מאמר מחקר

רכיב ביואקטיבי ממטוטלת האקוניטום מפחית דלקת דלקת מפרקים שגרונית בעכברים באמצעות ויסות מסלול PI3K/Akt

DOI:

10.3791/70473

⸱

21 באפריל 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1School of Pharmacy, Qinghai MinZu University, 2Qinghai Modern Plateau Biomedical Industry Institute, 3Qinghai Institute of Tibetan Medicine, 4Qinghai Provincial Key Laboratory of Plant Resource Chemistry on the Tibetan Plateau

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

באמצעות פרמקולוגיה רשת ועגינה מולקולרית, זוהו רכיבים אנטי-ראומטואידיים (RA) מ-A. pendulum . מחקרים ב-vivo הראו שאלקלואידים דיטרפניים, במיוחד סמירנוטין A, מקלים על תסמיני RA בעכברים דרך מסלול PI3K/Akt.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ברפואה הסינית המסורתית ובשיטות רפואיות אתניות שונות, שורשי מטוטלת האקוניטום N. Busch משמשים לעיתים קרובות בשל יכולתם לגרף מרידיאנים, להפיג ראומטיזם, לקדם את זרימת הדם ולהקל על דלקת מפרקים. כתוצאה מכך, צמח מרפא זה הפך לטיפול מוערך לנקעים ומחלות ראומטיות במערכות רפואיות אתניות שונות. מחקר זה חקר את המנגנונים שבאמצעותם שישה תרכובות מבודדות בעבר מ-A. pendulum amelioate משפרות דלקת הקשורה לדלקת מפרקים שגרונית (RA) באמצעות גישות הן במבחנה והן בגישות in vivo . שילוב של טכניקות, כולל פרמקולוגיה רשתית, עגינה מולקולרית, בדיקת אימונוסורבנט מקושרת באנזימים (ELISA), צביעת המטוקסילין ואאוזין (H&E), תגובת שרשרת פולימראז כמותית בזמן אמת (q-PCR) ו-Western Blot (WB). התוצאות הראו שסמירנוטין A, אחת משש התרכובות, מקלה על תסמיני דלקת מפרקים שגרונית על ידי מיקוד במסלול האיתות PI3K/Akt ודיכוי התגובה הדלקתית. ממצאים אלו מספקים בסיס מדעי להבנת הבסיס החומרי והפעולה המכניסטית שמאחורי השימוש המסורתי ב-A. pendulum בטיפול ב-RA.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

דלקת מפרקים שגרונית (RA) היא מחלה אוטואימונית כרונית המאופיינת בדלקת סינוביאלית, היפרפלזיה של רירית הסינוביאלית, חדירת תאי מערכת החיסון, היווצרות רקמת פאנוס פולשנית והרס מפרקים 1,2,3. עם שכיחות עולמית של 0.5%–1%, דלקת מפרקים שגרוניתית מהווה נטל בריאותי משמעותי ומשפיעה קשות על איכות החיים של המטופלים 4,5,6,7. טיפולים קונבנציונליים — כגון מתוטרקסט (MTX), גלוקוקורטיקואידים, מעכבי Janus kinase (JAK) ותרופות נוגדות דלקת לא סטרואידיות (NSAIDs) — מוגבלים לעיתים קרובות על ידי תופעות לוואי ותגובת מטופלים משתנה, מה שמדגיש את הצורך בטיפולים חדשניים8.

מוצרים טבעיים, במיוחד אלקלואידים, זכו לתשומת לב בזכות מנגנוני ריבוי מטרות ופרופילי בטיחות חיוביים בניהול RA. אלקלואידים כמו ברברין, סינומנין ומטרין מווסתים מסלולי דלקת מרכזיים, כולל קינאז חלבון מופעל על ידי מיטוגן (MAPK), פקטור גרעיני קאפה B (NF-κB), פוספטידילינוזיטול 3-קינאז/קינאז חלבון B (PI3K/Akt), ו-Janus kinase / ממיר אותות ומפעיל שעתוק (JAK/STAT) ומפחיתים ציטוקינים כמו פקטור נמק גידול אלפא (TNF-α), אינטרלוקין (IL)-1β ו-IL-6, המדגימים פוטנציאל טיפולי9. 10.

