידות עובי כפות הרגליים מתבצעות כל 1-3 ימים בין היום 0 ל-42. בדרך כלל, הופעת דלקת מפרקים נצפית סביב היום ה-28, כאשר הציון הקליני של דלקת המפרקים ועובי הכפות מגיעים לשיא סביב יום 35 (איור 5A-C). שכיחות ה-CIA בעכברי DBA/1J בדרך כלל מעל 90-100% עד יום 35 (איור 5A

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

הדמיה ב-IVO של מפרקים, בניגוד למחקרי קצה מסורתיים, מספקת תובנות חסרות תקדים על תהליכים ביולוגיים דינמיים בעכברים חיים. לדוגמה, טכניקה זו מאפשרת לנו להבין כיצד ארבעה קולטנים כימואטרינטים שונים - C5aR1, BLT1, CCR1 ו-CXCR2 - משתפים פעולה כדי ליזום גיוס נויטרופילים למפרקים מודלקים בדלקתמפרקים 10,11. בנוסף, הדמיית in vivo חשפה תפקיד פונקציונלי חדש ל-C5aR2 בהעברת C5a מרקמה ללומן הווסקולרי12.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

י.מ. קיבל מענק/תמיכה מחקרית מחברת התרופות צ'וגאי בע"מ.

תודות

עבודת י.מ. נתמכת על ידי החברה היפנית לקידום המדע (JSPS) KAKENHI [מענק מס' JP22K08531, JP25K02574]; הסוכנות היפנית למחקר ופיתוח רפואי (AMED) [מספר מענק 25bm1423033]; קרן הזיכרון מוצ'ידה למחקר רפואי ופרמצבטי; מענק JCR לקידום מחקר עבור FRONTIER וקרן מיצובישי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
29 G x 1/2"טרומוSS-10M2913
0.1 M חומצה אצטיתפוג'יפילם016-18835
מזרק פלסטיק בנפח 1 מ"לטופ19531
מזרק 1 מ"מ לשמןטרומוSS-01T
18 G x 1 1/2"טרומוNN-1838R
26 G x 1/2"טרומוNN-2613S
דקסטרן 680-250 קילוואןביוטיום80135
אגרוזInvitrogen16520-100
קולגן פר סוג IIמרכז מחקר קולגןK42
חימרדביקה93186
חבר מוחלט עוזר (CFA)כונדרקס7001
מיקרוסקופ קונפוקליניקוןA1
זכוכית כיסויMatsunami Glass IND.,LtdC024401
קליפר שקופיות דיגיטלימיצוטויו500-180-30
צינור פלקון (15 מ"ל)קורנינגNA
צינור פלקון (50 מ"ל)קורנינגNA
נוגדן Ly6G אנטי-עכבר מצומד FITCביולג'נד127606
מלקחייםרובוזRS-5070
מלקחייםנאפוקסMA-48-2
מזרק זכוכית ומחברתעשיית צובאסה בע"מ;S7P
גריזסיליקון טוריי דאו קורנינגNA
מכונת תספורת שיערוואהלWA5109
מכונת תספורת שיערוואהל9966
הסרת שיער crè אניקרייסילא זמין
מדטומידיןמייג'ילא זמין
מיקרו-מספרייםרובוזRS-5610
מיקרו-מספרייםרובוזRS-5630
מידאזולאםסנדוזלא זמין
גזה לחהניפון פייפר קרסיה בע"מS-200
ניתוח תמונות של NIS-Elements 6.20.00ניקוןNA
PBS בצינור פלקון (50 מ"ל)תאגיד שימדזו לאבחון5913
נוגדן CD4 אנטי-עכבר מצומד PEביולג'נד100408
פלטת פלסטיקקורנינג351029
פריזמה 10.3.1GraphPadNA
זכוכית שקופיתמוטו פיור כימיקלים בע"מ5115
טווח ניתוחיאולימפוסVMZ
קשר רקמתי3M1469SB
Vetorphale  מייג'ילא זמין

מקורות

  1. Nourshargh, S., Alon, R. Leukocyte migration into inflamed tissues. Immunity. 41 (5), 694-707 (2014).
  2. Miyabe, Y., Lian, J., Miyabe, C., Luster, A. D. Chemokines in rheumatic diseases: pathogenic role and therapeutic implications. Nat Rev Rheumatol. 15 (12), 731-746 (2019).
  3. Griffith, J. W., Sokol, C. L., Luster, A. D. Chemokines and chemokine receptors: positioning cells for host defense and immunity. Annu Rev Immunol. 32, 659-702 (2014).
  4. Murooka, T. T., et al. HIV-infected T cells are migratory vehicles for viral dissemination. Nature. 490 (7419), 283-287 (2012).
  5. Mempel, T. R., Henrickson, S. E., Von Andrian, U. H. T-cell priming by dendritic cells in lymph nodes occurs in three distinct phases. Nature. 427 (6970), 154-159 (2004).
  6. Sumen, C., Mempel, T. R., Mazo, I. B., von Andrian, U. H. Intravital microscopy: visualizing immunity in context. Immunity. 21 (3), 315-329 (2004).
  7. Wang, J., et al. Visualizing the function and fate of neutrophils in sterile injury and repair. Science. 358 (6359), 111-116 (2017).
  8. Lammermann, T., et al. Neutrophil swarms require LTB4 and integrins at sites of cell death in vivo. Nature. 498 (7454), 371-375 (2013).
  9. Miyabe, Y., Kim, N. D., Miyabe, C., Luster, A. D. Studying chemokine control of neutrophil migration in vivo in a murine model of inflammatory arthritis. Methods Enzymol. 570, 207-231 (2016).
  10. Miyabe, Y., et al. Complement C5a receptor is the key initiator of neutrophil adhesion igniting immune complex-induced arthritis. Sci Immunol. 2 (7), eaaj2195(2017).
  11. Sadik, C. D., Miyabe, Y., Sezin, T., Luster, A. D. The critical role of C5a as an initiator of neutrophil-mediated autoimmune inflammation of the joint and skin. Semin Immunol. 37, 21-29 (2018).
  12. Miyabe, Y., Miyabe, C., Mani, V., Mempel, T. R., Luster, A. D. Atypical complement receptor C5aR2 transports C5a to initiate neutrophil adhesion and inflammation. Sci Immunol. 4 (35), eaav5951(2019).
  13. Kohl, J. Igniting the flame in arthritis: C5aR2 controls endothelial transcytosis of C5a. Sci Immunol. 4 (35), eaax0352(2019).
  14. Miyabe, Y., Miyabe, C., Luster, A. D. LTB4 and BLT1 in inflammatory arthritis. Semin Immunol. 33, 52-57 (2017).
  15. Miyabe, Y., et al. Necessity of lysophosphatidic acid receptor 1 for development of arthritis. Arthritis Rheum. 65 (8), 2037-2047 (2013).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

In Vivo הדמיה חושפת את ההתנהגות הנדידה של לויקוציטים בתוך המפרקים
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.