Name: המבדק האדם In-Vivo למדידה רקמות ספציפיות של מגשרים nociceptive ו דלקתיות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-12-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 54 s
Description: למד שיטת מיקרודיאליזה לאיסוף נוזל בין-תאי מעור דלקתי בבני אדם. טכניקה זו מאפשרת ניתוח מדיאטורים נוציספטיביים ודלקתיים לחקר מנגנוני כאב ופיתוח טיפולים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

אינדוקציה של דלקת ניסיוני: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כוויות שמש מדרגה ראשונה מושרה בעור הלא שזוף של הירך עם סיוע של מקור, כיול אולטרה סגולה-B (Saalmann Multitester SBB LT 499, Saalmann GmbH, הרפורד, גרמניה). כוויות שמש מושרה 24 שעות לפני תחילת ניסוי microdialysis ידי יישום שלוש פעמים את כמות האור UVB צורך לגרום מאדימים מלא של עור חשוף, או שלוש פעמים את מינון erythemal מינימלי (MED). MED נקבעת בכל נושא לפני תחילת המחקר. מסירה מדויקת של אנרגיה מובטח עם UV-מטר (12 RM, ד&quot;ר Grobel UV-Electronic GmbH, Ettlingen, גרמניה). </li></ol> צנתר השמה אוסף מדגם: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת שטח היערכות עם כפפות סטריליות, 1 בעל מחט סטרילית, מזרק 1cc luer טיפ עם מד 23 (G) מחט, מזרק 1cc עם מחט 30G, 1% לידוקאין, מטליות אלכוהול, 2x2 פדי גזה סטרילי, צנתרים microdialysis המצורפת באחד סוף מחט 23G 4cm (דיאליזה Dermal, Erlangen, גרמניה), ו - 1.5 מ&quot;ל Microcent אוסף צינורות (E &amp; K מדעי, סנטה קלרה, קליפורניה.) עם פתרון מעכב פרוטאז 4μl לדגימה 100μl על קרח יבש. מעכבי פרוטאז פתרון מורכב לכל הוראה של היצרן באמצעות מעכבי פרוטאז קוקטייל טבליות (Roche Diagnostics, GmbH, מנהיים, גרמניה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון 1% אלבומין אנושי פתרון הצלצול של lactated ולמשוך אותו לתוך המזרק luer 1cc קצה, מוודא שאין בועות אוויר שנותרו המזרק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טען את המזרק עם הפתרון של 1% אלבומין מועשר האדם לקטט של הצלצול לתוך העריסה (microdialysis רב מזרק מתלה, הרווארד Apparatus, דרום Natick, MA) רכוב על משאבת עירוי דיוק גבוהה (משאבה 22, הרווארד Apparatus, דרום Natick, MA ). ודאו כי הבר של משאבת עירוי הנהיגה את המזרק נמצא במגע מלא עם הבוכנה של המזרק. הגדר את קצב משאבת לאחר המאשר כי הקוטר מזרק הוזנו במדויק לתוך המשאבה. שיעורי עירוי בשימוש נפוץ נע בין 2 ל 4μl/min. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את אזור אתה מתכנן לאסוף דגימת שלך. כאשר דגימה מאיזור דלקתי נוצר באופן מלאכותי, כגון כוויות שמש המתואר לעיל, תוכנית על החדרת צנתר בקצה כוויות שמש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניקוי שטח קטן בקצוות מנוגדים של הנגע, או אתר אתה מתכוון לאסוף דגימת שלך, עם אלכוהול. אלו אזורים לנקות תהיה הכניסה נועדה ונקודות יציאה הקטטר. מספיק להזריק לידוקאין תוך cutaneously (שמעידים הלבנה של העור על זריקה) באתרים אלה כדי ליצור בועה קטנה מאוד (מקסימום של 2 מ&quot;מ). הזרקה של כמות מוגבלת כזו של לידוקאין תוך עורית בכניסה ויציאה של הקטטר microdialysis לא צריך לשנות את תוצאות המבדק, אבל עושה החדרת הקטטר באופן משמעותי פחות כואב עבור משתתפי המחקר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות שימוש בטכניקות aseptic, הכנס את צנתרים microdialysis בעזרת מחט 23G מצורף לאורך האזור העור נחקרו. עומק הכניסה נמצאת בממשק שבין cutis ו subcutis. הכנסת בעומק נאותה ניתן לאמת אופטית. כאשר המחט הקטטר מחוברת מועברים קדימה המחט צריכה לגרום קצת למעלה קיפול של העור, כמו גם כמה הלבנה של העור. דימום לא אמור להתרחש. אם הדימום מתרחש זה מצביע על כך את המחט ממוקם עמוק יותר המיועדים ועומק הכניסה צריך להיות מותאם. לאחר מחט נדחקה דרך נקודת יציאה של העור, לשטוף את צנתרים עם פתרון 1% מועשר אלבומין לקטט של הצלצול עד שתראה טיפות לאורכו של הקטטר. הדבר נעשה על ידי החדרת בזהירות את קצה מחט של מזרק (מחט 23G) לתוך סוף דיסטלי של הקטטר microdialysis, ולאט לאט הזרקת פתרון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר השטיפה הקטטר למשוך בעדינות את המחט כדי להאכיל את הקטטר מחוברת דרך העור. טיפול עדין נדרש כי צנתרים הם בקוטר קטן, וכתוצאה מכך ושברירי. משוך את הצנתר עד שהוא מושחל לחלוטין דרך העור, כלומר, הבסיס של צינורות הפלסטיק גדול הטבעה סוף דיסטלי של קטטר נוגע בעור בנקודת הכניסה. כאמור, מעט דימום לא בסוף ההליך מאשר המיקום האופטימלי קטטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף את הקצה הדיסטלי של הקטטר אל קצה המחט 23G של מזרק המנוחה במעמד של משאבת אינפוזיה. טיפול נדרש כדי למנוע ניקוב את המחט דרך הקיר של הקטטר, אשר עלול לגרום דליפה פוטנציאליים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את המחט מקצה הפרוקסימלי של הקטטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש ¼ אינץ&#39; סרט ורוד, לצרף את צינור מוכנים 1.5ml אוסף Microcent את העור קרוב לאתר את היציאה של קטטר. הניחו את קצה הצנתר לתוך הצינור אוסף לאפשר איסוף microdialysate. הפעל את המשאבה זלוף ב r מראשאכלו לסירוגין לבדוק נפח נמסר ואסף מתאימים. במקרה כרכים אינם מתאימים, זליגת מהאתר כניסה העור צריך להיות שליליים (לפעמים יכול להיפתר על ידי משיכת חלק קטטר המוטבע על ידי צינורות הפלסטיק חזק יותר על האתר כניסה העור). לחלופין, קטטר ייתכן שיהיה צורך להחליפו אם כרכים נמסר שנאספו אינם מתאימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הדגימה היא מוחלטת, דגימות ממוקמים על קרח יבש עד אחסון ב -80 º C. </li></ol>

