זהו חלק ראשון מפרוטוקול דגימת קסנופוס מקיף. הרקמות שנדגמו הן חדר הלב, תא המטען העורקי, אונת הכבד השמאלית, כיס המרה, הריאות, הלבלב, הטחול, הגרון, הוושט, הקיבה, המעיים, האשכים, גופי השומן, צינור הביצית, כליות מזווגות, מקלעת סיאטית, עור, תימוס ועין שלמה.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
טכניקות יעילות לדגימה מקיפה של רקמות נגישות בקסנופוס בוגר
במאמר זה
סיכום
תקציר
Xenopus הוא כבר מזמן אורגניזם מודל מרכזי לחקר התפתחות ומחלות של בעלי חוליות, ומציע תובנות עמוקות לגבי תהליכים תאיים ותפקוד גנים. למרות שפע המידע על קסנופוס עוברי, נותר פער משמעותי בשיטות הסטנדרטיות לדגימת רקמות בוגרות, במיוחד עבור גישות מודרניות כמו פרוטאומיקה כמותית. מחקר זה מציג פרוטוקול מקיף לדגימה מהירה, מדויקת ויעילה של רקמות מרובות בקסנופוס בוגר. הפרוטוקול מתייחס לאתגרים הקשורים להבדלים האנטומיים העדינים בהשוואה לאנוראנים אחרים, ומבטיח יכולת שחזור גם עבור אלה עם ניסיון מוגבל בדיסקציה של צפרדעים. פרוטוקול זה מותאם לניתוחים ביוכימיים באיכות גבוהה על ידי תעדוף טריות הדגימה. אנו מאפשרים איסוף מהיר של עד 18 רקמות תוך שעה. בנוסף, השיטות חלות על תנאים מחוללים ולא מחוללים, ומספקות גמישות למגוון צרכים ניסיוניים. עבודה זו לא רק ממלאת פער מתודולוגי קריטי עבור Xenopus laevis ו-tropicalis , אלא גם משמשת כמשאב רב ערך לחוקרים המתאימים טכניקות למודלים דו-חיים דומים, ובכך משפרת את ההיקף והאמינות של מחקרים ביולוגיים ואבולוציוניים השוואתיים.
מבוא
קסנופוס מציע יתרונות ייחודיים על פני עכברים, דגי זברה ואורגניזמים מודלים אחרים לחקר מחלות אנושיות, במיוחד בהקשרים התפתחותיים ואבולוציוניים. התפתחותו העוברית החיצונית והעוברים הגדולים הניתנים למניפולציה מאפשרים תצפית בזמן אמת והתערבויות ניסיוניות (למשל, השתלת רקמות, עריכת גנים) המאתגרות בעכברים, המתפתחים פנימית ודורשים הליכים פולשניים. בנוסף, הלב התלת-תלת-תאי והגפיים הטטרפודיות של קסנופוס מספקים גשר אבולוציוני ישיר יותר לחקר מומים מולדים1, התחדשות גפיים2 והתפתחות לב3. בניגוד לעכברים, ראשנים של קסנופוס יכולים לחדש גפיים ואיברים, ולדגמן תהליכי התחדשות שנעדרים ביונקים, בעוד ששלב החיים הימי שלהם מאפשר מחקר לא פולשני של השפעות סביבתיות או רעלים. בשילוב עם רבייה מהירה יותר, עלויות נמוכות יותר ופחות אילוצים אתיים, Xenopus עדיף למחקרים מכניסטיים בעלי תפוקה גבוהה של אורגנוגנזה ותגובות לחץ שקשה לשכפל במערכות יונקים.
מאמר זה נועד להציע הנחיות ברורות לדגימת איברים מדויקת וניתנת לשחזור של רקמות קסנופוס בוגרות, כפי שזמין עבור ראשנים Xenopus 4. בעוד שקיימת "דיסקציה דיגיטלית"5 ו"הדמיית מיקרו-CT"6 של קסנופוס בוגר, השגת דגימה עקבית של איברים ורקמות בקסנופוס בוגר נותרה קשה ללא ההוראות המפורטות הניתנות למודלים בוגרים אחרים, כגון עכברים 7,8,9.
