הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר מחקר

Hydroxysafflor Yellow A מחליש את הרעילות הנגרמת על ידי LPS בנוירונים דופמינרגיים של דג הזברה על ידי ויסות מסלול האיתות TLR4/NF-ĸB

620 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/68314

⸱

18 ביולי 2025

 ,  ,  ,  ,  , 
1Center for Mitochondria and Healthy Aging, College of Life Science, Yantai University, 2Research Institute of Life Sciences, Yinfeng Biological Group Co., Ltd.

במאמר זה

סיכום

פרוטוקול זה נועד לבדוק אם הידרוקסיספלור צהוב A (HSYA) מחליש רעילות עצבית הנגרמת על ידי LPS בדגי הזברה. התפקוד המוטורי הוערך באמצעות מערכת ראייה חזותית. פגיעה עצבית דופמינרגית נבדקה על ידי אימונוהיסטוכימיה. מולקולות המעורבות במסלול TLR4/NF-κB נותחו באמצעות כתם מערבי.

תקציר

דלקת הנגרמת על ידי ליפופוליסכריד (LPS) ממלאת תפקיד מכריע בהפעלת והנצחת המחלות הנוירודגנרטיביות, כולל מחלת פרקינסון (PD). Hydroxysafflor צהוב A (HSYA) הוא המרכיב העיקרי של Carthamus tinctorius L.. מחקר זה נועד לבחון אם HSYA יכול לשפר את הרעילות הנגרמת על ידי LPS בנוירונים דופמינרגיים של דג הזברה. דג הזברה נחשף ל-LPS ולאחר מכן טופל ב-HSYA. מבחני התנהגות נערכו כדי להעריך את התפקוד המוטורי של דג הזברה. נבדקו פגיעה עצבית דופמינרגית ורמת דופמין. נמדדו גם TLR4, NF-κB, IL-1β ו-TNF-α. הוא הראה כי LPS (60 מיקרוגרם/מ"ל, ריכוז סופי) גרם לרעילות בדגי הזברה וגרם לתפקוד לקוי של המוטוריקה ולנזק לתאי עצב חיוביים לטירוזין הידרוקסילאז (TH). חשיפה ל-LPS לא רק הפחיתה את תכולת הדופמין אלא גם העלתה את רמות ה-IL-1β, TNF-α והביטוי של TLR4 ו-NF-κB. HSYA שיפר את התפקוד המוטורי הנגרמת על ידי LPS. בנוסף, HSYA החליש את אובדן הנוירונים החיוביים ל-TH, אשר לווה בעלייה בתכולת הדופמין. הטיפול ב-HSYA עיכב גם את הביטוי של TLR4, NF-κB וייצור של IL-1β, TNF-α. לסיכום, מחקר זה מדגים כי HSYA מחליש פגיעה הנגרמת על ידי דלקת בתאי עצב דופמינרגיים של דג הזברה על ידי ויסות מסלול TLR4/NF-κB, המספק בסיס ניסיוני למניעת פגיעה דלקתית במחלת פרקינסון.

