מאמר שיטה

בידוד קרדיומיוציטים חדריים מתוך מודל עכבר של קרדיוטוקסיות דוקסורוביצין

DOI:

10.3791/70411

⸱

27 בפברואר 2026

 ,  ,  , 
1Advanced Institute for Medical Sciences, Dalian Medical University, 2School of Basic Medical Sciences, Xi'an Jiaotong University, 3East China Normal University Health Science Center

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול זה מתאר שיטה ניתנת לשחזור, ללא לנגנדורף, לבידוד קרדיומיוציטים בוגרים בוגרים של עכברים בוגרים ממודל קרדיוטוקסיות מושרה על ידי דוקסורוביצין. הוא עושה שימוש בפרפוזיה אנטיגרדית ישירה מהחדר השמאלי ואחריה עיכול אנזימטי מבוקר כדי להפיק מיוציטים בצורת מוט עמידים לסידן, המתאימים לניתוחים מבניים, מולקולריים ותפקודיים.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

דוקסורוביצין (DOX) היא תרופה כימותרפית יעילה שהיישום הקליני שלה מוגבל על ידי קרדיוטוקסיות מתקדמת התלויה במינון, המשפיעה בעיקר על שריר הלב החדרי. חקר מנגנוני פגיעות תאיות בהקשר זה דורש בידוד אמין של קרדיומיוציטים בוגרים, תהליך שהוא מאתגר טכנית בלבבות חולים או שבריריים מבניים. כאן, אנו מתארים פרוטוקול נטול לנגנדורף מפושט וניתן לשחזור לבידוד קרדיומיוציטים תפקודיים של עכברים עם קרדיוטוקסיות הנגרמת על ידי DOX. לאחר קביעת מודל DOX בעכברי C57BL/6, הלב מנותק במהירות והאאורטה נלחמת מחוץ ל-vivo. הפרפוזיה האנטיגרדית הלא-מחזורית מתבצעת ישירות דרך החדר השמאלי באמצעות בופרים ללא סידן ומכילים אנזימים. דיסוציאציה מכנית עדינה של רקמת החדר המעכלת מניבה קרדיומיוציטים בודדים, ואחריה החזרה מבוקרת של סידן לשיקום סבילות הסידן. שיטה זו מספקת קרדיומיוציטים איכותיים, ברי-קיימא, בצורת מוט, התואמים לבדיקות במורד הזרם, כולל אימונופלואורסצנציה, ניתוח ארגון סרקומר, זיהוי אפופטוזיס ומחקרי איתות מולקולרי. על ידי ביטול הצורך בציוד פרפוזיה ייעודי לנגנדורף, פרוטוקול זה מציע פתרון נגיש ובעל תפוקה גבוהה למעבדות החוקרות מנגנוני פגיעות לב הנגרמות מ-DOX.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

דוקסורוביצין (DOX) הוא חומר כימותרפיה חזק לאנתרציקלין, אך השימושיות הקלינית שלו מוגבלת על ידי רעילות לב מצטברת שיכולה להתקדם לקרדיומיופתיה מורחבת ואי ספיקת לב 1,2. אפופטוזיס של קרדיומיוציטים הוא תהליך פתוגני מרכזי ברעילות זו 3,4,5, ולימוד אירועים תאיים אלו דורש גישה אמינה לקרדיומיוציטים בוגרים פונקציונליים שמקורם בלבבות שנפגעו מ-DOX. עם זאת, חשיפה ל-DOX הופכת את הקרדיומיוציטים לשבריריים מבניים ומוחלשים מטבולית6, מה שמגביר משמעותית את רגישותם ללחץ אנזימטי ומכני במהלך בידוד ומביאה ליכולת חיים נמוכה. בספרות הרחבה יותר, פרפוזיה של לנגנדורף נותרה השיטה השלטת לבידוד קרדיומיוציטים במבוגרים7. עם זאת, יש לו מגבלות בולטות כאשר הוא מיושם על שריר הלב הפגוע. השיטה דורשת ציוד מיוחד, קנולציה מדויקת של האאורטה ומיומנות טכנית רבה; בלבבות שטופלו ב-DOX, המאמץ המכני הנוסף שנכנס במהלך פרפוזיה של לנגנדורף עלול להחמיר עוד יותר את הפגיעה בתאים, ולגרום לתוצאות לא עקביות ולעיתים קרובות לא אופטימליות8.

