מחקר זה פיתח ואישר באופן ראשוני מודל עכברוש של עיכוב בהחלמת פצעים בתנאי היפוקסיה היפוברית בגובה רב.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר מחקר
* These authors contributed equally
מחקר זה פיתח ואישר באופן ראשוני מודל עכברוש של עיכוב בהחלמת פצעים בתנאי היפוקסיה היפוברית בגובה רב.
מצבים היפובריים בגובה רב עלולים לגרום להיפוקסיה ממושכת בפצע ולפגיעה בריפוי, אך מודלים סטנדרטיים נשארים נדירים. במחקר זה פיתחנו מודל ריפוי מאוחר של פצעים ואימתנו אותו באופן ראשוני על ידי סימולציה של היפוקסיה בגובה רב באמצעות מערכת היפובארית מבוקרת. העכברים אוחסנו בגבהים מדומים של 3000 מטר (לחץ אוויר: 70.1 קילופסקל, לחץ חמצן חלקי: 14.7 קילופסקל) ועד 8000 מ' (לחץ אוויר: 35.6 קילופסקל, לחץ חמצן חלקי: 7.5 קילופסקל) כדי לקבוע ספי בטיחות, עם הערכת לחץ חמצוני והיפוקסיה בעור. התוצאות הראו סיכון מוגבר לתמותה בגובה מדומה של 6000 מטר, עם סבילות שנצפתה מתחת ל-5000 מטר. גבהים גבוהים היו קשורים להחמרת לחץ חמצוני ולהחמרת היפוקסיה בעור; הפגינו עיכובים תלויים בגובה בריפוי הפצעים, ירידה בפרפוזיה, דיכוי שינוי קולגן והחמרה בתגובות דלקתיות. למרות הגברת גורמי התחדשות כלי דם, צפיפות המיקרווסקולרית ירדה. בסך הכול, מחקר זה פיתח ואימת באופן ראשוני מודל חולדה המתאים לחקירת מנגנונים והתערבויות בפצעים כרוניים שנגרמו מהיפוקסיה בגובה רב.
תיקון פצעי עור מהווה אתגר קליני נרחב ומשמעותי. מטראומה חריפה ועד סוגים שונים של פצעים שאינם מחלימים, מצבים אלו מטילים נטל מתמשך על מערכות הבריאות ועל איכות החיים של מטופלים 1,2,3,4,5,6. החלמת הפצע אינה אירוע יחיד אלא תהליך רב-שלבי מתואם וחופף: תאים דלקתיים, תאי סטרומל, קרטינוציטים ומערכת המיקרווסקולרית בונים יחד מחסומים ומחדשים רקמות תחת ויסות המפרק של המטריצה החוץ-תאית ורשתות איתות מגוונות 7,8,9,10 . בהתחשב בטבע התיקון הדורש אנרגיה רבה וברגישותו הקיצונית לסביבה הפנימית, שינויים במטבוליזם המערכתי ובמצבים פיזיולוגיים — כגון לחץ חמצוני מוגבר, חוסר ויסות חיסוני והפרפוזיה מיקרוקולטורית לקויה — עלולים להפריע למפל התיקון התקין בנקודות רבות, מה שמוביל לדלקת ממושכת, התחדשות לא מספקת ועיצוב מחדש לא תקין 9,11,12,13,14, 15.
אספקת החמצן היא גורם מרכזי המגביל את תהליכי תיקון הפצעים, משתתפת במטבוליזם אנרגיה ובנדידה/התרבות של תאים, תוך ויסות תגובות אנגיוגנזה ודלקתיות דרך מסלולי איתות היפוקסיה 16,17,18. היפוקסיה חולפת בשלב הפצע המוקדם מייצבת את גורם היפוקסיה ומתחילה תוכניות תיקון אדפטיביות. עם זאת, כאשר היפוקסיה הופכת למוגזמת או מתמשכת, אף על פי שאותות אנגיוגנזה עשויים להיות מוגברים באופן מפצה, הם עלולים להיכשל לתרגם לשחזור מיקרווסקולרי יעיל. בינתיים, החלפת פנוטיפ של מקרופאגים ורגרסיה דלקתית הופכים לרגישים יותר לחוסר איזון, ויוצרים מעגל אכזרי של "חסר היפוקסיה-דלקת-שיקום כלי דם" 19,20,21,22. זה רלוונטי במיוחד בסביבות בגובה רב: לחץ אטמוספרי מופחת את לחץ החמצן החלקי המעורר, וגורמת להיפוקסיה מתמשכת שמגבירה את הסיכון לפגיעה בריפוי פצעים וסיבוכים הקשורים לזיהומים 23,24,25,26.