מבוא

הפתוגנזה של מחלת פרקינסון (PD) היא הידרדרות בפעילות המוטורית עקב פגיעה בנוירונים דופמינרגיים במוח. בין הביטויים של מחלת פרקינסון תפקוד מוטורי לקוי, כולל רעד במנוחה, ברדיקינזיה, חוסר יציבות יציבה וטונוס שרירים. דלקת היא סימן היכר פתולוגי בולט של מחלת פרקינסון. רמות הציטוקינים בנוזל המוח והשדרה ובאזורי המוח הניגרוסטריאטלי לאחר המוות של אנשים עם פרקינסון גבוהות בהשוואה לבקרות בריאות תואמות גיל1. המנגנונים שבאמצעותם פגיעה עצבית דופמינרגית נגרמת על ידי דלקת מבוססים היטב. במחלת פרקינסון, נוירונים דופמינרגיים במוח התיכון רגישים לציטוקינים כגון גורם נמק גידול (TNF)-ɑ2. ליפופוליסכריד (LPS) הוא מרכיב של חיידקים. LPS מזוהה כליגנד של קולטן דמוי טול 4 (TLR-4). לאחר הקישור ל-TLR-4, LPS מוביל לתגובה דלקתית ומראה רעילות לרקמות. TLR-4 ממוקם על מיקרוגליה במערכת העצבים המרכזית. LPS מפעיל TLR-4 ולכן מייצר TNF-α ו-IL-1β. חשיפה מרכזית או היקפית ל-LPS תגרום לרעילות למערכת העצבים המרכזית. ישנן עדויות המוכיחות כי רעילות הנגרמת על ידי LPS ממלאת תפקיד בהפעלת והנצחת המחלות הנוירודגנרטיביות, כולל PD 3,4,5.

לאחרונה, דג הזברה שימש בדרך כלל כמודל לחקר מחלות במערכת העצבים. לדגי הזברה ולבני אדם יש 80% הומולוגיה גנטית. ולדגי הזברה יש כמעט אותו מספר כרומוזומים כמו לבני אדם. יתר על כן, המבנה העיקרי של המוח של דג הזברה ומסלולי האיתות שלו דומים לאלה של יונקים. דג הזברה יכול גם לייצר מספר רב של עוברים שקופים, להתפתח במהירות ונוטה למניפולציה גנטית6. יתרונות אלה הופכים את דג הזברה למודל מצוין לחקירת הפתוגנזה של מחלת פרקינסון ולפיתוח סינון תרופות בתפוקה גבוהה במחלת פרקינסון.

Hydroxysafflor צהוב A (HSYA) הוא מרכיב עיקרי של Carthamus tinctorius L. מחקרים קודמים הראו כי ל-HSYA יש תכונות אנטי דלקתיות. בתרביות מזנספליות ראשוניות, HSYA ב-20 מיקרומטר עד 640 מיקרומטר לא הראה רעילות כלשהי. וריכוז HSYA שנע בין 40 מיקרומטר ל-640 מיקרומטר הפחית נזק עצבי דופמינרגי המושרה על ידי LPS7. עכברי C57BL/6J נחשפו ל-6-הידרוקסידופמין כדי לגרום למודל של מחלת פרקינסון. HSYA לא רק מחליש את התפקוד הנוירולוגי הלקוי אלא גם מגן על נוירונים דופמינרגיים במוח. יתר על כן, HSYA הפחיתה את הביטוי של ציקלואוקסיגנאז-2, סינתאז תחמוצת החנקן המושרה ו-NF-κB בחומר השחור8.

נכון להיום, אין דיווחים המדגימים את המאפיין של HSYA להפחתת הרעילות של LPS in vivo. הוא הראה כי HSYA החליש את הרעילות הנגרמת על ידי LPS במבחנה7. עם זאת, הערכה מבוססת תאים אינה מייצגת את כל השלבים של התהליך המורכב של רעילות עצבית. דג הזברה מוכיח את עצמו כבעל ערך מיוחד לפענוח מנגנון הרעילות. בשנים האחרונות הוכח גם כי HSYA מסוגל לעכב את הפעלת המסלול הדלקתי NF-κB על ידי הפחתת הביטוי של חלבון קינאז B, ובכך לשפר את התגובה הדלקתית, וכי HSYA גם מעכב את מסלול האיתות הדלקתי הקשור לחלבון המפעיל 1, המשפיע על התפשטות התאים וגורם נמק הגידול הנגרמת על ידי α פגיעה דלקתית9, 10. מחקר זה נועד לחקור האם HYSA יכול לשפר את הרעילות הנגרמת על ידי LPS בנוירונים דופמינרגיים של דג הזברה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

הניסויים נערכו בהתאם להנחיות המכונים הלאומיים לבריאות לשימוש בחיות מעבדה (פרסום 86-23, תוקן ב-1986). ומחקר זה אושר על ידי הוועדה לטיפול ושימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת יאנטאי (YTDX20220623). הריאגנטים והציוד המשמשים במחקר זה מפורטים בטבלת החומרים.