כדי להתגבר על אתגרים אלו, הקמנו פרוטוקול פשוט ונגיש לבידוד קרדיומיוציטים חדריים בוגרים עמידים לסידן ממודל עכבר עם קרדיוטוקסיות חריפה הנגרמת על ידי DOX9. על ידי ביטול הצורך בפרפוזיה לנגנדורף קונבנציונלית ויישום פרפוזיה אנטגרדית מבוקרת אקס ביבו ישירות דרך החדר השמאלי, שיטה זו מצמצמת חשיפה איסכמית ומפחיתה מניפולציה מכנית של שריר הלב. תכונות אלו צפויות לשפר את העקביות הפרוצדורלית ולשפר את הישרדותם של קרדיומיוציטים פגיעים שמקורם בלבבות פגועים 7,10.

הגישה הנוכחית מתבססת על התקדמות מתפתחת בבידוד קרדיומיוציטים ללא לנגנדורף, ומרחיבה מושגים אלו לתאי חדר בוגרים, הדורשים שימור ארכיטקטורה של התכווצות בוגרת ותכונות טיפול בסידן, תכונות שאינן נתמכות כראוי על ידי שיטות עיכול פשוטות שפותחו בעיקר ללב יילודים11,12. לכן, פרוטוקול זה מציע אלטרנטיבה מעשית וניתנת לשחזור למעבדות שאין להן מערכות פרפוזיה ייעודיות. הקרדיומיוציטים המבודדים שומרים על שלמותם המבנית ומתאימים היטב ליישומים מגוונים במורד הזרם, כולל ניתוח סרקומר, הדמיית אימונופלואורסצנציה ומחקרי איתות אפופטוזיס, המאפשרים חקירה מכנית ישירה של פגיעות לב הנגרמות מ-DOX בהקשר פיזיולוגי רלוונטי. ביחד, פרוטוקול זה מתמודד עם צורך קריטי שלא נענה לבידוד קרדיומיוציטים חיים מלב שנפגע מ-DOX.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל ההליכים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות מוסדיות ולאומיות לטיפול ושימוש בבעלי חיים במעבדה, ונבדקו ואושרו על ידי ועדת הטיפול והשימוש בבעלי חיים מוסדית של אוניברסיטת שיאן ג'יאוטונג (אישור מס' XJTUAE2022-1441). הצרכנים, החומרים והציוד בהם משתמשים מופיעים בטבלת החומרים.

1. הקמת מודל הקרדיוטוקסיות החריפה המושרה על ידי DOX בעכברים C57BL/6

  1. הכנה לבעלי חיים: השתמש בעכברים זכרים בני 8-12 שבועות C57BL/6 (24-28 גרם). חיות בית בתנאים סטנדרטיים עם מחזור אור/חושך של 12 שעות וגישה חופשית למזון ולמים. הקצו עכברים באקראי לקבוצות ביקורת מטופלות ב-DOX או לקבוצות בעלות מלח (n = 3 לכל קבוצה).
  2. ניהול DOX
    1. הכינו תמיסת DOX טרייה ב-1.5 מ"ג/מ"ל במי מלח סטריליים. הגן על התמיסה מאור על ידי עטיפת המיכל בנייר אלומיניום.
    2. שקלו כל עכבר וחישבו את נפח ההזרקה עבור מינון תוך-פריטוניאלי יחיד (i.p.) של 15 מ"ג/ק"ג13,14.
    3. החזקו את העכבר בעדינות ונתנו את תמיסת DOX באמצעות הזרקה תוך-פריטוניאלית. החזיר את העכבר לכלוב שלו והלך לפי לוח הזמנים הניסיוני.
      אזהרה: DOX הוא חומר ציטוטוקסי. לבש ציוד מגן אישי מתאים (חלוק מעבדה, כפפות, מגן עיניים) ולטפל במגיב באזור בטיחות כימית ייעודי.
  3. לוח זמנים ומעקב: עוקב מדי יום אחר עכברים לבריאות כללית והתנהגות. לשבור משקל גוף כל יומיים. בצע בידוד קרדיומיוציטים 7 ימים לאחר הזרקת DOX.

