מאמר שיטה

ניתוחים של רשת ה-RNA האנדוגנית המתחרה בחולדות עם חסימת עורק המוח האמצעי בהתבסס על ביטוי lncRNA, miRNA ו-mRNA

668 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/68876

⸱

7 באוקטובר 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pharmacy, The First Affiliated Hospital of Anhui University of Chinese Medicine, 2School of Pharmacy, Anhui University of Chinese Medicine, 3School of Medical Economics Management, Anhui University of Chinese Medicine, 4Xin'an Medical Research Institute, 5Key Laboratory of Xin'An Medicine, Ministry of Education, 6Anhui Province Key Laboratory of Chinese Medicinal Formula

במאמר זה

סיכום

מחקר זה השתמש בניתוחים ביואינפורמטיים ואימות ניסיוני כדי לחקור באופן שיטתי את התפקידים הרגולטוריים והמנגנונים הבסיסיים של RNA ארוכים שאינם מקודדים (lncRNAs) המתפקדים כ-RNA אנדוגני תחרותי (ceRNAs) בשבץ איסכמי.

תקציר

מחקר זה נועד לחקור את התפקידים הרגולטוריים והמנגנונים הבסיסיים של lncRNAs הפועלים כ-ceRNAs בשבץ איסכמי. בהתבסס על השערת ה-ceRNA, lncRNAs, miRNAs ו-mRNAs זוהו כמרכיבים של רשת רגולטורית המעורבת בשבץ מוחי. lncRNAs מרכזיים מתת-הרשת שהתקבלה נבחרו לניתוח מפורט. ניתוח העשרה פונקציונלית באמצעות אונטולוגיה גנטית ומיפוי מסלולים באמצעות אנציקלופדיית קיוטו לגנים וגנומים חשף אינטראקציות קריטיות בתוך רשת ceRNA הקשורה ל-lncRNA. מסלולים מרכזיים, כולל איתות סידן, איתות צומת פער ואינטראקציה של קולטני ליגנד נוירואקטיביים, אומתו עוד יותר באמצעות ניתוח כתמים מערביים. רשת ה-ceRNA הבנויה כללה 334 lncRNAs, miRNAs ו-mRNAs, עם ניתוח העשרה פונקציונלי המנבא את תפקידיהם הביולוגיים. שלושה lncRNAs עם מרכזיות בדרגה גבוהה נבחרו לבניית תת-רשת ceRNA מייצגת. ניתוח כתמים מערביים גילה כי בהשוואה לקבוצת הדמה, רמות הביטוי של חלבוני מפתח - CaMKII, קלמודולין, CX36, PKC, CX43, GRIA3, GABRA6 ו-NPY1R היו מווסתות באופן משמעותי בקבוצת המודל, בעוד שהביטוי של CaN היה מווסת באופן משמעותי (P < 0.05). ממצאים אלה מצביעים על כך ש-lncRNAs מעורבים באופן משמעותי בפתוגנזה של שבץ מוחי. לסיכום, lncRNAs הפועלים כ-ceRNAs ממלאים תפקידים רגולטוריים קריטיים בפתוגנזה של שבץ איסכמי.

מבוא

שבץ איסכמי, הפרעה נוירולוגית נפוצה, מוביל לנזק מוחי קבוע, נכות ארוכת טווח או מוות 1,2,3,4. מיקרו-רנ"א (miRNAs או miR), רנ"א ארוך שאינו מקודד (lncRNA) ורנ"א שליח (mRNA) יוצרים רשתות רגולטוריות בתיווך RNA 5,6,7,8. מולקולות אלה מווסתות את תפקודי התא באמצעות מנגנונים מורכבים שונים 9,10 מוכרים יותר ויותר כתורמות לפתופיזיולוגיה של שבץ איסכמי. עם זאת, למרות הקשר ההולך וגובר שלהם למצב, התפקידים המדויקים של RNA לא מקודדים אלה נותרו לא ברורים. חקירה נוספת של RNA חדשים שאינם מקודדים חיונית להבהרת המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס שבץ איסכמי.

LncRNAs פועלים כמווסתים מרכזיים של ביטוי גנים במהלך התחלה והתקדמות של מצבים פתולוגיים שונים. משמשים כ-RNA אנדוגני מתחרה (ceRNAs), lncRNAs נקשרים ל-miRNAs כדי להפעיל השפעות רגולטוריות ספציפיות11. Wei et al. מדווחים כי lncRNA פועל AK038897 כ-ceRNA על ידי התמקדות ב-miR-26a-5p, ובכך מווסת את חלבון קינאז 1 הקשור למוות (DAPK1) כדי להחמיר פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה מוחית12. מחקרים מראים כי RNA SNHG1 ארוך שאינו מקודד (lncRNA SNHG1) מתפקד כ-ceRNA לוויסות מחלות כלי דם במוח על ידי ויסות מסלול האיתות HIF-1α/VEGF באמצעות אינטראקציה עם miR-18a13. מחקרים נוספים מראים כי גן 3 המתבטא בידי האם (lncRNA MEG3) מווסת אפופטוזיס עצבי באמצעות מפל האיתות miR-21/PDCD4 14. בעוד שמספר רב של lncRNAs, miRNAs ו-mRNAs זוהו באמצעות ריצוף תפוקה גבוהה או ניתוח מיקרו-מערך, הפונקציות של מולקולות אלה בשבץ נותרו לא ברורות, ויש צורך בדחיפות בהקמה שיטתית של רשתות רגולטוריות בתיווך RNA.

לכן, מחקר זה נועד לבנות רשת מקיפה של lncRNA-miRNA-mRNA המבוססת על השערת ceRNA תוך שימוש בנתונים שנאספו בעבר, ולנתח תת-רשתות ceRNA נבחרות באמצעות העשרה של אונטולוגיה גנטית (GO) ואנציקלופדיה של גנים וגנומים של קיוטו (KEGG) כדי להבין טוב יותר את תפקודי ה-lncRNA. התוצאות עשויות לחשוף כי מספר lncRNAs מתפקדים כ-ceRNAs, מה שעשוי לווסת miRNAs ספציפיים ואת ה-mRNA היעד שלהם. העשרת GO יכולה להדגיש תהליכים ביולוגיים מרכזיים, כגון התפתחות תאית, העברת אותות וויסות מחזור התא, בעוד שהעשרת מסלול יכולה לחשוף את מעורבותם במסלולים הקשורים לשבץ מוחי, תגובות חיסוניות וחילוף חומרים. ממצאים אלה יכולים להדגיש את התפקידים הפוטנציאליים של lncRNAs בתהליכים תאיים ומנגנוני מחלה מגוונים.