1. תחזוקה של דג הזברה

דג הזברה מזן AB (Danio rerio) הוחזק במערכת מים מחזורית בטמפרטורת מים של 27-28.5 מעלות צלזיוס (pH 7.0), במחזור אור/חושך של 14/10 שעות. דגי הזברה הוזנו פעמיים ביום בשרימפס. לאחר הזדווגות טבעית, עוברים מופרים נאספו בצלחות פטרי המכילות מדיום E3 עם מים נטולי יונים, KCl, NaCl, MgSO4·7H2O ו-CaCl2.

2. רעילות הנגרמת על ידי LPS בדגי הזברה

עוברי דג הזברה לאחר 24 שעות לאחר ההפריה (hpf) נקטפו והוקצו לקבוצות ביקורת ו-LPS, עם 60 עוברים בכל קבוצה. אבקת ה-LPS נשקלה ונוספה לכמות מסוימת של תמיסת PBS (pH = 7.4) לפירוק, שהוכנה כתמיסת מלאי LPS של 2 מ"ג/מ"ל, שהונחה ב-20 מעלות צלזיוס לאחסון והמתנה. במהלך הניסוי, תמיסת הרזרבה של LPS דוללה ל-30 מיקרוגרם/מ"ל, 60 מיקרוגרם/מ"ל ו-90 מיקרוגרם/מ"ל של תמיסת LPS. תמיסת LPS בריכוז סופי של 30 מיקרוגרם/מ"ל, 60 מיקרוגרם/מ"ל או 90 מיקרוגרם/מ"ל נוספה לצלחות פטרי המכילות 24 עוברי דג זברה hpf; נפח התמיסה לכל באר ניסוי היה 3 מ"ל. בקבוצת הביקורת, עוברי דג הזברה גודלו במדיום E3 ללא LPS. צלחות פטרי הונחו בתא דגירה בטמפרטורה קבועה בטמפרטורה של 28 מעלות צלזיוס. החשיפה ל-LPS חזרה על עצמה בעקבות אותו הליך שהוזכר לעיל במשך חמישה ימים רצופים.

3. השפעת מעכב TLR4 על רעילות הנגרמת על ידי LPS בדגי זברה

עוברי דג הזברה ב-24 hpf הוקצו לקבוצות ביקורת, LPS ו-TAK-242. מספר מחקרים נערכו כדי לאמת את ההשפעה הרגולטורית של TAK-242 בריכוז סופי של 1 מיקרומטר על ויסות מסלול האיתות TLR4, ביניהם כמה מחקרים הראו כי TAK-242, על ידי עיכוב התפשטות תאים המושרה על ידי LPS ושחרור גורמים דלקתיים, מספק דרך חדשה לפתור את הבעיות הקשורות להפחתת גלאוקומה בתקופה שלאחר הניתוח11. בקבוצת TAK-242, TAK-242 (1 מיקרומטר, ריכוז סופי) נוסף לצלחת פטרי המכילה 24 עוברי דג זברה hpf; נפח התמיסה לכל באר ניסוי היה 3 מ"ל. לאחר 30 דקות, LPS (60 מיקרוגרם/מ"ל, ריכוז סופי) נוסף כדי לגרום לרעילות, וריכוזי LPS לא גרמו לתמותה של דג הזברה. העוברים בקבוצת הביקורת נשמרו במדיום E3 בלבד. צלחות פטרי הונחו בתא דגירה בטמפרטורה קבועה בטמפרטורה של 28 מעלות צלזיוס. ההליך הנ"ל חזר על עצמו במשך חמישה ימים רצופים.