2. הכנת תמיסות וכלים כירורגיים לבידוד קרדיומיוציטים

  1. הכנת בופר: ראו טבלה משלימה 1 לשיטות הכנה מפורטות של תמיסות אלו.
    1. הכינו בופר פרפוזיה ובופר EDTA. כוון את ה-pH של כל התמיסות ל-7.4 באמצעות NaOH.
    2. הכינו תמיסת עיכול אנזימטית המכילה קולגנאז סוג II, קולגנאז סוג IV ופרוטאז XIV עם בופר פרפוזיה.
    3. הכינו בופר עצירת על ידי הוספת בופר פרפוזיה עם 5% סרום בקר עוברי (FBS).
    4. הכינו מדיום תרבית מלא על ידי הוספת 0.1% אלבומין סרום בקר (BSA), אינסולין-טרנספרין-סלניום (ITS), 10 מ"מ 2,3-בוטנדיון מונוקסים (BDM), ריכוז ליפידים, ופניצילין/סטרפטומיצין (P/S) למדיום M199.
    5. הכינו בופרי החזרת סידן על ידי הוספת מדיום תרבית מלא לבופרזיה בריכוזי סידן סופיים של 0.34 מ"מ, 0.68 מ"מ ו-1.02 מ"מ, בהתאמה.
      הערה: הכינו את כל התמיסות בתנאים סטריליים באמצעות סינון של 0.22 מיקרון. אחסן תמיסות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס, מוגן מאור, עד שבועיים. לבידוד לב עכבר אחד, יש להכין בופר EDTA של 50 מ"ל, 100 מ"ל בופר פרפוזיה (60 מ"ל לתמיסת קולגנאז, 10 מ"ל לבופר עצירה, שארית לפרפוזיה ושקיעת כבידה), 60 מ"ל בופר קולגנאז, ו-10 מ"ל בופר עצירה.
  2. הכנת כלי ניתוח: סטריליזציה של כל כלי הניתוח על ידי אוטוקלאב לפני ההליך. סדר את הכלים הבאים בסדר סדר באזור הניתוח: מספריים דקים, מספריים מעוקלים, מלקחיים, מלקחיים המוסטטיים מעוקלים (איור 1A), ומשאבת מזרק (איור 1B).

3. בידוד קרדיומיוציטים מלבבות שטופלו ב-DOX

הערה: סקירה סכמטית של הליך בידוד הקרדיומיוציטים מוצגת באיור 2. לאחר שווידא שכל כלי הכירורגיה, הציוד והפתרונות מוכנים, התחילו בבידוד.