למרות שמדריך דגימה לשש רקמות חיוניות זמין10, אין כרגע מדריך ספציפי ומקיף לניתוח ודגימה עבור Xenopus . קיים מדריך דיסקציה מקיף עבור Rana sp.11 ומדריכי דיסקציה שונים בכיתה זמינים עבור אנוראנים אחרים12, עם זאת, עבור אנשים חסרי ניסיון בטכניקות דגימה או באנטומיה של דו-חיים, ההבדלים העדינים בין קסנופוס לאנורנים אחרים הופכים את המשאבים הקיימים לבלתי מספיקים לדגימת רקמות עקבית וניתנת לשכפול.
מדריך זה פותח כדי לתעדף את טריות הרקמות עבור פרוטאומיקה ואימונוכימיה. למשתמש מנוסה, ניתן לאסוף את כל הרקמות מאדם אחד תוך פחות משעה. מומלץ שאם למשתמש חסר ניסיון, הוא ינסה את הפרוטוקול הזה על דגימות שהומתו מסיבות אחרות לפני שיקריב כל בעל חיים שקשה יותר להחליף.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל הניסויים אושרו ובוצעו בהתאם לכללים ולתקנות של בית הספר לרפואה של הרווארד IACUC (הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים IS 00001365_3). אם מקפידים על פרוטוקול זלוף13 לפני הדגימה, דלג לשלב 2.3.
1. הכנה (ללא זלוף)
- ודא שמוסד המחקר אישר את טכניקת המתת החסד המתוארת בפרוטוקול זה.
- הכן תמיסה של 5 גרם/ליטר MS-222 (טריקאין מתאן סולפונט) ו-5 גרם/ליטר נתרן ביקרבונט (ראה טבלת חומרים). בדוק את ה-pH כדי לוודא שהוא ≥7.
הערה: הנפח חייב להיות גדול מהנפח הנדרש כדי לכסות לחלוטין את בעלי החיים המומתים. - בצע המתת חסד ראשונית על ידי הנחת הקסנופוס בתמיסת MS-222 (משלב 1.2), תוך שמירה על החיה שקועה למשך שעהו-14 בסך הכל.
- הנח את משטח החיתוך (מגש או יריעת קצף) בשיפוע בתוך מיכל משני או סדר אותו בדרך אחרת כדי להקל על ניקוז הדם.
- לאחר שהצפרדע הייתה בתמיסה במשך שעה, המתת החסד הראשונית הושלמה. הסר את הצפרדע ובדוק את אובדן תגובת הכאב על ידי ביצוע צביטה בכף הרגל.
- רשום את הגיל (אם ידוע), המין והמצב הבריאותי של החיה הנדגמת, כמו גם אם היא עברה עירוי. שקלו את ה-Xenopus ובצעו את כל המדידות הנוספות הנדרשות לפני הדגימה.
- הניחו את הצפרדע על גבה והצמידו את הגפיים הקדמיות הפרוקסימליות לגוף (איור 1A).
- בעזרת מספריים לדיסקציה חותכים את העור, במעלה קו האמצע, ואז לרוחב, יוצרים שני דשים.
- זהה את הלינאה אלבה (איור 1B). השתמש במלקחיים כדי לתפוס את הלינאה אלבה ולמשוך אותה הרחק מהחלל הקולומי. השתמש בזהירות במספריים כדי לחתוך לכיוון הראש, דרך השרירים. צור שני דשים מחוץ לדופן החלל וחתוך או הצמיד את כל הדשים מהדרך.
- זהה את הלב, שעדיין אמור לפעום. אם הלב אינו נגיש בקלות, השתמשו במספריים כדי להקטין את עצמות הקורקואידים (איור 1B).
הערה: אם הלב הפסיק לפעום לפני הדגימה, טריות הדגימה נפגעה. - אם תרצה, השלם את פרוטוקול הזלוף המהיר9.
2. דגימה
הערה: אם החיה עברה עירוי, דלג לשלב 2.3. כל השוליים צריכים להיות בערך 25 מ"מ. יש לנגב את המלקחיים והמספריים או להחליף אותם בין הדגימות. יש לדגום את כל הרקמות תוך שעה אחת מהמתת החסד, לטריות מרבית.
- בעזרת פיפטת העברה, שטפו את החלל הקולומי עם PBS מקורר או 0.7x PBS15 כדי לנקות דם ולשמור על הראות.
- זהו את קרום הלב הדק (איור 2A) ומשכו אותו מתוח בעזרת מלקחיים לרקמות. בעזרת קצה המספריים לכריתת האירית, נקב אותו בעדינות, היזהר לא לחתוך את הרקמות הבסיסיות. קלפו את קרום הלב הרחק משלושת חדרי הלב (איור 2B).