חשיפה לגבהים גבוהים מעוררת תגובת לחץ היפוקסית בולטת בבני אדם27. סביבות בגובה רב עלולות להוביל להיפוקסיה רקמתית מתמשכת, פרפוזיה לא מספקת ותגובות דלקתיות באתרי פצע28. שינויים פתופיזיולוגיים אלו עלולים לפגוע בתהליך הריפוי על ידי קידום מיני חמצן ריאקטיביים מופרזים, הפעלת פרוטאזות וגרימת הזדקנות תאית, תוך שיבוש תפקוד תאי גזע מזנכימיים29,30. מחקרים שהעריכו ישירות את השפעות החשיפה לגובה רב על החלמת פצעי העור האנושיים נותרו מוגבלים. לכן, השימוש במודלים של בעלי חיים היפוקסיים היפובריים יכול לסייע באימות השפעת גורמים הקשורים לגובה על תיקון הפצע.
מודלים קודמים של בעלי חיים בגבהים קבועים דיווחו על עיכוב בהחלמת פצעים; עם זאת, ההשפעות התלויות בגובה, סף הבטיחות לחשיפה ממושכת למצבים היפובריים, והראיות הישירות להיפוקסיה מקומית בעור נותרולא ברורים. יתרה מזאת, קיימת הערכה שיטתית של ליקויי ריפוי, מה שהגביל את המחקר על המנגנונים הבסיסיים ואת זיהוי יעדי ההתערבות הפוטנציאליים31. במחקר זה, פיתחנו ואימתנו באופן ראשוני מודל פצע עור המבוסס על מערכת בקרה היפוברית, לסימולציה של היפוקסיה היפובארית בגובה רב בתנאים מבוקרים. באמצעות אסטרטגיית חשיפה מדורגת לגובה מדורג, הגדרנו תחילה את מרווחי הבטיחות לחשיפה היפוברית מתמשכת והערכנו את ההשפעות הביולוגיות של היפוקסיה היפוברית באמצעות אינדיקטורים מערכתיים. חשוב לציין, אימתנו עוד יותר ב-vivo שהסביבה ההיפובארית אכן גרמה להגבלת אספקת חמצן מקומית בעור. בהמשך הראינו כי היפוקסיה היפוברית מתמשכת מעכבת את סגירת הפצע באופן תלוי בגובה, בליווי שינויים היסטולוגיים וחריגות מרכזיות במסלולים. בסך הכול, מחקר זה פיתח ואישר באופן ראשוני פלטפורמת מודלים של בעלי חיים לפצעים כרוניים הקשורים להיפוקסיה בגובה רב, מה שאפשר הבהרה של מנגנונים והערכה שיטתיתשל אסטרטגיות טיפוליות מאוחרות יותר.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כל ההליכים הניסיוניים שכללו בעלי חיים נבדקו ואושרו על ידי ועדות האתיקה של אוניברסיטת מדעי האלקטרוניקה של סין (מס' 106142025091534170) והאוניברסיטה הרפואית של הצבא (מס' ) AMUWEC20265509). זרימת העבודה הגרפית של עיצוב הניסוי והניתוח המעורבים במחקר זה מוצגת באיור 1. בנוסף, הריאגנטים והציוד ששימשו במחקר זה מופיעים בטבלת החומרים.
בעלי חיים ניסיוניים והצהרה אתית
מחקר זה השתמש בזכרים של חולדות ספרג-דולי (SD), שנרכשו מחברת צ'נגדו דשואו לאברטור לוויילר, סין. כל בעלי החיים עברו תקופת הסתגלות של 7 ימים בתנאים סטנדרטיים לפני הניסוי.
קריטריוני הכללה והחרגה
קריטריוני הכללת בעלי חיים היו: זכרים חולדות SD, בגיל 6 עד 8 שבועות, משקל גוף 200–250 גרם, נראים בריאים ומפגינים התנהגות תקינה, וללא נגעים או זיהומים בעור.