  1. הידוק האאורטה וכריתת הלב
    1. הרדימו את העכבר ב-3% איזופלוראן ואשר הרדמה על ידי בדיקת חוסר תגובה לצביטת אצבע15.
    2. אבטח את העכבר במצב שכיבה על לוח הניתוח.
    3. בצע חתך בקו אמצעי דרך העור ודופן החזה כדי לחשוף את הלב, וחתוך את האאורטה היורדת.
    4. פרחו 7 מ"ל של בופר EDTA בקצב מבוקר ויציב לבסיס החדר הימני במשך כדקה אחת כדי להוציא במהירות דם מהחדרים תוך הפחתת חשיפה איסכמית ושמירה על שלמות מבנית לבבית, במיוחד בלבבות פגועים ב-DOX (איור 2A).
    5. מהדקים במהירות את האאורטה העולה (איור 2B), כריתת הלב והעבירה מיידית לצלחת 100 מ"מ המכילה בופר EDTA קר כקרח.
      הערה: הזמן הכולל מהורקוטומיה להעברת הלב עדיף להישאר מתחת ל-2 דקות כדי למזער איסכמיה.
  2. הגדרת פרפוזיה
    1. גזום בזהירות את הרקמה הסובבת.
    2. הניחו את הלב בצלחת נתיחה המכילה בופר פרפוזיה קר כקרח.
    3. פרצו 10 מ"ל של בופר EDTA בעקביות דרך קצה החדר השמאלי באמצעות מחט שוכן במשך 6 דקות כדי לערער חיבורים חוץ-תאיים.
    4. העבר את הלב לצלחת נוספת של 100 מ"מ והסרת שארית EDTA מחדרי הלב על ידי פיורוז של 3 מ"ל בופר פרפוזיה דרך אותו קטטר במשך 2 דקות.
      הערה: יש לשים לב לנפיחות הלב במהלך הפרפוזיה ולאבטח את האאורטה עם מלקחיים המוסטטיים מעוקלים כדי להקים מערכת פרפוזיה סגורה. יש לשלוט בקפידה בקצב הפרפוזיה ובלחץ כדי להימנע מכוח הידרוסטטי מופרז ולהפחית את הסיכון לקרע בעלייה השמאלית.
  3. עיכול אנזימטי
    1. העבר את הלב המנותק לצלחת בגודל 100 מ"מ המכילה 5 מ"ל תמיסת עיכול אנזימית.
    2. חבר את המחט הפנימית למזרק בנפח 20 מ"ל מלא בתמיסת עיכול האנזים וקבע את המחט היטב למשטח העבודה של ארון הבטיחות הביולוגית באמצעות סרט חיטוי.
    3. הניחו את המזרק במשאבת מיקרו-הזרקה והתחילו את הפרפוזיה בקצב מבוקר של 3 דקות למ"ל (איור 2C).
    4. יש להזין את הלב דרך החדר השמאלי עם תמיסת האנזים למשך 60-90 דקות עד שמתבצע עיכול מלא, מה שנראה באובדן מוחלט של גמישות הרקמה ובצבע חיוור של פני החדר (איור 2D). אם נצפה עיכול לא שלם לאחר הפרפוזיה הראשונית, ניתן להוסיף 15-20 מ"ל נוסף של תמיסת אנזימים להמשך העיכול.
      הערה: מניעת ניתוק מחט במהלך החלפת מזרק; אם הוסרו, יש להכניס מחדש לאתר החדר השמאלי המקורי כדי לשמור על מסלול הפרפוזיה.
  4. דיסוציאציה של רקמות
    1. העבר את הלב המעכל לצלחת בגודל 60 מ"מ המכילה 5 מ"ל של בופר עצירה.
    2. קרעו את רקמת החדר לחתיכות קטנות באמצעות מלקחיים עדינים (איור 2E).
    3. הפעילו בעדינות את תליית רקמת החדר עם פיפטה של 5 מ"ל כדי להפריד את הקרדיומיוציטים הבודדים (איור 2F).
    4. סינן את תליית התא דרך מסננת תאים של 100 מיקרון כדי להסיר שברי רקמה גדולים.
    5. שטוף את המסננת עם 5 מ"ל נוספים של בופר עצירה כדי למקסם את תפוקת התאים.
      הערה: בצע את כל שלבי הטריטורציה בעדינות והגביל את הפיפט ליותר מ-50 חזרות כדי למנוע נזק מכני לקרדיומיוציטים.
  5. החזרת סידן
    הערה: אפשר לקרדיומיוציטים לעבור 3-4 תקופות רצופות של שקיעת כבידה של 15 דקות בצינורות צנטריפוגה של 15 מ"ל (איור 2G). לאחר כל שקיעה, הסר בזהירות 80% מהסופרנטנט והשלים את הכדור ב-3 מ"ל של בופר החזרת הסידן הבא. הגדילו בהדרגה את ריכוז הסידן באמצעות תמיסות הגרדיאנט המוכנות בכל שלב16.
  6. ספירת תאים וציפוי
    1. כימות צפיפות התאים באמצעות המוציטומטר וחישוב את היחס בין קרדיומיוציטים בצורת מוט לבין קרדיומיוציטים מעוגלים 1,9 (איור 2H).
    2. פלטות 1-5 × 10תאים 5 במדיית ציפוי ללוחות 6 בארות מצופים מראש בלמינין (10 מיקרוגרם/מ"ל) למשך שעה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ונשטפו עם מלח בופר פוספט (PBS). הכינו את הצלחות יום מראש ואחסנו בטמפרטורה של 4°C במידת הצורך. החלף מדיה למדיום תרבית טרי ומחומם מראש אחרי שעה וכל 48 שעות לאחר מכן.
      הערה: ניתן להשהות את הפרוטוקול לאחר שלב 3.6. ניתן לשמור תאים בתרבית קצרה עד 6 שעות לניסויים מיידיים.