מספר שיפורים מרכזיים מוצעים על פני שיטות ניתוח רשת ceRNA קיימות בחקר שבץ איסכמי, כפי שנתמך על ידי השוואות למחקרים קשורים: ראשית, שילוב אימות רב-שכבתי על ידי שילוב בניית רשת עם אימות מסלול פונקציונלי; בניגוד ל-Li et al.15, המתמקד בעיקר בפרופיל ביואינפורמטי של רשתות ceRNA הקשורות למערכת החיסון באמצעות נתוני טרנסקריפטום ציבוריים, בנה רשת ceRNA הכוללת 334 lncRNAs, miRNAs ו-mRNAs ואמת מסלולי איתות קריטיים (איתות סידן, איתות צומת פער ואינטראקציה נוירואקטיבית בין ליגנד-קולטן) באמצעות ניתוח כתמים מערביים, תוך התייחסות למגבלה של הסתמכות יתר על תחזיות סיליקון כפי שניתן לראות ב-Fan et al.16אשר בונה רשת ceRNA הקשורה ל-circRNA אך חסרה אימות ניסיוני של מסלולים במורד הזרם, ומאשרת את הרלוונטיות התפקודית של הרשת החזויה על ידי כימות ביטוי חלבון (למשל, CaMKII, CX36, GRIA3) הן בקבוצת המודל והן בקבוצת הדמה;, התמקדות ב-lncRNAs ליבה בעלי חשיבות טופולוגית גבוהה, תוך שיפור הספציפיות של הממצאים; בניגוד ל-Cheng et al.17, שבונה רשת lncRNA-miRNA-mRNA ceRNA עם 3 lncRNAs, 2 miRNAs ו-24 mRNAs אך אינו נותן עדיפות לווסתים מרכזיים, מזהה 3 lncRNAs עם מרכזיות גבוהה לבניית תת-רשת מייצגת, מה שמבטיח שתובנות מכניסטיות מעוגנות בצמתים המשפיעים ביותר ומשפר את יכולת הפרשנות בהשוואה לרשתות רחבות יותר ופחות ממוקדות כמו אלה שתוארו ב-Li et al.18הכולל 62 lncRNAs אך חסר ניתוח תת-רשת ממוקד;, לספק פרמטרים ניסיוניים מפורטים לשיפור יכולת השחזור: השתמש ב-500 ננוגרם-1 מיקרוגרם של סך ה-RNA המופק מרקמות המוח (6 חולדות לקבוצה: 20 מודלים של MCAO ו-20 בקרות המופעלות על ידי דמה) להכנת ספרייה, עם מספר שלמות RNA (RIN) > 8.0 כדי להבטיח איכות, פרט שלא צוין ב-Wang et al.19, המאמת סמנים ביולוגיים של circRNA אך משמיט מפרטי קלט RNA; השתמש בחולדות SPF SD זכרים (220 ± 30 גרם) עם MCAO, מודל בשימוש נרחב, אך ציין במפורש את מגבלותיו, הוא אינו משכפל באופן מלא את מורכבות כלי הדם של שבץ איסכמי אנושי או את התגובות החיסוניות כפי שהודגש ב- Li et al. - ולהפחית זאת על ידי ריבוד חולדות לפי ציונים נוירולוגיים (1-3) כדי לתקנן את חומרת האוטם; להכיר במגבלות המחקר: רשת ה-ceRNA עשויה שלא ללכוד שינויים לאחר התרגום, וניתן להרחיב את גודל המדגם לאימות כתם מערבי (n = 6 לקבוצה), עם עבודה עתידית שתכלול קבוצות גדולות יותר וניתוחים פרוטאומיים כדי להתמודד עם פערים אלה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

הניסויים בבעלי חיים אושרו על ידי ועדת האתיקה הניסויית של אוניברסיטת אנהוי לרפואה סינית (מספר רישיון: AHUCM-rats-2024006) ונערכו בהתאם להנחיות המוסדיות ולתקני השימוש בבעלי חיים של JoVE. במחקר זה נעשה שימוש בארבעים חולדות SD זכרים בדרגת SPF (220 גרם ± 30 גרם). הריאגנטים והציוד המשמשים מפורטים בטבלת החומרים.

1. חיות ניסוי

  1. לשכן את בעלי החיים במרכז הניסויים בבעלי חיים בתנאי ניסוי סטנדרטיים. שמרו על מחזור אור/חושך של 12 שעות, החליפו מצעים מדי יום וספקו גישה חופשית למזון ומים.
  2. המתת חסד של בעלי החיים בסוף הניסוי על ידי מתן 150 מ"ג/ק"ג נתרן פנטוברביטל באמצעות הזרקה תוך צפקית כדי לגרום למצב הרדמה עמוק (בהתאם לפרוטוקולים שאושרו על ידי המוסד). אשר הרדמה עמוקה על ידי היעדר תגובה רפלקסיבית לצביטת כפות, עקוב אחר הנשימה כדי להבטיח אובדן מוחלט של סימנים חיוניים, ולאחר מכן המשך בעריפת הראש.