ברפואה הטיבטית, דלקת מפרקים שגרונית מסווגת כ-brum bu (דלקת מפרקים לחות), המיוחס לחוסר איזון בשלושת הוורטורים ולהצטברות מים צהובים לא בשלים במפרקים11,12 (איור 1). אקוניטום פנדולום N. Busch הוא צמח מסורתי להפלת לחות, קידום זרימת דם והקלה על כאב13,14. יותר מ-50 נוסחאות טיבטיות קלאסיות המכילות צמח זה תועדו, עם היסטוריה קלינית של שימוש שנמשך למעלה מ-300 שנים15,16. עם זאת, הרכיבים והמנגנונים הביואקטיביים שלו נותרו מאופיינים בצורה לקויה.

כאן, אנו משלבים פרמקולוגיה רשתית ועגינה מולקולרית כדי לחזות את רכיבי האנטי-RA של מטוטלת Aconitum N. Busch ואת היעדים והמסלולים הפוטנציאליים שלהם. תחזיות אלו מאומתות לאחר מכן ניסיוניות (איור 2). גישה משולבת זו שואפת להבהיר את הבסיס החומרי ואת היסודות המכניסטיים של מטוטלת Aconitum N. Busch בטיפול בדלקת מפרקים שגרונית, ולספק בסיס לפיתוח תרופות עתידי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

חמישים עכברי ספרג-דולי זכרים חסרי פתוגן (SPF) (במשקל 180–200 גרם) סופקו על ידי המרכז המחוזי להובאי לבקרת מחלות ומניעתן (האקדמיה המחוזית לרפואה מונעת של חוביי) (ווהאן, סין; תעודת רישיון בעלי חיים מס' SCXK(JB) 2023-0005). כל ההליכים הניסיוניים שכללו בעלי חיים בוצעו בהתאם בקפדנות למדריך המכון הלאומי לבריאות לטיפול ושימוש בבעלי חיים במעבדה (מהדורה 8, 2011). פרוטוקול המחקר נבדק ואושר על ידי ועדת האתיקה הניסיונית של חברת Tianjin Genink Biological Technology Co., Ltd. (אישור מס' GENINK-20250074). חומרים מרכזיים וציוד ששימשו במחקר זה מפורטים בטבלת החומרים הנלווה.

תרבית תאים
קו התאים MH7A של דלקת מפרקים שראוטואידית (RA) בבני אדם תורבתו במדיום Modified Eagle Medium (DMEM) של Dulbecco, שהושלף עם סרום בקר עוברי (FBS) של 10% (v/v) ונשמר בטמפרטורה של 37°C באינקובטור לח עם 5% CO17.

בעלי חיים וטיפולים
בעלי החיים הוחזקו במתקן סטנדרטי ללא פתוגנים ספציפיים (SPF) עם מערכת כלוב מאוורר (IVC) בתנאים סביבתיים מבוקרים בקפדנות: טמפרטורה מבוקרת אקלים של 21.0–25.0 מעלות צלזיוס, לחות יחסית של 40–70%, תקופת פוטוגרפיה של 12 שעות, וחידוש מלא של אוויר 15 פעמים בשעה. לאחר תקופת הסתגלות של 7 ימים, חולקו העכברים באקראי לשש קבוצות ניסוי, כאשר חולדות נוספות נשמרו כגיבוי למקרים בלתי צפויים. מודל דלקת מפרקים אדג'ובנטית חריפה (AA) הושרה על ידי הזרקה תת-עורית של 100 מיקרוליטר של אדג'ובנט פרוינד מלא (CFA; 10 mg·mL-1) לכף הרגל האחוריתהימנית 18. הקבוצות הניסיוניות תוכננו כך: קבוצת ביקורת ריקה, קבוצת מודל AA, קבוצת ביקורת חיובית (מתוטרקסט, 0.9 מ"ג·ק"ג)19, ושלוש קבוצות טיפול ב-Smirnotine A שניתנו ברמות נמוכות (0.962 mg·kg-1), בינוניות (1.923 mg·kg-1) וגבוהות (3.846 mg·kg-1) בהתבסס על ערך IC₅₀.