הקריטריונים להוצאת בעלי חיים היו כדלקמן: פצעים המראים זיהום ברור לאחר מודל פצעים; פצעים עם ריפוי או חתכים לא סטנדרטיים; מוות במהלך הניסוי או מוות בטעות כתוצאה מהרדמה.
קריטריוני החרגת נקודות הנתונים היו: תמונות פצע עם גלדים נרחבים, חסימת שיער או תאורה לא אחידה; תמונות הדמיית ניגודיות לייזר (LSCI) המציגות ארטיפקטים של תנועה; חתכי רקמה המציגים קמטים ברורים, רסיסים, או אזורים יעדיים חסרים; דגימות סרום המראות המוליזה ברורה; תמונות אימונופלואורסצנציה (IF) או אימונוהיסטוכימיה (IHC) עם חשיפה יתר או מיקום שגוי של נוגדנים
טיפול בהחרגות:
עבור כל בעלי החיים או נקודות הנתונים שהוחרגו, נתונים תקפים הושגו מחדש באמצעות ניסויים משלימים כדי להבטיח שגודל המדגם הסופי התקף לכל קבוצה יהיה N ≥ 3 לכל ניתוחי נקודת הקצה.
מערכת בקרה היפובארית וסביבה מדומה של היפוקסיה בגובה רב
הסביבה המדומה של היפוקסית בגובה רב הוקמה באמצעות מערכת בקרה היפובארית. מערכת זו מאפשרת ויסות מדויק של לחץ אוויר תא הנוסעים כדי לשחזר לחץ אטמוספרי התואם לגבהים שונים, ובכך מורידה את לחץ החמצן החלקי בסביבה ומעודדת חשיפה מבוקרת להיפוקסית (איור 2A).
לחץ תא הנוסעים הותאם לדמות גבהים של 3000 מ', 4000 מ', 5000 מ', 6000 מ', 7000 מ' ו-8,000 מ', עם פרמטרים מפורטים שסופקו בטבלה 1. במהלך הניסוי, חולדות SD שוכנו בקבוצות בהתאם להקצאת הניסוי שלהן. במהלך הפעלת התא, הלחץ הפנימי, הטמפרטורה והלחות נבדקו באופן רציף כדי להבטיח שלכל תנאי הסביבה שמעבר ללחץ, כל תנאי הסביבה נשארו דומים לאלו של בית המעבדה הסטנדרטי. סביבת המגורים שמרה על טמפרטורה של 22–24 מעלות צלזיוס, לחות יחסית של 50%–60%, מחזור אור/חושך של 12 שעות, וסיפקה גישה חופשית לאוכל סטנדרטי ומים לשתייה.
הערכת בטיחות של חשיפה היפוברית וניתוח הישרדות
כדי להעריך את שולי הבטיחות לחשיפה היפוברית מתמשכת, חולדות סומנו בנפרד והוקצו באקראי לקבוצות ניסוי באמצעות רצף מספרים אקראי שנוצר במחשב (פונקציית RAND באקסל). ההקצאה בוצעה על ידי חוקר שלא היה מעורב בטיפול בבעלי חיים לאחר מכן, איסוף נתונים או הערכת תוצאות. בהתבסס על מחקרי בעלי חיים עיקריים שכללו חשיפה למדרונים בגובה רב, גודל המדגם של כל קבוצה נקבע על12,33. העכברים חולקו לקבוצת ביקורת נורמוקסית (500 מ' מעל פני הים) וקבוצות גובה מדומה בגובה 3000 מ', 4000 מ', 5000 מ', 6000 מ', 7000 מ' ו-8,000 מ'. העכברים בכל קבוצה הוחזקו ברציפות בסביבתם למשך 30 יום. כל יומיים, מערכת הבקרה ההיפוברית משוחזרת לזמן קצר למצב של גובה פני הים למשך 30 דקות כדי לאפשר ניקוי כלובים ואספקת מזון ומים. במהלך דקומפרסיה ודחיסה מחדש, קצב שינוי הלחץ נשמר בכ-300 מ' לדקה כדי למזער את הסיכון לברוטראומה. במהלך תקופה זו, המצב הכללי של כל העכברים וכל אירועי תמותה נצפו ונרשמו מדי יום. עקומות הישרדות צוירו באמצעות שיטת קפלן-מאייר, ובוצעו מבחני דירוג לוגריתמי להשוואת הבדלים בהישרדות בין קבוצות.
זיהוי סמנים הקשורים ללחץ חמצוני בסרום
ביום ה-21 של החשיפה ההיפוברית, נאספו דגימות דם ורידי מחולדות תחת הרדמה. לאחר עמידה בטמפרטורת החדר, הסרום הופרד באמצעות צנטריפוגה (1,000 × גרם למשך 15 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס) ואוחסן בטמפרטורה של מינוס 80 מעלות צלזיוס לשימוש עתידי. רמות הסרום של לקטט דה-הידרוגנאז (LDH), מלונדיאלדהיד (MDA) וסופראוקסיד דיסמוטאז (SOD) נמדדו באמצעות ערכות בדיקה מתאימות.
הערכת מצבים היפוקסיים ברקמת עור
ערכת גילוי היפוקסיה שימשה להערכת היפוקסיה ברקמת עור. בקצרה, בימים 4 ו-7 של החשיפה להיפובריק, חולדות הוזרק תוך-פריטונית עם פימוזיד (60 מ"ג/ק"ג); העכברים הושמתו שעה לאחר ההזרקה, ונאספה רקמת עור מהגב לניתוח. ההליך המפורט של המתת החסד הוא כדלקמן: לפי הנחיות האגודה הווטרינרית האמריקאית בנושא המתת חסד, בעל החיים הוכנס לתא השראה והושרה הרדמה באמצעות חמצן המכיל 4–5% איזופלורן. לאחר שהחיה מאבדת את ההכרה, ריכוז האיזופלוראן יורד ל-2–3% ונשמר לפחות 10 דקות. לפני ביצוע ניתוק צוואר הרחם כאמצעי אישור, יש לוודא שהדופק והנשימה הפסיקו. דגימות הרקמה הושמורו בקירור בחנקן נוזלי ואוחסן בטמפרטורה של -80°C לשימוש מאוחר יותר. החתכים הוכנו באמצעות מיקרוטום קריוסטטי. בוצעה צביעת IF כדי לסמן אזורים היפוקסיים בתוך הרקמה.
כל תמונות הפלואורסצנציה צולמו באמצעות סורק שקופיות אוטומטי. הגדרות פרמטרי הפלואורסצנציה היו כדלקמן: DAPI (אורך גל עירור 365 ננומטר ± 10 ננומטר, אורך גל פליטה 440 ננומטר ± 40 ננומטר), Cy3 (אורך גל עירור 542–566 ננומטר, אורך גל פליטה 579–611 ננומטר), ו-Cy5 (אורך גל עירור 628 ננומטר, אורך גל פליטה 692 ננומטר). אותות היפוקסיה נותחו כמותית באמצעות תוכנת ImageJ.
מודל פצע עור בעובי מלא בעכברים
כדי להעריך שינויים בריפוי פצעים בעור בתנאים היפובריים ממושכים, חולדות קובצו תחילה והסתגלו לסביבה שלהן לפני מידול הפצעים. העכברים ממוספרים באופן אישי והוקצו באקראי לקבוצת הביקורת הנורמוקסית או לקבוצות החשיפה ההיפוברית, תוך סימולציה של גבהים של 3000 מ', 4000 מ' ו-5000 מ', באמצעות רצף מספרים אקראי שנוצר במחשב (פונקציית RAND ב-Excel). האקראיות בוצעה על ידי חוקר שלא היה מעורב ביצירת הפצע, בטיפול לאחר הניתוח או בהערכת התוצאה. הפרמטרים המפורטים לכל קבוצה הם כדלקמן: קבוצת הביקורת הנורמוקסית הייתה ממוקמת בגובה 500 מטר מעל פני הים (לחץ אטמוספרי: 101 קילופסקל, לחץ חמצן חלקי: 21 קילופסקל); קבוצת 3000 מטר (70.1 קילופסקל, 14.7 קילופסקל); קבוצת 4000 מטר (61.6 קילופסקל, 13.1 קילופסקל); וקבוצת 5000 מטר (54 קילופסקל, 11.3 קילופסקל).
