מאמר שיטה

ביוץ המוני ביונקים: טכניקות לניתוח פוליביולציה ספונטנית טבעית ופוליאבולציה מושרה בלגסטומוס מקסימוס

DOI:

10.3791/69653

⸱

6 בפברואר 2026

 ,  ,  ,  ,  , 
1Centro de Estudios Biomédicos Básicos, Aplicados y Desarrollo (CEBBAD), Universidad Maimónides, 2Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET)

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול זה מתאר שיטות לניתוח ביוץ טבעי ומושרה ב-Lagostomus maximus, כולל התאוששות הביציות לאחר ביוץ ספונטני, הורמונלי או ביוץ מושרה על ידי פלזמה זרעית. הוא מספק מסגרת מקיפה לחקר תגובתיות השחלות ופיזיולוגיית הרבייה במודל יונקי פוליביצתי מאוד.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הוויזקאצ'ה של מישורי דרום אמריקה, Lagostomus maximus, מוכר כמין היונק עם שיעור הביוץ הגבוה ביותר, שיכול להגיע עד 300 ביציות. ניתן לבחון את תופעת פוליבולציה מרשימה זו באמצעות מספר גישות מתודולוגיות המשקפות את הפיזיולוגיה הרבייתית הייחודית שלה. הביוץ הטבעי מוערך על ידי שחרור ביציות בעונת הרבייה, מה שמספק תובנות לגבי מנגנוני הביוץ הספונטניים של המין, כאשר הביציות מתאוששות על ידי שטיפת צינור הביצים וקרני הרחם. בנוסף, השראה ניסיונית של ביוץ באמצעות הורמונים חיצוניים, כגון גונדוטרופינים, מאפשרת הערכה מבוקרת של תגובתיות השחלות ומציעה מודל חשוב להבנת ויסות אנדוקריני במכרסמים היסטריקוגנתיים. גישה שלישית כוללת שימוש בפלזמה זרעית אוטולוגית כטריגר פיזיולוגי לביוץ, ומדגישה את הקיום המשותף של מנגנונים מושרים וספונטניים במין זה. יחד, טכניקות אלו לא רק מסבירות את הדינמיקה של גיוס זקיקים ושחרור ביציות, אלא גם מקמנות את L. maximus כמודל השוואתי לביולוגיה רבייתית, עם השלכות תרגומיות פוטנציאליות להבנת בקרת הביוץ ביונקים.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הוויזקאצ'ה של מישורי דרום אמריקה (Lagostomus maximus) הוא מכרסם היסטריקוגנת המתאפיין בפיזיולוגיה רבייתית יוצאת דופן, המאופיין בקצב ביוץ יוצא דופן שיכול לעבור 300 ביציות במחזור 1,2. תכונה ייחודית זו מיקמה את L. maximus כמודל טבעי לחקר תפקוד השחלות ושליטה בביוץ ביונקים 3,4,5,6,7,8,9,10,11.

בניגוד לבייצים ספונטניים טיפוסיים, L. maximus מציג מנגנוני ביוץ ספונטניים ומושרים2. דואליות זו, בשילוב עם גדילה זקיקית מסיבית וביוץ אסינכרוני, מאתגרת גישות קונבנציונליות המבוססות אך ורק על נקודות קצה אנדוקריניות או היסטולוגיות 4,12,13,14. כתוצאה מכך, השימוש בטכניקות ישירות וכמותיות הוא חיוני לקביעת הזמן והיקף שחרור הביציות במדויק.

נקבות ויסקאסה בוגרות הושגו מאוכלוסייה טבעית שהתחזקה ב-Estación de Cría de Animales Silvestres (ECAS), פארק פריירה איראולה, בראזאטגי, מחוז בואנוס איירס, ארגנטינה (34°49′57" דרום, 58°06′12" מערב). אנו מכירים בכך שזכויות ריבוניות על משאבי טבע הן רכוש בלעדי של מחוז בואנוס איירס. מספר בעלי החיים שנתפסו אושר על ידי משרד החקלאות של מחוז בואנוס איירס. נקבות נתפסו באמצעות מלכודות חיות שהונחו בכניסות למחילות בנקודות זמן שונות לאורך השנה.