4. השפעת HSYA על רעילות הנגרמת על ידי LPS בדגי זברה

עוברי דג הזברה ב-24 hpf הוקצו לקבוצות ביקורת, LPS ו-HSYA. HSYA בריכוז סופי של 20 מיקרומטר, 40 מיקרומטר או 80 מיקרומטר נוסף לצלחות פטרי המכילות 24 hpf עוברי דג זברה; נפח התמיסה לכל באר ניסוי היה 3 מ"ל. לאחר 30 דקות נוסף LPS (60 מיקרוגרם/מ"ל, ריכוז סופי). העוברים בקבוצת הביקורת נשמרו במדיום E3 בלבד. צלחות פטרי הונחו בתא דגירה בטמפרטורה קבועה בטמפרטורה של 28 מעלות צלזיוס. ההליך הנ"ל חזר על עצמו במשך חמישה ימים רצופים.

5. הערכה התנהגותית

דג הזברה הועבר ל-60 הבארות האמצעיות של צלחת של 96 בארות, עם זחל דג זברה אחד לכל באר. מדיום תרבית E3 (250 מיקרוליטר) נוסף לכל באר כדי לאפשר שחייה חופשית. פעילות תנועתית תועדה באמצעות מערכת ראייה. מים טהורים נוספו לקופסה הכהה (30 ס"מ × 40 ס"מ × 60 ס"מ), שהוגדרה למצב חימום עם טמפרטורה מותאמת ל-28 מעלות צלזיוס.

ברגע שטמפרטורת הקופסה החשוכה הגיעה ל-28 מעלות צלזיוס, צלחת 96 הבארות המכילה דג זברה הונחה פנימה, ומערכת הראייה החזותית הופעלה כדי לתעד את הפעילות התנועה. תיקיה חדשה נוצרה כדי לאחסן את הנתונים. קובץ וידאו תוצרת בית נבחר כמקור הווידאו לכניסה לממשק ההגדרות הניסיוני. בסעיף הגדרות הניסוי , מספר אזורי התצפית הוגדר ל-60, מה שמאפשר תצפית בו זמנית על 60 דגי זברה. ב-Arena Settings, התמונה של צלחת 96 הבארות שצולמה על ידי העדשה הופיעה על המסך, יחד עם עיגולי מיקום. המודולים בממשק Arrange Arenas הותאמו כך שאזור לכידת העדשה מיושר עם כל באר. במיפוי חומרת הזירה, נורית הקופסה הכהה הוגדרה לאור דולק.

בהגדרות בקרת הניסוי, נוצרה תוכנית חדשה עם תקופת הכנה של 10 דקות ותקופת זיהוי של 10 דקות, אשר יושמה לאחר מכן על כל הניסויים המקבילים. הגדרות זיהוי שימשו כדי לאשר שפונקציית לכידת העדשה פועלת כרגיל. ברשימת הניסוי הוצגו נתונים מ-60 דגי זברה בכל קבוצה. מספר הניסויים בסרגל הכלים שימש ליצירת טבלת נתונים המכילה את כל קבוצות הניסוי, מה שמבטיח את שלמות הנתונים.

כל ההגדרות אושרו, וטמפרטורת הקופסה הכהה נשמרה על 28 מעלות צלזיוס. לאחר שווידאו שכל באר מכילה דג זברה אחד עם סימנים חיוניים, הניסוי החל. במהלך הניסוי, עדשת המכשיר ההתנהגותי תיעדה את מסלול התנועה, משך הזמן והפרמטרים הקשורים. לאחר 20 דקות מההקלטה הראשונה, המערכת הסתיימה אוטומטית והתכוננה לניסיון הבא. הקופסה הכהה נפתחה, וצלחת בת 96 הבארות הוחלפה בצלחת חדשה המכילה דג זברה לניסוי הבא.

בסוף הניסוי נבחרו תוצאות ממודול הניתוח . פרמטרים ניסיוניים כגון מהירות ממוצעת, מרחק, תאוצה מקסימלית וזווית היגוי מוחלטת חולצו ממודול התוצאות ויוצאו. לאחר מכן נאספו הנתונים לניתוח הבדלים התנהגותיים בין קבוצות דגי הזברה12.

