מאמר שיטה

הערכת היפרמיה תגובתית פוסט-סתימתית בעור כפות חולדה באמצעות הדמיית ניגודיות כתמים בלייזר

644 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/68986

⸱

3 באוקטובר 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1V.A. Negovsky Research Institute of General Reanimatology, Federal Research and Clinical Center of Intensive Care Medicine and Rehabilitology, 2Research and Development Center of Biomedical Photonics, Orel State University, 3College of Engineering and Physical Sciences, Aston University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

פרוטוקול זה מציג שיטה להערכת פרמטרים של היפרמיה תגובתית פוסט-סדוקסית בעור של חולדה מורדמת באמצעות הדמיית ניגודיות כתמים בלייזר ומדידת לחץ דם פולשנית.

תקציר

הדמיית ניגודיות כתמי לייזר (LSCI) היא טכניקה מודרנית ולא פולשנית להערכת זלוף מיקרו-וסקולרי בבני אדם ובחיות מעבדה. השילוב של LSCI עם מדידת לחץ דם פולשני (BP) ובדיקת חסימת כלי דם מאפשר לחקור היפרמיה תגובתית פוסט-סדוקסיבית (PORH), ומספק הערכה של עתודת זרימת הדם המיקרו-וסקולרית ותגובתיות כלי הדם. מאמר זה מדגים את הטכניקה של שימוש ב-LSCI כדי להקליט ולדמיין PORH בכפה האחורית של חולדה בהרדמה כללית. שרוול פנאומטי מיוחד מנופח ליצירת חסימה וסקולרית זמנית (180 שניות) בגובה השוקה. הערכת ה-PORH (שיא היפרמיה ומדדים קינטיים) יכולה לספק מידע נוסף על המנגנונים והחומרה של התהליך הפתולוגי הנחקר (הלם במחזור הדם, אי ספיקת לב, יתר לחץ דם וכו') או לזהות השפעות וסקולריות של תרופה חדשה שאינן ניכרות בעת הערכת זלוף במנוחה. ניטור לחץ דם פולשני מאפשר חישוב מוליכות כלי דם עורית והתחשבות בשינויים בהמודינמיקה מערכתית, דבר חשוב במיוחד במודלים ניסיוניים של מחלות קשות. יודגם גם השימוש בגישה זו לזיהוי תפקוד מיקרו-וסקולרי במודל חולדה של הלם דימומי.

מבוא

תפקוד מיקרו-וסקולרי מעורב בפתוגנזה של מחלות לב וכלי דם, אנדוקריניות ואחרות רבות, פוגע בזלוף וחמצון של רקמות, ומשבש את מנגנוני הוויסות של כלי הדם של המודינמיקה מערכתית (למשל, ביתר לחץ דם)1. להפרעות מיקרו-סירקולציה יש גם משמעות פתופיזיולוגית רבה במנגנונים של תפקוד לקוי של איברים בחולים במצב קריטי עם טראומה, אלח דם וסוגים שונים של הלם (דימומי, ספטי, קרדיוגני וכו ')2.

נכון לעכשיו, מספר שיטות מבוססות לייזר משמשות במחקרים קליניים ופרה-קליניים להערכה לא פולשנית של זלוף רקמות ותפקוד מיקרו-וסקולרי: זרימה דופלר בלייזר (LDF), הדמיית דופלר בלייזר (LDI/LDPI) והדמיית ניגודיות כתמים בלייזר (LSCI). ביניהם, LSCI הוא המבטיח ביותר להערכה לא פולשנית של זלוף העור במרפאה. יש לו יתרונות ברורים על פני LDF ו-LDI/LDPI מכיוון שהשיטה פשוטה ליישום ומציעה הדמיה של כל תחום החקירהברזולוציה מרחבית וזמנית גבוהה כאחד. LSCI היא טכניקה המשתמשת באור לייזר כדי ליצור דפוסי כתמים, אשר מנותחים לאחר מכן כדי לדמיין את הדינמיקה של זרימת הדם. ניתנות הערכות ברזולוציה גבוהה בזמן אמת של מיקרו-סירקולציה, החיוניות לתחומי מחקר שונים, כגון מדעי המוח4, ניתוחי בטן5, דרמטולוגיה6 ומחקרי כלי דם אחרים 7,8, הן במסגרות קליניות והן בניסוי.

