מאמר מחקר

השפעות אנטי-דלקתיות של לקטונים ססקיטרפין מ-Eupatorium lindleyanum DC. במודלים של מכרסמים

DOI:

10.3791/69846

⸱

27 במרץ 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1College of Chinese Materia Medica, Chongqing University of Chinese Medicine, 2College of Traditional Chinese Medicine, Chongqing Medical University, 3Department of Liver Diseases, Chongqing Traditional Chinese Medicine Hospital, 4Institute of Pharmacology and Toxicology, Chongqing Academy of Chinese Materia Medica

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה מדגים שלקטונים ססקיטרפניים מ-Eupatorium lindleyanum DC. (SLEL) מפעילים השפעות אנטי-דלקתיות משמעותיות במודלים של בצקת אוזן עכברים הנגרמת על ידי קסילן ובמודלים של בצקת כפות עכברוש הנגרמת על ידי קראג'ינן, על ידי הפחתת נזק היסטופתולוגי, הפחתת שחרור ציטוקינים ועיכוב הפעלת איתות NF-κB.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

דלקת חריפה היא תהליך פתולוגי בסיסי המעורב במחלות רבות הקשורות למערכת החיסון. Eupatorium lindleyanum DC., עשב מרפא מסורתי, עשיר בלקטונים ססקיטרפניים (SLEL), שדווח כי הם מפגינים פעילות פרמקולוגית; עם זאת, ההשפעות האנטי-דלקתיות והשינויים המולקולריים הנלווים לכך עדיין לא מאופיינים באופן מלא. במחקר זה, תגובות דלקתיות חריפות הושרו במודל בצקת אוזן עכבר שנגרם על ידי קסילן ובמודל בצקת כפות עכברוש שנגרמה על ידי קאראג'ינן. פגיעה ברקמה וחדירת דלקת הוערכו באמצעות צביעת המטוקסילין ואאוזין. רמות הציטוקינים הפרו-דלקתיים (TNF-α, IL-6 ו-IL-1β) נמדדו בסרום באמצעות ELISA, והביטוי השעתוק שלהם ברקמות מודלקות נותח באמצעות PCR כמותי (qPCR). שינויים בחלבונים הקשורים למסלול NF-κB, כולל IκBα ו-p65 המזורחנים, הוערכו באמצעות Western blotting. טיפול ב-SLEL הפחית בצקת באוזן ובכף הרגל והקל על תכונות היסטופתולוגיות של דלקת חריפה, כולל בצקת רקמה, חדירת תאי דלקת וגודש כלי דם. במקביל, מתן SLEL היה קשור לירידה ברמות הסרום ובביטוי ה-mRNA ברקמות של Tnf-α, Il-6 ו-Il-1β. ניתוח Western Blot הראה ירידה בזרחון IκBα ו-p65 ברקמות מודלקות לאחר טיפול ב-SLE, מה שמעיד על מודולציה של אירועי איתות הקשורים ל-NF-κB. יחד, ממצאים אלו מדגימים תהליך ניסויי להערכת הפעילות האנטי-דלקתית של SLEL במודלים של דלקת חריפה ומצביעים על כך שהשפעותיה קשורות להפחתת ביטוי ציטוקינים פרו-דלקתי ולשינוי באיתות הקשור למסלול NF-κB.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

דלקת היא תגובה הגנתית מורכבת המופעלת על ידי פלישה פתוגנית או פגיעה ברקמה, ומשחקת תפקיד קריטי בהגבלת זיהום, ביטול גירויים מזיקים וקידום תיקון רקמות1. בעוד שתגובות דלקתיות מבוקרות הן חיוניות לשמירה על הומאוסטזיס רקמות, דלקת מוגזמת או מתמשכת עלולה להוביל לנזק ברקמה, לתפקוד לקוי של האיברים ולהתקדמות מחלות כרוניות. קלינית, דלקת מאופיינת באדמומיות, נפיחות, חום וכאב, ובמקרים חמורים עלולה לגרום לתגובות פתולוגיות מערכתיות. עדויות הולכות וגדלות קישרו דלקת לא מאוזנת להתפתחות סרטן, מחלות לב וכלי דם ומחלות אוטואימוניות2˒3.