4. הערכת שלמות מבנית של קרדיומיוציטים באמצעות צביעת חיסון

  1. תקן תאים עם 4% פאראפורמלדהיד למשך 15 דקות בטמפרטורת החדר.
  2. שטוף תאים שלוש פעמים עם PBS, 5 דקות כל אחת.
  3. חדיר תאים עם 0.1% Triton X-100 ב-PBS למשך 10 דקות ושוטף שלוש פעמים עם PBS, 5 דקות כל אחת.
  4. חסום קישור לא ספציפי עם 1% BSA ב-PBS למשך שעה.
  5. דגרו תאים עם נוגדן ראשוני נגד α-אקטינין סרקומרי במהלך הלילה בטמפרטורה של 4°C.
  6. שטפו בעדינות שלוש פעמים עם PBS, ואז דגרו עם הנוגדן המשני הפלואורסצנטי המתאים למשך שעה בטמפרטורת החדר.
  7. שטוף בעדינות שלוש פעמים עם PBS, ואז צבע נגד גרעיניים עם DAPI למשך 5 דקות.
  8. התקנת כיסויי כיסוי על מחסניות זכוכית באמצעות מדיום הרכבה נגד פייד.
  9. צלם תמונות באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנציה כדי להמחיש דפוסי צביעה.

5. ניתוח איתות אפופטוטי בקרדיומיוציטים מבודדים

  1. הפקת חלבונים וכימות
    1. קרדיומיוציטים ליז בבופר מבוסס RIPA, בתוספת מעכבי פרוטאז ופוספטאז.
    2. בצנטריפוגה הומוגנה ב-12,000 × גרם למשך 15 דקות בטמפרטורה של 4°C. אסוף את הסופרנטנט לניתוח הבא.
    3. קבעו את ריכוז החלבון באמצעות מבחן קולורימטרי של חומצה ביצינכונינית.
  2. ניתוח כתמים מערביים
    1. הפרדו 30 מיקרוגרם חלבון על ג'לים SDS-פוליאקרילאמיד והעבירו את החלבונים המופרדים לממברנות PVDF.
    2. חסמו את הממברנות עם 5% חלב דל שומן ב-TBS המכיל 1% טווין-20, ואז דגרו אותן ללילה בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס עם נוגדנים ראשוניים נגד Bax, Bcl-2 וקספאז-3 ששפור, סמנים מרכזיים של חלבונים שנבדקים לעיתים קרובות במחקרי DOX-קרדיוטוקסיות17.
    3. דגרו עם נוגדנים משניים מתאימים עם פרוקסידאז פרוקסידאז. לזהות אותות באמצעות תגובת כימילומינסצנציה משופרת ולצלם תמונות באמצעות מערכת הדמיה דיגיטלית18.
  3. ניתוח נתונים
    1. הצג נתונים כמותיים כממוצע ± SEM משלושה שכפולים ביולוגיים עצמאיים.
    2. בצע ניתוחים סטטיסטיים באמצעות GraphPad Prism, יישום ANOVA דו-כיווני להשוואות בין קבוצות ונקודות זמן שונות, או מבחן t דו-זנבי לא מזווג להשוואות בין שתי קבוצות. ערך p < 0.05 נחשב מובהק סטטיסטית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הערכת תפוקת התאים והכדאיות

