פרוטוקול זה מתאר מודל חזיר של יצירת הידבקות תוך-בטנית לאחר ניתוח באמצעות חזירי יוקטן הקטנים שעוברים ניתוח בטן פתוחה עם כריתת מעיים. הגישה משרתה באופן אמין הידבקויות תוך-בטניות ומספקת פלטפורמה להערכת התפתחות הידבקות ובדיקת אסטרטגיות נגד היצמדות.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
פרוטוקול זה מתאר מודל חזיר של יצירת הידבקות תוך-בטנית לאחר ניתוח באמצעות חזירי יוקטן הקטנים שעוברים ניתוח בטן פתוחה עם כריתת מעיים. הגישה משרתה באופן אמין הידבקויות תוך-בטניות ומספקת פלטפורמה להערכת התפתחות הידבקות ובדיקת אסטרטגיות נגד היצמדות.
מודל חזיר ליצירת הידבקות תוך-בטנית לאחר ניתוח הוקם באמצעות חזירי יוקטן מיניאטור. הפרוטוקול משלב לפרוטומיה של קו אמצע, כריתת מעי דק עם אנסטומוזה ראשונית דו-שכבתית, ושחיקה חד-צדדית של פריטונאל פריאטלי בפורמט של ניתוח בטן פתוח. היווצרות ההידבקות הוערכה ארבעה שבועות לאחר הניתוח באמצעות קריטריוני ניקוד גסים והיסטולוגיים מבוססים, כאשר הערכות בוצעו על ידי צופים עיוורים. הידבקויות התפתחו בכל בעלי החיים שהשתמשו במודל זה והיו רב-מוקדיות, כללו לולאות מעיים, בין המעי לדופן הבטן, כולל הפריטונאום שמעל איברים אחרים בבטן (למשל הכבד), ואתרי ניתוח, עם חומרה משתנה. ניתוח היסטולוגי לאחר ארבעה שבועות הראה הידבקויות המורכבות בעיקר ממטריקס חוץ-תאי, פיברובלסטים וכלי דם, בהתאם לפנוטיפ של רקמת ריפוי הפצע בשלב השיקום. מודל זה רלוונטי ללימוד ביולוגיית פיברוזיס הידבקות בטנית ו/או להערכה תרגומית של טיפולים מועמדים נגד היצמדות. על ידי שילוב הליך כירורגי מעי רלוונטי קלינית עם פגיעה פריטונאלית מוגדרת ואסטרטגיית הערכה סטנדרטית, פרוטוקול זה מספק גישה ניתנת לשחזור ולהערכה של הידבקויות תוך-בטניות לאחר ניתוח במודל של בעלי חיים גדולים.
הידבקויות לאחר ניתוח הן מקור עיקרי לתחלואה לאחר ניתוחי בטן ואגן, ומתפתחות אצל עד 93% מהמטופלים 1,2, כאשר כ-20% דורשים אשפוז בתוך חמש שנים בשל סיבוכים הקשורים להידבקות 3,4. פגיעה פריטונאלית נובעת מניתוחים בטניים וכן מגירוי תוך-בטני (זיהום או חשיפה לכימיה) או מצבים דלקתיים כרוניים כגון מחלת מעי דלקתית. ההידבקויות שנוצרות עלולות להוביל למגוון רחב של השלכות קליניות, כולל חסימות מעיים חוזרות שלעיתים דורשות ניתוחים נוספים, או גרימת עקרות וכאב כרוני 5,6,7. היווצרות הידבקות יכולה להיות חמורה במיוחד לאחר כריתה רב-ויסרלית לממאירות, כגון ניתוחים ציטוררדקטיביים, דלקת כרונית או חורי מעיים, כאשר פגיעה פריטונאית נרחבת מגבירה את התגובה הפיברוטית. בנוסף, מחלת הדבקה עלולה לסבך משמעותית את ההתערבויות הניתוחיות הבאות, לעיתים קרובות לבלתי אפשרית לבצע גישה זעיר-פולשנית או לגרום לפגיעה איטרוגנית לא מכוונת במעי או באיברים אחרים.
למרות החשיבות הקלינית שלהן, פיתוח אסטרטגיות יעילות נגד הידבקות מוגבל – ככל הנראה מוגבל בחלקו בשל מגבלות במודלים פרה-קליניים שמסכמים את האנטומיה, הפיזיולוגיה ותגובות הריפוי של פצעים כפי שנראו בבני אדם8. מודלים של מכרסמים נמצאים בשימוש נרחב בשל זמינותם, ניתנות לניתוח ויצירת הידבקות אמינה 9,10,11. עם זאת, חלל פריטונאלי קטן, מזנטריה דקה וסביבת דלקת מובחנת יכולים להגביל את הרלוונטיות התרגומית 8,12. מודלים אלו תרמו לפיתוח גישות נגד הידבקות שהוכיחו יעילות חזקה במחקרים בבעלי חיים אך הראו תועלת קלינית מוגבלת או תלויה בהקשר בבני אדם 8,13,14,15,16,17. בנוסף, פרוצדורות ניתוח דומות לבני אדם כגון כריתת מעי ואנסטומוזה קשות למידול באופן תרגומי רלוונטי במכרסמים, והבדלים ספציפיים למין במטבוליזם התרופות מגבילים עוד יותר את ההסקה הקלינית18.