הערכה פשוטה של ערכי זלוף העור במנוחה היא לרוב לא אינפורמטיבית לזיהוי הפרעות מיקרו-וסקולריות. זה נובע הן מהמאפיינים התפקודיים המהותיים של זרימת העור (שונות גבוהה, תלות בטמפרטורה, מתח וגורמים אחרים) והן מזלוף רקמות "נורמלי כוזב" במהלך תגובת הפיצוי של הגוף (למשל, עלייה בתפוקת הלב בשלבים המוקדמים של הלם ספטי). השימוש הנוסף בעומס פונקציונלי סטנדרטי מאפשר הערכה טובה יותר של מיקרו-סירקולציה וזיהוי תפקוד לקוי של כלי דם מיקרו-וסקולריים המוסתרים בתנאי מנוחה1. ידוע גם כי LSCI שימושי בהערכת מיקרו-סירקולציה בעור תחת גירויים פרמקולוגיים9.

השילוב של LSCI עם בדיקת חסימת כלי דם מאפשר הערכה לא פולשנית של תופעת ההיפרמיה התגובתית הפוסט-סתימתית (PORH), המשקפת פרמטרים תפקודיים חשובים של המיקרו-סירקולציה, בפרט עתודת זרימת הדם והתגובתיות של המיקרו-כלי דם10. גישה זו נמצאת בשימוש נרחב במחקרים קליניים לזיהוי הפרעות מיקרו-סירקולטוריות תפקודיות שאינן ניכרות ממדידות הזלוף הבסיסיות11, אך הערכה של PORH נדירה במחקרים פרה-קליניים בבעלי חיים12,13. בהשוואה למחקרים קליניים, השימוש בבדיקת חסימת כלי דם בניסוי in vivo מספק לחוקר הזדמנויות נוספות להעריך את המנגנונים של PORH, הפתוגנזה של מחלות קשות והפרמקודינמיקה של תרופות כלי דם. כמובן, הזדמנויות אלה חייבות להיות בגבולות הסטנדרטים הביו-אתיים המודרניים ליחס הומני לבעלי חיים.

פרוטוקול זה מציג שיטה להערכת פרמטרים של PORH בעור של חולדה מורדמת באמצעות LSCI ומדידת לחץ דם פולשנית. האחרון כולל צנתור של עורק הצוואר של החולדה ומאפשר מדידה של לחץ עורקי ממוצע (MAP) וקצב דופק. בנוסף, ניתן לאסוף דגימות דם עורקיות לבדיקות מעבדה (למשל ניתוח גזי דם עורקי). ראוי לציין כי פרוטוקול זה מכוון בעיקר לניסוי אקוטי שאינו כרוך בהתעוררות החיה מהרדמה לאחר השלמת הליכי הניסוי (למשל, מידול מחלה קשה). השיטה שאנו מציעים להערכת מיקרו-סירקולציה בחולדות היא פשוטה יחסית ותהיה שימושית במיוחד במחקרים של פיזיולוגיה ופתופיזיולוגיה השוואתית של כלי הדם, כולל הערכה של תפקוד לקוי של האנדותל, כמו גם בבדיקות פרה-קליניות של תרופות כלי דם חדשות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

ההליכים המתוארים להלן בוצעו כחלק מפרוטוקול שאושר על ידי מועצת הביקורת האתית של המרכז הפדרלי למחקר וקליני לרפואה ושיקום טיפול נמרץ.

1. הכנת השרוול הפנאומטי לחסימת כלי דם

  1. השתמש בשרוול פנאומטי ממערכת מדידת לחץ דם לא פולשנית (NIBP) לחולדות כדי ליצור חסימה חולפת של כלי הדם בכפה האחורית של חולדה.
  2. חבר את השרוול למנומטר האנרואיד ולמשאבת הגומי של טונומטר מכני קונבנציונאלי למדידת לחץ דם בבני אדם. השתמש בשלושה מקטעים של צינורות פלסטיק שקופים 3 מ"מ (מתוכם 1 מ' כלול במערכת NIBP) ובמחבר T בגודל המתאים (איור 1).
  3. בדוק את הפונקציונליות וההידוק של המערכת הפנאומטית המורכבת לפני השימוש בה על בעל חיים. ודא שלחץ השרוול נשמר על 200-220 מ"מ כספית למשך מספר דקות כאשר הוא מנופח.