2. אינדוקציה של מודל חסימת עורק המוח האמצעי (MCAO) בחולדות

  1. לגרום להרדמה על ידי מתן הזרקה תוך צפקית של 1% נתרן פנטוברביטל במינון של 40 מ"ג/ק"ג20 (בהתאם לפרוטוקולים שאושרו על ידי המוסד). העריכו את עומק ההרדמה באמצעות צביטת הבוהן ורפלקסים בקרנית.
    1. עקוב באופן רציף אחר קצב הנשימה וקצב הלב לאורך כל ההליך. יש למרוח משחת עיניים סטרילית על בסיס שמן מינרלי מיד לאחר השראת ההרדמה להגנה על העיניים21.
  2. לאחר הרדמה מלאה, בצע חתך בקו האמצע בצוואר וחשוף בזהירות את עורק הצוואר המשותף הימני (CCA), עורק הצוואר הפנימי (ICA) ועורק הצוואר החיצוני (ECA). בהדמיה ישירה, השתמש במכשירים מיקרו-כירורגיים מתאימים (למשל, מלקחיים ומספריים) כדי להפריד בעדינות את רקמת החיבור שמסביב ולחשוף באופן מלא כל עורק.
    1. לאחר חשיפת העורקים יש לקשור את ה-ECA וה-CCA באמצעות תפרים כירורגיים. קשרו קשרים כירורגיים מאובטחים כדי לחסום את זרימת הדם ולמזער דימום במהלך ההליכים הבאים. הקפידו על מתח מתאים ליצירת שדה יציב להחדרת תפרים.
    2. בצע חתך קטן בהתפצלות של ECA ו-ICA באמצעות מספריים עיניים כדי להתכונן להחדרת תפרים. בחר תפר ניילון בקוטר 0.25 מ"מ ואורך של 18 מ"מ מקצה הקצה המעוגל (בצורת כדור). הכנס את התפר דרך אתר החתך בצומת ECA-ICA וקדם אותו בעדינות לאורך ה-ICA לעומק של כ-18.5 מ"מ ±-0.5 מ"מ כדי לחסום את עורק המוח האמצעי ולגרום לאיסכמיה מוחית מוקדית.
    3. אבטח את תפר הניילון המוחדר לרקמה או לכלי הדם שמסביב באמצעות תפרים כירורגיים כדי למנוע תזוזה. לאחר שמירה על MCAO למשך שעתיים, לגרום לפגיעה באיסכמיה/רפרפוזיה. השתמש במלקחיים כירורגיים עדינים כדי לתפוס בעדינות את תפר הניילון ולמשוך לאט כ-5 מ"מ כדי להחזיר חלקית את זרימת הדם המוחית ולגרום לפציעה חוזרת. בקבוצת הדמה, קשרו רק את עורק הצוואר מבלי להכניס תסחיף חוט22.
  3. שבוע לאחר ההקמה המוצלחת של מודל MCAO, הרדמו עמוק את החולדות. ברגע שאין תגובה לצביטת כפות, ערפו במהירות את הראש וקצרו את המוח. שטפו את רקמות המוח במי מלח רגילים, ולאחר מכן אחסנו אותן במקרר בטמפרטורה של -80 מעלות צלזיוס לשימור בהקפאה23.
  4. ציון תפקוד נוירולוגי
    1. להעריך את התפקוד הנוירולוגי באמצעות שיטת הניקוד Longa כדי לקבוע את ההצלחה של מודל MCAO24. לאחר 24 שעות לאחר הרפרפוזיה, העריכו את התפקוד הנוירולוגי בכל חולדה והקצו ציון על סמך הקריטריונים הבאים: ציון 0: אין ליקוי נוירולוגי נראה; ציון 1: כיפוף הגפה הקדמית השמאלית במהלך מתלה הזנב, הגפה הקדמית לא מורחבת במלואה; ציון 2: כיפוף הגפה הקדמית השמאלית במהלך מתלי הזנב עם התנגדות מופחתת באופן ניכר בצד הפגוע (השמאלי) כאשר הוא מונח על משטח ישר; ציון 3: זהה לציון 2, עם תוספת תנועות סיבוב או סיבוב לא רצוני בזמן זחילה; ציון 4: אובדן הכרה או מוות תוך 24 שעות.
      הערה: ציון גבוה יותר מצביע על הפרעת התנהגות חמורה יותר וליקוי נוירולוגי גדול יותר.
  5. חשב את נפח האוטם המוחי באמצעות צביעה של 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC)
    1. חלקו כל מוח של חולדה ex vivo לאורך מישור העטרה לחמש פרוסות בעובי שווה. ודא שכל פרוסה היא בעובי מדויק של 2.0 מ"מ ± 0.1 מ"מ. טבלו את החלקים במלואם בתמיסת צביעה TTC 2% (w/v) שהוכנה טרייה.
      1. עטפו את מיכל הצביעה בנייר אלומיניום כדי להגן על התמיסה מפני אור ודגרו את הדגימות בחממה בטמפרטורה קבועה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ± 0.5 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות. לאחר הצביעה, הבחינו בכתמים אדומים ורודים ברקמת מוח רגילה, בעוד שאזורים עם אוטם איסכמי נשארים ללא כתמים (לבנים) עקב אובדן פעילות דהידרוגנאז.
    2. העבירו פרוסות מוח מוכתמות ב-TTC לתמיסת פרפורמלדהיד של 4% (w/v) וקבעו ב-4 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות כדי לשמר את המורפולוגיה של הרקמות. לאחר הקיבוע, צלם תמונות דיגיטליות של הפרוסות באמצעות מערכת הדמיה ברזולוציה גבוהה. רשום ואחסן את הנתונים בארכיון 24 שעות לאחר הקיבוע.
    3. השתמש בתוכנת ImageJ כדי לכמת את נפח האוטם ואת נפח רקמת המוח הכולל עבור כל קבוצת חולדות לאחר צביעת TTC. חשב את אחוז נפח האוטם המתוקן באמצעות הנוסחה הבאה25:
      נפח אוטם מתוקן (%) = {[נפח הנגע הכולל − (נפח ההמיספרה השמאלית − נפח ההמיספרה הימנית)] / נפח ההמיספרה הימנית} × 100%.
    4. השתמש בתוכנת GraphPad Prism כדי לדמיין ולנתח סטטיסטית נפחי אוטם מתוקנים באמצעות מבחן t לא מזווג. הגדר מובהקות סטטיסטית כ-P < 0.05.