תקופות הלכידה נבחרו לפי מחזור הרבייה הטבעי של המין שנקבע על ידי Llanos & Crespo15, ושוכללו בהתבסס על ניסיוננו בשטח 7,8,10,14. המין מציג עונת רבייה עיקרית הנמשכת מסוף הקיץ (מרץ) ועד תחילת האביב בסוף ספטמבר16, 17, 18, ותקופת רבייה משנית שמתרחשת באוקטובר, במיוחד בנקבות שאיבדו את צאצאיהן,15. בהתאם לכך, נקבעו קבוצות העבודה הבאות: א) קבוצה I (N= 27): סוף פברואר-תחילת אפריל (לא בהריון, תחילת עונת הרבייה הראשית); ב) קבוצה II (N= 26): אמצע ספטמבר-סוף אוקטובר (אסטרוס לא בהריון, לאחר הנקה); קבוצה III (N= 35): דצמבר-ינואר (ביוץ לא בהריון, מושרה על ידי הורמונים); קבוצה IV (N= 7): דצמבר-ינואר (ביוץ לא בהריון, מושרה על ידי פלזמה זרעית).

מחקר זה מציג ומאמת מספר גישות מתודולוגיות לניתוח ביוץ ב-L. maximus: (1) הערכת ביוץ טבעי באמצעות התאוששות ישירה של ביציות; (2) השראה של ביוץ באמצעות גונדוטרופינים חיצוניים; ו-(3) השראת ביוץ באמצעות פלזמה אוטולוגית של הזרע. כל טכניקה מספקת תובנות משלימות על דינמיקת הזקיקים, הבשרת הביציות ומנגנוני הוויסות השולטים בביוץ.

שטיפת צינורות הביצים וקרני הרחם מאפשרת התאוששות ישירה של הביציות וכימות מדויק של הביוצים, ומאפשרת מתאם להתפתחות הזקיקים ולמורפולוגיית הביציות 19,20,21. גירוי הורמונלי באמצעות גונדוטרופינים חיצוניים, שהותאמו מפרוטוקולים ששימשו במכרסמיםבמעבדה 22, מאפשר הערכה מבוקרת של תגובתיות השחלות ותזמון שחרור הביציות. בינתיים, השימוש בפלזמה הזרעית האוטולוגית כטריגר פיזיולוגי לביוץ - שתואר בעבר בביוץ מושרה כמו ארנבים וגמלים 23,24,25 - מציע דרך חדשנית לחקר הגורמים האנדוקריניים והפרקריניים המעורבים בביוץ.

על ידי שילוב המתודולוגיות המשלימות הללו, העבודה הנוכחית מספקת מסגרת ניתנת לשחזור לחקירת מנגנוני ביוץ ב-L. maximus. השילוב של מודלים טבעיים ומושרים מאפשר הבחנה בין גיוס זקיקיקים ספונטני, יעילות ביוץ ותגובות מתווכות פלזמה זרעית. יתרה מזאת, גישות אלו חושפות תופעות כמו הפעלה ספונטנית של ביציות פרתנוגנטיות וקיום משותף של ביציות "פגומות" ו"אאובולטוריות", התורמות להבנת הברירה הזקיקית וכשירות הביציות2.

מעבר להשלכותיו הספציפיות למין, מודל הוויזקאצ'ה מציע רלוונטיות רחבה יותר לביולוגיה רבייתית השוואתית. אסטרטגיית הביוץ המעורבת שלו מגשרת בין תכונות של ביוצים מושרים וספונטניים, ומספקת מקבילות חשובות לתהליכי רבייה ביונקים אחרים, כולל מינים ביתיים ובני אדם 7,14,26,27.