6. מדידת ציטוקינים מעודדי דלקת

דגי זברה נאספו. הדגימות נשקלו ו-PBS (0.01 מ', pH = 7.4) נוסף ביחס גרבימטרי של 1:9 והומוגני (5000 סל"ד, 30 שניות) ב-4 מעלות צלזיוס. הומוגנטים צנטריפוגו בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס, 5000 x גרם, 20 דקות, ונקטפו סופרנטנטים. IL-1β ו-TNF-α נבדקו עם ערכות ELISA דגים בהתאם להוראות שסופקו על ידי היצרן.

7. אימונוהיסטוכימיה

דגי הזברה תוקנו עם 5 מ"ל 4% (v/v) פרפורמלדהיד. מוטבע בפרפין וחתוך חלקים בעובי 5 מיקרומטר. הקטעים הודגרו עם מאגר ציטראט (200 מיקרוליטר) במיקרוגל למשך 10 דקות. הם הודגרו בתמיסת מי חמצן ומתנול של 0.3% למשך 30 דקות כדי לחסום פרוקסידאזות אנדוגניות. נשטף עם PBS 3 פעמים, 5 דקות בכל פעם. סרום לא חיסוני הודגר במשך 30 דקות ב-37 מעלות צלזיוס. נוגדן אנטי-TH ראשוני (1:100) הודגר במשך 30 דקות ב-37 מעלות צלזיוס. נשטף 3 פעמים עם PBS. מודגר עם נוגדן משני המקושר לחזרת פרוקסידאז (1:200) בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות. לאחר מכן, נוסף 3,3'-diaminodbenzidine. הקטעים צולמו באמצעות מיקרוסקופ שדה בהיר.

8. נוירוטרנסמיטורים

HPLC-ECD שימש לבדיקת רמת הדופמין. דופמין הידרוכלוריד הומס בחומצה פרכלורית של 0.1 M (HClO4) כדי לקבל תמיסת שיפוע ריכוז ב-3.90625 ננוגרם/מ"ל, 7.8125 ננוגרם/מ"ל, 15.625 ננוגרם/מ"ל, 31.25 ננוגרם/מ"ל, 62.5 ננוגרם/מ"ל ו-125 ננוגרם/מ"ל. סדרה של פתרונות סטנדרטיים לדופמין נותחה על ידי HPLC-ECD. רגרסיה ליניארית בוצעה באמצעות ריכוז הדופמין ואזור שיא הדופמין. שורטטה עקומה סטנדרטית. רקמות דג הזברה הומוגניות עם 0.1 M HClO413. ההומוגנטים צנטריפוגו בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס, 20,000 x גרם, 15 דקות. לאחר מכן, הדגימות הופרדו על עמודת ODS2 (E2118047; 4.6 × 250 מ"מ, 5 מיקרומטר). הוכן בופר: 25 ממול/ליטר נתרן אצטט, 25 ממול/ליטר חומצת לימון, 0.01 ממול/ליטר חומצה אתילנדיאמינטטראצטית מלח דיסודיום, 1 ממול/ליטר נתרן 1-אוקטנסולפונט, וחומצה אצטית, pH מותאם ל-3.35. השלב הנייד היה אצטוניטריל: בופר (1:9, v/v). לאחר סינון ואקום עם קרום פילטר של 0.22 מיקרומטר, הדגימה הוסרה על ידי הסרת גז קולי למשך 10 דקות. הטמפרטורה של תנור העמודים הייתה 30 מעלות צלזיוס. קצב הזרימה היה 1 מ"ל לדקה. הדגימה הוזרקה בנפח של 20 מיקרוליטר. הגלאי האלקטרוכימי הופעל במתח של 1000 mV עם טווח של 10 μA. כמות הדופמין ברקמות דג הזברה חושבה על סמך משוואת הרגרסיה.