2. הכנת קטטר עורקי, תחנת עבודה ומכשירים כירורגיים

  1. טפלו באזור העבודה ב-70% אלכוהול. מכסים את שולחן הניתוחים בווילון סטרילי. צנתרים ומכשירים לעיקור גז (בהליכי הישרדות וניסויים כרוניים).
  2. לצנתור עורק הצוואר, השתמש בצנתר PE-50 (OD 0.9 מ"מ, ID 0.6 מ"מ) באורך 12 ס"מ עם טבעת נעילה 25 מ"מ מהקצה. כדי למנוע ניקוב עורקים, השתמש בצנתר עם קצוות חלקים.
  3. חבר מחט קהה 22 גרם ומזרק של 2 מ"ל מלא במי מלח (5 IU הפרין/1 מ"ל) לקצה החיצוני של הצנתר. יש לשטוף את הצנתר בתמיסת מלח הפרינית (0.1-0.2 מ"ל) כדי להבטיח סבלנות ולמנוע היווצרות קרישים.

3. הרדמה וטיפול טרום ניתוח

הערה: כל חומרי ההרדמה יכולים לדכא את הנשימה וזרימת הדם. מינון נכון המבוסס על מיני בעלי חיים, זן, גיל ומצב בריאותי הוא קריטי כדי למנוע מנת יתר קטלנית. יש להכשיר את הצוות בהרדמת בעלי חיים וניטור סימנים חיוניים. הנהלים חייבים להיות מאושרים על ידי הוועדה המוסדית הרלוונטית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC) או גוף אתי מקביל. יש לנקוט משנה זהירות בעת טיפול במחטים, אזמלים ומכשירים חדים אחרים. השתמש תמיד במיכל חד לסילוק מיידי. לעולם אל תכסום מחטים. היו מודעים לסיכון לפציעות מחטים, שעלולות להעביר גורמים זואונוטיים או לגרום לטראומה פיזית.

  1. להרדים את החולדה על ידי הזרקה תוך-צפקית (IP) של תערובת של טילטמין (10 מ"ג/ק"ג) + זולאזפם (10 מ"ג/ק"ג) תמיסת 2% במי מלח, וקסילזין (5 מ"ג/ק"ג) תמיסת 0.5% במי מלח. ודא שההרדמה מספקת על ידי בדיקת היעדר רפלקסים (צביטת הבוהן).
  2. גילוח פרווה מהאזורים הקדמיים והאחוריים של הצוואר (כולל האזור הבין-שכמי). טפלו בעור באזורים אלה עם חומר חיטוי לעור (70% אלכוהול). הניחו את החיה במצב שכיבה על שולחן כירורגי מחומם.
  3. עקוב אחר מצבה של החיה המורדמת על ידי הערכה קבועה של עומק ההרדמה (תנועות ספונטניות, תגובה לגירויים כואבים), דפוס הנשימה (תדירות, עומק, קצב, צפצופים), צבע העור והריריות. השתמש בזריקות נוספות של טילטמין + זולאזפם 10 מ"ג/ק"ג IP לפי הצורך.
  4. הימנע מהיפותרמיה משמעותית על ידי שמירה על טמפרטורת פי הטבעת של החיה על 36.5-37.0 מעלות צלזיוסבאמצעות שולחן חימום ושמיכות בידוד.

