Method Article

טכניקות יעילות לדגימה מקיפה של רקמות נגישות בקסנופוס בוגר

DOI:

10.3791/68353

⸱

June 10th, 2025

 ,  , 
1Department of Systems Biology, Harvard Medical School

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

זהו חלק ראשון מפרוטוקול דגימת קסנופוס מקיף. הרקמות שנדגמו הן חדר הלב, תא המטען העורקי, אונת הכבד השמאלית, כיס המרה, הריאות, הלבלב, הטחול, הגרון, הוושט, הקיבה, המעיים, האשכים, גופי השומן, צינור הביצית, כליות מזווגות, מקלעת סיאטית, עור, תימוס ועין שלמה.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Xenopus הוא כבר מזמן אורגניזם מודל מרכזי לחקר התפתחות ומחלות של בעלי חוליות, ומציע תובנות עמוקות לגבי תהליכים תאיים ותפקוד גנים. למרות שפע המידע על קסנופוס עוברי, נותר פער משמעותי בשיטות הסטנדרטיות לדגימת רקמות בוגרות, במיוחד עבור גישות מודרניות כמו פרוטאומיקה כמותית. מחקר זה מציג פרוטוקול מקיף לדגימה מהירה, מדויקת ויעילה של רקמות מרובות בקסנופוס בוגר. הפרוטוקול מתייחס לאתגרים הקשורים להבדלים האנטומיים העדינים בהשוואה לאנוראנים אחרים, ומבטיח יכולת שחזור גם עבור אלה עם ניסיון מוגבל בדיסקציה של צפרדעים. פרוטוקול זה מותאם לניתוחים ביוכימיים באיכות גבוהה על ידי תעדוף טריות הדגימה. אנו מאפשרים איסוף מהיר של עד 18 רקמות תוך שעה. בנוסף, השיטות חלות על תנאים מחוללים ולא מחוללים, ומספקות גמישות למגוון צרכים ניסיוניים. עבודה זו לא רק ממלאת פער מתודולוגי קריטי עבור Xenopus laevis ו-tropicalis , אלא גם משמשת כמשאב רב ערך לחוקרים המתאימים טכניקות למודלים דו-חיים דומים, ובכך משפרת את ההיקף והאמינות של מחקרים ביולוגיים ואבולוציוניים השוואתיים.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

קסנופוס מציע יתרונות ייחודיים על פני עכברים, דגי זברה ואורגניזמים מודלים אחרים לחקר מחלות אנושיות, במיוחד בהקשרים התפתחותיים ואבולוציוניים. התפתחותו העוברית החיצונית והעוברים הגדולים הניתנים למניפולציה מאפשרים תצפית בזמן אמת והתערבויות ניסיוניות (למשל, השתלת רקמות, עריכת גנים) המאתגרות בעכברים, המתפתחים פנימית ודורשים הליכים פולשניים. בנוסף, הלב התלת-תלת-תאי והגפיים הטטרפודיות של קסנופוס מספקים גשר אבולוציוני ישיר יותר לחקר מומים מולדים1, התחדשות גפיים2 והתפתחות לב3. בניגוד לעכברים, ראשנים של קסנופוס יכולים לחדש גפיים ואיברים, ולדגמן תהל....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל הניסויים אושרו ובוצעו בהתאם לכללים ולתקנות של בית הספר לרפואה של הרווארד IACUC (הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים IS 00001365_3). אם מקפידים על פרוטוקול זלוף13 לפני הדגימה, דלג לשלב 2.3.

1. הכנה (ללא זלוף)

  1. ודא שמוסד המחקר אישר את טכניקת המתת החסד המתוארת בפרוטוקול זה.
  2. הכן תמיסה של 5 גרם/ליטר MS-222 (טריקאין מתאן סולפונט) ו-5 גרם/ליטר נתרן ביקרבונט (ראה טבלת חומרים). בדוק את ה-pH כדי לוודא שהוא ≥7.
    הערה: הנפח חייב להיות גדול מהנפח הנדרש כדי לכסות לחלוטין את בעלי החיים המומתים.
  3. בצע המתת חסד ראשונית על ידי הנחת הקסנופוס

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

על ידי ביצוע כל השלבים של פרוטוקול זה, חדר הלב, תא המטען העורקי, אונת הכבד השמאלית, כיס המרה, הריאות, הלבלב, הטחול, הגרון, הוושט, הקיבה, המעיים, האשכים, גופי השומן, צינור הביצית, הכליות המזווגות, מקלעת הסיאטית, העור, התימוס והעין כולה נכרתו באופן נקי תוך שעה מהמתת החסד (ראה איור 1, איור 2, איור 3, איור 4, איור 5,

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הפרוטוקול המוצג כאן נועד לספק גמישות למשתמשים ברמות ניסיון שונות תוך הבטחת איסוף רקמות חיוניות בזמן וביעילות. למשתמשים חדשים מומלץ לבצע כל שלב בפרוטוקול כמתואר כדי להבטיח איסוף שיטתי של רקמות. עם זאת, משתמשים מנוסים יותר עשויים לבחור לדלג על שלבים מסוימים ולדגום רק את הרקמות הדרושות להם. לדוגמה, ניתן להשיג גישה לטחול, שנמצא מאחורי המזנטריה, מבלי לדגום את הלבלב פשוט על ידי הזזת הקיבה. יכולת הסתגלות זו מאפשרת התאמה אישית של תהליך הדגימה בהתאם לצרכי המחקר הספציפיים. בעוד שקצב פירוק הרקמות ו.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין אינטרסים מתחרים להצהיר עליהם.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה על ידי ODO31956 המענקים OD R24 של NIH. ברצוננו להודות גם לסמנתה ג'לברט וג'יל רלסטון על הסיוע והתמיכה.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
1x PBS Corning21-040-CV
זכוכית מגדלת 5x עם תאורת LED ומעמדamazon.comאסור לאור B08QJ6J8P1 לייצר חום
צנרת העברה חד פעמיתVWR414004-036
ניתוח מלקחיים מחודדים עדיניםפישר סיינטיפיק08-875
חיתוך מספריים פיונט חד, ישר 6.5 אינץ'VWR76457-374
מגש דיסקציהפישר סיינטיפיק14-370-284יריעות קלקר הן חלופה מקובלת
מיכל המתת חסדארה"ב פלסטיק פריט  2860מיכלים אטומים חלופיים
מכסה מיכל המתת חסדארה"ב פלסטיק פריט  3047
מספריים לכריתת עיניים 6 אינץ'VWR470018-938מספריים לקשתית הם אלטרנטיבה מקובלת
MS-222: Syncaine (לשעבר tricaine)Pentair AESTRS1
מלקחיים לרקמת שיניים של חולדה 5.5 אינץ', נירוסטהFisher ScientificS08100
נתרן ביקרבונט, אבקה, USPFisher Scientific18-606-333
מלקחיים לדוגמה, סיכות T משוננותVWR82027-442
לניתוחפישר ScinetificS99385
מקובל

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Duncan, A. R., Khokha, M. K. Xenopus as a model organism for birth defects—Congenital heart disease and heterotaxy. Semin Cell Biol. 51, 73(2016).
  2. Kawasumi-Kita, A., et al. hoxc12/c13 as key regulators for rebooting....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Xenopus Tissue SamplingAdult XenopusFrog DissectionQuantitative ProteomicsBiochemical AnalysisTissue CollectionAmphibian ModelsComparative BiologyPerfused TissuesReproducible Protocol

Related Articles