9. כתם מערבי

חלבונים הופקו מרקמת דג הזברה, והריכוז נבדק (ריכוז סופי: 10 מ"ג/מ"ל). חלבונים (50 מיקרוגרם/5 מיקרוליטר) נחשפו לאלקטרופורזה של ג'ל נתרן דודציל סולפט-פוליאקרילאמיד 8%. קרום ההעברה נערך ב -110 וולט למשך שעה. הממברנות נחסמו עם חלב 5% למשך שעה. מודגר בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס עם נוגדנים ראשוניים: ארנב נגד TLR4 (1:1000), ארנב נגד NF-κB (1:2000), ארנב נגד לאמין B1 (1:2000), או ארנב נגד GAPDH (1:1000). לאחר שטיפה עם TBST (3 פעמים למשך 5 דקות כל אחת), הממברנות הודגרו עם נוגדן משני למשך שעה. הרצועות הודגמו באמצעות ערכת מצע כימילומינסנט ECL וכומתו באמצעות מערכת הדמיית ג'ל. Lamin B1 ו-GAPDH שימשו כבקרות העמסה.

10. ניתוח סטטיסטי

כל הנתונים בוטאו כממוצע ± SD ונותחו באמצעות תוכנה סטטיסטית. ניתוחים סטטיסטיים בוצעו באמצעות ניתוח שונות חד כיווני (ANOVA) ואחריו מבחן טוקי. ערך P של <0.05 היה מובהק סטטיסטית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

השפעות של LPS על התפקוד המוטורי של דג הזברה
המהירות הממוצעת, המרחק הכולל והתאוצה המקסימלית של דג הזברה בקבוצות LPS (60 מיקרוגרם/מ"ל ו-90 מיקרוגרם/מ"ל) הופחתו (P <-0.01) בהשוואה לקבוצת הביקורת. התפקוד המוטורי התבטא גם בשינויים תכופים בכיוון התנועה. זווית הסיבוב המוחלטת של דג הזברה בקבוצות LPS 60 מיקרוגרם/מ"ל ו-LPS 90 מיקרוגרם/מ"ל גדלה באופן משמעותי (P < 0.01) (איור 1) בהשוואה לקבוצת הביקורת.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

לצמחי מרפא יש רקורד ארוך של יישומים אנטי דלקתיים ונוירו-פרוטקטיביים14. המחקרים הקודמים שלנו הראו של-HSYA הייתה השפעה מגנה במודלים של בעלי חיים עם מחלת פרקינסון המושרים על ידי חומרים נוירוטוקסיים. באמצעות רעילות הנגרמת על ידי LPS בדגי זברה, מחקר זה מדגים כי HSYA מחליש את הפגיעה הנגרמת על ידי דלקת בנוירונים דופמינרגיים של דג הזברה על ידי ויסות מסלול האיתות TLR4/NF-κB.

לא רק שהפרעות שינה ותפקוד קוגניטיבי קשורים קשר הדוק למחלת פרקינסון

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים שאין ניגודי אינטרסים.

תרומת המחבר:
המשגה: Guirong Zhang, Bing Han. רכישת מימון: Guirong Zhang, Bing Han. חקירה: Huilin Zhang. מתודולוגיה: Huilin Zhang, Mingyue Li, Xiaohan Zhang, Yang Li. פיקוח: Guirong Zhang, Bing Han. כתיבה- טיוטה מקורית: Mingyue Li, Xiaohan Zhang, Yang Li. כתיבה-ביקורת ועריכה: Huilin Zhang, Guirong Zhang, Bing Han.