4. צנתור עורק הצוואר השמאלי

  1. בצע חתך עור בקו האמצע של 2 ס"מ על פני הגחון של הצוואר. בעזרת המוסטט ומלקחיים, נתח בצורה בוטה לאורך את השרירים והפאשיה של הצוואר כדי לחשוף את עורק הצוואר השמאלי ולבודד קטע של 5-7 מ"מ של הכלי. הפרד בזהירות את עצב הנרתיק מעורק הצוואר, הימנע מפגיעה בו.
  2. בעזרת תפר משי 4-0, הניחו עניבה רופפת על החלק הזנבי של העורק, וקשרו את קצה הגולגולת של הכלי. השתמש בלסתות של מלקחיים מיקרו-כירורגיים המונחים מתחת לעורק כדי למתוח אותו בעדינות כדי למנוע דימום לאחר החתך.
  3. בעזרת מספריים מיקרוכירורגיים בזווית של 45 מעלות גולגולת, בצע חתך רוחבי בעורק בין שתי הקשירה (לעומק שלא יעלה על מחצית קוטר הכלי).
  4. לאחר ביצוע חתך קטן בעורק, הכנס את הקטטר לכיוון הלב עד לטבעת הקיבוע בעזרת מלקחיים. תוך כדי החזקת הקטטר בלומן של הכלי, הדק את הקשירה הזנבית וקשר קשרים נוספים מעל טבעת הקיבוע של הצנתר.
  5. בדוק את הסבלנות של הקטטר על ידי שאיבת כמות קטנה של דם למזרק ושטוף את הצנתר שוב. מהדקים את הקטטר עם מחזיק מחט חלק 2-3 ס"מ מטבעת הקיבוע. הסר את המחט הקהה והמזרק מהקטטר.
  6. הפוך בזהירות את החולדה למצב נוטה. בצע חתך עור בקו האמצע של 0.5-1.0 ס"מ בין עצם השכמה בעזרת מספריים כירורגיים. מנהרה את המהדק ההמוסטטי תת עורי דרך החתך הגבי לכיוון הגחון. אחוז בקצה החיצוני של הצנתר והעביר אותו בזהירות דרך המנהרה התת עורית, הוצא אותו לאזור הבין-שכם.
  7. הכנס מחט קהה עם מזרק של 2 מ"ל המחובר לקצה החיצוני של הצנתר.
  8. סגור את פצעי הניתוח הגחוני והגבי באמצעות מחט אטראומטית ותפר מונופילמנט 4-0.

5. מדידת לחץ דם פולשנית

  1. מלאו את המתמר המכויל ממערכת מדידת לחץ הדם הפולשנית במי מלח הפריניים (5 IU הפרין/1 מ"ל).
  2. הנח את החיה במצב הגחון. נתק את המזרק של 2 מ"ל מהמחט הקהה וחבר את הקטטר למתמר (איור 2). הסר את המהדק מהקטטר ושטוף את קו לחץ הדם עם 0.1-0.2 מ"ל של מי מלח הפריניזציה.
  3. השתמש במערכת איסוף נתונים כדי למדוד ולתעד לחץ דם ודופק. פעימה מוגדרת היטב בצורת הגל של לחץ הדם (משרעת של 10-15 מ"מ כספית ומעלה) מצביעה על הסבלנות והמיקום הנכון של הצנתר.
    הערה: כדי למדוד במדויק את לחץ הדם, יש למקם את המתמר בגובה הלב של החיה. אם מופיעות בועות אוויר בקו מדידת לחץ הדם, הסר אותן כדי למנוע תסחיף אוויר של איברים פנימיים.
  4. ייצב את החיה המורדמת למשך 15-20 דקות לפני מדידת לחץ עורקי ממוצע (MAP) ומשתנים פיזיולוגיים בסיסיים אחרים.
  5. פתח את יישום התוכנה לרכישת נתונים. בתפריט קובץ , בחר חדש.
  6. ודא שהקלט הפיזי הנכון (למשל, קלט 1) נבחר. לחץ על חץ התפריט הנפתח בכותרת הערוץ המתאימה (למשל, ערוץ 1) ובחר הגדרות ערוץ.
  7. בתיבת הדו-שיח, כוונן את טווח המתח (±100 mV) כדי להתאים לאות הצפוי. הגדר את יחידות התצוגה למ"מ כספית.
  8. התאמת קצב הדגימה: לחץ על כפתור קצב הדגימה בסרגל הכלים. עבור לחץ דם פולשני, הגדר את קצב הדגימה ל-200 הרץ (200 דגימות לשנייה). אם מטרות המחקר כוללות ניתוח מורפולוגיה של גלי דופק, הגדל את קצב הדגימה ל-1 קילו-הרץ.
  9. לחץ על כפתור התחל כדי להתחיל להקליט את נתוני הניסוי.
  10. לאחר לכידת פלח הנתונים הרצוי, לחץ על תפסיק לחצן. שמור את קובץ הנתונים באמצעות קובץ | שמירה בשם... תן לו שם קובץ ייחודי.

