הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר מחקר

סימולציה של מצבים היפוקסיים בגובה רב מעכבת את החלמת הפצעים בעכברים

230 צפיות

DOI:

10.3791/71250

5 ביוני 2026

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

מחקר זה פיתח ואישר באופן ראשוני מודל עכברוש של עיכוב בהחלמת פצעים בתנאי היפוקסיה היפוברית בגובה רב.

תקציר

מצבים היפובריים בגובה רב עלולים לגרום להיפוקסיה ממושכת בפצע ולפגיעה בריפוי, אך מודלים סטנדרטיים נשארים נדירים. במחקר זה פיתחנו מודל ריפוי מאוחר של פצעים ואימתנו אותו באופן ראשוני על ידי סימולציה של היפוקסיה בגובה רב באמצעות מערכת היפובארית מבוקרת. העכברים אוחסנו בגבהים מדומים של 3000 מטר (לחץ אוויר: 70.1 קילופסקל, לחץ חמצן חלקי: 14.7 קילופסקל) ועד 8000 מ' (לחץ אוויר: 35.6 קילופסקל, לחץ חמצן חלקי: 7.5 קילופסקל) כדי לקבוע ספי בטיחות, עם הערכת לחץ חמצוני והיפוקסיה בעור. התוצאות הראו סיכון מוגבר לתמותה בגובה מדומה של 6000 מטר, עם סבילות שנצפתה מתחת ל-5000 מטר. גבהים גבוהים היו קשורים להחמרת לחץ חמצוני ולהחמרת היפוקסיה בעור; הפגינו עיכובים תלויים בגובה בריפוי הפצעים, ירידה בפרפוזיה, דיכוי שינוי קולגן והחמרה בתגובות דלקתיות. למרות הגברת גורמי התחדשות כלי דם, צפיפות המיקרווסקולרית ירדה. בסך הכול, מחקר זה פיתח ואימת באופן ראשוני מודל חולדה המתאים לחקירת מנגנונים והתערבויות בפצעים כרוניים שנגרמו מהיפוקסיה בגובה רב.

מבוא

תיקון פצעי עור מהווה אתגר קליני נרחב ומשמעותי. מטראומה חריפה ועד סוגים שונים של פצעים שאינם מחלימים, מצבים אלו מטילים נטל מתמשך על מערכות הבריאות ועל איכות החיים של מטופלים 1,2,3,4,5,6. החלמת הפצע אינה אירוע יחיד אלא תהליך רב-שלבי מתואם וחופף: תאים דלקתיים, תאי סטרומל, קרטינוציטים ומערכת המיקרווסקולרית בונים יחד מחסומים ומחדשים רקמות תחת ויסות המפרק של המטריצה החוץ-תאית ורשתות איתות מגוונות 7,8,9,10

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל ההליכים הניסיוניים שכללו בעלי חיים נבדקו ואושרו על ידי ועדות האתיקה של אוניברסיטת מדעי האלקטרוניקה של סין (מס' 106142025091534170) והאוניברסיטה הרפואית של הצבא (מס' ) AMUWEC20265509). זרימת העבודה הגרפית של עיצוב הניסוי והניתוח המעורבים במחקר זה מוצגת באיור 1. בנוסף, הריאגנטים והציוד ששימשו במחקר זה מופיעים בטבלת החומרים.

בעלי חיים ניסיוניים והצהרה אתית
מחקר זה השתמש בזכרים של חולדות ספרג-דולי (SD), שנרכשו מחברת צ'נגדו דשואו לאברטור לוויילר, סין. כל בעלי החיים עברו תקופת הסתגלות של 7 ימים בתנאים סטנדרטיים לפני הניסוי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

אימות מרווחי בטיחות להיפוקסיה מתמשכת הנגרמת מלחץ נמוך
ניתוח הישרדות של קפלן–מאייר הראה שינוי הדרגתי כלפי מטה בעקומות ההישרדות ככל שהגובה המדומה עלה, כאשר אירועי התמותה נצפו לראשונה בקבוצת 6000 מטר (איור 2B). השוואות זוגיות עם תיקון בונפרוני לא הראו הבדלים מובהקים סטטיסטית בשיעורי ההישרדות בין קבוצת הביקורת לבין קבוצות 6000 מ' עד 8000 מ'. ביום ה-30, שיעורי ההישרדות הסופיים של קבוצת הביקורת, קבוצת 3000 מ', 4000 מ', 5000 מ', 6000 מ', 7000 מ'.......