תודות

אנו מודים לרייצ'ל ג'יימס על עריכת כתב היד הזה. מחקר זה מומן על ידי הקרן למדעי הטבע של מחוז שאנדונג (מענק מס. ZR2020MH377).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
ערכת מדידת ריכוז חלבון BCA
Beyotime BiotechnologyP0012S
מערכת הדמיה כימית-לומינסנטBeijing Sage Venture Technology Co.ChampChemi 910
דופמין הידרוכלורידסיגמא– אולדריץ'PHR1090
איזון אלקטרונישנחאי OHAUS Instrument Co.AR-2140
ELISA עבור IL-1 ובטא;ערכות COIBO BiotechnologyCB10018-FI
ELISA עבור TNF-ואלפא;COIBO BiotechnologyCB10148-FI
GAPDH נוגדניםטכנולוגיית איתות תאים5174S
GraphPad Prism 5.0GraphPad תוכנה סטטיסטית, בוסטון,
MA, ארה"ב, www.graphpad.com		Prism 5.0
כרומטוגרפיה נוזלית
בעלת ביצועים גבוהים– זיהוי אלקטרוכימי
(HPLC– ECD)		GL Sciences, Ibaraki, יפןED723
צנטריפוגת הקפאה במהירות גבוההבייג'ינג Dalong Xingchuang
Experimental Instrument Co.		D3024R
HPLC– ECDGL SciencesED723
HSYALuye Pharma Group Ltd.
LY202206 תמונה QuantGE Healthcare, טוקיו, יפןLAS 4000
Lamin B1 נוגדניםטכנולוגיית איתות תאים13435S
LPSSigma– AldrichL2630
מיקרוסקופLeica, WetzlarDM1000LED
מיקרוסקופLeica, גרמניהDM1000LED
תווית אנזים רב תכליתיתShanghai Meigu Molecular Instrument Co.פרדיגמת
NF-κ B נוגדן טכנולוגיית איתות תאים8242S
Noldus Visual Vision XT systemBeijing Noldus Biotechnology Co., Ltd.EthoVision XT15
ערכת מיצוי חלבון גרעינית וציטופלזמית
Beyotime BiotechnologyP0028
PMSFBeyotime BiotechnologyST506
TAK-242Merck614316
ThermostatShenzhen Galaxy Instrumentation Co.
12810129 נוגדן TLR4Abcamab13556
דג זברההמרכז הצפוני ללאומי
דג זברה מודל בעלי חיים		AB זן
זברה מערכת מים מחזורבייג'ינג איישנג ביוטכנולוגיה ושות', בע"מESEN-AW-S1
ערכות SpectraMax