6. מדידת זלוף עור באמצעות LSCI

  1. נגב את המשטח הצמחי של כפה האחורית של החולדה בגזה ספוגה במים לניקוי העור.
    הערה: אין להשתמש באלכוהול או בתמיסות אחרות העלולות לגרום להיפרמיה של העור.
  2. הנח את השרוול הפנאומטי על כפה האחורית של החולדה בגובה שריר השוקה והגסטרוקנמיוס.
    הערה: היזהר בעת החדרת האצבעות והקרסול דרך לומן השרוול כדי למנוע פגיעה בקרום המתנפח ודחיסת הרקמות הרכות של הברך.
  3. הניחו את כף הרגל של החולדה על פיסת גזה ובנוסף אבטחו את אצבעות הרגליים עם רצועת סרט דבק כדי למזער את חפצי התנועה (איור 2).
  4. הכן חומרה ותוכנה לרכישת נתונים כדי להקליט זלוף עור בשיטת LSCI.
    הערה: בעבודה המוצגת, החומרה מורכבת ממצלמת מונוכרום במהירות גבוהה קרוב לאינפרא אדום (NIR), מטרת מצלמה, מקטב ליניארי NIR ומקור לייזר עם סט המפזרים. התוכנה מורכבת מכלי הקלטת וידאו הלוכד פריימים בקצב פריימים מוגדר (90 פריימים לשנייה) וזמן חשיפה (11 אלפיות השנייה). הממדים בפועל של האזור שהוא שדה הראייה של המצלמה הם 16 x 16 מ"מ.
  5. ודא שאזור העניין (טרסוס ומטטרסוס) נמצא בנקודת המוקד של אובייקט המצלמה.
  6. כוונן את מקור הלייזר כך שהתאורה תהיה אחידה ולא מוגזמת על פני כל אזור העניין.
  7. כוונן את המקטב הליניארי כך שההשתקפות הספקולרית מהאובייקט הנמדד תמוזער.
  8. ודא שהפרמטרים בכלי הקלטת וידאו מוגדרים כהלכה, ולאחר מכן לחץ על ללכוד כפתור כדי להקליט תמונות מונוכרום גולמיות למשך 30 שניות (הקלטה בסיסית, יכולה להיות פחות או יותר). השתמש בתמונות כדי לחשב ערכי Speckle Perfusion (ראה נוסחה (2) להלן).
    הערה: במחקר זה נעשה שימוש במערך ניסיוני שפותח במיוחד, אך ניתן להשתמש בכל מכשיר זמין מסחרית המיישם את שיטת LSCI לביצוע מדידות על פי פרוטוקול זה. מומלץ לבצע מדידות LSCI בחדר חשוך כדי למזער את השפעת התאורה החיצונית על התוצאות המתקבלות.