הפרוטוקולים המתודולוגיים המפורטים כאן נועדו להבטיח שחזוריות ולהקל על הסתגלתם להקשרים ניסיוניים מגוונים הכוללים דינמיקת זקיקים, ויסות ביוץ ומניפולציה הורמונלית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הפרוטוקולים הניסיוניים המתוארים כאן נבדקו ואושרו על ידי הוועדה המוסדית לשימוש וטיפול בבעלי חיים ניסיוניים (CICUAE, אוניברסיטת מיימונידס, מספר פרוטוקול #6184). לכידות, טיפול והמתת חסד בוצעו על ידי צוות טכני מיומן בהתאם לכל התקנות המקומיות, המדינתיות והפדרליות המסדירות את הטיפול והשימוש בבעלי חיים במעבדה. גידול בעלי חיים פעל לפי הנחיות המכון הלאומי לבריאות (NIH) לטיפול ושימוש בבעלי חיים במעבדה28 והנחיות האגודה האמריקאית ליונקים (ASM) לשימוש ביונקים בר במחקר29. כל הניסויים עמדו בהנחיות ARRIVE 2.030. נעשה כל מאמץ למזער את מספר בעלי החיים בשימוש. מישורי דרום אמריקה (Lagostomus maximus) אינם נחשבים למין בסכנת הכחדה31.

1. השראה הורמונלית של ביוץ

הערה: סעיף זה מציג השראה הורמונלית של ביוץ אצל נקבות לא בהריון של ויזקאצ'ה שנלכדו. נדונות שלוש אפשרויות פרוטוקול שונות.

  1. פרוטוקול A:
    1. הזרקו 200 יחידת IU של גונדוטרופין כוריוני סוסי (eCG) תוך-שרירית ב-0 שעות ו-24 שעות, ואחריהן 500 יחידת גונדוטרופין כוריוני אנושי (hCG) ב-48 שעות.
    2. מנוחה לנקבות עד להמתת חסד.
    3. הורד נשים 60-132 שעות לאחר מתן hCG (ראו סעיף 3).
  2. פרוטוקול B:
    1. נתנו 200 יחידת נוזלים של eCG בתוך השריר ב-0 שעות ו-24 שעות, ואחריהן 1,000 יחידת hCG ב-72 שעות.
    2. מנוחה לנקבות עד להמתת חסד.
    3. הורד נשים 60-132 שעות לאחר מתן hCG (ראו סעיף 3).
  3. פרוטוקול C:
    1. מתן 250 IU של eCG תוך-שרירית ב-0 שעות, 24 שעות ו-48 שעות, ואחר כך 2 מ"ג הורמון לוטאיניזציה (pLH) ב-72 שעות.
    2. מנוחה לנקבות עד להמתת חסד.
    3. הורד נשים 60-132 שעות לאחר מתן pLH (ראו סעיף 3 וטבלה 1).
      הערה: בעלי החיים בכל קבוצה הושמתו בנקודות זמן שונות (בין 60 שעות ל-132 שעות לאחר מתן hCG). התפלגות הזמן הזו הייתה חיונית לאישור האופי הממושך של תקופת הביוץ במין זה. בפרט, בניסויים שמטרתם הייתה איסוף בלעדי של ביציות בוגרות, בוצעה המתת חסד בעקביות ב-120 שעות לאחר ה-hCG.

2. השראת ביוץ על ידי פלזמה זרעית

הערה: בדקו את יכולת הפלזמה הזרעית לגרום לביוץ באמצעות מתן תוך-שריר בנשים עם פרים הורמונליים.

  1. איסוף והכנת זרע
    1. איסוף זרע מזכרים פעילים רבייתית באמצעות אלקטרושפיכה, כפי שמתואר על ידי ג'אקינו32.
    2. זרע בצנטריפוגה ב-200 × גרם למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר כדי לשחרר תאי זרע ופסולת תאית.
    3. הוסיפו סופרנטנטים (פלזמה זרעית) עם פניצילין וסטרפטומיצין ואחסנו בטמפרטורה של מינוס 20 מעלות צלזיוס עד השימוש.
  2. השראת ביוץ בנשים לא בהריון באמצעות פלזמה זרעית
    1. נתן 200 יחידות IU של eCG בתוך השריר ב-0 שעות ו-24 שעות לכל נקבה.
    2. הזריק פלזמה זרע תוך-שרירית 48 שעות לאחר המינון הסופי של eCG.
    3. מנוחה לנקבות עד להמתת חסד.
    4. המתת חסד לבעלי חיים 72 שעות לאחר הזרקת פלזמה לזרע (ראו סעיף 3).
      הערה: כללו נקבות ביקורת שהוזרקו בתמיסת מלח במקום פלזמה זרעית.