לאחר תקופת הסתגלות בת 7 ימים, חולדות SD הורדמו ונשמרו תחת הרדמה באמצעות שאיפת איזופלורן של 2%. במקביל, ניתנת זריקת חדירה מקומית של 5% לידוקאין המכיל אפינפרין (יחס דילול: 1:100,000) לאתר הניתוח המסומן כדי לספק הקלה סביב הניתוח וההמוסטזיס. באמצעות מאגר ביופסיה (עם להב עגול בקוטר 10 מ"מ בבסיס), יוצרים חתך עור. לחץ את אגרוף הביופסיה על עורו הגבי של העכברוש, ואז סובב אותו בעדינות כך שהלהב העגול יחתוך בהדרגה את העור עד שיגיע לפאציה התת-עורית השטחית. לאחר הסרת מכת הביופסיה, ייווצר חתך עור עגול רגיל בקוטר של כ-10 מ"מ.
לאחר יצירת הפצעים, העכברים בכל קבוצה הוחזרו לסביבתם המקורית ונשמרו בסביבתם המקורית עד לנקודת הסיום הניסויית, מה שהבטיח שכל תהליך החלמת הפצע יתקדם בתנאי החמצן שנקבעו מראש.
מקרו-הערכה של תהליך החלמת הפצע
תמונות הפציעה צולמו בימים 0, 2, 4, 6, 8, 10, 12 ו-14 לאחר הפציעה תחת תאורה אחידה ומרחק הדמיה עקבי. שטח הפצע נמדד באמצעות תמונה J. בקצרה, תמונות הפצע שהתקבלו בכל נקודת זמן יובאו לתמונה J, כויללו לפי מד הסקאלה, ושולי הפצע סומנו ידנית כדי לקבוע את אזורהפצע 34. ריפוי הפצע חושב כך: ריפוי הפצע (%) = (שטח הפצע ההתחלתי − שטח הפצע הנוכחי)/שטח הפצע ההתחלתי × 100%.
הערכת מיקרו-זרימת פצעים
ביום השביעי להחלמת הפצע, נבדקה הזרמת דם מיקרוקולטורית באזור הפצע באמצעות מערכת LSCI. לפני הבדיקה, חולדות הורדמו באמצעות שאיפה עם 2% איזופלוראן והוחזקו לשולחן ניתוח מבוקר טמפרטורה לשמירת טמפרטורת הגוף. אזור הפצע הגבי היה חשוף לחלוטין, וגשוש הלייזר המנומר הוצב אנכית כ-20 ס"מ מעל הפצע. הספק הגשושית הוגדר ל-110 מ"וואט, תדר הדגימה ל-30 הרץ, וזמן החשיפה ל-3 שניות. בתנאים חשוכים, יש לצלם תמונת זרימת דם בצבע פסאודו-צבעוני של אזור הפצע. השתמש בתוכנת LSCI כדי לתאר ידנית את אזור הפצע בתמונת זרימת הדם בצבע פסאודו-צבע; התוכנה מחשבת אוטומטית את ערך זרימת הדם עבור אותו אזור לאורך תקופה של 3 שניות (ביחידות שרירותיות [A.U.]). לבסוף, ייצא את ערכי הפרפוזיה לתוכנה מתאימה לגרוט.
צביעה היסטולוגית וניתוח שיפוץ קולגן
בעלי חיים הושמתו בנקודות זמן מוגדרות, ופצעים שלמים ורקמות עור סמוכות נקטפו, תוקנו, יובשו, הוטמעו בפרפין וחולקו. המטוקסילין ואאוזין (HE): משמשים להערכת רוחב הפצע, היקף האפיתל מחדש ועובי האפידרמלי המתחדש; צביעת הטריכרום של מסון: משמשת להערכת שקיעת סיבי קולגן וחישוב שבר נפח הקולגן; צביעת סיריוס אדומה: משמשת להבחנה בין קולגן סוג I (Col I) לקולגן סוג III (COL III) תחת מיקרוסקופ אור מקוטב ולחישוב יחס COL I/COL III.