חיזוי מחלות ומטרות מורכבות
בהתבסס על סקר פעילות ראשוני שנערך על ידי קבוצת המחקר שלנו, נבחרו שש תרכובות שהראו פעילות ביולוגית חיובית לבדיקה: חמישה אלקלואידים דיטרפנואידים (איור 3), בנזואילקונין (1), 14-בנזואיל-8-O-מתילקונין (2), (−)-(A-b)-14α-בנזוילוקסי-N-אתיל-13β, 15α-דיהידרוקסי-1α,6α,8β,16β,18-פנטמתוקסיאקוניטן (3), סמירנוטין A (4), ואקוניטין (5), יחד עם נגזרת קומרין אחת, סקופולטין (6)20. הסימונים הפשוטים של מערכת הזנת הקו (SMILES) של תרכובות אלו נאספו ממסד הנתונים PubChem (https://pubchem.ncbi.nlm. nih.gov/) או נוצרו באמצעות ChemDraw 18.0. סימונים אלו יובאו לאחר מכן למאגר הנתונים SwissTargetPrediction (https://swisstargetprediction.ch/), כאשר המין צוין כ"הומו ספיינס". המטרות הפוטנציאליות זוהו על ידי בחירת גנים עם ערך הסתברות > 0, ונאספו שמות יעדים וזהים תואמים של UniProt21,22.

רשתות PPI
הגנים החופפים של המטרה נותחו על ידי רשת אינטראקציה בין חלבון לחלבון (PPI) באמצעות מאגר הנתונים STRING (https://string-db.org/)23. הנתונים שנוצרו בפורמט TSV יובאו לאחר מכן ל-Cytoscape 3.9.1 להמשך ויזואליזציה וניתוח. הפרמטרים הטופולוגיים של הרשת חושבו באמצעות תוסף Network Analyzer המובנה. ברשת המוצגת, גודל הצומת ועוצמת הצבע מופו לערך הדרגה, בעוד שעובי הקצוות שיקף את עוצמת האינטראקציה בין המטרות. מטרות הליבה זוהו ודורגו על פי דרגת האסוציאציהשלהן 24.

אונטולוגיה גנטית (GO) ואנציקלופדיית קיוטו לגנים וגנומים (KEGG) לניתוח העשרת מסלולים
היעדים המשותפים הוגשו למסד הנתונים Metascape (https://metascape.org) לניתוחי העשרת מסלולי GO ו-KEGG25. תוצאות פונקציונליות הוצגו באמצעות פלטפורמת הביואינפורמטיקה WeiShengXin (https://www.bioinformatics.com.cn).

בניית הרשת של "רכיבי תרופות פעילים-מחלה-מטרות-מסלולים"
רכיבים פעילים והמטרות המקבילות שלהם נבדקו באופן שיטתי, ואחריהם ניתוח העשרה פונקציונלית לזיהוי מסלולי איתות עיקריים והיעדים הנלווים להם. אלמנטים אלו שולבו לאחר מכן באמצעות Cytoscape 3.9.1 לבניית רשת מקיפה של "תרופות–רכיבים פעילים–מחלה–מטרות–מסלולים'. לאחר מכן בוצע ניתוח טופולוגי באמצעות כלי Network Analyzer , שבו צומתים דורגו על פי פרמטרים מרכזיים, כולל דרגה וביניים, כדי לזהות אלמנטים מרכזיים ברשת.

עגינה מולקולרית של תרכובות מפתח למטרות ליבה
המבנים התלת-ממדיים של חלבוני המטרה המרכזיים, כולל ESR1 (9BQE), PTGS2 (5F19), EGFR (2XKN), GSK3B (5HLN), SRC (5MTJ) ו-ERBB2 (8U8X), נאספו ממאגר נתוני החלבונים של RCSB (http://www.rcsb.org/; נגיש ב-7 במאי 2025). מבני מורכבות נבנו ב-ChemDraw (גרסה 18.0) והוסבו לאחר מכן לפורמט SDF תלת-ממדי באמצעות מודול Chem3D משולב. תוצאות העגינה המולקולרית הוצגו באמצעות PyMOL, והזיקות הקשירה הוערכו לפי אנרגיית אינטראקציה (kcal·mol-1)26.

בדיקת כחיות תאים
תאי MH7A בשלב הצמיחה הלוגריתמי הוזרעו ללוחות של 96 בארות בצפיפות של 5 ×-103 תאים בכל באר. עם הגעה ל-80% מפגש תאים, טופלו תחילה בליפופוליסכריד (LPS) (1 מיקרוגם·מיליטר-1) למשך 6 שעות ולאחר מכן נחשפו לריכוזים משתנים של סמירנוטין A (5, 25, 50, 75 ו-100 מיקרוג·מ"ל-1). כל קבוצת טיפול הוקמה ברביעייה ודגרה במשך 24 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס תחת 5% CO₂. לאחר הדגירה, נוספו 100 מיקרוליטר של 10% תמיסת CCK8 לכל באר, ואחריה דגירה נוספת בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 2 שעות. הספיגה ב-450 ננומטר נמדדה באמצעות קורא מיקרופלט.