עכברים שקיבלו DOX הראו ירידה משמעותית במשקל הגוף ביחס לקבוצה שטופלה במי מלח (איור משלים 1A). ההקמה המוצלחת של מודל הקרדיוטוקסיות החריפה הנגרמת על ידי DOX אושרה עוד יותר על ידי עלייה ניכרת בסמני פגיעות לב בסרום, כולל cTnT ו-CK (איור משלים 1B,C), וכן עלייה בולטת באפופטוזיס הקרדיומיוציטים, כפי שמודגם בצביעת TUNEL (תיוג קצה הקצה הסופי של דאוקסינוקלאוטידיל טרנספראז dUTP (TUNEL) של חלקי לב...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בידוד מוצלח של קרדיומיוציטים בוגרים איכותיים ועמידים לסידן הוא חיוני למחקרים ברמת התא של פתופיזיולוגיה לבבית. פרוטוקול זה מניב באופן אמין קרדיומיוציטים פונקציונליים הן מלב עכברים בריאים והן מלב פתולוגי, כאשר שני שלבים הם קריטיים במיוחד לשמירה על חיוניות התאים. ראשית, אופטימיזציה ועוקבת בקפידה אחרי משך הפרפוזיה האנזימטית. עיכול לקוי גורם להתנתקות רקמה לקויה ותפוקה נמוכה, בעוד שעיכול יתר פוגע בשלמות המבנית, מה שמוביל לתאים מתכווצים יתר או מעוגלים. נקודת הסיום האופטימלית מסומנת על ידי אובדן...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה על ידי קרן המדעים הטבעיים של סין (מענק 82230012 81830015 ל-N. Wang, מענק 82570478 ל-L. Xiao).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
צלחות קלוטור תא 100 מ"מסינון ביולוגי של סילון סילוני TCD000100
100 & mu; מסננת תא Mקורנינג431752
צינורות צנטריפוגה של 15 מ"לסינון ביולוגי של סילון סילוני CFT011150
צינורות צנטריפוגה של 50 מ"לסינון ביולוגי של סילון סילוני CFT011500
צלחות תרבית תאים בגודל 60 מ"מסינון ביולוגי של סילון סילוני TCD100060
אלבומין סרום בקר (BSA)סיגמא-אלדריץ'A1470 
קולגנאז IIסיגמא-אלדריץ'C6885
קולגנאז IVסיגמא-אלדריץ'C5138
מלקחיים המוסטטיים מעוקליםRWD מדעי החייםF22003-10
מספריים עם קצה מעוקלRWD מדעי החייםS12001-09
מספריים עדיניםRWD מדעי החייםS12000-09
מלקחייםRWD מדעי החייםF13014-12
קנולה פנימית (26G)בקטון, דיקינסון ושות'381312
אינסולין-טרנספרין-סלניום (ITS)MedChemExpressHY-150287
איזופלורן   RWD מדעי החייםR510-22-10
למינין (ככברוש)תרמו-סיינטיפיק23017015
ריכוז שומנים (מוגדר כימית)MedChemExpressHY-K3019
M199 בינוניסיגמא-אלדריץ'M4530
פניצילין-סטרפטומיציןMedChemExpress  HY-K1006
פרוטאז XIVסיגמא-אלדריץ'P5147
סרט אינדיקטור לעיקורמינסוטה כרייה וייצור (3M)CT060934701
משאבת מזרק (ISPLab01)משאבת דיוק באודינג שנצ'ןSC-49464A

