הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

פרוטוקולים כירורגיים לאנסטומוזה לימפה ורידית עמוקה בצוואר הרחם במודל חולדה: אנסטומוזה של בלוטות לימפה וכלי לימפה

1.4K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/69201

⸱

14 בנובמבר 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Neurosurgery, The Second Affiliated Hospital of Harbin Medical University, 2Institute of Medical Technology, Peking University Health Science Center, 3Department of MR Diagnosis, The Second Affiliated Hospital of Harbin Medical University, 4Department of Neurology, The Second Affiliated Hospital of Harbin Medical University, 5Department of Clinical Nutrition, Harbin 242 Hospital

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להגדרה ברורה של השלבים לאנסטומוזה של בלוטת הלימפה הצווארית העמוקה או כלי הלימפה הנכנס שלה עם וריד הפנים האחורי בחולדה, כדי למזער את השפעתם של משתנים אחרים ולתקנן את ביצוע המחקר מבוסס הניתוח.

תקציר

אנסטומוזה לימפה ורידית עמוקה בצוואר הרחם (dcLVA) הפכה לאסטרטגיית טיפול מבטיחה למחלת אלצהיימר (AD), המציעה שיפורים משמעותיים בהשוואה לאפשרויות הטיפול המוגבלות הנוכחיות. עם זאת, המנגנון הבסיסי של dcLVA נותר לא ברור. למרות שניסויים קליניים נמשכים, מודלים של בעלי חיים המדמים dcLVA מספקים כלי רב ערך לחקר המנגנון שלו. מחקר זה נועד לפתח פרוטוקול סטנדרטי ליצירת מודלים של dcLVA בבעלי חיים כדי להקל על מחקר בסיסי ולהתמודד עם אתגרים קליניים. אנו מתארים את ההליכים הכירורגיים ואת השלבים העיקריים לאנסטומוזה של בלוטת הלימפה הצווארית העמוקה (dcLN) וכלי הלימפה הנכנס שלה (ALV) עם וריד הפנים האחורי (PFV), ומפרטים את שתי השיטות הכירורגיות הנפרדות הללו: אנסטומוזה עמוקה של בלוטות הלימפה הצוואריות (dcLnVA) ואנסטומוזה של כלי לימפה עמוק בכלי הרחם (dcLaVA). מעבר לקידום ניקוז הלימפה, ההשוואה בין שתי השיטות הכירורגיות הללו עוזרת לנו גם להבין ולחקור את תפקידם של בלוטת הלימפה הצווארית העמוקה ומערכת הלימפה הצווארית העמוקה בפתוגנזה של אלצהיימר. בסך הכל, ההצגה המלאה והברורה של ההליך הכירורגי וציוני הדרך האנטומיים העיקריים בחולדה עוזרת לתקנן את הפרוטוקול הכירורגי, שיכול למזער גורמים מבלבלים ולהפחית את השונות הבין-ניסויית, ובכך להניח בסיס מתודולוגי מוצק להבנה מעמיקה יותר של המנגנונים המעורבים.

מבוא

מחלת אלצהיימר (AD) היא הפרעה ניוונית נוירודגנרטיבית מתקדמת בהדרגה שלעתים קרובות גורמת לירידה קוגניטיבית. המאפיינים הפתולוגיים הייחודיים של אלצהיימר הם פלאק עמילואיד-בטא (Aβ) וסבכים נוירו-פיברילריים, הנוצרים על ידי חלבוני טאו זרחניים באופן חריג. מחקר שנערך לאחרונה על מערכת הלימפה במוח פתח אפיקים טיפוליים חדשים לטיפול במחלת אלצהיימר. מערכת זו מקלה על ניקוז Aβ מהנוזל הבין-תאי (ISF) לנוזל המוח השדרתי (CSF) ולאחר מכן לבלוטות הלימפה הצוואריות העמוקות דרך כלי הלימפה של קרום המוח (mLVs)1. בשנת 2024, הצוות של פרופסור שי דיווח על המקרה הראשון של שיפור קוגניטיבי בחולה AD בעקבות אנסטומוזה לימפה ורידית עמוקה בצוואר הרחם (dcLVA) ולאחר מכן יזם ניסוי קליני (NCT06530732)2.

למרות ש-dcLVA, כגישה טיפולית חדשה לאלצהיימר, מציע סיכויים מבטיחים לחולים, המנגנונים המדויקים העומדים בבסיס ההשפעות הטיפוליות שלו דורשים הבהרה נוספת3. מודלים של בעלי חיים מספקים פלטפורמה הכרחית לחקירת מנגנונים אלה. הבנה מקיפה של המנגנונים הטיפוליים של dcLVA לא רק תשפר את ההבנה שלנו לגבי פתוגנזה של אלצהיימר, אלא גם תייעל טכניקות כירורגיות, תבהיר את אינדיקציות הטיפול, ובסופו של דבר תספק יתרונות קליניים גדולים יותר למטופלים.