- חתוך את האפרכסת על ידי חיתוך במקום בו הן פוגשות את החדר ותא המטען העורקי.
- השתמשו במלקחיים כדי לתפוס את החדר בקודקוד וחתכו אותו מתחת למקום שבו הוא פוגש את תא המטען העורקי, והשאירו שוליים (איור 2C).
- בדוק ויזואלית את החדר בהגדלה כדי לוודא שלא מחוברות רקמות לא רצויות.
הערה: מרכז החדר עשוי לכלול רקמת שסתום ספירלה בצבע בהיר; זה עשוי להישמר. בבעלי חיים לא מחוללים, הסרת החדר עשויה להיחשב כהמתת חסד משנית (נקראת גם הרדמה סופנית). - מיד לאחר הדגימה, שטפו את דגימות הרקמה ב-PBS צונן או 0.7x PBS, בהתאם לצרכי הניסוי15.
הערה: בבעלי חיים שעברו עירוי, צפוי שכל הרקמות למעט הכבד יישטפו בצורה נקייה. אם זה לא המקרה, יש לרשום הערה. ברקמות לא ממוזגות, כל אמצעי השטיפה יהיו רוויים בדם. יש לבצע את שלבים 2.5-2.6 לאחר דגימת כל רקמה. - שימו לב שגזע העורקים מתפצל לשני גזעי אבי העורקים (שנקראים גם אבי העורקים הצדדי), ושכל אחד מהם מתפצל לשלוש קשתות עורקים (איור 2D). משוך את תא המטען העורקי מתוח וחתוך את גזעי אבי העורקים מיד לאחר המקום שבו הקשתות הללו מתפצלות.
- התבוננו בשלוש האונות של הכבד (איור 3A). אחזו בשפת האונה השמאלית (מימין לצופה) והרימו אותה בעדינות כך שצינורות הכבד והציסטיות יהיו גלויים. דגמו את 2/3 התחתון של האונה, מתחת לקבצים מצורפים אלה (איור 3B).
- זהה את כיס המרה, שעשוי להשתנות באופן דרסטי בצבעו. תפסו את כיס המרה, משכו אותו הרחק מהאונה הימנית של הכבד ונתקו את החיבור שלו (איור 3C). אם הוא לא מתפוצץ, אז קרע אותו במספריים לכריתת אירית.
- אחוז בקודקוד הריאה ומשוך אותו מתוח. שימו לב למרקם הנאדיות, וקבעו היכן המרקם מסתיים ומתחיל הסימפונות. חתוך בשוליים אלה (איור 3D). אם הריאה מאוחה לצפק, נתק אותה בזהירות.
- זהה את השחלה, העטופה בשכבה של צפק קרביים הנקראת אפיתל הנבט. הזיזו בעדינות את האונות עד שהן בצדדים שלהן כדי להפוך את אזור ההתקשרות לגלוי (איור 4A); חיבורים אלה נמצאים ישירות בגחון לכליה המזווגת. בעזרת מספריים, הסירו את השחלות קרוב ככל האפשר לכליות מבלי לפגוע בהן (איור 4B). במהלך תהליך זה, אם הביציות דולפות החוצה, דגמו אותן ולאחר מכן שטפו אותן.
הערה: הסרת השחלה עוזרת להשיג גישה טובה יותר לרקמות של נקבת צפרדע. - בדקו את האונה הקדמית (שנקראת גם האונה החציונית) של הכבד, ושימו לב כיצד היא מתחברת לקיבה ולתריסריון דרך המזנטריה (איור 3A ואיור 4C). נתק את המזנטריה והרצועה של הכבד באמצעות מספריים לכריתת העיניים. המסה הבשרנית שנותרה היא הלבלב וצינור המרה המשותף.
- נתק את החיבור של הלבלב וצינור המרה המשותף לאונה הקדמית של הכבד, והשאיר שוליים. אחוז בבטן עם מלקחיים עם שיניים וקצה אחד של הלבלב עם מלקחיים לרקמות. תחת הגדלה, הקניטו בעדינות את הלבלב מהקיבה (איור 4D).
- אם הלבלב לא יוצא נקי, קח את רקמת הלבלב שנותרה. לחלופין, נתק את הלבלב באופן שיטתי באמצעות מספריים לכריתת אירית ומלקחיים לרקמות.