צביעת אימונוהיסטוכימיה
חתכי פרפין עברו הסרת שעווה, החזרת נוזלים ושאיבת אנטיגן לפני צביעת IHC או IF. נוגדנים ראשוניים נדגרו במהלך הלילה בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס, ואחר כך נוספו נוגדנים משניים מתאימים. מידע ספציפי על נוגדנים ודילול מתאים מסופקים בטבלת החומרים. חתכי IHC פותחו עם DAB, בעוד שחתכי IF השתמשו בנוגדנים משניים פלואורסצנטיים עם צביעת נגד DAPI לגרעינים35,36. כל התמונות נאספו בתנאים זהים וכמותו באמצעות תוכנת ImageJ.
ניתוח סטטיסטי
כל הנתונים מוצגים כסטיית תקן ממוצעת ±. ניתוחים סטטיסטיים בוצעו באמצעות תוכנת GraphPad Prism. להשוואות בין קבוצות מרובות בנקודת זמן אחת, הוחל ניתוח חד-כיווני של שונות (ANOVA), וכאשר זוהה הבדל כולל משמעותי, נעשה שימוש במבחן ההשוואה המרובה של טוקי לניתוחים בין-קבוצתיים מאוחרים יותר. לנתוני ריפוי פצעים שנבדקו לאורך מספר נקודות זמן, בוצע ANOVA דו-כיווני כאשר קבוצת הטיפול והזמן נכללו כגורמים עצמאיים להערכת ההשפעות העיקריות וכן האינטראקציה ביניהן. ניתוחים לאחר מכן בוצעו גם הם באמצעות מבחן ההשוואה המרובה של טוקי. כדי להעריך את עוצמת הסטטיסטיקה נוספת, בוצע ניתוח עוצמה לאחר מכן בתוכנת G*Power בהתבסס על נקודת הקצה הראשית (ריפוי פצע ביום ה-14).
ניתוח הישרדות השתמש בשיטת קפלן-מאייר כדי לשרטט עקומות הישרדות, עם מבחני דירוג לוגריתמי להשוואת הבדלי הישרדות בין קבוצות. בהשוואות זוגיות בין קבוצות מרובות, תיקון בונפרון יושם לשליטה בסיכון לשגיאות מסוג I מתוך השוואות מרובות. כל המבחנים הסטטיסטיים היו דו-זנביים, כאשר P < 0.05 נחשבו מובהקים סטטיסטית.
כל הערכות התוצאה, כולל מדידות אזור הפצע, ניתוחים היסטולוגיים ואימונוהיסטוכימיים כמותיים, וניתוחי LSCI, בוצעו על ידי חוקר יחיד שהיה עיוור להקצאות קבוצות המחקר.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
אימות מרווחי בטיחות להיפוקסיה מתמשכת הנגרמת מלחץ נמוך
ניתוח הישרדות של קפלן–מאייר הראה שינוי הדרגתי כלפי מטה בעקומות ההישרדות ככל שהגובה המדומה עלה, כאשר אירועי התמותה נצפו לראשונה בקבוצת 6000 מטר (איור 2B). השוואות זוגיות עם תיקון בונפרוני לא הראו הבדלים מובהקים סטטיסטית בשיעורי ההישרדות בין קבוצת הביקורת לבין קבוצות 6000 מ' עד 8000 מ'. ביום ה-30, שיעורי ההישרדות הסופיים של קבוצת הביקורת, קבוצת 3000 מ', 4000 מ', 5000 מ', 6000 מ', 7000 מ'...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תנאים בגובה רב פוגעים בתהליך ריפוי הפצע על ידי גרימת היפוקסיה ברקמות, הפחתת זרימת דם ותגובות דלקתיות, מה שמקדם ייצור יתר של מיני חמצן תגובתיים, הפעלת פרוטאז, הזדקנות תאית ותפקוד לקוי של תאי גזע מזנכימליים 27,28,29,30 . בהתחשב במגבלות הנוכחיות במחקר האנושי על השפעות הגובה הגבוה, פיתוח מודלים סטנדרטיים של בעלי חיים המדמים היפוקסיה בגובה רב הוא משמעותי מאוד.
<...הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים מתחרים.