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

תנאים בגובה רב פוגעים בתהליך ריפוי הפצע על ידי גרימת היפוקסיה ברקמות, הפחתת זרימת דם ותגובות דלקתיות, מה שמקדם ייצור יתר של מיני חמצן תגובתיים, הפעלת פרוטאז, הזדקנות תאית ותפקוד לקוי של תאי גזע מזנכימליים 27,28,29,30 . בהתחשב במגבלות הנוכחיות במחקר האנושי על השפעות הגובה הגבוה, פיתוח מודלים סטנדרטיים של בעלי חיים המדמים היפוקסיה בגובה רב הוא משמעותי מאוד.

<.......

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים מתחרים.

תודות

מחקר זה מומן על ידי קרנות המחקר הבסיסיות לאוניברסיטאות המרכזיות, UESTC (ZYGX2025YGLH006); פרויקט מחקר מדעי הבריאות של מחוז סצ'ואן (2025-205); קרן המדע הטבעי של שיגאטסה, טיבט, סין (RKZ2024ZR-003).

....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
סורק שקופיות אוטומטיאולימפוסVS200סריקת חתך רקמות
אלבומין סרום בקר (BSA)סרוויסביוGC305010מגיב חוסם ל-IHC/IF
נוגדן CD206פרויטנטק18704-1-APזיהוי מקרופאגים M2 (דילול 1:200)
נוגדן CD31אבקאםab182981זיהוי צפיפות כלי דם (דילול 1:800)
נוגדן CD86HuaBioER1906-01זיהוי מקרופאגים M1 (דילול 1:200)
נוגדן CK19HuaBioET1601-6הערכת אפיתליאליזציה מחדש (דילול 1:200)
ערכת מצע DABZSGB-BIOZLI-9018מצע כרומוגני לצביעת IHC
IgG אנטי-ארנב עם FITC עם ז'אנים קונוגטיבייםסרוויסביוGB22303נוגדן משני פלואורסצנטי ל-IF (דילול 1:100)
G*Powerאוניברסיטת דויסבורג-אסן, גרמניהwww.gpower.hhu.deחישוב עוצמה סטטיסטית
תוכנת GraphPad Prismתוכנת GraphPadhttps://www.graphpad.com/ניתוח סטטיסטי ויצירת גרפים
תמיסת צביעת המטוקסיליןJ&; K ScientificLM10N13H& צביעת E
HIF-1 ו-alpha; נוגדןביולוגיהBS-0737Rזיהוי איתות הקשור להיפוקסיה (דילול 1:100)
IgG אנטי-ארנב עם עיזים מנוגדת HRPסרוויסביוGB23303נוגדן משני ל-IHC (דילול 1:100)
מערכת בקרה היפוברית שנגחאי יויאן אינסטרומנטס בע"מLP-1500משמש לסימולציה של היפוקסיה היפובארית בגובה רב מדורגת
ערכת Hypoxyprobe-1Hypoxyprobe Inc.HP1-100משמש לגילוי היפוקסיה בחיים
ערכת הגברת אות טירמיד IF555סרוויסביוG1233משמש להגברת אותות פלואורסצנציה משופרים
נוגדן IL-10HuaBioHA722032זיהוי ציטוקינים נוגדי דלקת (דילול 1:100)
IL-1 ובטא; נוגדןHuaBioHA723965זיהוי ציטוקינים פרו-דלקתיים (דילול 1:100)
תוכנת ImageJהמכונים הלאומיים לבריאות (NIH), ארה"בhttps://imagej.net/ij/download.htmlכימות תמונה
איזופלוראןRWD Life Science Co., Ltd.R510-22-16
נוגדן Ki-67HuaBioHA721115זיהוי התרבות קרטינוציטים (דילול 1:400)
מערכת דימות זרימת דם בלייזר ספקל RWD Life Science Co., Ltd.RFLSI ZWהערכה של  הזרמת דם
ערכת בדיקת LDHמכון הביו-הנדסה של נאנג'ינג ג'יאנצ'נגA005-1-2מדידת LDH בסרום
מסון' ערכת צביעת טריכרוםסרוויסביוG1006-100MLניתוח הצטברות קולגן
ערכת בדיקת MDAמכון הביו-הנדסה של נאנג'ינג ג'יאנצ'נגA003-1-1הערכת פרוקסידציה של שומנים
ערכת צביעה אדומה של סיריוססרוויסביוG1078-100MLהתמיינות קולגן I/III
ערכת בדיקת SODמכון הביו-הנדסה של נאנג'ינג ג'יאנצ'נגA001-1-1מדידת פעילות SOD בסרום
TNF-α נוגדןHuaBioER65189זיהוי ציטוקינים פרו-דלקתיים (דילול 1:200)
נוגדן VEGF-AHuaBioET1604-28זיהוי איתות הקשור לאנגיוגנזה (דילולציה 1:200)

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות