פרוטוקולי איסוף הנתונים של NHANES אושרו על ידי הוועדה לסקירת אתיקה מחקרית של המרכז הלאומי לסטטיסטיקה בריאותית (NCHS). מכיוון שמאגרי הנתונים של NHANES זמינים לציבור, החוקרים אינם זקוקים לאישור נוסף מוועדות הביקורת המוסדיות (IRBs) שלהם.
חקר אוכלוסייה וקריטריוני זכאות
ה-NHANES עושה שימוש בעיצוב דגימה רב-שלבי של דגימה בשכבת, ואוספת מידע בריאותי ותזונתי מקיף באמצעות ראיונות עם משקי בית, בדיקות גופניות סטנדרטיות והערכות מעבדה במרכזי בדיקה ניידים (MEC). נתונים זמינים לציבור ממחזורי הסקר של 1999 עד 2004 נותחו. מכיוון שהנתונים היו אנונימיים לחלוטין ונגישים לציבור, מחקר רטרוספקטיבי זה לא דרש אישור אתי נוסף. המחקר כלל שני רכיבים: (1) ניתוח חתך הבודק את הקשר בין RAR להופעת מיגרנה, ו-(2) ניתוח קוהורט פרוספקטיבי שבודק את הקשר בין רמות RAR לתמותה מכל הסיבה בקרב אנשים עם מיגרנה כדי להעריך את ערכה הפרוגנוסטי. איור 1 ממחיש את עיצוב המחקר הכולל ואת תהליך בחירת המשתתפים, כפי שנדרש על פי הנחיות JoVE. בקצרה, נבחנו לראשונה 15,332 משתתפים בגיל ≥ 20. לאחר יישום קריטריוני ההדרה והתחשבות בנתונים חסרים, נכללו 8,781 משתתפים בניתוח החתך. נתונים חסרים טופלו באמצעות ניתוח מקרה מלא, שבו משתתפים עם ערכים חסרים למשתנים מרכזיים (RAR, מצב מיגרנה או משתנים משתנים) הוצאו כדי להבטיח שחזוריות. בניתוח הקוהורט, המשתתפים שזוהו כסובלים ממיגרנה (n = 1,762) נעקבו לאורך זמן כדי לחקור את הקשר בין RAR לסיכון לתמותה.
מדידה וסיווג של RAR
RDW ב-NHANES נמדד כחלק מהליכי ספירת דם מלאה סטנדרטיים במעבדה שבוצעו על ידי צוות מיומן. כל ערכי המעבדה, כולל RDW ואלבומין, התקבלו ממדידת בסיס אחת לכל משתתף. רמות אלבומין בסרום נקבעו באמצעות שיטת ברומוקרסול סגול (BCP) בתנאי pH סטנדרטיים. ה-RAR חושב כ-RDW (%) חלקי אלבומין בסרום (g·dL-1) ושימש רבות במחקרים קודמים כסמן מורכב לדלקת ומצב תזונה19. לניתוח החתך, המשתתפים סווגו לרבעונים (Q1–Q4) בהתבסס על התפלגות RAR באוכלוסיית המחקר הכוללת: Q1 (≤ 2.73), Q2 (> 2.73–2.93), Q3 (> 2.93–3.18), ו-Q4 (> 3.18). בניתוח הקבוצה, שכלל רק משתתפים עם מיגרנה, התפלגות ה-RAR השתנתה; הרבעונים חושבו מחדש בתוך תת-הקבוצה הזו: Q1 (≤ 2.74), Q2 (> 2.74–2.95), Q3 (> 2.95–3.23), ו-Q4 (> 3.23).
הערכת מיגרנה
מיגרנה (או כאב ראש חמור) ב-NHANES הוערכה באמצעות שאלון: נשאלו המשתתפים: "בשלושת החודשים האחרונים, האם היו לכם כאבי ראש או מיגרנות חמורים?" מחקרים קודמים, כולל מחקר שכיחות ומניעת מיגרנות וסקרים לאומיים רבים מבוססי NHANES, הראו התאמה טובה בין כאב ראש חמור שדווח על עצמו לבין מיגרנה שאובחנה קלינית 20,21,22. לכן, זיהוי מבוסס שאלון מספק גישה סבירה וניתנת להשוואה לזיהוי אנשים עם מיגרנה פוטנציאלית במחקרי אוכלוסייה.
הערכת תמותה
המעקב החל במועד בחינת ה-MEC ונמשך עד פטירתו או 31 בדצמבר 2019. תוצאות התמותה סווגו לפי קודי ICD-10 להערכת תמותה מכל הסיבה.
הערכת משתנים
הגורמים המבלבלים הפוטנציאליים נבחרו בהתבסס על הספרות הקודמת ועל הרלוונטיות הקלינית שלהם 23,24,25. המשתנים הדמוגרפיים כללו גיל, מין, גזע/אתניות (אמריקאי-מקסיקני, לבן לא-היספני, שחור לא היספני, אחרים), השכלה (< תיכון, תיכון, > תיכון), מצב משפחתי (נשוי/גר עם בן זוג לעומת לא נשוי), ויחס הכנסה לעוני משפחתי (PIR: < 1, 1–3, > 3). גורמי אורח החיים כללו סטטוס עישון (נוכחי, לשעבר ואף פעם) וצריכת אלכוהול (לעולם לא). המצב הפיזי הוצג על ידי BMI (< 25, 25–30 ו-> 30), ומצבים רפואיים כללו סוכרת מדווחת עצמית ויתר לחץ דם.
ניתוח סטטיסטי
כל הניתוחים לקחו בחשבון את עיצוב הסקר המורכב של NHANES על ידי שילוב משקלים של MEC, יחידות דגימה ראשוניות (אשכולות) ושכבות, והבטיחו הערכות מייצגות ברמה הארצית וניתנות לשחזור. משתנים רציפים הוצגו כמדיאנים משוקללים עם טווחי בין-רבעוניים (IQR) והושוו באמצעות מבחן קרוסקל–ווליס, בעוד שמשתנים קטגוריים הוצגו כאחוזים משוקללים והושוו באמצעות מבחן חי-ריבוע ראו–סקוט. מודלים של רגרסיה לוגיסטית משוקללת שימשו בניתוח החתך להערכת הקשרים בין RAR למיגרנה, כאשר התוצאות הוצגו כיחס סיכויים (ORs) ורווחי ביטחון של 95% (CI). בניתוח הקוהורטים, מודלים של סיכונים פרופורציונליים של קוקס יושמו להערכת הקשר בין רבעונים RAR לתמותה מכל הסיבה, כאשר התוצאות דווחו כיחס סיכון (HRs) ו-CI של 95%. נבנו שלושה מודלים היררכיים: מודל 0 לא היה מותאם; מודל 1 הותאם לגורמים דמוגרפיים; מודל 2 הותאם עוד לגורמים באורח החיים והפיזיות (עישון, אלכוהול, BMI); ודגם 3 הותאם גם למצבים רפואיים (יתר לחץ דם וסוכרת). רגרסיית ספליין קובייתי מוגבל (RCS), תוך שימוש ב-3 קשרים הממוקמים באחוזון העשירי, ה-50 וה-90 של התפלגות RAR, יושמה כדי לחקור קשרים לא ליניאריים פוטנציאליים בין RAR למיגרנה או תמותה. נוצרו עקומות הישרדות של קפלן–מאייר להשוואת הישרדות בין רבעונים של RAR, ועקומות מאפייני הפעלה של מקלט תלויות זמן (ROC) שימשו להערכת ביצועי החיזוי של RAR לתוצאות תמותה. ניתוחי תת-קבוצות בוצעו באמצעות מונחי אינטראקציה, כאשר P דו-צדדי < 0.05 נחשב למובהק סטטיסטית. כל הניתוחים בוצעו באמצעות תוכנת R (גרסה 4.2.2).