תרופות נוגדות דלקת לא-סטרואידיות (NSAIDs) הן כיום החומרים הנפוצים ביותר לניהול דלקת. למרות יעילותם בהקלה על התסמינים, שימוש ארוך טווח ב-NSAID מלווה לעיתים קרובות בתופעות לוואי, כולל גירוי במערכת העיכול, תגובות רגישות יתר ורעילות כבד4, שמגבילות את היישום הקליני שלהן. כתוצאה מכך, יש עניין גובר בזיהוי תרופות אנטי-דלקתיות חלופיות עם פרופיל בטיחות משופר. מוצרים טבעיים, כולל תרופות צמחיות מסורתיות, נבדקו כמקורות פוטנציאליים לתרכובות ביואקטיביות בעלות תכונות אימונומודולטוריות. עם זאת, טענות כלליות לגבי רעילות נמוכה או פונקציות רגולטוריות מערכתיות צריכות להיות מפורשות בזהירות ולדרוש אימות ניסיוני במודלים מוגדרים של מחלה5.

Eupatorium lindleyanum DC. הוא צמח רפואי מסורתי שהפיטוכימיקלים האופייניים שלו כוללים לקטונים ססקיטרפניים, בעיקר תרכובות מסוג גויאנוליד ואאודסמנוליד, יחד עם גרמקרנולידים וזנתנולידים6. תמציות של Eupatorium lindleyanum DC. דווח כי הם מציגים פעילויות מורידות שומן, אנטי-טרשת עורקים, אנטי-גידולים ואנטי-דלקתיות במגוון מסגרות ניסוי6. במיוחד, תמציות אתנול של Eupatorium lindleyanum DC. הראו השפעות הגנה במודלים של פגיעות ריאה חריפות שנגרמו על ידי ליפופוליסכריד (LPS)7. עם זאת, הפעילות האנטי-דלקתית של SLEL והשפעותיה במודלים הקלאסיים של דלקת חריפה עדיין אינן מאופיינות מספיק.

כדי להתמודד עם הפער הזה, השתמשנו בשני מודלים משלימים לדלקת חריפה: בצקת אוזן הנגרמת על ידי קסילן בעכברים, שתופסת תגובות דלקתיות נוירוגניות ווסקולריות מהירות, ובצקת כפות רגליים הנגרמת על ידי קראג'ינן בעכברים, מודל מבוסס היטב המשקף דלקת חריפה תלויה בזמן הכוללת ייצור ציטוקינים וחדירה לתאים. מודלים חלופיים, כגון דלקת מערכתית הנגרמת על ידי LPS, לא נבחרו בשל הדגש על הפעלה חיסונית מערכתית ולא על בצקת רקמה מקומית והתאמותם המוגבלת לניתוחים היסטולוגיים ומולקולריים ברמת הרקמה8.

באמצעות אסטרטגיית המודל המשולבת הזו, הוערכו תגובות דלקתיות באמצעות מדידות כמותיות של בצקות, הערכה היסטופתולוגית באמצעות צביעת המטוקסילין ואאוזין (H&E), פרופילינג ציטוקינים בסרום, ניתוח שעתוק ברמת הרקמה ושינויים בחלבונים הקשורים ל-NF-κB. פרוטוקול זה מתאים במיוחד לסינון פעילות אנטי-דלקתית בדלקת חריפה, שבה מעניינים היווצרות בצקת, ביטוי ציטוקינים וקריאות מולקולריות הקשורות למסלול. עם זאת, יש להכיר במגבלות של מודלים חריפים, כולל הסקה מוגבלת למצבים דלקתיים כרוניים וגבולות פרשניים בעת הסקת סיבתיות משינויים באיתות ברמת הרקמה.

יחד, מחקר זה מדגיש גישה מונעת פרוטוקול המשלבת מודלים משלימים של דלקת חריפה עם ניתוחים היסטולוגיים ומולקולריים משולבים, ומספק מסגרת ניתנת לשחזור להערכת הפוטנציאל האנטי-דלקתי של תרכובות שמקורן בצמחי מרפא.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול מחקר בעלי החיים אושר על ידי ועדת הטיפול והשימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת צ'ונגצ'ינג הרפואית (IACUC-CQMU-2025-10073).

הכנת שבר מועשר לקטונים ססקיטרפני (SLEL)

חומרים רפואיים מיובשים של Eupatorium lindleyanum DC. נמחקו ונחשפו לריפלוקס פעמיים עם 70% אתנול (V/V) בלחץ מופחת. כל חילוץ בוצע ביחס ממס לחומר של 10:1 (v/w) למשך 2 שעות. התמציות המשולבות סוננו, רוכזו בלחץ מופחת בטמפרטורה של ≤60 מעלות צלזיוס, ולאחר מכן יובשו בהקפאה בוואקום כדי לקבל את אבקת תמצית האתנול הגולמית.

התמצית המיובשת הומסה במלואה במים מזוקקים (ריכוז סופי: 100 מ"ג/מ"ל) והועברה ברצף לכרומטוגרפיית שרף פוליאמיד, ולאחר מכן כרומטוגרפיית שרף ספיחה מקקרופוסית D101 להעשרת לקטונים ססקיטרפניים. לאחר שהשגת שיווי המשקל של הספיחה, שרף D101 נשטף במים מזוקקים להסרת זיהומים פולריים ולאחר מכן נשטף באתנול אנידרי. לאחר שחרור אתנול, החלק שנאסף רוכז בלחץ מופחת ועבר ייבוש בהקפאה ליצירת חלק SLEL, שנשמר בטמפרטורה של −20°C עד לשימוש.

ההפרדה הושגה על פלטפורמת UPLC תוך שימוש במערכת פאזה ניידת בינארית של אצטוניטריל וחומצה פורמית של 0.1% (v/v) במים. תוכנית הגרדיאנט כללה אחיזה איזוקרטית ראשונית של 25 דקות בתכולה אורגנית נמוכה, רמפה ליניארית קצרה ל-70% אצטוניטריל, שלב צעד אורגני גבוה עם 90% אצטוניטריל, ושלב שיווי משקל סופי עם חזרה לתנאי התחלה. המערכת הופעלה ב-0.25 mL·min⁻1 עם טמפרטורת עמודה של 35°C ונפח הזרקה של 0.1 מיקרוליטר (איור משלים S1).

בעלי חיים

בסך הכול שימשו במחקר זה 36 זכרים של חולדות ספרג–דולי (200 ± 20 גרם) ו-36 עכברי BALB/c זכרים (20 ± 2 גרם). בעלי החיים אוחסנו בתנאים סטנדרטיים (22 ± 2 מעלות צלזיוס, 55 ± 5% לחות, מחזור אור/חושך של 12 שעות) עם גישה חופשית למזון ולמים. בעלי החיים התרגלו במשך 7 ימים לפני הניסויים ונעקבו מדי יום לבריאות כללית. כל ההליכים בוצעו כדי למזער סבל בעלי חיים, וההרדמה בוצעה לפני איסוף דם ואיסוף רקמות.