הערה: בנוסף לצינור המרה המשותף, צפוי כי חלק מהמזנטריה וצינור הלבלב ייכללו בדגימה זו.
- אם הלבלב לא יוצא נקי, קח את רקמת הלבלב שנותרה. לחלופין, נתק את הלבלב באופן שיטתי באמצעות מספריים לכריתת אירית ומלקחיים לרקמות.
- זהה את הטחול ודגום אותו על ידי חיתוך החיבור שלו לצפק (איור 4E).
- הסר והשליך את רקמות הכבד הנותרות.
- הסר את הריאה השנייה ואת הסימפונות הנותרים במקום בו הם נצמדים לגרון. אוחזים בגרון בקצהו התחתון, מתחילים להרים אותו החוצה מהחלל, מנתקים חיבורים ברורים כשהם מתגלים.
- כאשר הגרון מורם, הצמדתו לוושט תורגש. קלפו בזהירות וחתכו את רקמת הוושט הרחק מהגרון באמצעות מספריים מעוקלים לכריתת הוושט (איור 5A). לאחר מכן, משוך את הגרון כלפי מטה וחתוך אותו הרחק מחלל הפה. חתוך את כל הקבצים המצורפים הברורים שמתגלים.
- שימו לב לעקמומיות של הקיבה, שמבדילה אותה מהוושט, כמו גם להגבלה הפילורית שמבדילה בין הקיבה למעיים (איור 5B). חותכים את תעלת העיכול מיד לפני עקמומיות הקיבה, ומפרידים אותה מהוושט.
- פתח את הפה וזהה את הפתח המשותף של צינורות האוסטכיוס על גגו16. כשהפה פתוח, משכו את הוושט כדי לשים לב לחיבור שלו (איור 5C). הרם את הוושט מהחלל וניתוק חיבורים ברורים לאורך הדרך. נתק את הוושט מחלל הבוקאלי מיד מתחת לפתח האוסטכי.
- תפסו את הקיבה וחתכו אותה במקום שבו היא פוגשת את התריסריון, בהגבלת הפילורי (איור 5A,B).
- משוך את המעי הגס מתוח וחתוך אותו קרוב ככל האפשר לקלואקה (איור 5D). משוך את המעיים החוצה, תוך ניתוק כל חיבורי הצפק הברורים.
- אם הצפרדע היא זכר, זהו את האשכים והסירו אחד מהם באמצעות מספריים לכריתת הקשתית, תוך היזהרות שלא לפגוע בכליה שמתחתיה (איור 6A).
- הקניט את הגופים השומנים כך שיהיו בצדדים שלהם; האזור מעל הכליה, בו גוף השומן מתחבר לצפק, יהיה גלוי. תפסו את הבסיס של כל אחד מגופי השומן והשתמשו במספריים כדי לחתוך אותו מהצפק, ולהשאיר שוליים (איור 6B).
- זהה והסר את שלפוחית השתן, וחתוך קרוב ככל האפשר לקלואקה (איור 6C).
- אם הצפרדע היא נקבה או שיש לה שריד ביצית מובהק, תפסו את הקצה התחתון של צינור הביצית, משכו אותה הרחק מהקלואקה וחתכו אותה קרוב ככל האפשר לקלואקה (איור 6D). משוך את צינור הביצית החוצה מהחלל הקולומי, תוך ניתוק כל חיבורי הצפק כאשר הם מתגלים (איור 6E).
- הסר והשליך את גופי השומן והאשכים או הביצית שנותרו.
- השתמש במלקחיים כדי לתפוס את הכליות בבסיסן התחתון ושים לב שהן מכוסות על ידי הצפק השקוף (רטרופריטונאלי)17. חתכו את הצפק בבסיס הכליה (איור 7A) ואז הרימו את הכליות החוצה מהחלל הקולומי (איור 7B), באמצעות מספריים כדי לחתוך את הצפק לפי הצורך.
- בהגדלה, יש לחתוך עודפי צפק וכל רקמת שומן שנותרה בגוף, בשחלה או באשכים.
- התבונן בצרור העצבים ההיקפיים המחבר את קצה עמוד השדרה לכל רגל; זהו מקלעת הסיאטית. תפסו את צרור העצבים בעזרת מלקחיים וחתכו אותם במקום שבו הם יוצאים מהחלל הקולומי (איור 7C). הרם את הצרור מהחלל וחתך אותו במקום שבו העצבים עוזבים את עמוד השדרה (איור 7D).