<ol><li>Angst, M. S., Clark, J. D., Carvalho, B., Tingle, M., Schmelz, M., Yeomans, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+profile+in+human+skin+in+response+to+experimental+inflammation%2C+noxious+stimulation+and+administration+of+a+COX-inhibitor%3A+A+microdialysis+study%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Cytokine profile in human skin in response to experimental inflammation, noxious stimulation and administration of a COX-inhibitor: A microdialysis study.</a> Pain. 139, 15-27 (2008).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

השימוש בשילוב של טכניקות microdialysis ו immunoassay הטכנולוגיה זמנית הוא בעל ערך בזמן אמת, ב-vivo המבדק אדם מתן תובנה אירועים ביוכימיים ברקמות של עניין. בשילוב עם בדיקות התנהגותיות כגון בדיקות כאב, השיטה מאפשרת ללמוד את יחסי הגומלין המורכבים של ביוכימיקלים מתווך כאב ודלקת. השיטה מבטיחה 1) זיהוי סמנים ספציפיים רקמות מתווך כאב ודלקת, 2) מתן תובנה מכניסטית לתוך הפתולוגיה של התנאים כאב דלקתי כרוני עם רקמה לפתולוגיה הפריפריה, ו 3) לחקור פעולות משכך כאבים / אנטי hyperalgesic ואנטי דלקתיים של תרופה חדשנית מ...