הצוות של פרופסור שי דיווח לאחרונה על מודל dcLVA, המדגים את ההיתכנות של חיבור יובלים של וריד הצוואר החיצוני עם בלוטת הלימפה הצוואריתהעמוקה 4. עם זאת, תיאור הדגם עדיין אינו מספיק. ראשית, התיאור של בלוטת הלימפה הצווארית העמוקה (dcLN) והאנטומיה הסובבת אותה אינו מספק. שנית, אין הערכה אובייקטיבית וכמותית של סבלנות לאחר הניתוח. חשוב מכך, חסרים תיאורים מפורטים של השלבים לאנסטומוזה של dcLN וורידים, כמו גם תמונות וסרטונים ברורים ואינטואיטיביים הנוחים להוראה.

בהתחשב בכך שטכניקה זו כוללת מניפולציה כירורגית מורכבת ובהתחשב בהבדלים האנטומיים בין חולדות לבני אדם, וריאציות בהליכים כירורגיים ופרטים טכניים במודלים של חולדות עשויות להוביל לפערים משמעותיים בתוצאות הניסוי. לכן, זה קריטי ודחוף להמחיש בבירור את ציוני הדרך האנטומיים הרלוונטיים בחולדות ולספק תיאורים טכניים מפורטים של הליך האנסטומוזיס. מאמצים כאלה חיוניים כדי לשפר את יכולת השחזור והסטנדרטיזציה של הפרוטוקול הכירורגי, ובכך לתמוך ביישום רחב יותר על ידי חוקרים ולקדם חקירות מדעיות קשורות. יתר על כן, בהתחשב במגוון הטכניקות הכירורגיות הקליניות, כגון אנסטומוזה של בלוטות לימפה לווריד ואנסטומוזיס לימפטי ורידי, והפוטנציאל לתוצאות משתנות בהתאם לגישה הכירורגית, יש צורך במחקרים השוואתיים כדי להעריך את יעילותם היחסית. בתגובה לאתגרים אלה, אנו מציגים שתי שיטות dcLVA הניתנות לשחזור גבוה: אנסטומוזה עמוקה של בלוטת הלימפה הצווארית לווריד (dcLnVA) ואנסטומוזה של כלי לימפה עמוק בצוואר הרחם (dcLaVA). שיטות אלו נועדו לתקנן את תהליך יצירת המודל ולהקל על מחקר בסיסי לאחר מכן.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

מחקר זה נערך באישור הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC) של האוניברסיטה הרפואית חרבין (אישור מס. SYDW2025-037). הנבדקים היו חולדות Sprague-Dawley (SD) זכרות, במשקל 400-500 גרם ובגילאי 12-14 שבועות, שסופקו על ידי מרכז בעלי החיים של האוניברסיטה. המרכז מתחזק מתקן נטול פתוגנים ספציפיים (SPF) ועומד בתקני הרבייה הלאומיים.

הערה: מחקר זה חוקר בעיקר שתי שיטות של אנסטומוזה בין לימפה צוואר הרחם העמוקה לוורידים. יצירת חיבור כירורגי בין ה-dcLN לווריד הפנים האחורי (PFV); טכניקה זו מכונה dcLnVA. יצירת קשר אנטומי בין כלי הלימפה הצווארי העמוק (dcLaV) לבין ה-PFV; טכניקה זו מכונה dcLaVA. אנו מתארים את שני ההליכים המיקרו-כירורגיים בפירוט, כולל המתודולוגיות האופרטיביות שלהם והערכה פוסט-אנסטומוזיס.

1. הכנה טרום ניתוחית

  1. להרדים את החולדה באמצעות הזרקה תוך-צפקית של נתרן פנטוברביטל (50 מ"ג/ק"ג). עקוב מקרוב אחר תגובות החולדה. המשך רק כאשר רפלקס הדוושה נעדר לחלוטין.
  2. באמצעות מחט קהה, יש לתת לאט תמיסת אוונס כחול (EB) (כ-60-100 מיקרוליטר/ק"ג, 5%)5 לתוך רירית האף של חלל האף החד-צדדי. מקם את החולדה בתנוחת שכיבה חצי צדדית, כאשר הבטן פונה כלפי מעלה והנחיר המוזרק על ידי EB פונה כלפי מטה. אבטח את הראש כדי למנוע כניסת EB לנחיר הנגדי או לדרכי הנשימה.
  3. גלח את השיער על צוואר החולדה כדי להבטיח שדה ניתוח ברור. יש למרוח וזלין על שתי העיניים כדי למנוע יובש או פגיעה בקרנית במהלך הניתוח.