- הסר את הסיכות מהחיה, הפוך אותה על הגחון שלה והצמד מחדש את איברי החיה. בחר אחת מהגפיים האחוריות כדי לדגום ממנה ולהצמיד את כף הרגל של אותה איבר.
- הסירו דש עור בצורת שקד מעל הגסטרוקנמיוס/טיביופיבולה (איור 8A,B).
- תפסו את עור הגב וחתכו לרוחב כך שיהיה חתך רציף סביב החלק האמצעי של החיה (איור 8C).
- הסר את הסיכות, אבטח את הרגליים ביד אחת ותפס את עור הגב הקדמי בעזרת מלקחיים משוננים. עור החיה על ידי משיכת עור הגב כלפי מעלה מעל הראש והזרועות, תוך שימוש בכוח (איור 8D).
- זהו את המסה השומנית שמכסה את מפרק הלסת, חתכו את השוליים האחוריים של המסה מהמקום שבו היא מאוחה לרקמות שריר ורודות, ואז השתמשו במספריים לכריתת אירידקטומיה כדי לחתוך אותה מהעצם שמתחתיה (איור 9A). כתלות בגיל החיה ובבגרותה, יתגלה מקבץ של מלנופורים (איור 9B). חתוך את המסה כלפי מטה כך שלא יחוברו חיבורים שריריים או סחוס.
- החזר את החיה ובחר עין. הכניסו מספריים מעוקלים לכריתת העין למסלול סביב עקמומיות העין (איור 9C). חותכים בעדינות סביב העין, מנתקים חיבורים שריריים.
- החלק את המספריים עמוק יותר לתוך המסלול ונתק את עצב הראייה, מאחורי העין. השתמש במספריים אלה כדי להוציא את העין מהמסלול ולאחר מכן להפחית עוד יותר את כל החיבורים השריריים.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
על ידי ביצוע כל השלבים של פרוטוקול זה, חדר הלב, תא המטען העורקי, אונת הכבד השמאלית, כיס המרה, הריאות, הלבלב, הטחול, הגרון, הוושט, הקיבה, המעיים, האשכים, גופי השומן, צינור הביצית, הכליות המזווגות, מקלעת הסיאטית, העור, התימוס והעין כולה נכרתו באופן נקי תוך שעה מהמתת החסד (ראה איור 1, איור 2, איור 3, איור 4, איור 5,
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
הפרוטוקול המוצג כאן נועד לספק גמישות למשתמשים ברמות ניסיון שונות תוך הבטחת איסוף רקמות חיוניות בזמן וביעילות. למשתמשים חדשים מומלץ לבצע כל שלב בפרוטוקול כמתואר כדי להבטיח איסוף שיטתי של רקמות. עם זאת, משתמשים מנוסים יותר עשויים לבחור לדלג על שלבים מסוימים ולדגום רק את הרקמות הדרושות להם. לדוגמה, ניתן להשיג גישה לטחול, שנמצא מאחורי המזנטריה, מבלי לדגום את הלבלב פשוט על ידי הזזת הקיבה. יכולת הסתגלות זו מאפשרת התאמה אישית של תהליך הדגימה בהתאם לצרכי המחקר הספציפיים. בעוד שקצב פירוק הרקמות ו...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין אינטרסים מתחרים להצהיר עליהם.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי ODO31956 המענקים OD R24 של NIH. ברצוננו להודות גם לסמנתה ג'לברט וג'יל רלסטון על הסיוע והתמיכה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 1x PBS | Corning | 21-040-CV | |
| זכוכית מגדלת 5x עם תאורת LED ומעמד | amazon.com | אסור לאור B08QJ6J8P1 לייצר חום | |
| צנרת העברה חד פעמית | VWR | 414004-036 | |
| ניתוח מלקחיים מחודדים עדינים | פישר סיינטיפיק | 08-875 | |
| חיתוך מספריים פיונט חד, ישר 6.5 אינץ' | VWR | 76457-374 | |
| מגש דיסקציה | פישר סיינטיפיק | 14-370-284 | יריעות קלקר הן חלופה מקובלת |
| מיכל המתת חסד | ארה"ב פלסטיק | פריט 2860 | מיכלים אטומים חלופיים |
| מכסה מיכל המתת חסד | ארה"ב פלסטיק | פריט 3047 | |
| מספריים לכריתת עיניים 6 אינץ' | VWR | 470018-938 | מספריים לקשתית הם אלטרנטיבה מקובלת |
| MS-222: Syncaine (לשעבר tricaine) | Pentair AES | TRS1 | |
| מלקחיים לרקמת שיניים של חולדה 5.5 אינץ', נירוסטה | Fisher Scientific | S08100 | |
| נתרן ביקרבונט, אבקה, USP | Fisher Scientific | 18-606-333 | |
| מלקחיים לדוגמה, סיכות T משוננות | VWR | 82027-442 | |
| לניתוח | פישר Scinetific | S99385 |
מקורות
- Duncan, A. R., Khokha, M. K. Xenopus as a model organism for birth defects—Congenital heart disease and heterotaxy. Semin Cell Biol. 51, 73(2016).