3. ריצוף RNA בתפוקה גבוהה

  1. בחר רקמות מוח משלוש חולדות בכל קבוצה. הסר RNA ריבוזומלי (rRNA) מסך דגימות ה-RNA באמצעות ערכת הסרת ה-rRNA Ribo-Zero בהתאם להוראות היצרן.
    1. בנה ספריות DNA משלימות (cDNA) באמצעות ערכת ההכנה לספריית RNA של TruSeq בהתאם לפרוטוקול הסטנדרטי. השתמש בספריות cDNA מטוהרות ליצירת אשכולות וריצוף.
  2. השתמש בנתוני הליבה שנוצרו בעבר26, שסיפקו את כל ספריות הרצף ומערכי הנתונים למחקר זה, ללא הסתמכות על ספריות חדשות שנבנו. מקד את העבודה הנוכחית בניתוח ההיתוך המשולב של מערכי הנתונים הקיימים הללו מבלי ליצור ספריות RNA-seq חדשות או נתוני רצף.
    1. לאשר את אישור ועדות האתיקה המוסדיות הרלוונטיות למחקר הקודם. בצע ריצוף בתפוקה גבוהה כדי להעריך באופן שיטתי את פרופיל ביטוי ה-miRNA בחולדות עם MCAO, תוך הקפדה על פרוטוקולים סטנדרטיים כפי שתוארו קודם לכן27.
      הערה: נתוני בקרת איכות עבור ספריית ריצוף RNA מסופקים בקובץ משלים 1.

4. ניתוח ביטוי דיפרנציאלי של רנ"א ארוך לא מקודד, מיקרו-רנ"א ורנ"א שליח

  1. השג ביאורים עבור גנים מקודדי חלבון, miRNAs ו-lncRNAs מ-Ensembl (https://www.ensembl.org/index.html), miRBase (https://www.mirbase.org/) ו-NONCODE (http://www.noncode.org/), לפי הצורך 28,29,30. כימות ביטוי גנים באמצעות StringTie31 (https://ccb.jhu.edu/software/stringtie/).
    1. הרכיבו את הקריאות המיושרות מכל דגימה לטרנסקריפטומים באמצעות מרכיב StringTie. השתמש במודול המיזוג StringTie כדי לשלב את מכלולי הטרנסקריפטום מכל הדגימות, וליצור קבוצה מאוחדת של תמלילים עקביים על פני העוקבה. השתמש בטרנסקריפטום הממוזג הזה כדי להעריך את שפע התעתיק32.
    2. בצע כימות של גנים מקודדי חלבון ו-lncRNAs על ידי החלת נורמליזציה של ממוצע קצוץ של ערכי M (TMM) וחישוב שברים לכל קילו-בסיס של תעתיק למיליון קריאות ממופות (FPKM) עבור כל תעתיק33,34.
  2. בצע ניתוח ביטוי דיפרנציאלי באמצעות חבילת edgeR (https://bioconductor.org/) כדי לזהות lncRNAs (DELs), miRNAs (DEMis) ו-mRNAs (DEMs) המתבטאים באופן דיפרנציאלי בין קבוצות ה-MCAO והבקרה. המר את מטריצת הספירה הגולמית המסוננת לאובייקט edgeR DGEList. העריכו את הפיזור המשותף והקצו את אותו ערך פיזור לכל גן או miRNA.
    1. לבצע בדיקה מדויקת להשוואת ביטוי גנים בין קבוצות. אחזר את השינוי בקיפול log2 (log2FC), ספירת יומן למיליון (logCPM), ערכי P וערכי P מותאמים לקצב גילוי שגוי (FDR) עבור כל גן35 המתבטא באופן דיפרנציאלי. הגדר מובהקות סטטיסטית כ-P < 0.05 עם סף שינוי קיפול של |log2(FC)| > 1.

5. חיזוי מטרות RNA ארוכות שאינן מקודדות ו-RNA שליח של מיקרו-רנ"א המתבטאות באופן דיפרנציאלי

  1. אחזר את הרצפים של DEMis ו-DELs ממסדי הנתונים המתאימים. השתמש בכלי חיזוי האינטראקציה miRNA-lncRNA miRanda36 ו-RNAhybrid37 כדי לזהות אינטראקציות פוטנציאליות בין DEMis ו-DELs. השג זוגות אינטראקציה miRNA-mRNA ממסד הנתונים miRWalk 3.0 (http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de/)38

6. בניית ה-RNA הארוך הלא מקודד - microRNA - רשת ויסות RNA שליח

  1. בנה את רשת הרגולציה lncRNA-miRNA-mRNA על סמך השערת ceRNA39,40.
    1. חשב את מקדם המתאם של פירסון (PCC) בין DELs ו-DEMs. בחר זוגות lncRNA-mRNA לניתוח נוסף אם PCC > 0.99 ו-P < 0.01.
    2. עבור כל זוג lncRNA-mRNA המתבטא במשותף, זהה miRNAs משותפים המכוונים לשני התעתיקים. השתמש ב-miRNAs משותפים אלה כדי לבנות את רשת הביטוי המשותף miRNA-mRNA-lncRNA.
    3. השתמש ב-Cytoscape (https://cytoscape.org/) כדי לבנות ולהמחיש את רשת האינטראקציה lncRNA-miRNA-mRNA41,42. בצע את השלבים הבאים:
      1. השתמש בתוסף CytoNCA כדי לחשב מרכזיות בין (BC), מרכזיות קרבה (CC) ומרכזיות דרגה (DC) עבור כל צומת.
      2. בחר גנים עם ציוני מרכזיות העולים על הערכים החציוניים של כל שלושת המדדים כדי לבנות את תת-רשת המפתח הסופית.
      3. השתמש בתוסף CytoHubba כדי לזהות את 10 הגנים המרכזיים המובילים ברשת האינטראקציה בין חלבון לחלבון ולחלץ צמתים מרכזיים שזוהו בשלב 2.
      4. חשב את דרגת הצומת עבור כל רכיב ברשת ceRNA.

7. ניתוחי העשרה פונקציונלית

  1. בצע ניתוחי העשרה של מסלול GO ו-KEGG כדי לחקור עוד יותר את תפקוד ה-RNA43. השתמש בחבילת clusterProfiler (https://bioconductor.org/) כדי להציג באופן חזותי את תוצאות ההעשרה44.