<table><tbody><tr><td>קתטר למיקרודיאליזה</td><td>כלי</td><td>Dermal Dialysis</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Pump 22</td><td>כלי</td><td>Harvard Apparatus</td><td>552219</td><td></td></tr><tr><td>Saalmann Multitester SBB LT 400</td><td>כלי</td><td>Saalmann GmbH</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>RM-12 IP-65 Radiometer</td><td>כלי</td><td>Dr. Grobel UV Elektronik GmbH</td><td>82120000/81112100</td><td></td></tr><tr><td>מעכב פרוטינאזה מלא (Complete Proteinase Inhibitor)</td><td>ריאגנט</td><td>Roche Group</td><td>11836145001</td><td></td></tr><tr><td>מבחנה למיקרו-צנטריפוגה</td><td>כלי</td><td>E&amp;amp;K Scientific</td><td>380150-X</td><td></td></tr><tr><td>אלבומין 5%</td><td>ריאגנט</td><td>ZLB Behring</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>רינגר לקטט</td><td>ריאגנט</td><td>Hospira Inc.</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Xylocaine-MPF</td><td>אחר</td><td>AstraZeneca</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>מזרק 1mL</td><td>כלי</td><td>BD Biosciences</td><td>309602</td><td></td></tr></tbody></table>

המבדק האדם in-vivo למדידה רקמות ספציפיות של מגשרים nociceptive ו דלקתיות

Human In-Vivo Bioassay for the Tissue-Specific Measurement of Nociceptive and Inflammatory Mediators

המבדק הזה ב-vivo האדם יכול לשמש כדי ללמוד מתנדבים אדם חולים. דוגמאות נאספים מאתרי רקמות רלוונטי כגון העור באמצעות קטטר מוכנס microdialysis בסביבה נקייה מחיידקים (דיאליזה Dermal, Erlangen, גרמניה). בדוגמה זו היא אוסף של נוזל interstitial של דלקת עור בניסוי במתנדבים אנושיים. אוסף דוגמאות ניתן בשילוב עם בדיקות ניסיוניות אחרות. לדוגמה, ההערכה סימולטני של ביוכימיקלים שוחרר מקומית רגישות סובייקטיבית לגירויים מכאיבים בעור מודלק בניסוי מספק את הקישור קריטי ביוכימיים התנהגותי לזהות סמנים ביולוגיים של כאב ודלקת. Assay שהוצגו האורגניזם האנושי החי מאפשר תובנה מכניסטית לתוך תהליכי רקמות ספציפיות הבסיסית והכאב / או דלקת. השיטה גם מתאימה מאוד כדי לבחון את היעילות של התערבויות קיימות או רומן - כמו לתרופות חדשות - מיקוד הטיפול של מצבים כואבים ו / או דלקתיים. מאמר זה יספק תיאור מפורט על שימוש בטכניקות microdialysis לאיסוף נוזלים ביניים מן הנגע בעור מודלק בניסוי של נבדקי המחקר האנושי. דגימות נוזל ביניים מעובדים בדרך כלל עם סיוע של חרוז זמנית immunoassays מערך המאפשר assaying עד 100 analytes בדגימות קטנות בהיקף כמו 50 מיקרוליטר.

טכניקה מוצג אוסף ב-vivo של דגימות נוזל interstitial מאתרים רקמות רלוונטי (העור כאן, מוסת בניסוי) למדידת ביוכימיקלים מתווך כאב ודלקת.

המבדק האדם In-Vivo למדידה רקמות ספציפיות של מגשרים nociceptive ו דלקתיות

בדיקה ביולוגית זו בבני אדם במצב in-vivo יכולה לשמש לחקר מתנדבים ומטופלים. דגימות נאספות מאתרי רקמה רלוונטיים, כגון העור, באמצעות...