2. חתך כירורגי

  1. חיטוי קו האמצע של צוואר החולדה שלוש פעמים עם תמיסת יוד כדי להבטיח שדה כירורגי סטרילי.
  2. בצע חתך בקו האמצע באורך של כ -3 ס"מ באמצעות מספריים כירורגיים.
    הערה: הקפד לא לפגוע בבלוטה התת-לסתית (SMG) ובכלי הדם במהלך הדיסקציה.
  3. משוך את החתך הניתוחי כדי לחשוף את שריר הסטרנו-בלוטת התריס (STM), שריר הסטרנוקלידומסטואיד (SCM) ושריר האומוהיואיד (OHM).

3. הכנת ה-PFV

  1. זהה את ה-PFV, יובל של וריד הצוואר החיצוני (EJV), לאורך השוליים הצדדיים של ה-SCM.
  2. בהתפצלות בין ה-PFV ל-EJV, חסום את ה-PFV באמצעות קליפ מיקרו-וסקולרי.
  3. המשך לנתח בצורה בוטה את ה-PFV כדי להשיג אורך מספיק, והדק אותו בקצה הדיסטלי. ודא שמקטע ה-PFV נשאר רופף ככל האפשר כדי לאפשר מתיחה לאחר מכן במהלך אנסטומוזה עם ה-dcLN.
  4. צור חתך אורכי במקביל לציר כלי הדם באמצעות מספריים מיקרו-וסקולריים.
    הערה: ודא שחתך ה-PFV הוא אורכי, מכיוון שניתן להגדיל את החתך הרוחבי ולהיקרע על ידי מתיחה.
  5. השקו היטב את מקטע כלי הדם המבודד עם מי מלח שעברו הפרין (0.1% נתרן הפרין ב-0.9% NaCl) עד לניקוי מלא של אריתרוציטים תוך-וסקולריים.

4. אנסטומוזה של בלוטות הלימפה-ורידים

  1. חקור וחשוף באופן מלא את dcLN ואת כלי הלימפה הנכנס שלו (ALV) באמצע STM ו-SCM4.
  2. נתח את ה-dcLN בהדרגה בטכניקה קהה. חתכו בזהירות את הפאשיה בין ה-dcLN לרקמות הסובבות, והימנעו מנזק הן ל-dcLN והן ל-ALV שלו.
    הערה: ודא ש-PFV ו-dcLN קרובים זה לזה כדי למזער את המתח לאחר אנסטומוזיס.
  3. בצע חתך בקצה הדיסטלי של ה-dcLN. ודא שרוחב החתך קטן או דומה לקוטר ה-PFV, כך שזרימת הדם PFV לא תושפע באופן משמעותי.
  4. בעזרת תפר ניילון 12-0, אנסטומוזה את הקצה הפרוקסימלי של חתך ה-PFV לקצה הפרוקסימלי של חתך ה-dcLN.
  5. המשך להרחיב את אורך החתך של ה-PFV לקצה הדיסטלי כך שיהיה מעט גדול יותר מאורך חתך ה-dcLN.
  6. העבירו את המחט ברצף דרך הקצה החיצוני של חתך ה-dcLN והקצה הפנימי של חתך ה-PFV, ובכך משכו את חתך ה-dcLN ללומן של PFV.
  7. בצע תפר רציף מהקצה התחתון לקצה העליון של חתך dcLN. יש לתת נתרן הפרין פעם נוספת ממש לפני השלמת התפר הסופי כדי למנוע היווצרות פקקת בתוך לומן ה-PFV. שמור על מתח מתאים על התפר במהלך הסגירה הרציפה כדי להבטיח סגירה מאובטחת ולמנוע דליפה לאחר מכן.
  8. הנח תפרים קטועים בכל מקום שבו האנסטומוזה הרציפה רופפת.