7. בדיקת חסימת כלי דם והערכת PORH

  1. סגור את שסתום ההקלה של משאבת הגומי.
  2. לאחר לכידת זלוף העור הבסיסי (במנוחה), נפח במהירות את השרוול הפנאומטי על איבר החיה ללחץ גדול יותר מלחץ הדם הסיסטולי של החיה (בדרך כלל 200-220 מ"מ כספית כדי לחסום באופן אמין את זרימת הדם העורקית והוורידית מבלי לגרום לפגיעה בגפיים).
  3. המשך להקליט את אות ה-LSCI של העור למשך 180 שניות (30-300 שניות בהתאם למטרות המחקר) כדי לאשר חסימת כלי דם ולאחר מכן לקבוע את "האפס הביולוגי" של זלוף הכתמים.
  4. רוקן במהירות את השרוול לאחר הגעה לזמן חסימת היעד והמשך להקליט את אות ה-LSCI של העור למשך 180 שניות נוספות (יכול להיות פחות או יותר) כדי להקליט את דינמיקת ה-PORH.
  5. רשום את צורת הגל של הלחץ העורקי הפולשני במקביל להערכת הזלוף העורי לפני, במהלך ואחרי חסימת כלי הדם. השתמש בנתונים אלה כדי לחשב MAP ומוליכות כלי דם עורית (ראה להלן).
  6. השג ערכי Speckle Perfusion באמצעות אלגוריתם שנכתב בסביבת תוכנה. השלב הראשון הוא להפוך תמונות מונוכרום גולמיות לתמונות ניגודיות מנומרות. חשב את ניגודיות הכתמים הממוצעת באמצעות נוסחה (1):
    figure-protocol-1    (1)
    כאשר עוצמה היא העוצמה של כל פיקסל בזמן נתון.
    הערה: מספר התמונות שעליהן מחושב הניגודיות עשוי להשפיע מאוד על תוצאת העיבוד. במחקר זה נעשה שימוש באלגוריתם LSCI זמני עם ממוצע של מעל 90 תמונות.
  7. המרת ערכי ניגודיות כתמים לערכי Speckle Perfusion באמצעות הנוסחה (2):
    figure-protocol-2  (2)
  8. בחרו אזור מלבני הכולל את אזור העניין (tarsus ו-metatarsus) לחישוב ממוצע של ערכי Speckle Perfusion (בתוך אזור מלבני זה). השתמש בהתפתחות הזמן (גרף) של זלוף הכתמים המתקבל על ידי הליך כזה לחישוב נוסף של הפרמטרים שנחקרו.
  9. בהתבסס על ערכי זלוף העור שנמדדו, חשב את הפרמטרים העיקריים של PORH ( איור 3).
  10. חשב מוליכות כלי דם עורית (CVC) באמצעות נוסחה (3):
    figure-protocol-3   (3)
    היכןLSCI נח הוא הערך הממוצע של זלוף כתמי עור שנרשם בנקודת ההתחלה (יחידות שרירותיות = AU); MAP הוא הלחץ העורקי הממוצע (mmHg) שנרשם באותה תקופת זמן.
  11. חשב את שיא מוליכות כלי הדם העורית (CVCmax) באמצעות הנוסחה (3) והחלף את הערכים המתאימים להיפרמיה שיא (LSCImax) ו-MAP.

8. פרוצדורות ניסוי ומדידות חוזרות

  1. לאחר רישום זלוף העור, PORH ומשתנים פיזיולוגיים אחרים מעניינים בנקודת ההתחלה, בצע את ההתערבות הניסיונית על פי פרוטוקול המחקר המאושר (לדוגמה, מידול של התהליך הפתולוגי ו/או מתן תרופה וזואקטיבית).
  2. להעריך מחדש את PORH ומשתנים פיזיולוגיים אחרים בנקודת זמן המחקר הבאה לאחר התפתחות התהליך הפתולוגי המדומה או השגת השפעת התרופה הניתנת.

9. סוף הניסוי

  1. עם סיום הניסוי האקוטי, המתת חסד של החולדה על ידי הזרקה תוך עורקית של 2% לידוקאין (2 מ"ל) בהרדמה כללית עמוקה (טילטמין + זולאזפאם וקסילזין). בהתאם לחוקים ולפרוטוקולים המקומיים, השתמש בשיטה חלופית של המתת חסד הומאנית למכרסמי מעבדה שאושרה על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC).
    הערה: להליכי הישרדות והתאוששות מתוכננת של בעל החיים מהרדמה, יש לספק טיפול מתאים והערכה קבועה של מצבו של בעל החיים, כולל מניעת היפותרמיה ומשככי כאבים נאותים לאחר הניתוח (למשל, קטופרופן 5-10 מ"ג/ק"ג IM).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