8. ניתוח כתמים מערביים לאיתור רמות הביטוי של חלבוני מפתח המעורבים במסלולים הקשורים ל-lncRNA - ceRNA

  1. בהרדמה עמוקה, הסר במהירות את כל המוח. לאחר הסרת קרומי המוח וכלי הדם, יש לבודד את רקמת קליפת המוח באזור האוטם של החולדה45. השתמש במספריים עדינים כדי לחתוך את הרקמה לחתיכות קטנות, וודא שכל חתיכה שוקלת בין 50 מ"ג ל-100 מ"ג. העבר את דגימות הרקמה השוקלות לצינורות הומוגניזציה מקוררים מראש.
    1. הכן את מאגר הליזה של החלבון ביחס נפח של PMSF למאגר ליזה RIPA של 1:100 (ריכוז סופי 1 מ"מ PMSF). הוסף את מאגר הליזיס ביחס של 200 מיקרוליטר לכל 20 מ"ג רקמה. הומוגניזציה יסודית של הדגימות באמצעות הומוגנייזר זכוכית מעוקר בחום עד שהרקמה מתפרקת דק.
    2. דגרו את ההומוגנטים על הקרח למשך 30 דקות, תוך ערבוב עדין כל 10 דקות כדי להקל על ליזה מלאה. צנטריפוגה את הדגימות ב-28,656.6 × גרם למשך 15 דקות ב-4 מעלות צלזיוס. שאפו בזהירות את הסופרנטנט המכיל חלבון כולל מבלי להפריע לגלולה.
  2. הוסף 5× אלקטרופורזה של ג'ל נתרן דודציל סולפט-פוליאקרילאמיד (SDS-PAGE) לדגימת החלבון ביחס של 1:4 (נפח אחד של 5× מאגר ל-4 נפחים של דגימת חלבון). לאחר הדילול, ריכוז העבודה הסופי של מאגר הטעינה SDS-PAGE הוא 1×.
    1. מערבבים היטב ומחממים באמבט מים רותחים למשך 10 דקות כדי לנטרל לחלוטין את החלבונים. הניחו לדגימות להתקרר לטמפרטורת החדר. טען 30 מיקרוגרם מכל דגימה לבארות הג'ל SDS-PAGE.
    2. בצע אלקטרופורזה בשני שלבים: החל 80 וולט למשך 30 דקות כדי לפתור חלבונים דרך ג'ל הערימה, ולאחר מכן הגדל ל-120 וולט למשך שעה כדי להפריד חלבונים בג'ל הפתרון.
  3. הכן נייר סינון חתוך מראש וממברנות פוליווינילידן דיפלואוריד (PVDF) כך שיתאימו לגודל הג'ל. משרים את קרום ה- PVDF במתנול למשך 3 דקות כדי להפעיל אותו. טבלו גם את קרום ה-PVDF וגם את נייר הסינון במאגר ההעברה למשך 5 דקות.
    1. הרכיבו את כריך ההעברה בסדר הבא (מלמעלה למטה): צלחת אנודה, שלוש שכבות של נייר פילטר, קרום PVDF, ג'ל, שלוש שכבות של נייר פילטר, צלחת קתודה. ודא יישור נכון של שכבות הג'ל, הממברנה ונייר הסינון. הסר את כל בועות האוויר בכל שלב כדי להבטיח העברה אחידה.
  4. מיד לאחר העברת החלבון, שטפו את קרום ה-PVDF במאגר הכביסה המערבי למשך 5 דקות כדי להסיר את מאגר ההעברה השיורית. חסום את הממברנה בטמפרטורת החדר למשך שעתיים עם ניעור עדין במאגר חוסם מערבי המכיל 5% אבקת חלב דל שומן, או השתמש ב-5% BSA אם מזהים חלבונים זרחניים.
  5. לאחר החסימה, יש לדגור על הממברנה עם הנוגדן הראשוני (1:1000) בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה עם ניעור עדין. למחרת, דגרו את הממברנה עם הנוגדן המשני (1:10,000) למשך שעתיים בטמפרטורת החדר.
  6. בצע זיהוי כימילומינסנט בחדר חשוך כדי למנוע הפרעות אור. הנח את צד החלבון של קרום ה-PVDF שטוח במרכז לוחית החשיפה במערכת ההדמיה האוטומטית.
    1. מערבבים כמויות שוות של מגיב ECL A ומגיב ECL B בצינור צנטריפוגה נקי מיד לפני השימוש. מרחו את תמיסת ה-ECL המעורבת באופן שווה על משטח הממברנה כדי ליזום את תגובת הזוהר.
    2. לאחר 1-2 דקות של דגירה בטמפרטורת החדר, הסר בעדינות עודפי נוזלים מבלי להפריע למשטח הממברנה. התאם את פרמטרי החשיפה במערכת ההדמיה בהתאם לעוצמת הזוהר כדי לייעל את לכידת האות.

9. ניתוח סטטיסטי

  1. נתח את תוצאות הכתם המערבי באמצעות תוכנת ImageJ כדי לכמת ערכי אפור פס. השתמש ב-GraphPad Prism לניתוח סטטיסטי של נתונים ניסיוניים. בטא את כל הנתונים כממוצע ± סטיית תקן (x ± SD). להעריך הבדלים סטטיסטיים בין קבוצות באמצעות מבחן t לא מזווג.
    1. הזן נתונים משתי קבוצות הדגימה הבלתי תלויות בטבלת הנתונים של התוכנה, כאשר כל קבוצה מתאימה לעמודה נפרדת והדגימות אינן תלויות זו בזו. אמת את הנורמליות על ידי בחירה ב"מבחני נורמליות וסימטריה" תחת הפונקציה "ניתוח" והחלת מבחן שפירו-וילק על שתי הקבוצות.
    2. אם P > 0.05 עבור שתי הקבוצות, קחו בחשבון את הנתונים המופצים בדרך כלל. על בסיס זה, בחר מבחן t לא משויך תחת t-tests בפונקציה ניתוח כדי לבצע את הניתוח. הגדר מובהקות סטטיסטית כ-P < 0.05.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

תוצאות הניסוי של אימות שיעור ההצלחה של כל קבוצה של מודלים של חולדות מוצגות באיור 1. אחרי המודל, ניקוד תפקוד נוירולוגי בוצע על החולדות (איור 1A). קבוצת המודל הראתה ליקויים נוירולוגיים חמורים, ואלה עם ציונים שנעו בין 1 ל-3 נכללו בניסויים הבאים. איור 1B ו-C מראים את תוצאות הצביעה של TTC, כאשר אדום מייצג רקמת מוח תקינה ולבן מציין את האזור האוטם. קבוצת המודל הראתה אוטם מוחי חמור. ממצאים אלה מאשרים את הקמתו המוצלחת של המודל האיסכמי ומאמתי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

כדי לחקור את המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס פתוגנזה של שבץ מוחי ולזהות מטרות אבחנתיות וטיפוליות פוטנציאליות, נערכו ניתוחי RNA-Seq ו-RNA-Seq קטן (sRNA-Seq) על רקמות מוח מחולדות לאחר MCAO. מחקר זה נועד בעיקר לחקור את רשתות הרגולציה המורכבות הכוללות lncRNAs, miRNAs ו-mRNAs. ניתוח מקיף של מערכי הנתונים של RNA-Seq ו-sRNA-Seq מרקמות מוח של חולדות המושרות על ידי MCAO נערך כדי להבהיר את רשת הרגולציה של lncRNA-miRNA-mRNA. אינטראקציה נרחבת ברשת נבנתה כדי להמחיש את הקשרים הרגולטוריים בין lncRN...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים קובעים כי אין אינטרסים מתחרים.