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Singal, P. K., Iliskovic, N. Doxorubicin-induced cardiomyopathy. N Engl J Med. 339 (13), 900-905 (1998).
  2. Zamorano, J. L., et al. ESC Position paper on cancer treatments and cardiovascular toxicity developed under the auspices of the ESC Committee for practice guidelines: task force for cancer treatments and cardiovascular toxicity of the European Society of Cardiology (ESC). Eur Heart J. 37 (36), 2768-2801 (2016).
  3. Xu, C., et al. Usp38 promotes oxidative stress and inflammation and aggravates doxorubicin-induced cardiotoxicity by deubiquitinating and stabilizing pten. Int Immunopharmacol. 167, 115750(2025).
  4. Yue, M. Y., et al. Salviae miltiorrhizae radix et rhizoma protects against doxorubicin-induced cardiotoxicity: A systematic review. Phytomedicine. 148, 157244(2025).
  5. Kong, C. Y., et al. Underlying the mechanisms of doxorubicin-induced acute cardiotoxicity: Oxidative stress and cell death. Int J Biol Sci. 18 (2), 760-770 (2022).
  6. Domínguez Romero, Y., Ortiz Montoya, G., NovoaHerrán, S., Osorio Mendez, J., Gomez Grosso, L. A. Mirna expression profiles in isolated ventricular cardiomyocytes: Insights into doxorubicin-induced cardiotoxicity. Int J Mol Sci. 25 (10), 5272(2024).
  7. Li, H., et al. Optimized Langendorff perfusion system for cardiomyocyte isolation in adult mouse heart. J Cell Mol Med. 24 (24), 14619-14625 (2020).
  8. Gharanei, M., Hussain, A., Janneh, O., Maddock, H. L. Doxorubicin-induced myocardial injury is exacerbated following ischaemic stress via opening of the mitochondrial permeability transition pore. Toxicol Appl Pharmacol. 268 (2), 149-156 (2013).
  9. O'connell, T. D., Rodrigo, M. C., Simpson, P. C. Isolation and culture of adult mouse cardiac myocytes. Methods Mol Biol. 357, 271-296 (2007).
  10. Liu, Y., Dostal, D. E., Tong, C. W. Isolation of adult mouse cardiomyocytes using Langendorff perfusion apparatus. Methods Mol Biol. 2319, 143-152 (2021).
  11. Bongiovanni, C., et al. Protocol for isolating and culturing neonatal murine cardiomyocytes. STAR Protoc. 5 (4), 103461(2024).
  12. Vidyasekar, P., Shyamsunder, P., Santhakumar, R., Arun, R., Verma, R. S. A simplified protocol for the isolation and culture of cardiomyocytes and progenitor cells from neonatal mouse ventricles. Eur J Cell Biol. 94 (10), 444-452 (2015).
  13. Li, L., et al. Preventive effect of erythropoietin on cardiac dysfunction in doxorubicin-induced cardiomyopathy. Circulation. 113 (4), 535-543 (2006).
  14. Zhang, X., et al. Rosmarinic acid alleviates cardiomyocyte apoptosis via cardiac fibroblast in doxorubicin-induced cardiotoxicity. Int J Biol Sci. 15 (3), 556-567 (2019).
  15. Oh, S. S., Narver, H. L. Mouse and rat anesthesia and analgesia. Curr Protoc. 4 (2), e995(2024).
  16. Ackers-Johnson, M., et al. A simplified, Langendorff-free method for concomitant isolation of viable cardiac myocytes and nonmyocytes from the adult mouse heart. Circ Res. 119 (8), 909-920 (2016).
  17. Zhang, X., et al. Fndc5 alleviates oxidative stress and cardiomyocyte apoptosis in doxorubicin-induced cardiotoxicity via activating Akt. Cell Death Differ. 27 (2), 540-555 (2020).
  18. Mahmood, T., Yang, P. C. Western blot: Technique, theory, and troubleshooting. N Am J Med Sci. 4 (9), 429-434 (2012).
  19. Guo, G. R., et al. A modified method for isolation of human cardiomyocytes to model cardiac diseases. J Transl Med. 16 (1), 288(2018).
  20. Judd, J., Lovas, J., Huang, G. N. Isolation, culture, and transduction of adult mouse cardiomyocytes. J Vis Exp. (114), e54012(2016).
  21. Łoboda, A., Zieliński, T., Dulak, J. Cell-free strategies for cardiomyocyte proliferation and heart repair. Pharmacol Rep. , 00805-00807 (2025).
  22. Alam, P., et al. Cardiac remodeling and repair: Recent approaches, advancements, and future perspectives. Int J Mol Sci. 22 (23), 13104(2021).
  23. Seibertz, F., et al. A modern automated patch-clamp approach for high-throughput electrophysiology recordings in native cardiomyocytes. Commun Biol. 5 (1), 969(2022).
  24. Gorski, P. A., Kho, C., Oh, J. G. Measuring cardiomyocyte contractility and calcium handling in vitro. Methods Mol Biol. 1816, 93-104 (2018).
  25. Li, A., Gao, M., Jiang, W., Qin, Y., Gong, G. Mitochondrial dynamics in adult cardiomyocytes and heart diseases. Front Cell Dev Biol. 8, 584800(2020).
  26. Woodcock, E. A., Matkovich, S. J. Cardiomyocytes structure, function and associated pathologies. Int J Biochem Cell Biol. 37 (9), 1746-1751 (2005).
  27. Gan, P., et al. Rbpms is an RNA-binding protein that mediates cardiomyocyte binucleation and cardiovascular development. Dev Cell. 57 (8), 959-973.e7 (2022).
  28. Jia, K., et al. RNA helicase ddx5 maintains cardiac function by regulating camkiiδ alternative splicing. Circulation. 150 (14), 1121-1139 (2024).
  29. Zhuang, L., et al. Dyrk1b-stat3 drives cardiac hypertrophy and heart failure by impairing mitochondrial bioenergetics. Circulation. 145 (11), 829-846 (2022).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

מאמרים קשורים