השיטה המתוארת לעיל להערכת תפקוד מיקרו-וסקולרי יושמה על ידינו בסדרה של ניסויים עם מודלים של הלם דימומי (איבוד דם של 35% מנפח הדם המחושב) בחולדות זכרים של Wistar במשקל 250-300 גרם. בקבוצת בעלי החיים עם דימום (HS, n = 13), הערכת פרמטרי PORH עם ניטור סימולטני של לחץ דם פולשני בוצעה 30 דקות לאחר השלמת הדימום. בקבוצת הביקורת של בעלי חיים שעברו ניתוח דמה (Sham, n = 10) לא נגרם דימום, אך אותן מדידות בוצעו בפרק זמן דומה. הבדלים בין קבוצות נותחו באמצעות מבחן Mann-Whitney U . התוצאות מבוטאו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

כאן אנו מתארים טכנולוגיה מודרנית להערכת מיקרו-סירקולציה עורית ותגובתיות כלי דם בניסוי in vivo במכרסמים. לשימוש מוצלח וסטנדרטי בשיטה זו במחקרים פיזיולוגיים ופרמקולוגיים, יש לקחת בחשבון מספר שיקולים נוספים. בפרוטוקול הנ"ל, חולדות מורדמות בשילוב של טילטמין + זולאזפם + קסילזין, המוכתב בעיקר על ידי תקנים מקומיים לעבודה עם חיות מעבדה וגישה מוגבלת לבופרנורפין, קטמין ומשככי כאבים והרדמה נפוצים אחרים. עבור מחקרים פרמקולוגיים הכוללים ניתוחים קלים, עדיפה איזופלורן/סבופלוראן מונואנאסטזיה אם קיים ציו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין ניגודי אינטרסים להצהיר עליהם.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי קרן המדע הרוסית במסגרת פרויקט 24-25-00310.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מחט א-טראומטית עם ניילון תפר כירורגי, 4C-0.5x16-4/0-NMedtekhnika, רוסיהלא ישיםכחול. אורך 75 ס"מ. USP 4/0 (MP1.5). לתפירת פצע כירורגי
קטטר לעורק הצוואר של חולדה עם מחט מזרק קהה 22 גרםSciCat, רוסיה לא ישיםPE-50, אורך 12 ס"מ, OD=0.9 מ"מ, ID= 0.6 מ"מ. עם טבעת קיבוע אחת
מתמר לחץ חד פעמי של Deltranיוטה מוצרים רפואיים, ארה"ב 6069כבל 12 אינץ'
דיסקופיקס תלת כיווני לטיפול בעירוי וניטורב. בראון, גרמניה 16494ג
הפאריןBelmedpreparaty, בלארוס לא ישיםהפרין נתרן 5000 יחב"ל/מ"ל, אמפולות 5 מ"ל
לידוקאיןVelpharm, רוסיהלא ישיםפתרון להזרקה 20 מ"ג/מ"ל, אמפולות 2 מ"ל
שרוול פנאומטי "סיסטולה"Neurobotics, רוסיהלא ישיםחלק ממדידת לחץ דם לא פולשנית למכרסמים. סוג זנב 5-10 מ"מ (חולדות)
נתרן כלוריPharmasyntez, רוסיה לא ישיםפתרון לעירוי 0,9%, 250 מ"ל
מעבדת תוכנה8 ADInstruments, אוסטרליהלא ישיםגירסה 8.1.13
תוכנה MATLAB The MathWorks Inc., ארה"בN/A גרסה R2019b
מזרק סטרילי לשימוש חד פעמי, 1 מ"ל, 3 חלקיםHuaian סיטי Hengchun מוצר רפואי ושות 'בע"מ, סיןN/A מחט 27 גרם
מזרק סטרילי לשימוש חד פעמי, 2 (2.5) מ"ל, 3 חלקיםVogt Medical Vertrieb GmbH, גרמניה1310524מחט 23 גרם
תפר SILK-SPolytechmed, רוסיה לא ישיםלא נספג, קלוע, עשוי משי טבעי עם ציפוי סיליקון, שחור בקלטת. USP 4/0 (MP1.5). אורך 100 מ'. לקשירת כלים
קסילהInterchemie, הולנדN/A קסילזין 20 מ"ג/מ"ל, 50 מ"ל
זולטיל 100Virbac, צרפת N/A טילטמין הידרוכלוריד 50 מ"ג/מ"ל, זולזפם הידרוכלוריד 50 מ"ג/מ"ל, 5 מ"ל