מבחן ELISA בתאי MH7A
הסופרנטנט נאסף בצנטריפוגה ב-2000 × גרם למשך 20 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. רמות הציטוקינים הדלקתיים, כולל IL-6, IL-1β, TNF-α ו-IL-10, נמדדו בסופרנטנט באמצעות ערכות ELISA מתאימות, בהתאם להוראות היצרן.

מדידת רמת נפיחות האצבעות
רמת הנפיחות של כף הרגל האחורית הימנית הוערכה על ידי מדידת נפח הכפות כל 3 ימים לאחר המידול. המדידות נערכו פעמיים לכל חולדה ונמדדו בממוצע. התגובה הדלקתית נמדדה כאחוז העלייה בנפח הכפות ביחס לקו הבסיס.

figure-protocol-1

מדידת מדד האיברים
כל העכברים הורדמו והושמתו 24 שעות לאחר הטיפול האחרון. השיטה ההומנית המוכרת על ידי הקהילה הווטרינרית הבינלאומית מאומצת. ראשית, ריכוז גבוה (5%) של איזופלוראן משמש להרדמה עמוקה של בעל החיים. כאשר החיה מאבדת את ההכרה ואת כל הרפלקסים, החזה נפתח והלב נחתך, כך שהחיה תמות ללא כאב וללא תחושה. הטחול והתימוס נכרתו מיד ונשקלו. לאחר שטיפה במי מלח רגילים, הלחות העודפת על פני הרקמה הוסרה על ידי סינון בנייר סינון, ומשקל האיברים הרטוב נרשם27.28.

figure-protocol-2

המטוקסילין ואאוזין (HE)
כדי לשמור על שלמות דגימות רקמת הכף, נאסף ואוחסן את כל החלק הדיסטלי למפרק הקרסול הימני של כל חולדה. לחתך השתמשו ברקמת כף הרגל הנפוחה. הליך הדגימה היה כדלקמן: הרקמה כ-1 ס"מ מעל מפרק הקרסול הימני ננתכה לחלוטין, הפרווה הוסרה, וגזע העצם נחתך בקצה הפרוקסימלי. הדגימה קיבעה מיד בתמיסת 10% פרפורמלדהיד. לאחר הקיבוץ, הרקמה הונחה בתמיסת דקלציפיקציה של 15% EDTA. הדקלציפיקציה נבדקה כל 3 ימים, והתמיסה רעננה לפי הצורך עד שהרקמה התרככה, מה שמעיד על סיום הדקלציפיקציה. הרקמה יובשה לאחר מכן באמצעות סדרת אתנול מדורגת (75% ל-4 שעות, 85% ל-2 שעות, 90% לשעה וחצי, 95% לשעה, ושתי החלפות של 100% אתנול למשך 0.5 שעות). החלקים עברו דה-פרפין, הודרו מחדש באמצעות אתנול, צובקו בהמטוקסילין במשך 10 דקות, נשטפו במי ברז, הובחנו בחומצה כלורית–אתנול במשך 10 שניות, נשטפו במי ברז, כחולו, שטפו שוב, טבלו באתנול 85% במשך 5 דקות, צבעו באאוזין במשך 5 דקות, שטפו במי ברז במשך 3 שניות, ייבשו, נוקו והותקנו לתצפית29.

בדיקת ELISA לסרום חולדה
דגימות הדם צונטרו ב-2000 × גרם למשך 20 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס, והסופרנטנט שהתקבל נאסף לניתוח ציטוקינים. הריכוזים של IL-1β, IL-6 ו-TNF-α נקבעו באמצעות ערכות ELISA מסחריות, בהתאם לחלוטין לפרוטוקולי היצרן. נוצרה ועקומה סטנדרטית הותאמה באמצעות תוכנת cvxpt32, ורמות הביטוי של כל ציטוקין חושבו על ידי אינטרפולציה של ערכי הספיגה למשוואת העקומה הסטנדרטית המתאימה. ריכוזי החלבון הסופיים חושבו מהמדידות הניסיוניות בפועל.