תודות

כתב יד זה נתמך על ידי פרויקט מימון המועמדים למנהיג האקדמי של מחוז אנהוי (מס' 2022H287), פרויקט מפתח מחקר הבריאות של מחוז אנהוי (התייחסות: AHWJ2022a013), פרויקט מפתח המחקר למדעי הטבע של המכללה המחוזית של אנהוי (NO.2023AH050745), ופרויקט הכישרונות המצטיינים להיגיינה ובריאות של מחוז אנהוי (NO. ahsjhmypygc20230074).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
2% (w/v) תמיסת צביעה TTCבייג'ינג Kangle שיבוט ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ 20230805צביעת TTC
4% (w/v) תמיסת פרפורמלדהידביוטייםעמ' 0099רקמת מוח קבועה
40 חולדות SD זכר בדרגת SPFHagzhou Ziyuan מעבדה גידול בעלי חיים ושות', בע"מSCXK [zhe] 2024-0004חיית מעבדה
אבקת חלב דל שומן 5%פיגן מדעיPH1519WB
מערכת אלקטרופורזה של אגרוזבייג'ינג Liuyi ביוטכנולוגיה ושות', בע"מDYCP-44PWB
מכשיר חשיפה אוטומטישנחאי Peiqing טכנולוגיה ושות', בע"מJS-M6PWB
מד חשיפה אוטומטישנחאי Peiqing טכנולוגיה ושות', בע"מJS-M6PWB
מכונת קרח אוטומטיתצ'אנגשו סיטי Xueke מכשירי חשמל ושות', בע"מIMS-20WB
קלמודוליןזיקה49ב2443WB
קמקיזיקה14G0796WB
צנטריפוגהHaimen Qilinbeier ייצור מכשירים ושות', בע"מLX 300WB
חבילת clusterProfilerמוליכים ביולוגייםclusterProfiler_4.17ניתוחי העשרה
CX36זנביוN24AP24WB
CX43זנביוM08NO01WB
ערכת כימילומינסנציה רגישה במיוחד ECLביושארפBL520BWB
תנור ייבוש אוויר תרמוסטטי חשמלישנחאי Sanfa מכשיר מדעי ושות', בע"מDHG-9070WB
מכשיר אלקטרופורזהשנחאי Tianeng טכנולוגיה ושות', בע"מ (טאנון)רווח למניה300WB
מכשיר אלקטרופורזהשנחאי טאנון מדע & טכנולוגיה ושות', בע"מרווח למניה300WB
מיכל אלקטרופורזהשנחאי טאנון מדע & טכנולוגיה ושות', בע"מVE-180WB
גברה6זיקה46V5371WB
עיזים נגד עכבר IgGZs-BIO142637WB
עיזים נגד ארנב IgGZs-BIO139931WB
גריה3זיקה0C33051WB
צנטריפוגה מקוררת במהירות גבוההAnhui Jiawen ציוד מכשירים ושות', בע"מJW-3021HRWB
מערכת HiSeq 2500אילומינה/רצף RNA בתפוקה גבוהה
תוכנת ImageJמכוני הבריאות הלאומייםתמונה J 1.54kצביעת TTC
מערבל חימום מגנטיהעיר צ'אנגג'ואו ומפעל המכשיריםJJ-79-1WB
מיקרופיפטהגרמניה Eppendorf/WB
מיקרו צנטריפוגה בטמפרטורה רגילהHaimen Qi Limber Instrument Manufacturing Co., LTD. LX300LX300WB
NPY1Rזיקה2D38248WB
פיפטהאפנדורף0.5-10ulWB
PKCזיקה17ה3745WB
סמן חלבון מוכתם מראשביושארפBL712CWB
קרום PVDFמיליפורIPVH00010WB
ערכת הסרת rRNA Ribo-Zeroאילומינה, סן דייגו, קליפורניה, ארה"ב/מיצוי RNA
ריפה ליזאטביושארפBL504AWB
נתרן פנטוברביטלבייג'ינג Think-Far Technology Co., Ltd.מרקהרדמה
מכשיר ממברנה העברהשנחאי טאנון מדע & טכנולוגיה ושות', בע"מVE-186WB
מנגנון טרנסממברנישנחאי Tianeng טכנולוגיה ושות', בע"מ (טאנון)VE-186WB
&בטא;-אקטיןZs-BIO19AW0505WB