מודלים של בעלי חיים גדולים, במיוחד חזירים, משמשים באופן נרחב לחקר תהליכים בטניים בשל הדמיון האנטומי והפיזיולוגי שלהם לבני אדם וטיפול כירורגי דומה, ומספקים פלטפורמה לחקר היווצרות הידבקות ובדיקת התערבויות טיפוליות 19,20,21,22. מודלים קיימים של הידבקות חזיר סיפקו תובנות חשובות, אך רבים מתמקדים ביצירת הידבקות ספציפית לפרוצדורות ולעיתים חסרים פרוצדורות סטנדרטיות שמגבילות את יישומם, במיוחד להידבקויות חמורות שנוצרות לאחר ניתוח מעי פתוח 23,24,25,26,27.
כדי להתמודד עם מגבלות אלו, פיתחנו מודל חזיר של הידבקויות תוך-בטניות לאחר ניתוח, המשלב לפרוטומיה בקו האמצע, כריתת מעי דק, ושחיקה חד-צדדית של הפריטונאלי הפריאטלי. אסטרטגיית הפריטונאלית הרב-מוקדית הזו מסכמת פגיעות מעודדות הידבקות שנפוצות במהלך ניתוחי בטן, ויוצרת הידבקויות בעוצמות ומיקומים שונים במהלך ארבעת השבועות, עם הידבקויות מובטחות בצד הבטן, שם מתבצעת שפשוף פריאטלי מכוון, וכן הידבקויות סטוכסטיות ברחבי הבטן. על ידי שילוב ניתוח מעי רלוונטי קלינית עם פגיעה פריטונאית מוגדרת וניתנת לשחזור, מודל זה מתגבר על מגבלות מרכזיות של מערכות חזיר קודמות ומספק פלטפורמה עקבית לחקר היווצרות הידבקות לאחר ניתוח והערכת התערבויות נגד היצמדות.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הצהרת אתיקה
כל מחקרי חזיר נערכו לפי פרוטוקולים שאושרו על ידי ועדת הטיפול והשימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת סטנפורד (IACUC) פרוטוקול #34052 כפי שתואר קודם28.
1. גידול בעלי חיים
2. הרדמה והכנה טרום-ניתוחית
3. הליך כירורגי
4. טיפול לאחר ניתוח
5. המתת חסד
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מודל ההידבקות המוצע לאחר ניתוח חזיר (איור 1) שולב עם מערכת ניקוד מותאמת לדירוג הידבקויות בזמן אמת28. ניקוד ההידבקות בוצע באופן עצמאי על ידי 3 חברי צוות שהיו עיוורים לתנאי ניסוי בנקודת זמן של 4 שבועות על קבוצה מייצגת של n=4 חזירים; הציונים נמדדו בממוצע עבור ציון הידבקות סופי לכל בעל חיים (איור 2A). הידבקויות תוך-בטניות נוצרו ב-100% מהחיות שנבדקו הן בצד השחוק והן בצד הלא שחו...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
המודל המוצע להידבקות חזיר מספק שיטה קלינית רלוונטית ואמינה למידול הידבקויות תוך-בטניות. בניגוד למודלים של פגיעות מוקדיות או חד-מקומיות, השילוב של לפרוטומיה בקו האמצע, כריתת מעי דק עם אנסטומוזה ושפשוף פריטונאלי פריאטלי סטנדרטי נבחר בכוונה כדי לשחזר את הפגיעות הפריטונאליות הרב-גורליות שנפגשו במהלך ניתוחים בטניים פתוחים. השחיקה המבוקרת של הפריטונאום הפריאטלי לאורך דופן הבטן מדמה פגיעה הקשורה לרטרקטור הנפוצה במהלך לפרוטומיה אנושית, בעוד כריתת מעי ואנסטומוזה גורמים לטיפול קליני רלוונטי במעיים...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
למחברים אין גילויים רלוונטיים.