ניתוח תגובת שרשרת פולימראז כמותית (qPCR)
RNA כולל בודד מתאי סינוביאל באמצעות תגובת טריזול, כאשר הפרדת פאזה הושגה באמצעות תוספת כלורופורם30. ערכת שעתוק הפוך מסחרית שימשה לאחר מכן לסנתזת cDNA מה-RNA המבודד, תוך שמירה קפדנית על הוראות היצרן. qRT-PCR בוצע באמצעות תגובת SYBR Premix. גליצראלדהיד-3-פוספט דה-הידרוגנאז (GAPDH) שימש כגן ייחוס אנדוגני, ורמות הביטוי היחסיות של הגנים חושבו באמצעות שיטת 2-ΔΔCt . רצפי הפריימר הבאים שימשו: GAPDH קדימה: ACAGCAAGGGTGGTGGGAC, ו-GAPDH הפוך: TTTGAGGGTGCAGCGAACTT; IL-17A קדימה: CTGATGCTGTGCTGCTGCTACTGA, ו-IL-17A הפוך: TGGAACGGTTGTAGTAGCTGA; TRAF6 קדימה: ACATTTCCCTCTGTCCACAC, ו-TRAF6 אחורה: TTAGCATCCATGACCTCTTCGT; IL-10 קדימה: CTGCAGGACTTTAAGGGTTACTT, ו-IL-10 אחורה: CTTGCTTTTATTCACAGGGGA; IL-1β קדימה: CCTGTGTGATGAAAGAGGGC, ו-IL-1β הפוך: TATGTCCCGACCATTGCTGT; IL-6 קדימה: GTTGCCTTCTTGGGGACTGATG, ו-IL-6 אחורה: TACTGGTCTGTGTGTGTGTGTGTGTGT.

הפקת חלבון ו-Western bloting
רקמת סינוביאלית נבדקה בבופר RIPA, וריכוזי החלבון נמדדו באמצעות ערכת בדיקה של חומצה ביצינכונינית (BCA). לבדיקת Western Bloting, ליזטים המכילים כמויות שוות של חלבון נחשפו לאלקטרופורזה של ג'ל נתרן דודציל סולפט-פוליאקרילאמיד (SDS-PAGE) ולאחר מכן הועברו לממברנות פוליווינילידין פלואוריד (PVDF). לאחר חסימה עם 5% חלב דל שומן במי מלח עם טריס-בופר עם 0.1% טווין (TBST) למשך שעתיים בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס, הממברנות נדגרו במהלך הלילה בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס עם נוגדנים ראשוניים (GAPDH 1:50000; P-PI3K 1:1000; PI3K 1:1000; P-AKT 1:3000; AKT 1:6000). לאחר שטיפה נרחבת עם TBST, הממברנות הגיבו עם נוגדנים משניים מצומדים לפרוקסידאז חזרת (HRP) (Anti-Mouse IgG 1:10000; אנטי-ארנב IgG 1:1000) למשך שעתיים בטמפרטורת החדר. לאחר סדרה נוספת של שטיפות TBST, הוצגו רצועות חלבון באמצעות מצע כימילומינציה משופרת (ECL). עוצמות הרצועות נמדדו באמצעות תוכנת ImageJ ונרמלו ל-GAPDH כבקרת עומס.

ניתוח סטטיסטי
כל הנתונים נותחו באמצעות תוכנת Graphpad Prism 9.5 ומוצגים כסטיית תקן ממוצעת ±±. השוואות סטטיסטיות בוצעו באמצעות ANOVA חד-כיווני במידת הצורך. ערך p של פחות מ-0.05 נחשב למובהק סטטיסטית. בהשוואה לקבוצת הביקורת: *p < 0.05, **p < 0.01, p < 0.001, ו-p < 0.0001; בהשוואה לקבוצת Model/LPS: #p < 0.05, ##p < 0.01, ###p < 0.001, ו-####p < 0.0001.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

השפעות נגזרות מטוטלת A. על מטרה אנטי-RA
המבנים התלת-ממדיים של שש התרכובות נאספו בפורמט SDF, ומספרי SMILES הועלו למסד הנתונים SwissTargetPrediction לחיזוי מטרות. מטרות עם הסתברות גבוהה מ-0 נשמרו, והתוצאות יוצאו כקובץ CSV. לאחר הסרת כפילויות, זוהו בסך הכל 97 מטרות פוטנציאליות הקשורות לתרכובות.