בצקת אוזן הנגרמת על ידי קסילן בעכברים

מודל הבצקת של אוזן העכבר נקבע כפי שתוארקודם 9. לאחר ההסתגלות, העכברים חולקו באקראי לשש קבוצות (n = 6 לכל קבוצה): קבוצת ביקורת (CG), מודל (MG), דקסמתזון (DEX, 10 mg/kg) וקבוצות SLEL במינון נמוך (75 מ"ג/ק"ג), מינון בינוני (150 מ"ג/ק"ג), ומינון גבוה (300 מ"ג/ק"ג). כל הטיפולים ניתנו באמצעות שיפוי אוראלי פעם ביום במשך 7 ימים רצופים (נפח מינון סופי: 10 מ"ל/ק"ג). בשעה וחצי לאחר הטיפול הסופי, הושרה דלקת על ידי מריחת 30 מיקרוליטר קסילן באופן שווה על שני משטחי האוזן הימנית, למעט בקבוצת הביקורת. שלושים דקות לאחר מכן, עכברים הורדמו, נאספו דגימות דם, ונעשו מכות אוזן עגולות בקוטר 8 מ"מ ממיקומים אנטומיים זהים של שתי האוזניים.

בצקת כף רגל שנגרמה על ידי קאראג'ינן בעכברים

מודל הבצקת של כפות העכברוש הוקם באמצעות קאראג'ינן כפי שתוארקודם 10. העכברים חולקו באקראי לשש קבוצות (n = 6 לכל קבוצה): CG, MG, DEX (5 mg/kg) ו-SLEL במינון נמוך (50 mg/kg), מינון בינוני (100 mg/kg) ורמות גבוהות (200 mg/kg). הטיפולים ניתנו דרך הפה פעם ביום במשך 7 ימים (10 מ"ל/ק"ג). נפחי כפות רגליים בסיסיים נמדדו לפני המינון הסופי. שלושים דקות לאחר המתן האחרון, הוזרק 0.1 מ"ל של תמיסת קאראג'ינן 1% (עם ז) תת-עורית למשטח כף הרגל האחורית הימנית. נפחי הכפות נמדדו ב-1, 2, 3 ו-4 שעות לאחר ההזרקה באמצעות פלתיסמומטר. בצקת הרגליים חושבה כך:

בצקת כפות (%) = (Vt − V0) / V0 × 100%

בדיקה היסטולוגית

רקמות האוזן והכפות נאספו מיד לאחר הערכות פונקציונליות. הרקמות הוקצו בפורמלין בופר ניטרלי של 10% למשך 72 שעות בטמפרטורת החדר, הוטמעו בפארפין, חתכו (5 מיקרון) וצבועו ב-H&E לפי פרוטוקולים סטנדרטיים11.

מבחן אימונוסורבנט מקושר באנזימים (ELISA)

דגימות הסרום נאספו בצנטריפוגה ב-3,000 × גרם למשך 10 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. רמות TNF-α, IL-6 ו-IL-1β נמדדו באמצעות ערכות ELISA מסחריות בהתאם לפרוטוקולים סטנדרטיים.

ניתוח כתמים מערביים

תמציות חלבון כוללות הוכנו מרקמות אוזן וכפות רגליים באמצעות בופר RIPA ליזיס בתוספת מעכבי פרוטאז ופוספטאז. ריכוזי החלבון נמדדו באמצעות בדיקת BCA, וכמויות שוות של חלבון (30 מיקרוגרם לדגימה) טופלו על ידי SDS-PAGE והועברו לממברנות PVDF. הממברנות נחסמו עם 5% חלב דל שומן למשך שעה בטמפרטורת החדר, ולאחר מכן דגירה עם נוגדנים ראשוניים ב-4 מעלות צלזיוס במהלך הלילה ונוגדנים משניים מצומדים ל-HRP למשך שעה בטמפרטורת החדר. רצועות אימונוריקטיביות זוהו באמצעות כימילומינסנציה משופרת וכמותו באמצעות תוכנת ImageJ.