3. הרדמה, המתת חסד ואיסוף דרכי הרבייה

הערה: השתמשו בהרדמה ובשיטות המתת חסד הומניות כדי להשיג דרכי רבייה שלמות לניתוחי ביציות והיסטולוגיה.

  1. השרה של המתת חסד באמצעות הזרקה תוך-שרירית אחת ומחושבת של 13.5 מ"ג/ק"ג קטמין כלורהידרט ו-0.6 מ"ג/ק"ג קזילזין כלורהידראט, הניתנת בהתאם להמלצות היצרן ולפרוטוקולים מוסדיים שנקבעו.
  2. אשר הרדמה עמוקה על ידי היעדר תגובה לכאב (רפלקסים של פדל).
  3. מניחים את החיה במצב שכיבה וחטא את הבטן.
  4. פתח את חלל הבטן בניתוח כדי לחשוף במלואו את כל איברי הבטן.
  5. בצע בדיקה כללית לקביעת מצבו הכללי של בעל החיים ואישור ביוץ טבעי או הורמונלי בשל נוכחות סטיגמטות ביוציות.
  6. קבל דגימת דם באמצעות ניקור ישיר של הווריד הנוב העליון לבדיקה סרולוגית.
  7. לבצע המתת חסד על בעל החיים על ידי מתן 0.5 מ"ל/ק"ג נתרן פנטוברביטל תוך-לבבי.
  8. נתח והסר בזהירות את השחלות, הצינורות הביציים וקרני הרחם, תוך היזהרות שלא לפגוע במבנים שלהם.
  9. שמרו רקמות בתמיסת מלח קרח עם בופר פוספט (PBS) עד לעיבוד (≤15 דקות).

4. התאוששות מביציות

הערה: שחזור ביציות מצינורות הביצים וקרני הרחם על ידי שטיפה עדינה כדי להבטיח איסוף מלא של גמטות משוחררות תוך מזעור נזק לרקמות.

  1. הכינו את מכשיר השטיפה על ידי חיבור מחט קהה של 26-G למזרק של 1 מ"ל מלא ב-0.9% NaCl בתוספת 4 מ"ג/מ"ל BSA, 100 מיקרוגרם/מ"ל פניצילין G ו-100 IU/mL סטרפטומיצין.
  2. הכניסו בעדינות את המחט לאינפונדיבולום של כל צינור ביצים והזריקו לאט את תמיסת השטיפה.
  3. אספו את השפכים מהצינור הביצי הדיסטלי ומקרן הרחם לצלחות פטרי סטריליות.
  4. חזרו על השטיפה עד שהנוזל שנתפס נראה נקי וללא ביציות או שאריות תאי גלויות.
  5. העבר ביציות לטיפות של 100 מיקרוליטר של מדיום M2 המכילות 4 מ"ג/מ"ל BSA ואנטיביוטיקה תחת שמן מינרלי.
  6. לאשר החלמה מוצלחת על ידי בדיקת טיפות תחת מיקרוסקופ סטריאו; צפו לראות ביציות חופשיות ללא תאי קומולוס המפוזרים בתוך הנוזל.
  7. המשיכו בשטיפה עד שהשפכים נראים נקיים ולא נצפו ביציות נוספות תחת המיקרוסקופ הסטריאומיקרוסקופי (בדרך כלל 3-5 שטיפות בכל צינור ביצי).
    הערה: ביציות שהתאוששו אמורות להיראות כדוריות ושקופות תחת הגדלה נמוכה.
  8. סווג ביציות לפי שלמות מורפולוגית כפי שמתואר בסעיף 6.

5. הערכת מורפולוגיה של הביציות

הערה: העריך את איכות הביציות שהתאוששו בהתבסס על מראה ציטופלזמי, אחידות פלוסידה ושלב הבגרות הגרעינית.

  1. זהה ביציות כנורמליות אם הן מציגות צורה כדורית, פלוסידה אחידה, ציטופלזמה הומוגנית שקופה, וווסיקולה נבטנית נראית לעין או גוף קוטבי ראשון.
  2. זהה ביציות כחריגות אם הציטופלזמה נראית כהה, גרגירית או מפורקת, או אם הזונה פלוסידה אינה סדירה.
  3. רשמו את שלב הבגרות הגרעינית כ-GV, פירוק ווסיקולת גרמינל (GVBD), או מטפאזה II (MII).