מטרות מחלה הקשורות לדלקת מפרקים שגרונית (RA) נאספו ממאגרי GeneCards, OMIM ו-TTD, והניבו 3520, 5 ו-3 מטרות, בהתאמה. לאחר מיזוג והסרת כפילויות, ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר משולב זה מספק תובנות מכניות חדשות לגבי פעילות דלקת מפרקים נגד ראומטואיד של סמירנוטין A, אלקלואיד C19-דיטרפנואיד ממטוטלת Aconitum N. Busch. הממצאים שלנו מראים שסמירנוטין A משפר דלקת RA באמצעות עיכוב ממוקד של מסלול האיתות PI3K/Akt, המייצג מנגנון שונה מאלקלואידים דיטרפנואידים שדווחו בעבר.

השילוב של חיזוי פרמקולוגיה ברשת ואימות עגינה מולקולרית זיהה בהצלחה את EGFR ו-PTGS2 כמטרות עיקריות, עם זיקות קשירה יוצאות דופן של -9.5 ו-10.2 קקלורי-מולה⁻

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים כי אין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים ידועים או מערכות יחסים אישיות שיכולות להיראות כמשפיעות על העבודה המדוונת במאמר זה.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה נתמך כלכלית על ידי פרויקט הנוער של קרן מדעי הטבע של מחלקת המדע והטכנולוגיה של צ'ינגהאי (מס' 2022-ZJ-950Q) והקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (NSFC) (מס' 82460845).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
AceQ qPCR SYBR Green Master Mixואזימהשאלה 111
נוגדן עכבר מונוקלונלי AKT (60 kDa)ווהאן סניינג ביוטכנולוגיה60203-2-Ig
ערכת בדיקת חלבון BCAביוטכנולוגיה ג'יבייסי בגואנגג'ואוG3522
תקן BSAביוטכנולוגיה ג'יבייסי בגואנגג'ואוG8532
מדיום שלם לתאי MH7Aביוטכנולוגיה פוהנג בשנגחאיFH-MH7A
ערכת ELISA ל-IL-10לנצ'אנגשואו ביוטכנולוגיהED-13626
ערכת ELISA ל-IL-17Aלנצ'אנגשואו ביוטכנולוגיהED-10344
ערכת ELISA ל-IL-1 ובטא;לנצ'אנגשואו ביוטכנולוגיהED-10351
ערכת אליסה ל-IL-6לנצ'אנגשואו ביוטכנולוגיהED-10377
ערכת ELISA עבור TNF-αלנצ'אנגשואו ביוטכנולוגיהED-11776
מערכת PCR כמותית פלואורסצנטיתמערכות ביולוגיות יישומיותVIIA-7
נוגדן עכבר מונוקלונלי GAPDHווהאן סניינג ביוטכנולוגיה60004-1-Ig
צנטריפוגה מקוררת מהירהציוד כלי נגינה של הונאן קצ'נגHI-16KR
HiScript II Q Select RT SuperMix עבור qPCRואזימהR223
נוגדן משני נגד עכברים לעז המסומן על ידי HRPווהאן סניינג ביוטכנולוגיהSA00001-1
נוגדן משני נגד ארנבים שמסומן על ידי HRPביוטכנולוגיה ביוטייםA0208
קו סינוביוציטים דמויי סינוביוציטים בדלקת מפרקים שגרונית אנושית MH7Aקיסאי ביוטכנולוגיהQS-H075
קורא מיקרופלטביו-טקMQX200
מיקרוסקופלייקהFLEXACAM C1
קורא מיקרופלט רב-מצבימכשירים מולקולרייםFlexStation 3
P-AKT (60 kDa) נוגדן לארנב פוליקלונליווהאן סניינג ביוטכנולוגיה28731-1-AP
מיקרוטום פרפיןלייקהRM 2016
מגבר PCRמערכות ביולוגיות יישומיותproFlex
מלח עם בופר עם פוספט (1&φ; PBS)קיסאי ביוטכנולוגיהQS-S001
PI3K (85 kDa) נוגדן ארנב פוליקלונליזיקהAF6241
P-PI3K (85 kDa) נוגדן ארנב פוליקלונליזיקהAF3242
סמירנוטין Aבודד וזוהה על ידי המעבדה שלנוC39H49NO11
מייבש רקמותווהאן ג'ונג'יה אלקטרוניקהJT-12J
מכונת הטמעת רקמותווהאן ג'ונג'יה אלקטרוניקהJB-L6
מכונת פיזור ואפייה לרקמותווהאן ג'ונג'יה אלקטרוניקהJK-6
טריזולאמביון15596-026
תמיסת עיכול תאי טריפסין (0.25% טריפסין,   עם EDTA, ללא פנול אדום)קיסאי ביוטכנולוגיהQS-S401