PCR כמותי בזמן אמת (qRT-PCR)

סך ה-RNA בודד מרקמות אוזן וכפות רגליים באמצעות תגובת חילוץ RNA המופיעה בטבלת החומרים. מיקרוגרם אחד של RNA כולל הועתק הפוך ל-cDNA באמצעות ערכת שעתוק הפוך מסחרית לפי הוראות היצרן. PCR כמותי בוצע באמצעות כימיה של SYBR Green עם פריימרים גנטיים ספציפיים (טבלה 1) בנפח תגובה של 10 מיקרו ליטר תחת פרוטוקול הגברה דו-שלבי. תנאי שעתוק הפוך מפורטים ופרמטרי מחזור PCR מסופקים בסעיף הפרוטוקול. רמות התמלול היחסיות חושבו באמצעות שיטת 2⁻ΔΔCT , כאשר Gapdh שימש כגן ההתייחסות הפנימי.

נתונים וניתוח סטטיסטי

הנתונים מבוטאים כממוצע ± SD. השוואות סטטיסטיות בין שתי קבוצות בוצעו באמצעות מבחן t סטודנט לא מזווג, בעוד ש-ANOVA חד-כיווני יושם בניתוחים שכללו יותר משתי קבוצות. המובהקות הסטטיסטית הוגדרה כ-p < 0.05. המובהקות מוצגת כ-# p < 0.05 ו-## p < 0.01 לעומת קבוצת הביקורת (CG), ו-* p < 0.05 ו-** p < 0.01 לעומת קבוצת המודל (MG).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הרכב כימי ב-SLEL דרך UPLC-Q/TOF/MSn

הפרופיל הכימי של SLEL נבדק באמצעות UPLC-Q/TOF-MSn במצבים יונים חיוביים ושליליים. זוהו תשעה לקטונים ססקיטרפניים כרכיבים דומיננטיים (איור משלים S1). הקצאות נוסחאות מולקולריות נגזרו מיוני אדוקט שנצפו, כולל [M+H]⁺ ו-[M+Na]⁺ במצב חיובי, וכן [M−H]⁻ ו-[M+HCOO]⁻ במצב שלילי (טבלה משלימה S1).

השפעות SLEL במבחן בצקת האוזן המושרה על ידי קסילן

לאחר ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

במחקר זה, לקטונים ססקיטרפניים מ-Eupatorium lindleyanum DC. (SLEL) הוערכו באמצעות שני מודלים מבוססים לדלקת חריפה, כלומר בצקת אוזן הנגרמת על ידי קסילן בעכברים ובצקת כפות רגליים שנגרמה על ידי קאראגינן בעכברים. על ידי שילוב ניקוד היסטופתולוגי, מדידות ציטוקינים בסרום, כימות mRNA ברמת הרקמה וקריאות איתות ברמת חלבון, פרוטוקול זה מספק אפיון רב-שכבתי של תגובות דלקתיות מקומיות ומערכתיות בתוך תהליך ניסוי אחד.