המחקר שפורסם בפרסום זה נתמך על ידי תוכנית SPARK של סטנפורד, מענק פרויקט שיפור הידבקויות ניתוחיות של הקולג' האמריקאי למנתחים, בתמיכה נדיבה של משפחת קרלינו, ומהמחלקה לכירורגיה באוניברסיטת סטנפורד. ברצוננו להודות למרכז שירותי הווטרינריה של סטנפורד ולצוות בפביליון ההשוואה לבעלי חיים. כל הרעיונות, הניתוחים, ההפניות והאיורים נוצרו ואומתו על ידי המחברים. כלי בינה מלאכותית שימשו רק לעריכות שפה ודקדוק משניות.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| <חזק>חיות | |||
| נקבות חזירי מיני-יוקטן, במשקל גוף 9 עד 12 ק"ג (7 עד 9 שבועות) | S& חוות S | 8 | |
| ציוד כירורגי | |||
| DMI4000 מיקרוסקופ B | לייקה מיקרוסיסטמס | היסטולוגיה | |
| <חזק>חומרים | |||
| Euthasol | וירבאק | המתת חסד | |
| כתם אלכוהולי Eosin-Y | Azer Scientific | Cat#ES709 | היסטולוגיה |
| מגלשות עם קפאה | פישר סיינטיפיק | Cat#12-550-400 | היסטולוגיה |
| מאייר ופריים; s תמיסת המטוקסילין | סיגמא-אלדריץ' | Cat#MHS80 | היסטולוגיה |
| <חזק>תרופות | |||
| אמוקסיצילין | קובטרוס | 59629 | מניעת זיהומים 10 מ"ג/ק"ג ב-PO BID x1 |
| אנסף/צפאזולין | קובטרוס | 84773 | בקרת זיהומים לפני הניתוח 25 מ"ג/ק"ג ורידי |
| אטיפאמזולה | קובטרוס | 82124 | סוכן הפיכת הרדמה 0.2 מ"ג/ק"ג |
| אטרופין | קובטרוס | 74760 | ברדיקרדיה 0.04mg/kg |
| בופרנורפין שחרור מורחב (ER) | וודג'ווד פארמסי | הקלה על כאבים 0.18 מ"ג/ק"ג ורידי | |
| קרפרופן - תוך ניתוח | דקרה | אנלגזיה 25 מ"ג/ק"ג IV | |
| קרפרופן - לאחר ניתוח | דקרה | Analgesia 25-50 מ"ג PON PRN | |
| סרניה | זואטיס | אנטי-בחילה 1-2 מ"ג/ק"ג בעירוי לאחר הניתוח | |
| איזופלוראן | דקרה | הרדמה | |
| לידוקאין 2% | VetOne | V1 510212 | Analgesia 2 מ"ג/ק"ג SQ לפני החתך |
| קטמין | דקרה | אנסטזיה & Analgesia 12 מ"ג/ק"ג IM | |
| דובוטמין | Hospira | מינון וטיטרציה לפי רופא מרדים | |
| פובידון-יוד (בטדין) | ValleyVet | 12265 | חומר חיטוי |
| זילזין (רומפון) | דקרה | GW l400000 | הרדמה/הרדמה 2.2 מ"ג/ק"ג IM |
| <ציוד כירורגי>חזק | |||
| תפר 3-0 PDS (פולידיוקסנון) | אתיקון | Cat#Z316H | אנסטמוזיס כמות - 2 |
| 3-0 תפר משי (פופ-אוף) | אתיקון | קטגור#1679H | אנסטמוזיס כמות - חבילה אחת של פופ אוף |
| תפר 0-0 PDS (פולידיוקסנון) | אתיקון | Cat#Z990G | Linea Alba closure כמות - 1 |
| 3-0 תפר פרולין | אתיקון | Cat#8684G | סגירת עור כמות - 1 |
| בובי אלקטרוקוטרי | אספקת רפואה גרייליין | Cat#E2516 | הומאוסטזיס וחיתוך |
| סט סטנדרטי של כלים כירורגיים סטריליים עם רטרקטורים לדופן הבטן כמו של הצבא/צי או ריצ'רדסון. | |||
| 3M Tegaderm + פד | 3M | קטגור#3593 | חבישה כירורגית |
| דיאטה נוזלית עתירה בחלבון | להבטיח | Diet 1.5 בקבוקים BID | |
| <חזק>תוכנה | |||
| BioRender | מספר הסכם SH28Z3OOKI | יצירת דמויות | |
| אדובי אילוסטרייטור | אדובי | v29.8.1 | יצירת דמויות |
| פיג'י | NIH | יצירת דמויות | |
| *הערה: כלי בינה מלאכותית שימשו רק לעריכות משניות בשפה ובדקדוק | |||
| *BID - פעמיים ביום, IV - תוך-ורידי, IM - תוך-שריר, PO - לפי OS/ דרך הפה, SQ - תת-עורי, PRN לפי הצורך |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.