- Kawasumi-Kita, A., et al. hoxc12/c13 as key regulators for rebooting the developmental program in Xenopus limb regeneration. Nat Commun. 15, 3340(2024).
- Hoppler, S., Conlon, F. L. Xenopus: experimental access to cardiovascular development, regeneration discovery, and cardiovascular heart-defect modeling. Cold Spring Harb Perspect Biol. 12 (6), a037200(2020).
- Patmann, M. D., Shewade, L. H., Schneider, K. A., Buchholz, D. R. Xenopus tadpole tissue harvest. Cold Spring Harb Protoc. 2017 (11), (2017).
- Porro, L. B., Richards, C. T. Digital dissection of the model organism Xenopus laevis using contrast-enhanced computed tomography. J Anat. 231 (2), 169-191 (2017).
- Laznovsky, J., et al. Unveiling vertebrate development dynamics in frog Xenopus laevis using micro-CT imaging. Gigascience. 13, giae037(2024).
- Ruehl-Fehlert, C., et al. Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice—Part 1. Exp Toxicol Pathol. 55 (2-3), 91-106 (2003).
- Kittel, B., et al. Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice—Part 2. A joint publication of the RITA and NACAD groups. Exp Toxicol Pathol. 55 (6), 413-431 (2004).
- Morawietz, G., et al. Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice—Part 3. A joint publication of the RITA and NACAD groups. Exp Toxicol Pathol. 55 (6), 433-449 (2004).
- Jonas-Closs, R. A., Peshkin, L. Techniques for rapidly sampling six crucial organs in adult Xenopus. J Vis Exp. (204), (2024).
- Lőw, P., Molnár, K., Kriska, G. Dissection of a frog (Rana sp.). Atlas of animal anatomy and histology. , Springer. Cham. 213-263 (2016).
- O'Rourke, D. P. Amphibians used in research and teaching. ILAR J. 48 (3), 183-187 (2007).
- Jonas-Closs, R. A., Peshkin, L. Effective rapid blood perfusion in Xenopus. J Vis Exp. (195), e65287(2023).
- AVMA guidelines for the euthanasia of animals. 37, 2020 edition, AVMA Veterinary Medical Association. https://www.avma.org/resources-tools/avma-policies/avma-guidelines-euthanasia-animals (2020).
- Balls, M., Worley, R. S. Amphibian cells in vitro. II. Effects of variations in medium osmolarity on a permanent cell line isolated from Xenopus. Exp Cell Res. 76 (2), 333-336 (1973).
- Mason, M., Wang, M., Narins, P. Structure and function of the middle ear apparatus of the aquatic frog, Xenopus laevis. Proc Inst Acoust. 31, 13-21 (2009).
- Holz, P. H., Raidal, S. R. Comparative renal anatomy of exotic species. Vet Clin North Am Exot Anim Pract. 9 (1), 1-11 (2006).
- Adamson, R. H. Permeability of frog mesenteric capillaries after partial pronase digestion of the endothelial glycocalyx. J Physiol. 428, 1-13 (1990).
- O'Rourke, K. P., Ackerman, S., Dow, L. E., Lowe, S. W. Isolation, culture, and maintenance of mouse intestinal stem cells. Bio Protoc. 6 (4), e1733(2016).
- Vitt, L. J., Caldwell, J. P. Anatomy of amphibians and reptiles. Herpetology: An Introductory Biology of Amphibians and Reptiles. , Academic Press. 35-81 (2009).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