מחקר זה מומן על ידי קרנות המחקר הבסיסיות לאוניברסיטאות המרכזיות, UESTC (ZYGX2025YGLH006); פרויקט מחקר מדעי הבריאות של מחוז סצ'ואן (2025-205); קרן המדע הטבעי של שיגאטסה, טיבט, סין (RKZ2024ZR-003).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| סורק שקופיות אוטומטי | אולימפוס | VS200 | סריקת חתך רקמות |
| אלבומין סרום בקר (BSA) | סרוויסביו | GC305010 | מגיב חוסם ל-IHC/IF |
| נוגדן CD206 | פרויטנטק | 18704-1-AP | זיהוי מקרופאגים M2 (דילול 1:200) |
| נוגדן CD31 | אבקאם | ab182981 | זיהוי צפיפות כלי דם (דילול 1:800) |
| נוגדן CD86 | HuaBio | ER1906-01 | זיהוי מקרופאגים M1 (דילול 1:200) |
| נוגדן CK19 | HuaBio | ET1601-6 | הערכת אפיתליאליזציה מחדש (דילול 1:200) |
| ערכת מצע DAB | ZSGB-BIO | ZLI-9018 | מצע כרומוגני לצביעת IHC |
| IgG אנטי-ארנב עם FITC עם ז'אנים קונוגטיביים | סרוויסביו | GB22303 | נוגדן משני פלואורסצנטי ל-IF (דילול 1:100) |
| G*Power | אוניברסיטת דויסבורג-אסן, גרמניה | www.gpower.hhu.de | חישוב עוצמה סטטיסטית |
| תוכנת GraphPad Prism | תוכנת GraphPad | https://www.graphpad.com/ | ניתוח סטטיסטי ויצירת גרפים |
| תמיסת צביעת המטוקסילין | J&; K Scientific | LM10N13 | H& צביעת E |
| HIF-1 ו-alpha; נוגדן | ביולוגיה | BS-0737R | זיהוי איתות הקשור להיפוקסיה (דילול 1:100) |
| IgG אנטי-ארנב עם עיזים מנוגדת HRP | סרוויסביו | GB23303 | נוגדן משני ל-IHC (דילול 1:100) |
| מערכת בקרה היפוברית | שנגחאי יויאן אינסטרומנטס בע"מ | LP-1500 | משמש לסימולציה של היפוקסיה היפובארית בגובה רב מדורגת |
| ערכת Hypoxyprobe-1 | Hypoxyprobe Inc. | HP1-100 | משמש לגילוי היפוקסיה בחיים |
| ערכת הגברת אות טירמיד IF555 | סרוויסביו | G1233 | משמש להגברת אותות פלואורסצנציה משופרים |
| נוגדן IL-10 | HuaBio | HA722032 | זיהוי ציטוקינים נוגדי דלקת (דילול 1:100) |
| IL-1 ובטא; נוגדן | HuaBio | HA723965 | זיהוי ציטוקינים פרו-דלקתיים (דילול 1:100) |
| תוכנת ImageJ | המכונים הלאומיים לבריאות (NIH), ארה"ב | https://imagej.net/ij/download.html | כימות תמונה |
| איזופלוראן | RWD Life Science Co., Ltd. | R510-22-16 | |
| נוגדן Ki-67 | HuaBio | HA721115 | זיהוי התרבות קרטינוציטים (דילול 1:400) |
| מערכת דימות זרימת דם בלייזר ספקל | RWD Life Science Co., Ltd. | RFLSI ZW | הערכה של הזרמת דם |
| ערכת בדיקת LDH | מכון הביו-הנדסה של נאנג'ינג ג'יאנצ'נג | A005-1-2 | מדידת LDH בסרום |
| מסון' ערכת צביעת טריכרום | סרוויסביו | G1006-100ML | ניתוח הצטברות קולגן |
| ערכת בדיקת MDA | מכון הביו-הנדסה של נאנג'ינג ג'יאנצ'נג | A003-1-1 | הערכת פרוקסידציה של שומנים |
| ערכת צביעה אדומה של סיריוס | סרוויסביו | G1078-100ML | התמיינות קולגן I/III |
| ערכת בדיקת SOD | מכון הביו-הנדסה של נאנג'ינג ג'יאנצ'נג | A001-1-1 | מדידת פעילות SOD בסרום |
| TNF-α נוגדן | HuaBio | ER65189 | זיהוי ציטוקינים פרו-דלקתיים (דילול 1:200) |
| נוגדן VEGF-A | HuaBio | ET1604-28 | זיהוי איתות הקשור לאנגיוגנזה (דילולציה 1:200) |