בנקודות הזמן הסופיות שנקבעו (30 דקות לאחר הקסילן ו-4 ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים שאין להם ניגודי עניינים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה מומן על ידי פרויקט קרן המדע הטבעי של עיריית צ'ונגצ'ינג (מס' cstc2021jcyj-msxmX0365), תוכנית המחקר במדע וטכנולוגיה של ועדת החינוך העירונית של צ'ונגצ'ינג (מס' KJZD-K202215101, לא. KJZD-M202515104), קרן מחקר משותפת לחדשנות טכנולוגית על ידי משרד המדע והטכנולוגיה של מחוז צ'ונגצ'ינג בישאן ואוניברסיטת הרפואה הסינית של צ'ונגצ'ינג (מס' BSZYYLH010), קרן המדעים הפוסט-דוקטורנטית של סין (מס' 2025M783952), ופרויקט החדשנות השיתופית של מדע וטכנולוגיה בסצ'ואן-צ'ונגצ'ינג תחת מחלקת המדע והטכנולוגיה של מחוז סצ'ואן (מס' 2024YFHZ0083).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
אנטי-GAPDHImmunoWayYN5585
אנטי-Iκ Bαטכנולוגיית איתות סלולרי4812
אנטי-P65אבמארטTA5006
אנטי p-Iκ Bαטכנולוגיית איתות סלולרי2859
אנטי-P-P65אבמארטTP70621
BCABeyotime Biotechnology Co., LtdP10010
IL-1 ובטא; ערכהשיאמן חויג'יה ביוטכנולוגיה בע"מEHJ-20537r
ערכת IL-6שיאמן חויג'יה ביוטכנולוגיה בע"מEHJ-20746r
מיקרופיפטהאפנדורף
קורא מיקרופלטג'ין בע"מOdyssey Fc
PVDFמיליפורIPVH00010
ערכת תמלול הפוךMedChemExpressHY-K051A
בופר RIPABeyotime Biotechnology Co., LtdP0013B
SYBR Green MastermixMedChemExpressHY-K0522
TNF-α ערכהשיאמן חויג'יה ביוטכנולוגיה בע"מEHJ-20039r
טריזולתרמו פישר סיינטיפיק15596018CN
מקפיא בטמפרטורה נמוכה במיוחדסניו

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Bäck, M., Yurdagul, A. Jr, Tabas, I., Öörni, K., Kovanen, P. T. Inflammation and its resolution in atherosclerosis: mediators and therapeutic opportunities. Nat Rev Cardiol. 16 (7), 389-406 (2019).
  2. Braz-Silva, P. H., Bergamini, M. L., Mardegan, A. P., De Rosa, C. S., Hasseus, B., Jonasson, P. Inflammatory profile of chronic apical periodontitis: a literature review. Acta Odontol Scand. 77 (3), 173-180 (2019).
  3. Parker, A., et al. Elevated apoptosis impairs epithelial cell turnover and shortens villi in TNF-driven intestinal inflammation. Cell Death Dis. 10 (2), 108(2019).
  4. Dobson, G. P., Biros, E., Letson, H. L., Morris, J. L. Living in a hostile world: inflammation, new drug development, and coronavirus. Front Immunol. 11, 610131(2021).
  5. Marshall, A. C. Traditional Chinese medicine and clinical pharmacology. Drug Discovery and Evaluation: Methods in Clinical Pharmacology. Hock, F., Gralinski, M. , Springer. Cham. (2020).
  6. Wang, X. Y., et al. Traditional applications, phytochemistry, and pharmacological activities of Eupatorium lindleyanum DC.: a comprehensive review. Front Pharmacol. 11, 577124(2020).
  7. Ren, L., et al. Yemazhui (Herba Eupatorii Lindleyani) ameliorates lipopolysaccharide-induced acute lung injury via modulation of TLR4/NF-κB/NLRP3 signaling and intestinal flora in rats. J Tradit Chin Med. 44 (2), 303-314 (2024).
  8. Kim, D. G., et al. Distinct anti-inflammatory activities of bioavailable forms of cinnamaldehyde and cinnamon polyphenols. J Ethnopharmacol. 121071, (2025).
  9. Yang, X., et al. Anti-inflammatory effects of boldine and reticuline isolated from Litsea cubeba through JAK2/STAT3 and NF-κB signaling pathways. Planta Med. 84 (1), 20-25 (2018).
  10. Chen, T., et al. Phytochemical determination and mechanistic investigation of Polygala tenuifolia root extract for bronchitis. J Ethnopharmacol. 333, 118418(2024).
  11. Pahl, H. L. Activators and target genes of Rel/NF-κB transcription factors. Oncogene. 18 (49), 6853-6866 (1999).
  12. Luo, C., et al. Multi-omics and experimental insights into the protective effects of sesquiterpenoid lactones from Eupatorium lindleyanum DC. in acute lung injury. Pharmaceuticals (Basel). 18 (10), 1523(2025).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

NF KappaBWestern BlotELISA

מאמרים קשורים