מקורות

  1. Marquez-Ortiz, R. A., et al. Neuroimmune support of neuronal regeneration and neuroplasticity following cerebral ischemia in juvenile mice. Brain Sci. 13 (9), 1337(2023).
  2. Han, M., Ma, B., She, R., Xing, Y., Li, X. Correlations between serum cxcl9/12 and the severity of acute ischemic stroke, a retrospective observational study. Neuropsychiatr Dis Treat. 19, 283-292 (2023).
  3. Wang, J., Shan, A., Shi, F., Zheng, Q. Molecular and clinical characterization of ang expression in gliomas and its association with tumor-related immune response. Front Med (Lausanne). 10, 1044402(2023).
  4. Ma, W., et al. Effects of ischemic postconditioning and long noncoding RNAs in ischemic stroke. Bioengineered. 13 (6), 14799-14814 (2022).
  5. Deng, Y., et al. High-throughput sequencing to investigate lncRNA-circRNA-miRNA-mRNA networks underlying the effects of beta-amyloid peptide and senescence on astrocytes. Front Genet. 13, 868856(2022).
  6. Li, R. B., Yang, X. H., Zhang, J. D., Cui, W. Gas6-as1, a long noncoding RNA, functions as a key candidate gene in atrial fibrillation-related stroke determined by ceRNA network analysis and WGCNA. BMC Med Genomics. 16 (1), 51(2023).
  7. Shu, J., Yang, L., Wei, W., Zhang, L. Identification of programmed cell death-related gene signature and associated regulatory axis in cerebral ischemia/reperfusion injury. Front Genet. 13, 934154(2022).
  8. Zou, J. B., et al. Reconstruction of the lncRNA-miRNA-mRNA network based on competitive endogenous RNA reveal functional lncRNAs in cerebral infarction. Sci Rep. 9 (1), 12176(2019).
  9. Zheng, H. Y., et al. Longitudinal transcriptome analyses show robust T cell immunity during recovery from COVID-19. Signal Transduct Target Ther. 5 (1), 294(2020).
  10. Lu, Z., Deng, M., Ma, G., Chen, L. Trim38 protects h9c2 cells from hypoxia/reoxygenation injury via the traf6/tak1/nf-κb signalling pathway. PeerJ. 10, e13815(2022).
  11. Zhang, C., et al. Long noncoding RNAs in intracerebral hemorrhage. Front Mol Neurosci. 16, 1119275(2023).
  12. Wei, R., Zhang, L., Hu, W., Wu, J., Zhang, W. Long noncoding RNA ak038897 aggravates cerebral ischemia/reperfusion injury via acting as a cerna for mir-26a-5p to target dapk1. Exp Neurol. 314, 100-110 (2019).
  13. Retraction: LncRNA snhg1 regulates cerebrovascular pathologies as a competing endogenous RNA through hif-1α/vegf signaling in ischemic stroke. J Cell Biochem. 126 (4), e70017(2025).
  14. Yu, Z., et al. Tnf-α stimulation enhances the neuroprotective effects of gingival MSCs-derived exosomes in retinal ischemia-reperfusion injury via the meg3/mir-21a-5p axis. Biomaterials. 284, 121484(2022).
  15. Li, Y., et al. Profiling immune cell-related gene features and immunoregulatory ceRNA in ischemic stroke. Mol Biomed. 5 (1), 72(2024).
  16. Fan, R., et al. Integrated analysis of circRNA-associated ceRNA network in ischemic stroke. Front Genet. 14, 1153518(2023).
  17. Cheng, L., Zhao, Y., Ke, H. Comprehensive analysis of lncRNA-miRNA-mRNA cerna network in ischemic stroke. Heliyon. 10 (9), e29651(2024).
  18. Li, S., et al. Construction of lncRNA-mediated ceRNA network for investigating immune pathogenesis of ischemic stroke. Mol Neurobiol. 58 (9), 4758-4769 (2021).
  19. Wang, X. Z., et al. Construction of circRNA-mediated immune-related ceRNA network and identification of circulating circRNAs as diagnostic biomarkers in acute ischemic stroke. J Inflamm Res. 15, 4087-4104 (2022).
  20. Movassaghi, S., et al. Effect of pentoxifylline on ischemia-induced brain damage and spatial memory impairment in rats. Iran J Basic Med Sci. 15 (5), 1083-1090 (2012).
  21. Saund, J., Dautan, D., Rostron, C., Urcelay, G. P., Gerdjikov, T. V. Thalamic inputs to dorsomedial striatum are involved in inhibitory control: Evidence from the five-choice serial reaction time task in rats. Psychopharmacology (Berl). 234 (16), 2399-2407 (2017).
  22. Fei, C., et al. Effects of tao hong si wu decoction on circular rna expression profiles in rats with middle cerebral artery occlusion. Chinese Pharmacological Bulletin. 40 (05), 954-963 (2024).
  23. Ma, R., et al. Correlation of thrombin and lc3II/I expression in different ischemic phases and different brain regions in the MCAO model rats. J Hunan Univ Chinese Med. 42 (06), 899-905 (2022).
  24. Li, S., et al. Regulation of nr4a1 by taohong siwu decoction inhibits endothelial cell apoptosis in cerebral ischemia-reperfusion injury. J Ethnopharmacol. 353 (Pt A), 120285(2025).
  25. Ji, Z. J., et al. Neuroprotective effect of taohong siwu decoction on cerebral ischemia/reperfusion injury via mitophagy-NLRP3 inflammasome pathway. Front Pharmacol. 13, 910217(2022).
  26. Duan, X., et al. RNA sequencing for gene expression profiles in a rat model of middle cerebral artery occlusion. Biomed Res Int. 2018, 2465481(2018).
  27. Duan, X., et al. Identification and functional analysis of microRNAs in rats following focal cerebral ischemia injury. Mol Med Rep. 19 (5), 4175-4184 (2019).
  28. Zerbino, D. R., et al. Ensembl 2018. Nucleic Acids Res. 46 (D1), D754-D761 (2018).
  29. Ji, X., et al. A comprehensive rat transcriptome built from large-scale RNA-seq-based annotation. Nucleic Acids Res. 48 (15), 8320-8331 (2020).
  30. Zheng, Y., et al. Npinter v5.0: NcRNA interaction database in a new era. Nucleic Acids Res. 51 (D1), D232-D239 (2023).
  31. Oliveira, L. A., et al. The widespread misuse of stringtie's gene identifier tags as de facto gene symbols does not allow consistent gene identification in published research. Gene. 954, 149440(2025).
  32. Pertea, M., et al. Stringtie enables improved reconstruction of a transcriptome from RNA-seq reads. Nat Biotechnol. 33 (3), 290-295 (2015).
  33. Zaghlool, A., et al. Characterization of the nuclear and cytosolic transcriptomes in human brain tissue reveals new insights into the subcellular distribution of RNA transcripts. Sci Rep. 11 (1), 4076(2021).