5. אנסטומוזה של כלי לימפה-וריד

  1. לחצות את ה-ALV ולשמר את הרקמה שמסביב כדי לשמש כנקודת עיגון לתפר.
  2. בעזרת מחט תפר 12-0, הכנס אותה כ-2 מ"מ פרוקסימלי לחתך ה-PFV וקדם אותה ליציאה דרך פתח חתך ה-PFV.
  3. הזן את הרקמה ליד גדם ה-ALV עם מחט התפר כדי לתפוס את ה-ALV.
  4. העבירו את המחט לתוך חתך ה-PFV והחוצה דרך הקצה הפרוקסימלי שלה, ואז קשרו את התפר לקיבוע גדם ה-ALV בתוך לומן ה-PFV.
    הערה: הכנס לחלוטין את גדם ה-ALV ללומן של PFV, כוון אותו לכיוון הפרוקסימלי כדי לשמור על ניקוז פיזיולוגי.
  5. לתפור את הרקמה שמסביב ליד גדם ה-ALV לקצה הפנימי של חתך ה-PFV כדי לספק קיבוע חיצוני. תן נתרן הפרין לפני התפר האחרון כדי לשמור על לומן ה-PFV נקי מקריש.

6. תפרים וטיפול לאחר הניתוח

  1. בצע תפירה רציפה לפאשיה התת עורית ותפירה מופרעת לאפידרמיס.
  2. לחטא את אזור הניתוח בתמיסת יוד. לאחר מכן יש למרוח משחת אריתרומיצין באופן אחיד סביב החתך כדי למנוע זיהום.
  3. לאחר הניתוח, יש לתת נתרן פניצילין (800,000 יחידות לק"ג) באמצעות הזרקה תוך צפקית פעם ביום במשך חמישה ימים רצופים כדי להפחית את הסיכון לזיהום.

7. אימות של אנסטומוזה

  1. זהה ונתח את וריד הפנים הקדמי (AFV), יובל של ה-EJV, לרוחב ה-PFV.
  2. ודא את הצלחת האנסטומוזה על ידי התבוננות בכתמים עזים יותר באופן משמעותי ב-PFV בהשוואה ל-AFV הסמוך.
  3. כמת שינויי צבע באופן אובייקטיבי באמצעות מרחב הצבעים הסטנדרטי CIE LAB. הגדר וחלץ אזורי עניין (ROIs) בפיג'י כדי לקבל את ערכי CIE L*a*b* הממוצעים, ולאחר מכן חשב את זווית הגוון (h°) במעלות באמצעות הנוסחה:
    h° = atan2(b, a) × (180/π)6,7.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

ההליכים הכירורגיים והתוצאות שלאחר הניתוח של dcLnVA ו-dcLaVA מומחשים עם מקרה מייצג אחד כל אחד. במקרה של dcLnVA, PFV (קוטר 2 מ"מ) זוהה ונותק מהגבול הצדדי של ה-SCM (איור 1A, איור S1A). במרווח בין ה-SCM ל-STM, כ-4 מ"מ מדיאלי ל-PFV, נמצא dcLN סגלגל ארוך (5 מ"מ ×-4 מ"מ ×-2 מ"מ) ומופרד דק (איור 1B,C, איור S1B-E). לאחר מכן, ה-PFV המהודק הוצב לצד ה-dcLN המופרד (איור 1D

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

בשנת 2012, ILif ואחרים תיארו לראשונה את המערכת הגלימפטית8. בשנת 2015, לובו ועמיתיו זיהו אגרגטים של תאי T בלומן של כלי הלימפה וכינו מבנים אלה לימפה קרום המוח. הם הוכיחו עוד כי לימפה קרום המוח קשורה הן למערכת הגלימפטית והן ל-dcLN. לסיכום, תחת ויסות מערכת הלימפה במוח, כולל גם מערכת הלימפה וגם הלימפה של קרום המוח, Aβ בנוזל הבין-תאי מתנקז לנוזל המוח השדרתי (CSF), ואז ללימפה קרום המוח, ובסופו של דבר מגיע ל-dcLN9. ניסויים עוקבים בבעלי חיים הראו בא...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (82173384 ו-81773161), תוכנית המחקר והפיתוח המרכזית של מחוז היילונג-ג'יאנג (2023ZX06C11) ופרויקט קרן המחקר המדעי הרפואי של Genertec (TYYLKYJJ-2024-043).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
0.9% תמיסת מלח סטרילית    שנדונג קידו פארמה בע"מ;  R9824041307   
משחת אריתרומיציןסאנקי פארמה בע"מ.H34020307
Evans Blue Dye 5% (50 מ"ל)ליג'יןDK0053
תמיסת נתרן הפארין 0.1%BIOSCOBAC006
מלקחיים מיקרו-מלקחייםאנליקסיןAT-15
קלימפ מיקרווסקולריטייגרג'יןTG-AC-18-Z
פניצילין נתרןHebei Yuanzheng Hemu Pharmaceutical Co., LtdJFT230602
ווזלין לבןטיאנצ'נג   20250202