6. הערכת הבשלה הגרעינית של הביציות ושלמות הציר המיוטי

הערה: העריך את הבשלה הגרעינית ומורפולוגיית הציר באמצעות צביעת אימונופלואורסצנציה של צביעת α-טובולין וכרומטין.

  1. קבע ביציות ב-2% פאראפורמלדהיד (PFA) למשך 20 דקות.
  2. פרמייביליז ב-0.2% Triton X-100 ב-PBS למשך 40 דקות.
  3. אחרי התיקון ב-2% PFA למשך 20 דקות ושוטף שלוש פעמים ב-PBS (30 דקות כל אחת).
  4. חסום עם 2% סרום עזים, 2% BSA, 2% אבקת חלב, 0.1 מיליון גליצין, ו-0.01% טריטון X-100 ב-PBS למשך ≥ שעה.
  5. דגרו ביציות במהלך הלילה בטמפרטורה של 4°C עם נוגדן אנטי-α-tubulin לעכברים (1:200).
  6. שטוף ב-PBS למשך 30 דקות ודוגר במשך שעה אחת בחושך עם IgG אנטי-עכבר פלואורסציין איזותיוציאנאט (FITC) (1/1000).
  7. צבע נגד עם 10 מיקרוגרם/מ"ל Hoechst 33324 למשך 10 דקות ושטוף ב-PBS שמכיל 2% BSA.
  8. התקן ביציות במדיום אנטי-פייד וצלם באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי.
  9. לכידת ועיבוד תמונות באמצעות תוכנת EZ-C1 (גרסה 3.90 של EZ-C1); כוון ניגודיות ובהירות בתוכנות עיבוד תמונה לפי הצורך.
    הערה: צביעה מוצלחת מתבטאת בדפוס פלואורסצנציה ירוק ברור של הציר המיוטי (FITC) וצביעת נגד גרעינית כחולה עם Hoechst 33324.

7. ניתוח סטטיסטי

הערה: ניתחו נתונים כמותיים להשוואת תגובות ביוץ ואיכות הביציות בקרב קבוצות ניסוי.

  1. מבטאים נתונים כממוצעים ± SD.
  2. השתמש במבחן t של סטודנט להשוואות בין שתי קבוצות.
  3. יש להחיל ANOVA חד-כיווני ואחריו מבחן פוסט-הוק של Bonferroni להשוואות מרובות.
  4. נחשוב על p < 0.05 כמובהק סטטיסטית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ביוץ טבעי