  34. Zhang, W., et al. Transcriptomic data of peach varieties with different chilling requirement levels. BMC Genom Data. 25 (1), 99(2024).
  35. Chamorro Petronacci, C. M., et al. Identification of prognosis-associated microRNAs in HNSCC subtypes based on the TCGA dataset. Medicina (Kaunas). 56 (10), 535(2020).
  36. Wang, X., et al. Exosomes activate hippocampal microglia in atrial fibrillation through long-distance heart-brain communication. BMC Cardiovasc Disord. 24 (1), 627(2024).
  37. Jiang, P., et al. Circrna-phf21a_0002 promotes pyroptosis to aggravate hepatic ischemia/ reperfusion injury by sponging let-7b-5p. Heliyon. 10 (16), e34385(2024).
  38. Faraldi, M., et al. Circulating biomarkers associated with walking performance in elderly subjects: Exploring miRNAs, metabolic and inflammatory biomarkers. Geroscience. 47 (3), 3977-3996 (2025).
  39. Jiang, H., et al. Reconstruction and analysis of the lncRNA-miRNA-mRNA network based on competitive endogenous RNA reveal functional lncRNAs in rheumatoid arthritis. Mol Biosyst. 13 (6), 1182-1192 (2017).
  40. Alipour, S., et al. Innovative targets of the lncRNA-miRNA-mRNA network in response to low-dose aspirin in breast cancer patients. Sci Rep. 12 (1), 12054(2022).
  41. Ono, K., et al. Cytoscape web: Bringing network biology to the browser. Nucleic Acids Res. 53 (W1), W203-W212 (2025).
  42. Shannon, P., et al. Cytoscape: A software environment for integrated models of biomolecular interaction networks. Genome Res. 13 (11), 2498-2504 (2003).
  43. Huckvale, E. D., Moseley, H. N. B. Predicting the pathway involvement of all pathway and associated compound entries defined in the Kyoto Encyclopedia of genes and genomes. Metabolites. 14 (11), (2024).
  44. Yu, G., Wang, L. G., Han, Y., He, Q. Y. Clusterprofiler: An R package for comparing biological themes among gene clusters. Omics. 16 (5), 284-287 (2012).
  45. Ueno, Y., et al. Axonal outgrowth and dendritic plasticity in the cortical peri-infarct area after experimental stroke. Stroke. 43 (8), 2221-2228 (2012).
  46. Arkelius, K., et al. Lox-1 and mmp-9 inhibition attenuates the detrimental effects of delayed rt-PA therapy and improves outcomes after acute ischemic stroke. Circ Res. 134 (8), 954-969 (2024).
  47. Hou, L., et al. Itgam is a critical gene in ischemic stroke. Aging (Albany, NY). 16 (8), 6852-6867 (2024).
  48. Miao, M., Lyu, M., Zhong, C., Liu, Y. Correlation between mmp9 promoter methylation and transient ischemic attack/mild ischemic stroke with early cognitive impairment. Clin Interv Aging. 18, 1221-1232 (2023).
  49. Li, W., et al. Clec7a knockdown alleviates ischemic stroke by inhibiting pyroptosis and microglia activation. J Integr Neurosci. 23 (12), 219(2024).
  50. Shi, Y., et al. C5ar1 mediates the progression of inflammatory responses in the brain of rats in the early stage after ischemia and reperfusion. ACS Chem Neurosci. 12 (21), 3994-4006 (2021).
  51. Yan, Y., Chen, L., Zhou, J., Xie, L. Snhg12 inhibits oxygen-glucose deprivation-induced neuronal apoptosis via the mir-181a-5p/negr1 axis. Mol Med Rep. 22 (5), 3886-3894 (2020).
  52. Wei, X. Y., et al. Long noncoding RNA RPL34-AS1 ameliorates oxygen-glucose deprivation-induced neuronal injury via modulating miR-223-3p/igf1r axis. Hum Cell. 35 (6), 1785-1796 (2022).
  53. Zhou, X., et al. Long noncoding RNA norad protects against cerebral ischemia/reperfusion injury-induced brain damage, cell apoptosis, oxidative stress, and inflammation by regulating miR-30a-5p/ywhag. Bioengineered. 12 (2), 9174-9188 (2021).
  54. Gao, H., et al. Long noncoding RNA Peg13 alleviates hypoxic-ischemic brain damage in neonatal mice via mir-20a-5p/xiap axis. Neurochem Res. 47 (3), 656-666 (2022).
  55. Fluri, F., Schuhmann, M. K., Kleinschnitz, C. Animal models of ischemic stroke and their application in clinical research. Drug Des Devel Ther. 9, 3445-3454 (2015).
  56. Zhao, W., et al. Comparison of RNA-seq by poly (a) capture, ribosomal RNA depletion, and DNA microarray for expression profiling. BMC Genomics. 15 (1), 419(2014).
  57. Wang, C., et al. The construction and analysis of lncRNA-miRNA-mRNA competing endogenous RNA network of Schwann cells in diabetic peripheral neuropathy. Front Bioeng Biotechnol. 8, 490(2020).
  58. Pillai-Kastoori, L., et al. Antibody validation for Western blot: By the user, for the user. J Biol Chem. 295 (4), 926-939 (2020).
  59. Liu, Q., et al. Mir-190a potentially ameliorates postoperative cognitive dysfunction by regulating tiam1. BMC Genomics. 20 (1), 670(2019).
  60. Vella, D., Zoppis, I., Mauri, G., Mauri, P., Di Silvestre, D. From protein-protein interactions to protein co-expression networks: A new perspective to evaluate large-scale proteomic data. EURASIP J Bioinform Syst Biol. 2017 (1), 6(2017).
  61. Panfil, K., Deavours, A., Kirkpatrick, K. Effects of the estrous cycle on impulsive choice and interval timing in female rats. Horm Behav. 149, 105315(2023).
  62. Ouyang, S., et al. Comprehensive bioinformatics analysis to reveal key RNA targets and hub competitive endogenous RNA network of keratoconus. Front Genet. 13, 896780(2022).
  63. Chen, X., et al. Cx3cl1/cx3cr1 axis attenuates early brain injury via promoting the delivery of exosomal microRNA-124 from neuron to microglia after subarachnoid hemorrhage. J Neuroinflammation. 17 (1), 209(2020).
  64. Karim, M. R., et al. Explainable AI for bioinformatics: Methods, tools and applications. Brief Bioinform. 24 (5), bbad236(2023).
  65. Shainer, I., et al. Transcriptomic neuron types vary topographically in function and morphology. Nature. 638 (8052), 1023-1033 (2025).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

lncRNAmiRNAceRNAWestern Blot

מאמרים קשורים