סרטון זה מתחיל 24 שעות לאחר השראת כויית שמש ניסויית בירכו של מטופל באמצעות מקור אור UV מכויל. לאחר application של חומר הרדמה מקומי, מוחדר קטטר למיקרודיאליזה בין החתכים לשכבה תת-עורית ולאחר מכן נמשך דרך העור. מזרק פרפוזיה מחובר לקצה הפרוקסימלי של הקטטר, והפעלת משאבת הפרפוזיה תשרה את הזרימה ואת האיסוף של מיקרו-ליזאט.לאחר האיסוף, ניתן לאחסן את הדגימות במינוס 80 מעלות צלזיוס עד לביצוע הניתוח של המתווכים הנוציצפטיביים והדלקתיים. שלום, אני מרטין אנגסט מהמחלקה להרדמה באוניברסיטת סטנפורד. ושלום, אני מרתה טינגל, אחות מחקר בכירה ומנהלת מעבדת הכאב האנושי, שהוקמה על ידי ד"ר אנגסט בשנת 1995 כאן באוניברסיטת סטנפורד.היום נציג בפניכם הליך להחדרה של קטטרים למיקרודיאליזה לעור דלקתי ניסיוני של משתתפים במחקר אנושי, לצורך איסוף נוזל בין-תאי. אנו משתמשים בטכניקה זו במעבדה שלנו כדי לחקור שחרור ספציפי לרקמה של כימיקלים ביולוגיים הקריטיים לתיווך של כאב ודלקת. אז בואו נתחיל.מודל אחד של דלקת עור ניסויית הוא כוויות שמש מלאכותיות. כוויות שמש מדרגה ראשונה מונחעות באמצעות מקור קרינה אולטרה-סגולה B (ultraviolet B) מכויל. אספקה מדויקת של אנרגיה מובטחת באמצעות מד UV.כוויות שמש מושגות בדרך כלל על ידי הפעלת קרינת UVB בכמות הגדולה פי שניים עד שלושה מהכמות הדרושה לגרימת אדמומיות. לפני איסוף הדגימות, הכין אזור עבודה עם

human-vivo-bioassay-for-tissue-specific-measurement-nociceptive

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

טכניקה לאסוף למדוד מתווכים פצע כירורגי ביוכימיים בנקודות זמן מסוימות.

איסוף מדידת מגשרים nociceptive ועל פצעים דלקתיים כירורגי

אלגוריתמים להערכת סף הכאב חום מכני בעור מודלק בניסוי של נבדקי המחקר האנושי מוצגים. שתי בדיקות פרדיגמות כאב באופן עצמאי לבחון עיבוד nociceptive ידי שני הגדולים היקפי סיב עצב שמשדר כאב אוכלוסיות, כלומר לא myelinated סיבי C ו-A קטן myelinated דלתא סיבים.

קביעת חום סף כאב מכני של העור מודלק בבני אדם

סרטון זה מדגים את הכימות של מתווכי דלקת במהלך זיהום על ידי דגירה של תאי חיסון אנושיים שמקורם ברקמת ריאה אנושית עם המופילוס אינפלואנזה. ציטומטריית זרימה משמשת למדידת פלואורסצנטיות של ציטוקינים בלימפוציטים מסומנים, בקורלציה עם ייצור ציטוקינים מעודדי דלקת בתגובה לזיהום חיידקי.

כימות מתווכי דלקת בתאים נגועים ברקמה אנושית

על מנת ללמוד את השינויים של סיבי עצב intraepidermal nociceptive (IENFs) בneuropathies כואב (PN), פיתחנו פרוטוקולים שיכולים ישירות לבחון שינויים מורפולוגיים תלת ממדיים שנצפו בIENFs nociceptive. ניתוח תלת ממדי של IENFs יש את הפוטנציאל כדי להעריך את השינויים מורפולוגיים של IENF בPN.