מקורות

  1. Formolo, D. A., et al. Leveraging the glymphatic and meningeal lymphatic systems as therapeutic strategies in Alzheimer's disease: an updated overview of nonpharmacological therapies. Mol Neurodegener. 18 (1), 26(2023).
  2. Li, X., et al. Promising outcomes 5 weeks after a surgical cervical shunting procedure to unclog cerebral lymphatic systems in a patient with Alzheimer's disease. Gen Psychiatr. 37 (3), e101641(2024).
  3. Chen, J. Y., et al. Deep cervical lymphovenous anastomosis (LVA) for Alzheimer's disease: microsurgical procedure in a prospective cohort study. Int J Surg. 111 (7), 4211-4221 (2025).
  4. Fang, R., et al. A novel microsurgical model of cervical lymph node-to-vein anastomosis (LNVA) for studying brain lymphatic outflow. J Craniofac Surg. 36 (6), 2160-2163 (2025).
  5. Maloveska, M., et al. Dynamics of Evans blue clearance from cerebrospinal fluid into meningeal lymphatic vessels and deep cervical lymph nodes. Neurol Res. 40 (5), 372-380 (2018).
  6. Mazur, F., Han, Z., Tjandra, A. D., Chandrawati, R. Digitalization of colorimetric sensor technologies for food safety. Adv Mater. 36 (42), e2404274(2024).
  7. Karamucki, T., Rybarczyk, A., Jakubowska, M., Sulerzycka, A. A comparison of two methods of determining colour change in the assessment of the quality of pork. Acta Sci Pol Technol Aliment. 16 (3), 321-329 (2017).
  8. Iliff, J. J., et al. A paravascular pathway facilitates CSF flow through the brain parenchyma and the clearance of interstitial solutes, including amyloid β. Sci Transl Med. 4 (147), 147ra111(2012).
  9. Louveau, A., et al. Structural and functional features of central nervous system lymphatic vessels. Nature. 523 (7560), 337-341 (2015).
  10. Da Mesquita, S., et al. Functional aspects of meningeal lymphatics in ageing and Alzheimer's disease. Nature. 560 (7717), 185-191 (2018).
  11. Wang, M., et al. Non-invasive modulation of meningeal lymphatics ameliorates ageing and Alzheimer's disease-associated pathology and cognition in mice. Nat Commun. 15 (1), 1453(2024).
  12. Proulx, S. T. Cerebrospinal fluid outflow: a review of the historical and contemporary evidence for arachnoid villi, perineural routes, and dural lymphatics. Cell Mol Life Sci. 78 (6), 2429-2457 (2021).
  13. Yoon, J. H., et al. Nasopharyngeal lymphatic plexus is a hub for cerebrospinal fluid drainage. Nature. 625 (7996), 768-777 (2024).
  14. Zhou, Y., et al. Impaired peri-olfactory cerebrospinal fluid clearance is associated with ageing, cognitive decline and dyssomnia. EBioMedicine. 86, 104381(2022).
  15. Papadopoulos, Z., et al. Differential impact of lymphatic outflow pathways on cerebrospinal fluid homeostasis. J Exp Med. 222 (2), e20241752(2025).
  16. Mehta, N. H., et al. The brain-nose interface: a potential cerebrospinal fluid clearance site in humans. Front Physiol. 12, 769948(2021).
  17. Norwood, J. N., et al. Anatomical basis and physiological role of cerebrospinal fluid transport through the murine cribriform plate. Elife. 8, e44278(2019).
  18. Fan, F., Zhao, N., Guo, M. Lymphatic-venous anastomosis: cracking the code of Alzheimer's disease treatment. Neural Regen Res. , (2025).
  19. Hong, J. P., Chen, W. F., Nguyen, D. H., Xie, Q. A proposed role for lymphatic supermicrosurgery in the management of Alzheimer's disease: a primer for reconstructive microsurgeons. Arch Plast Surg. 52 (2), 96-103 (2025).
  20. Nguyen, L., et al. Role of sigma-1 receptors in neurodegenerative diseases. J Pharmacol Sci. 127 (1), 17-29 (2015).
  21. Pierre, K., et al. Chronic traumatic encephalopathy: diagnostic updates and advances. AIMS Neurosci. 9 (4), 519-535 (2022).
  22. Chen, J. Y., et al. Deep cervical lymphovenous anastomosis (LVA) for Alzheimer's disease: microsurgical procedure in a prospective cohort study. Int J Surg. 111 (7), 4211-4221 (2025).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

פרוטוקולים כירורגיים לאנסטומוזה לימפה ורידית עמוקה בצוואר הרחם במודל חולדה: אנסטומוזה של בלוטות לימפה וכלי לימפה
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.