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Perera, J., Delrosso, C. A., Nerviani, A., Pitzalis, C. Clinical phenotypes, serological biomarkers, and synovial features defining seropositive and seronegative rheumatoid arthritis: a literature review. Cells. 13 (9), 743(2024).
  2. Jiang, N., Tian, X. P., Zeng, X. F. Interpretation on the 2024 Chinese for the diagnosis and treatment of rheumatoid arthritis. Med J PUMCH. 16 (1), 28-34 (2025).
  3. Nygaard, G., Firestein, G. S. Restoring synovial homeostasis in rheumatoid arthritis by targeting fibroblast-like synoviocytes. Nat Rev Rheumatol. 16 (6), 316-333 (2020).
  4. Dumoulin, Q. A., et al. Development of rheumatoid arthritis after methotrexate in anticitrullinated protein antibody-negative people with clinically suspect arthralgia at risk of rheumatoid arthritis: 4-year data from the TREAT EARLIER trial. Lancet Rheumatol. 6 (12), e827-e836 (2024).
  5. Zhang, R. Y., et al. Mechanisms of NLRP3 inflammasome in rheumatoid arthritis and osteoarthritis and the effects of traditional Chinese medicine. J Ethnopharmacol. 321, 117432(2024).
  6. Parveen, A., Wal, P., Kumar Rai, A., Wal, A. An outlook of substantial progress in nanotechnology emerged in treatment approaches for rheumatoid arthritis. Curr Drug Ther. 19 (3), 289-301 (2024).
  7. Shen, P., et al. Wutou decoction attenuates rheumatoid arthritis in rats through SIRT1-mediated deacetylation of the HMGB1/NF-κB pathway. J Ethnopharmacol. 337, 118921(2025).
  8. Wang, X. W., et al. Jingfang granules alleviates the lipid peroxidation induced ferroptosis in rheumatoid arthritis rats by regulating gut microbiota and metabolism of short chain fatty acids. J Ethnopharmacol. 339, 119160(2025).
  9. Wang, X. D., Mao, J. X. Systematic pharmacology-based strategy to investigate the mechanism of beta-sitosterol for the treatment of rheumatoid arthritis. Front Genet. 15, 1507606(2024).
  10. Liu, S., et al. Treatment of rheumatoid arthritis with alkaloids in natural medicines: a review. Mod Chin Med. 24 (4), 721-727 (2022).
  11. Tan, X. Y., et al. Rapid visual characterization of alkaloid changes in traditional processing of Tibetan medicine Aconitum pendulum by high-performance thin-layer chromatography coupled with desorption electrospray ionization mass spectrometry imaging. Front Pharmacol. 14, 1104473(2023).
  12. Yu, L. Q., et al. Traditional Tibetan medicine: therapeutic potential in rheumatoid arthritis. Front Pharmacol. 13, 938915(2022).
  13. Ai, C. Q. Sibu Yidian Sman Thang Detailed. , Qinghai Ethnic Publishing House. (2012).
  14. Zhang, X. R., et al. Medication regularity of Tibetan patent medicines for gZav-Grib disease based on data mining. Shanxi Med Periodical Press. 21 (16), 29923-29928 (2023).
  15. Liu, Y., et al. An integrated strategy of UPLC-Q-TOF/MS and HPTLC/PAD-DESI-MSI for the analysis of chemical variations: a case study of Tibetan medicine Tiebangchui. J Pharm Anal. 14 (4), 100907(2024).
  16. Li, C. Y., et al. Aconitum pendulum and Aconitum flavum: a narrative review on traditional uses, phytochemistry, bioactivities and processing methods. J Ethnopharmacol. 292, 115216(2022).
  17. Xie, C. M., et al. Triptolide suppresses human synoviocyte MH7A cells mobility and maintains redox balance by inhibiting autophagy. Biomed Pharmacother. 115, 108911(2019).
  18. Wang, X. W., et al. Exploration of protective effect and mechanism of Jingfang granules on rheumatoid arthritis based on network pharmacology and metabolomics. Chin Tradit Herb Drugs. 55 (23), 8067-8078 (2024).
  19. Yin, Q., et al. Anti-rheumatoid arthritis effects of traditional Chinese medicine Fufang Xiaohuoluo pill on collagen-induced arthritis rats and MH7A cells. Front Pharmacol. 15, 1374485(2024).