מקורות

  1. Roustit, M., Cracowski, J. Non-invasive assessment of skin microvascular function in humans: an insight into methods. Microcirculation. 19 (1), 47-64 (2012).
  2. Duranteau, J., et al. The future of intensive care: the study of the microcirculation will help to guide our therapies. Crit Care. 27 (1), 190(2023).
  3. Basak, K., Manjunatha, M., Dutta, P. K. Review of laser speckle-based analysis in medical imaging. Med Biol Eng Comput. 50 (6), 547-558 (2012).
  4. Goldberg, J., et al. Intraoperative laser speckle contrast imaging to assess vessel flow in neurosurgery: a pilot study. Neurosurgery. 94, 983-992 (2024).
  5. Paramasivam, R., et al. Laser speckle contrast imaging for intraoperative assessment of intestinal microcirculation in normo- and hypovolemic circulation in a porcine model. Eur Surg Res. 65 (1), 1-8 (2023).
  6. Linkous, C., et al. Applications of laser speckle contrast imaging technology in dermatology. JID Innov. 3 (5), 100187(2023).
  7. Golubova, N., et al. Effect of thinned-skull cranial window on monitoring cerebral blood flow using laser speckle contrast imaging. IEEE J Sel Top Quantum Electron. 31 (4), 1-8 (2025).
  8. Golubova, N., Potapova, E., Seryogina, E., Dremin, V. Time-frequency analysis of laser speckle contrast for transcranial assessment of cerebral blood flow. Biomed Signal Process Control. 85, 104969(2023).
  9. Escobar, S., et al. Evaluation of systemic endothelial-dependent and endothelial-independent microvascular reactivity in metabolically healthy obesity: an observational study. Microvasc Res. 148, 104553(2023).
  10. Shirazi, B. R., Valentine, R. J., Lang, J. A. Reproducibility and normalization of reactive hyperemia using laser speckle contrast imaging. PLoS One. 16 (1), e0244795(2021).
  11. Tew, G. A., Klonizakis, M., Crank, H., Briers, J. D., Hodges, G. J. Comparison of laser speckle contrast imaging with laser Doppler for assessing microvascular function. Microvasc Res. 82 (3), 326-332 (2011).
  12. Yuan, X., et al. A comparison of the cutaneous microvascular properties of the spontaneously hypertensive and the Wistar-Kyoto rats by spectral analysis of laser Doppler. Clin Exp Hypertens. 41 (4), 342-352 (2019).
  13. Dubensky, A., et al. Post-occlusive reactive hyperemia variables can be used to diagnose vascular dysfunction in hemorrhagic shock. Microvasc Res. 152, 104647(2024).
  14. Meglinski, I. V., Kal'chenko, V. V., Kuznetsov, Y. L., Kuznik, B. I., Tuchin, V. V. Towards the nature of biological zero in the dynamic light scattering diagnostic modalities. Dokl Phys. 58, 323-326 (2013).
  15. Feng, J., et al. Catheterization of the carotid artery and jugular vein to perform hemodynamic measures, infusions and blood sampling in a conscious rat model. J Vis Exp. (95), e51881(2015).
  16. Henninger, N., Heimann, A., Kempski, O. Electrophysiology and neuronal integrity following systemic arterial hypotension in a rat model of unilateral carotid artery occlusion. Brain Res. 1163, 119-129 (2007).
  17. Souza-Silva, E., Ascenso, R., Tonussi, C. R., Da Silva-Santos, J. E. Detection of blood flow perfusion and post-occlusive reactive hyperemia in the skeletal muscle of rats. Life Sci. 278, 119571(2021).
  18. Roustit, M., Millet, C., Blaise, S., Dufournet, B., Cracowski, J. L. Excellent reproducibility of laser speckle contrast imaging to assess skin microvascular reactivity. Microvasc Res. 80 (3), 505-511 (2010).
  19. Nilsson, M., et al. Day-to-day variability in cutaneous microcirculation measured with multi-exposure laser speckle contrast imaging and multispectral imaging. Microvasc Res. 160, 104819(2025).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

מאמרים קשורים