הדמיה תלת ממדית של סיבי עצב Intraepidermal nociceptive בביופסיות עור אדם

אנו מתארים שיטת הדמיה לא פולשנית להבחנה שלבים דלקתיים. משלוח מערכתי של לומינול מגלה תחומים של דלקת חריפה תלויות על פעילות MPO בנויטרופילים. לעומת זאת, הזרקה של lucigenin מאפשרת הדמיה של דלקת כרונית תלויה בפעילות phox במקרופאגים.

בשיטת ההדמיה vivo להבחין דלקת אקוטית וכרונית

אנו מתארים פרוטוקול לבחון את התפתחותם של hyperalgesia מושרה אופיואידים וסובלנות בעכברים. המבוסס על המדידה של תגובות nociceptive תרמיים ומכאניות של בעלי חיים תמימים וטופל במורפיום, היא מאפשרת לכמת את העלייה ברגישות לכאב (hyperalgesia) ולהפחית בכאבים (סובלנות) הקשורים לממשל אופיום כרוני.

הערכה של סובלנות hyperalgesia ומשככי כאבים הנגרם מורפיום בעכברים באמצעות שיטות nociceptive תרמיים ומכאניות

מאמר זה מסביר את היישום של הדמיה פלואורסצנטי באמצעות בדיקת הדמיה אופטית activatable לדמיין את הפעילות vivo של metalloproteinases מטריצה ​​מפתח בשני מודלים ניסיוניים שונים של דלקת.

לא פולשני<em&gt; בויבו</em&gt; פלואורסצנטי הדמיה אופטית של פעילות MMP דלקתית באמצעות Activatable פלואורסצנטי סוכן הדמיה

שינויים מורפולוגיים מתרחשים בתאי החיסון החיסונית התגובה בעקבות ההפעלה ולקדם שינויים בגיוס הסלולר. ניצול 2-פוטון הדמיה בשילוב עם חלבון מהונדס בצורה גנטית לפיברוסט-1 (FSP1)-יצור; tdTomato פלומפולט-stop-floxed (tb/tb) קו העכבר הירוק fluorescently מתויג ליפופוליל-fitc, אנחנו יכולים להדגים ספיגה ספציפית מאוד של ליפופוליד בפיברוהכדורים ושינויים מורפולוגיים ב vivo.

ב Vivo שני צבעים 2-פוטון הדמיה של תאי כתב שתייגת גנטית בעור

פרוטוקול סטנדרטי מתואר כדי לחקור את הפעילות האנטי-סרטנית ואת הרעילות הנלווית של IL-1α במודל עכבר סינגני של HNSCC.

הערכת הפעילות האנטי-סרטנית In vivo של ננו-חלקיקים פוליאנהידריד IL-1α

שיטות אימונוכימיות מבוססות למדידת משדרי פפטידים in vivo מסתמכות על מיקרודיאליזה או על משיכת נוזלים בתפזורת כדי לקבל את הדגימה לניתוח לא מקוון. עם זאת, אלה סובלים ממגבלות מרחביות-טמפורליות. הפרוטוקול הנוכחי מתאר את הייצור והיישום של ביוסנסור אימונופרוב קיבולי המתגבר על מגבלות הטכניקות הקיימות.

מדידת In Vivo שנפתרה בזמן של נוירופפטידים דינמיים על ידי אימונופרוב קיבולי בלב חזירי

הפרוטוקול מתאר כיצד למדוד היפרלגזיה בברך בעכברים. אנו מראים דוגמאות במודלים של עכברים לכאבי ברכיים חריפים כמו גם במודלים של דלקת מפרקים ניוונית (OA).

הערכת היפרלגזיה בברך בעכברים באמצעות מדידת יישום לחץ

למד שיטת מיקרודיאליזה לאיסוף נוזל בין-תאי מעור דלקתי בבני אדם. טכניקה זו מאפשרת ניתוח מדיאטורים נוציספטיביים ודלקתיים לחקר מנגנוני כאב ופיתוח טיפולים.

המבדק האדם In-Vivo למדידה רקמות ספציפיות של מגשרים nociceptive ו דלקתיות

גלה סרטונים נוספים