וידאו זה מציג את התהליך של כל תא מהדק הקלטות מתח הפרוסה הרשתית של נמר מימיים סלמנדרה. אנו מדגימים את הכנת הפרוסה וכן כיצד לבצע הקלטות מהדק תיקון במהלך גירוי ויזואלי של הרשתית.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
שלמות התא הקלטות של אור עורר זרמים Synaptic מעוררים פורסים את רשתית
במאמר זה
סיכום
תקציר
אנו משתמשים כל תא מהדק טכניקה טלאי ללמוד את המעגלים הסינפטי שבבסיס עיבוד המידע החזותי ברשתית. בסרטון הזה, אנו נדריך אותך בתהליך של ביצוע כל תא הקלטות של זרמים מעוררים אור של תאים בודדים בהכנת פרוסה הרשתית. אנו משתמשים נמר מימיים כמו סלמנדרה במודל חיה. נתחיל בתיאור דיסקציה של העין ולהראות כמה פרוסות מורכבים עבור הקלטות אלקטרו. לאחר פרוסה ממוקמת בחדר ההקלטה, אנו מדגימים כיצד לבצע כל תא מהדק הקלטות מתח. לאחר מכן, אנו הפרויקט גירויים חזותיים על photoreceptors של הפרוסה לעורר אור עורר תגובות הנוכחי. במהלך ההקלטה אנו perfuse את הפרוסה עם סוכני תרופתי, לפיה מערכת ערוץ 8-זלוף מאפשר לנו לעבור במהירות בין סוכנים שונים. הכנה פרוסה רשתית נעשה שימוש נרחב הרשתית עבור הקלטות מהדק תיקון, בפרט ללמוד amacrine או תאים דו קוטבית, אשר אינם נגישים בהכנת כל הר.
פרוטוקול
פתרונות
- פתרון תאיים בתאי הגנגליון (מ"מ): 100-K-gluconate, 8 KCl, 1 MgCl 2, 1 EGTA, 10 HEPES, 4 ATP, GTP 0.5, 90 מיקרומטר Sulforhodamine B (עבור כתמים), מותאם pH = 7.4 עם KOH
- פתרון תאיים עבור תאים דו קוטבית (מ"מ): 90 K-gluconate, 8 KCl, 1 MgCl 2, 10 BAPTA, 10 HEPES, 4 ATP, GTP 0.5, 90 מיקרומטר Sulforhodamine B (עבור כתמים), מותאם pH = 7.4 עם KOH
- רינגר תאיים של פתרון (מ"מ): 112 NaCl, גלוקוז 5, 5 HEPES, 2 KCl, 2 CaCl
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
יתרונות:
- כל סוגי תאים נגישים
- זיהוי קל של סוגי תאים, בפרט אם פלורסנט לצבוע מתווסף פתרון האלקטרודה
- סוכני תרופתי יכול בקלות להגיע תאים היעד
- הטכניקה מהדק התיקון מאפשר לחקור את התפקיד של תעלות יונים שונים חישובים הרשתית. מידע אותו לא ניתן להשיג באמצע.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות | |
|---|---|---|---|---|
| Multiclamp 700A | מגבר Patch Clamp | Molecular Devices | ||
| SZX9 | מיקרוסקופ להבדילה | Olympus Corporation | ||
| BX50WI | מיקרוסקופ זקוף | Olympus Corporation | מצויד בעדשות 40x, 10x טבילה במים, מסננים פלואורסצנטיים ומנורת כספית | |
| P-97 | מכשיר למשיכת מיקרופיפטות | Sutter Instrument Co. | ||
| Lucivid | מזריק תמונות מיקרוסקופיות | MBF Bioscience | ||
| מערכת פופוזין בעלת 8 ערוצים | מיקרו-פופוזין | Parker Hannifin Corporation | ||
| Bits++ | מעבד וידאו דיגיטלי | Cambridge Research Systems | ||
| עיניות אינפרא-אדום | אחר | ITT Visual Information Solutions | ||
| בארות סיליקון דביקות | אחר | Molecular Probes, Life Technologies | קוטר 20mm, עומק 1.0mm | |
| מסנני ממברנה | מסנן | EMD Millipore | HAWPO1300 | .45μm HA |
| קפילריות זכוכית בורוסיליקט | זכוכית לאלקטרודות | World Precision Instruments, Inc. | 1B150-4 | |
| מסנני מזרק | מסנן | Whatman, GE Healthcare | 6789-0402 | מסננים 4mm, ממברנת נילון .2um, בית פוליפרופילן |
| מצלמת IR | מצלמה מורכבת על מיקרוסקופ | Sony Corporation | SPT-M324 | Extrawave HAD, מצלמת וידאו B7W |
| Picrotoxin | ריאגנט | Sigma-Aldrich | P1675 | |
| Strychnine | ריאגנט | Sigma-Aldrich | S0532 | |
| Imidazole-4-acetic acid sodium salt | ריאגנט | Sigma-Aldrich | I7013 | |
| זחלי סלמנדרת נמר | בעל חיים | Charles E. Sullivan |
מקורות
- Cook, P. B., Lukasiewicz, P. D., McReynnolds, J. S. GABA(C) receptors control adaptive changes in a glycinergic inhibitory pathway in salamander retina. Journal of Neuroscience. 20, 806-812 (2000).
- Heflin, S. J., Cook, P. B.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