שתים עשרה מתוך 27 נקבות (קבוצה I) שנתפסו מסוף פברואר ועד אמצע אפריל, במקביל לעונת ההזדווגות הראשונית, נצפו כביצות, בעוד שבעונת ההזדווגות המשנית (ספטמבר/אוקטובר) (קבוצה II), 10 מתוך 26 נקבות שנתפסו הציגו ביוץ. שיעור הצלחה דומה של כ-40% מהנקבות הבייצות נצפה בשתי תקופות הלכידה. לא נצפה נפיחות באזור האמפולרי של צינור הביוץ בכל מקרה, וביציות נלקחו מנקבות ללא קשר לנוכחות סטיגמטות ביוץ (איור 1A,B). הביציות נלקחו במצב עירום, כלו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הפרוטוקול המוצג כאן לחקר הביוץ במישורים ויזקאצ'ה מספק מסגרת ניתנת לשחזור להערכת אירועים ביוציים טבעיים וניסיוניים כאחד. יתרון מרכזי של פרוטוקול זה הוא היכולת שלו לכמת ולאפיין ישירות את מספר הביציות הגבוה במיוחד שמשתחררים מהוויזקאצ'ה של המישורים, תכונה שאין לה מתחרים במודלים יונקים אחרים. בניגוד לשיטות עקיפות המבוססות על פרופילים הורמונליים או חתכים היסטולוגיים, שטיפת ביציות ורחם מספקת גישה מיידית לביציות שלמות, ומאפשרת ניתוחים כמותיים ואיכותניים כאחד. גישה זו גם שומרת על שלמות קומפלקסי ה...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים כי אין ניגוד עניינים שיכול להיתפס כפוגע באובייקטיביות המחקר המדווח.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה בסיוע כספי פנימי של אוניברסיטת מיימונידס בארגנטינה וסוכנות FONCYT-AMPCYT בארגנטינה (PICT-2018-04619, הוענק ל-NPL). המחברים מודים במיוחד לרשות משרד החקלאות של ממשלת מחוז בואנוס איירס, ארגנטינה, על אישור לכידת בעלי חיים; לאנשי ה-Estación de Cría de Animales Silvestres (ECAS, מחוז בואנוס איירס, ארגנטינה) על עזרתם היקרה בלכידת בעלי החיים וטיפול בהם; ול-DVM סרג'יו פראריס ו-DVM פרננדו לאנגה מ-CCV-אוניברסיטת מיימונידס על סיועו במהלך ההרדמה וההליכים הכירורגיים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
אדובי פוטושופאדובי סיסטמס בע"מ, ארה"בלא זמיןעיבוד תמונה
אלבומין סרום בקר (BSA)סיגמא-אלדריץ', ארה"בA9647משמש במדיום שטיפה ובובור חסימה
צנטריפוגה (לעיבוד זרע)אפנדורף, גרמניה5417Rהכנת פלזמה זרעית
מיקרוסקופ קונפוקלי (C1 Eclipse E800)ניקון בע"מ, יפןלא זמיןהדמיית ביציות
אלקטרו-שפיכהתוכנן במעבדה; מותאם מיונקים ביתיים לשימוש במכרסמי קביומורףלא זמיןאיסוף זרע
אותניל (נתרן פנטוברביטל, נתרן דיפנילהידנטואין)Brouwer S.A., ארגנטינהלא זמיןהמתת חסד
אנטי-עכבר עיז מצורף FITC IgG (AP124F)כמיקון, ארה"בAP124Fנוגדן משני
ערכת צביעת המטוקסילין-אאוסיןסיגמא-אלדריץ', ארה"במגווןהיסטולוגיה
הוכסט 33324תרמו פישר סיינטיפיק, ארה"בH3570צביעה גרעינית
קטמין כלורהידרטהולידיי סקוט S.A., ארגנטינהלא זמיןהרדמה
מכסה זרימה למינריתרמו סיינטיפיק, ארה"בלא זמיןטיפול אספטי
מיקרוסקופ אוראולימפוס, יפןBX51היסטולוגיה
לוטרופין-V (pLH)Bioniche Animal Health Care, קנדהלא זמיןהשראה הורמונלית
M2 בינוניסיגמא-אלדריץ', ארה"בM7167התאוששות מהביציות
שמן מינרליסיגמא-אלדריץ', ארה"בM8410תרבות הביציות
נובורמון 5000 (eCG)סינטקס S.A., ארגנטינהלא זמיןהשראה הורמונלית
אובוסין (hCG)סינטקס S.A., ארגנטינהלא זמיןהשראה הורמונלית
פאראפורמלדהיד (PFA, 2% ו-4%)סיגמא-אלדריץ', ארה"ב158127קיבוע
פניצילין Gסיגמא-אלדריץ', ארה"בP3032אנטיביוטיקה למדיה
סטריאומיקרוסקופלייקה מיקרוסיסטמס, גרמניהM80זיהוי ביציות
סטרפטומיציןGibco, Thermo Fisher Scientific, ארה"ב11860038אנטיביוטיקה למדיה
מזרק עם מחט קהה (1 מ"ל)BD ביוסיינסס, ארה"ב305219שטיפת צינורות הביצה/הרחם
טריטון X-100סיגמא-אלדריץ', ארה"בT8787פרמיאביליזציה
מדיום התקנה של VectaShieldמעבדות וקטור, ארה"בH-1000התקנה לפלואורסצנציה
קזילזין כלורהידראטמעבדות ריצ'מונד, ארגנטינהלא זמיןהרדמה
קסילןסיגמא-אלדריץ', ארה"ב534056הסרת שעווה, מקטעי פרפין
נוגדן מונוקלונלי α-tubulin (נוגדן עכברי &-tubulin, SC-5286 B7)Santa Cruz Biotechnology, ארה"בSC-5286 B7לצביעת חיסון בכישור מיוטי

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Weir, B. J. The reproductive physiology of the plains viscacha, Lagostomus maximus. J Reprod Fertil. 25, 355-363 (1971).
  2. Leopardo, N. P., Inserra, P. I. F., Giacchino, M., Caram, D. A., Willis, M. A., Vitullo, A. D. Polyovulation in the South American plains vizcacha, revisited: coexistence of spontaneous and induced ovulation. J Exp Zool A Ecol Integr Physiol. 343 (6), 724-739 (2025).
  3. Caram, D. A., Inserra, P. I. F., Vitullo, A. D., Leopardo, N. P. Autophagy favors survival of corpora lutea during the long-lasting pregnancy of the South American plains vizcacha, Lagostomus maximus (Rodentia Caviomorpha). Sci Rep. 14 (1), 11220(2024).
  4. Cortasa, S. A., et al. Achieving full-term pregnancy in the vizcacha relies on a reboot of luteal steroidogenesis in mid-gestation (Lagostomus maximus, Rodentia). PLoS One. 17, e0271067(2022).
  5. Flamini, M. A., Barbeito, C. G., Gimeno, E. J., Portiansky, E. L. Histology, histochemistry and morphometry of the ovary of the adult plains viscacha (Lagostomus maximus) in different reproductive stages. Acta Zool (Stockh). 90, 390-400 (2009).
  6. Fraunhoffer, N. A., et al. Hormonal behavior correlates with follicular recruitment at mid-gestation in the South American plains vizcacha, Lagostomus maximus (Rodentia, Caviomorpha). Gen Comp Endocrinol. 250, 162-174 (2017).
  7. Jensen, F., Willis, M. A., Albamonte, M. S., Espinosa, M. B., Vitullo, A. D. Naturally suppressed apoptosis prevents follicular atresia and oocyte reserve decline in the adult ovary of Lagostomus maximus (Rodentia, Caviomorpha). Reproduction. 132, 301-308 (2006).
  8. Jensen, F., Willis, M. A., Leopardo, N. P., Espinosa, M. B., Vitullo, A. D. The ovary of the gestating South American plains vizcacha (Lagostomus maximus): suppressed apoptosis and corpora lutea persistence. Biol Reprod. 79, 240-246 (2008).
  9. Leopardo, N. P., Jensen, F., Willis, M. A., Espinosa, M. B., Vitullo, A. D. The developing ovary of the South American plains vizcacha, Lagostomus maximus (Mammalia, Rodentia): massive proliferation with no sign of apoptosis-mediated germ cell attrition. Reproduction. 141, 633-641 (2011).
  10. Leopardo, N. P., Vitullo, A. D. Early embryonic development and spatiotemporal localization of mammalian primordial germ cell-associated proteins in the basal rodent Lagostomus maximus. Sci Rep. 7 (1), 594(2017).
  11. Leopardo, N. P., Velazquez, M. E., Cortasa, S., González, C. R., Vitullo, A. D. A dual death/survival role of autophagy in the adult ovary of Lagostomus maximus (Mammalia-Rodentia). PLoS One. 15 (5), e0232819(2020).
  12. Weir, B. J. Reproductive Characteristics of Hystricogmorph Rodents. The Biology of Hystricomorph Rodents. , Symposia of the Zoological Society of London. London, UK. (1974).
  13. Dorfman, V. B., et al. Variation in progesterone receptors and GnRH expression in the hypothalamus of the pregnant South American plains vizcacha Lagostomus maximus (Mammalia, Rodentia). Biol Reprod. 89 (5), 115(2013).
  14. Inserra, P. I. F., Leopardo, N. P., Willis, M. A., Freysselinard, A. L., Vitullo, A. D. Quantification of healthy and atretic germ cells and follicles in the developing and postnatal ovary of the South American plains vizcacha, Lagostomus maximus: evidence of continuous rise of the germinal reserve. Reproduction. 147, 199-209 (2014).
  15. Llanos, A. C., Crespo, J. A. Ecología de la vizcacha (Lagostomus maximus maximus Blainv.) en el nordeste de la provincia de Entre Ríos. Rev Investig Agríc. 6, 289-378 (1952).
  16. Weir, B. J. The management and breeding of some more hystricomorph rodents. Lab Anim. 4 (1), 83-97 (1970).
  17. Branch, L. C., Villarreal, D., Fowler, G. S. Recruitment, dispersal, and group fusion in a declining population of the plains viscacha (Lagostomus maximus; Mammalia, Chinchillidae) in scrub habitat of central Argentina. J Mammal. 74 (1), 9-20 (1993).
  18. Spotorno, A. E., Patton, J. L. Superfamily Chinchilloidea Bennett 1833. Mammals of South America. , University of Chicago Press. Chicago, IL, USA. (2015).
  19. Baker, T. G. A quantitative and cytological study of germ cells in human ovaries. Proc R Soc Lond B Biol Sci. 158 (972), 417-433 (1963).
  20. Forabosco, A., Sforza, C., De Pol, A., Vizzotto, L., Marzona, L., Ferrario, V. F. Morphometric study of the human neonatal ovary. Anat Rec. 231, 201-208 (1991).
  21. Hirshfield, A. N. Development of follicles in the mammalian ovary. Int Rev Cytol. 124, 43-101 (1991).
  22. Suzuki, O. Sequence comparison of gonadotropin subunits in laboratory animals for improvement of superovulation techniques. Kansai J Lab Anim. 27, 72-75 (2006).
  23. Chen, B. X., Yuen, Z. X., Pan, G. W. Semen-induced ovulation in the Bactrian camel (Camelus bactrianus). J Reprod Fertil. 73, 335-339 (1985).
  24. El Allali, K., El Bousmaki, N., Ainani, H., Simonneaux, V. Effect of the camelid's seminal plasma ovulation-inducing factor/β-NGF: a Kisspeptin target hypothesis. Front Vet Sci. 4, 99(2017).
  25. García-García, R. M., et al. β-Nerve growth factor identification in male rabbit genital tract and seminal plasma and its role in ovulation induction in rabbit does. Ital J Anim Sci. 17, 442-453 (2017).
  26. Weir, B. J. The reproductive organs of the female plains viscacha, Lagostomus maximus. J Reprod Fertil. 25, 365-373 (1971).
  27. Vitullo, A. D., Inserra, P. I. F., Leopardo, N. P., Halperin, J., Dorfman, V. B. The Plains Vizcacha. Assisted Reproduction in Wild Animals of South America. , CRC Press. Boca Raton, FL, USA. (2023).
  28. National Research Council Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. , 8th edn, National Academies Press. Washington, DC, USA. (2011).
  29. Sikies, R. S., et al. Guidelines of the American Society of Mammalogists for the use of wild mammals in research. J Mammal. 92 (1), 235-253 (2011).
  30. Percie du Sert, N., et al. The ARRIVE guidelines 2.0: updated guidelines for reporting animal research. PLoS Biol. 18 (7), e3000410(2020).
  31. Roach, N. Lagostomus maximus. The IUCN Red List of Threatened Species. , (2016).
  32. Giacchino, M. Caracterización del proceso de implantación en Lagostomus maximus: un mamífero con poliovulación y reabsorción embrionaria selectiva. [Doctoral thesis]. , Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad de Buenos Aires. Argentina. (2017).
  33. Kershaw-Young, C. M., Druart, X., Vaughan, J., Maxwell, W. M. C. β-Nerve growth factor is a major component of alpaca seminal plasma and induces ovulation in female alpacas. Reprod Fertil Dev. 24, 1093-1097 (2012).
  34. Kubiak, J. Z. Mouse oocytes gradually develop the capacity for activation during the metaphase II arrest. Dev Biol. 136, 537-545 (1989).
  35. Soede, N. M., Noordhuizen, J. P. T. M., Kemp, B. The duration of ovulation in pigs, studied by transrectal ultrasonography, is not related to early embryonic diversity. Theriogenology. 38 (4), 653-666 (1992).
  36. Nicoll, M. E., Racey, P. A. Follicular development, ovulation, fertilization and foetal development in tenrecs (Tenrec eucaudatus). J Reprod Fertil. 74, 47-55 (1985).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

הסרטון יגיע בקרוב

מאמרים קשורים