מקורות

  1. Lazdon, E., Stolero, N., Frenkel, D. Microglia and Parkinson's disease: Footprints to pathology. J Neural Transm. 127 (2), 149-158 (2020).
  2. Block, M. L., Zecca, L., Hong, J. S. Microglia-mediated neurotoxicity: Uncovering the molecular mechanisms. Nat Rev Neurosci. 8 (1), 57-69 (2007).
  3. Wang, A., et al. Inhibition of NLRP3 inflammasome ameliorates LPS-induced neuroinflammatory injury in mice via PINK1/Parkin pathway. Neuropharmacology. 257, 110063(2024).
  4. Dhureja, M., Deshmukh, R. Impact of alogliptin on lipopolysaccharide-induced experimental Parkinson's disease: Unrevealing neurochemical and histopathological alterations in rodents. Eur J Pharmacol. 975, 176635(2024).
  5. Jiang, S. Y., et al. Mefloquine targets NLRP3 to reduce lipopolysaccharide-induced systemic inflammation and neural injury. EMBO Rep. 24 (10), e57101(2023).
  6. Lal, R., et al. Experimental models of Parkinson's disease: Challenges and Opportunities. Eur J Pharmacol. 980, Article 176819 (2024).
  7. Wang, T., et al. Hydroxysafflor Yellow A attenuates lipopolysaccharide-induced neurotoxicity and neuroinflammation in primary mesencephalic cultures. Molecules. 23 (5), 1210(2018).
  8. Yang, X., et al. Protective effect of hydroxysafflor yellow A on dopaminergic neurons against 6-hydroxydopamine, activating anti-apoptotic and anti-neuroinflammatory pathways. Pharm Biol. 58 (1), 686-694 (2020).
  9. Feng, X., et al. Hydroxysafflor yellow A regulates lymphangiogenesis and inflammation via the inhibition of PI3K on regulating AKT/mTOR and NF-κB pathway in macrophages to reduce atherosclerosis in ApoE-/- mice. Phytomedicine. 112, 154684(2023).
  10. Liu, S., et al. Hydroxysafflor yellow A inhibits TNF-α-induced inflammation of human fetal lung fibroblasts via NF-κB signaling pathway. Evid Based Complement Alternat Med. 2019, 4050327(2019).
  11. Liang, L., et al. Inhibitive effect of TAK-242 on Tenon's capsule fibroblasts proliferation in rat eyes. Int J Ophthalmol. 12 (11), 1699-1707 (2019).
  12. Zhao, Y., et al. Rosmarinic acid protects against MPTP-induced dopaminergic neurotoxicity in zebrafish embryos. Toxicol In Vitro. 65, 104823(2020).
  13. Monje, M. L., Toda, H., Palmer, T. D. Inflammatory blockade restores adult hippocampal neurogenesis. Science. 302 (5651), 1760-1765 (2003).
  14. Batiha, G. E., et al. Commiphora myrrh: A phytochemical and pharmacological update. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 396 (3), 405-420 (2023).
  15. Al-Kuraishy, H. M., et al. Sleep disorders cause Parkinson's disease or the reverse is true: Good GABA good night. CNS Neurosci Ther. 30 (3), e14521(2024).
  16. Alrouji, M., et al. Role of uric acid in neurodegenerative diseases, focusing on Alzheimer and Parkinson disease: A new perspective. Neuropsychopharmacol Rep. 44 (3), 639-649 (2024).
  17. Jankovic, J. Parkinson's disease: Clinical features and diagnosis. J Neurol Neurosurg Psychiatry. 79, 368-376 (2008).
  18. Al-Kuraishy, H. M., et al. Parkinson's disease risk and hyperhomocysteinemia: The possible link. Cell Mol Neurobiol. 43 (6), 2743-2759 (2023).
  19. Al-Kuraishy, H. M., et al. The classical and non-classical axes of renin-angiotensin system in Parkinson disease: The bright and dark side of the moon. Ageing Res Rev. 94, 102200(2024).
  20. Hou, S., et al. Dopamine is produced in the rat spinal cord and regulates micturition reflex after spinal cord injury. Exp Neurol. 285, 136-146 (2016).
  21. Kalia, L. V., Lang, A. E. Parkinson's disease. Lancet. 386, 896-912 (2015).
  22. Hirsch, E. C., Standaert, D. G. Ten unsolved questions about neuroinflammation in Parkinson's disease. Mov Disord. 36, 16-24 (2021).
  23. Hussey, S. E., et al. TAK-242, a small-molecule inhibitor of Toll-like receptor 4 signalling, unveils similarities and differences in lipopolysaccharide- and lipid-induced inflammation and insulin resistance in muscle cells. Biosci Rep. 33, e00098(2012).
  24. Heidari, A., Yazdanpanah, N., Rezaei, N. The role of Toll-like receptors and neuroinflammation in Parkinson's disease. J Neuroinflamm. 19, 135(2022).
  25. Zhao, Z., et al. Fecal microbiota transplantation protects rotenone-induced Parkinson's disease mice via suppressing inflammation mediated by the lipopolysaccharide-TLR4 signaling pathway through the microbiota-gut-brain axis. Microbiome. 9, 226(2021).
  26. Sun, M. F., Shen, Y. Q. Dysbiosis of gut microbiota and microbial metabolites in Parkinson's disease. Ageing Res Rev. 45, 53-61 (2018).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

TLR4NF KappaB
הסרטון יגיע בקרוב
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.