  20. Dong, D., et al. A new phenolic glycoside from roots of Aconitum pendulum. China J Chin Mater Med. 50 (22), 6380-6386 (2025).
  21. Wang, X., et al. Network pharmacology provides new insights into the mechanism of traditional Chinese medicine and natural products used to treat pulmonary hypertension. Phytomedicine. 135, 156062(2024).
  22. Nam, D. G., Kim, M., Choi, A. J., Choe, J. S. Health benefits of antioxidant bioactive compounds in ginger (Zingiber officinale) leaves by network pharmacology analysis combined with experimental validation. Antioxidants. 13 (6), 652(2024).
  23. Chen, G. Y., et al. Prediction of Rhizoma drynariae targets in the treatment of osteoarthritis based on network pharmacology and experimental verification. Evid Based Complement Alternat Med. 2021, 5233462(2021).
  24. Guo, Z. W., et al. Mechanism of crocin in improving Alzheimer's disease based on network pharmacology, molecular docking and cellular validation. Chin Tradit Herb Drugs. 56 (13), 4712-4723 (2025).
  25. Chen, G. Y., et al. Network pharmacology-based strategy to investigate the mechanisms of Cibotium barometz in treating osteoarthritis. Evid Based Complement Alternat Med. 2022, 1826299(2022).
  26. Zheng, Y. T., Xia, L. J., Zhang, X. J., Jin, M. Exploration of potential anti-inflammatory targets and key ingredients of Arisaematis rhizoma in treatment of major depressive disorder based on machine learning and molecular dynamics simulation. Chin Tradit Herb Drugs. 55 (15), 5174-5188 (2024).
  27. Guo, M., et al. Levamisole ameliorates rheumatoid arthritis by downregulating the PI3K/Akt pathway in SD rats. Pharmaceuticals. 17 (11), 1504(2024).
  28. Zhang, B. L., et al. Mechanism of Yiqi Yangyin Tongluo decoction regulating miR-885-5p/PTEN signaling pathway to regulate autophagy-inflammation in collagen-induced arthritis model rats. Liaoning J Tradit Chin Med. 52 (3), 182-189 (2025).
  29. Chen, G. Y., et al. Integrating network pharmacology and experimental validation to explore the key mechanism of Gubitong recipe in the treatment of osteoarthritis. Comput Math Methods Med. 2022, 7858925(2022).
  30. Li, J. Y., et al. Effect of Danggui Niantongtang on key factors of extrinsic and intrinsic apoptotic pathway in synovial tissue of adjuvant arthritis rats. Chin J Exp Tradit Med Form. 27 (4), 1-7 (2021).
  31. Xia, Z. X., Li, Q., Tang, Z. Y. Network pharmacology, molecular docking, and experimental pharmacology explored Ermiao wan protected against periodontitis via the PI3K/AKT and NF-κB/MAPK signal pathways. J Ethnopharmacol. 303, 115900(2023).
  32. Sabbah, D. A., Hajjo, R., Sweidan, K. Review on epidermal growth factor receptor (EGFR) structure, signaling pathways, interactions, and recent updates of EGFR inhibitors. Curr Top Med Chem. 20 (10), 815-834 (2020).
  33. Guo, X., et al. The antiangiogenic effect of total saponins of Panax japonicus CA Meyer in rheumatoid arthritis is mediated by targeting the HIF-1α/VEGF/ANG-1 axis. J Ethnopharmacol. 333, 118422(2024).
  34. Jiang, L., et al. Elucidating the role of Rhodiola rosea L. in sepsis-induced acute lung injury via network pharmacology: emphasis on inflammatory response, oxidative stress, and the PI3K-AKT pathway. Pharm Biol. 62 (1), 272-284 (2024).
  35. Bai, Y. M., Liang, S., Zhou, B. Yangyinghuoxue decoction exerts a treatment effect on hepatic fibrosis by PI3K-AKT pathway in rat model: based on network pharmacology and molecular docking. Aging (Albany NY). 16 (4), 3773(2024).
  36. Ba, X., et al. WTD attenuating rheumatoid arthritis via suppressing angiogenesis and modulating the PI3K/AKT/mTOR/HIF-1α pathway. Front Pharmacol. 12, 696802(2021).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Western BlotPCR
הסרטון יגיע בקרוב

מאמרים קשורים