Name: איסוף cryopreservation של ביציות ועוברים אוגר עכבר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-03-27T00:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 36 s
Description: למד שיטה לאיסוף וקירור ביציות אוגר ועוברי עכבר לשימור גנטי לטווח ארוך. הטכניקה מבטיחה שיעורי הישרדות גבוהים לאחר הפשרה ומסייעת למחקר בביולוגיה רה-פרודוקטיבית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

עבודה זו נתמכה על ידי Ministerio ספרדית דה Educación y Ciencia (BIO 2006-11792) ואת Generalitat דה קטלוניה (2005-SGR00437). המחברים מבקשים להודות מארק Puigcerver ואת יונתן לוקאס לקבלת סיוע טכני שלהם בהכנת התקשורת. כל הצוות של ד &#39;Servei Estabulari הוא הודה לדיור בעלי חיים, ובעיקר חואן חוסה מרטין חבייר בניטו על תרומה נוספת על הקלטה של ​​וידאו חלק זה. NCB הוא עמית של Fundação פורטוגזית פסקה דואר Ciência Tecnologia ו SG הוא עמית של הספרדי Ministerio de Educación y Ciencia.

טיפול בבעלי חיים ונהלים נערכו על פי הנחיות ותקנות שאושרו על ידי ועדת האתיקה על בעלי חיים ומחקר האדם של אוניברסיטת האוטונומית של ברצלונה, ספרד. אני אוסף הביצית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק ובחר אוגרים הנקבה (Mesocricetus auratus; 8-12 בשבוע הישן) של זן הסורי הזהב עבור נוכחות של הפרשות הנרתיק עבה (פריקה postovulatory). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגרום לנקבות שנבחרו superovulate בזריקה intraperitoneal של 40 IU של PMSG (בהריון Mare סרום גונדוטרופין) ואחריו 40 IU של hCG (גונדוטרופין כוריוני אנושי) 60 שעות לאחר מכן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים אוגרים הנקבה 16 שעות לאחר מתן hCG בתא פחמן דו חמצני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בודד oviducts מן הנקבות כפי שמוצג בסרטון ולהעבירם ירידה של המדיום KSOM-H. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איסוף הביצית-תלולית על ידי מתחמי קריעת ampulla oviduct תחת מיקרוסקופ סטריאוסקופית ירידה של hyaluronidase (156 U / ml) בשעה 37 ° C. ביציות יתפנה מן התאים קומולוס בתוך כ 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרימי ביציות מן hyaluronidase ולשטוף אותם פעמיים בינוני KSOM-H. </li></ol> עבור אוסף של עוברי עכברים, נקבות עכברים (Mus שריר: 6-8 בשבוע הישן) הם המושרה על ידי הזרקה superovulate intraperitoneal של 5 IU של PMSG ואחריו 5 IU של hCG 48 שעות מאוחר יותר הזדווגו עם עכברים זכרים. נקבות מוקרבים על ידי נקע בצוואר הרחם ב 24-26, 44-46 או 54-56 שעות לאחר מתן של hCG עבור obtention של pronuclear, 2 תאים או 4 תאים עוברים שלב, בהתאמה. אוסף של עוברים pronuclear מתבצעת בדיוק כפי שתואר עבור ביציות אוגר. עוברים בשלבים 2 תאים ו 4 תאים נאספים על ידי שטיפה עם oviducts בינוני KSOM-H [6]. הערה: בעקבות פרוטוקול זה כ 20-30 ביציות / עוברים ניתן לאסוף מן הנקבה כל אחד. השנייה. הכנת מקפיא הפשרה פתרונות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון אני על ידי דילול 0.57 מ&quot;ל של propilenglycol ב 5 מ&quot;ל של KSOM-H (1.5 מ &#39;של propilenglycol). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון הפשרה על ידי הוספת 2 מ&quot;ל של KSOM-H לצינור עם סוכרוז 0.2052 גרם (0.3 מ &#39;של סוכרוז). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון הקפאת ידי הוספת 2 מ&quot;ל של תמיסת אני לצינור עם סוכרוז 0.0684 גרם (1.5 מ &#39;של propilenglycol ו 0.1 סוכרוז M). </li></ol> הערה: אני פתרון מקפיא הפשרה הפתרונות צריכים להיות מוכנים רק לפני השימוש בהם. עם זאת, הסכומים המפורטים של סוכרוז לשמש להכנת הקפאת פתרונות הפשרה עשוי להיות משוקלל מראש ומאוחסנים 3 מ&quot;ל שפופרות בטמפרטורת החדר במשך כמה חודשים. ג. הקפאת פרוטוקול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת ביציות / עוברים ממדיום KSOM-H ירידה של פתרון ואני דגירה של 7-15 דקות בטמפרטורת החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בינתיים, להכין צלחת פטרי 90 מ&quot;מ כדי לטעון את קשיות ידי הצבת 90 טיפות של μl מקפיא הפשרה פתרונות כמו זה המוצג בסרטון (1 טיפה של כל פתרון / קש). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את המספר הרצוי של ביציות / עוברים את טיפות פתרון מקפיא. הערה: אנו בדרך כלל העברה בין 5-30 ביציות או עוברים / ירידה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף קש למערכת שאיפה לשלוט בפה לטעון אותו הבאים בסדר הזה: הפתרון אני, אוויר, ירידה הקפאה עם ביציות, אוויר, ירידה הפשרה, אוויר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר קש נטען, לשמור aspirating עד הטיפה הראשונה הציג (פתרון אני) מגיע פולימר בקצה העליון של הקשית וחותמות הזה סוף. Thermo-חותם את הקצה השני של קש או חותם עם פקק פלסטיק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את במקפיא לתכנות ובחר את תוכנית ההקפאה. תוכנית הקפאת בשימוש פרוטוקול זה מבוסס על שיעורי קירור פורסם במקור על ידי לאסאל et al. [7]: <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 2 ° C / min מ בטמפרטורת החדר ל -7 ° C 0 ° C / min 10 דקות, כדי לאפשר איזון הטמפרטורה של זריעת אינדוקציה (ראה להלן) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 0.3 ° C / min מ -7 ° C ל -30 ° C 0 ° C / min 2 דקות, כדי לאפשר איזון הטמפרטורה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 35 ° C / min מ -30 ° C ל -130 ° C </li></ul></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טען את קשיות על החריצים של בעל במקפיא לתכנות, ולוודא כי החלק של קש עם ירידה של פתרון הפשרה פונה כלפי חוץ. הפעל את תוכנית ההקפאה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר הטמפרטורה מגיעה ל -7 מדגם ° C וקירור בהמתנה, לבצע זריעה ידנית: לצלול מלקחיים לתוך חנקן נוזלי, למשוך את מחזיקי מעט מהמקפיא כדי לחשוף את החלק של קשיות המכיל את טיפות פתרון הפשרה, ומיד המגע החלק הזה של קשיות עם מלקחיים. חזור לבעל ולכל קש בעל ולאחר מכן אפשר להריץ את תוכנית ההקפאה עד הסוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר התוכנית תושלם, לצלול בעלי בחנקן נוזלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את קשיות מןמחזיקי ולהעבירם gobelet שכותרתו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבסוף, בחנות gobelet בתוך טנק חנקן נוזלי. </li></ol> IV. הפשרה פרוטוקול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את קש מהטנק חנקן נוזלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור על קש בטמפרטורת החדר למשך 40 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משרים את קש באמבט מים ב 30 ° C במשך 40 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את תקע מתוך קש או לחתוך את קצה תרמו אטום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רוקן את קש בצלחת פטרי בגודל 35 מ&quot;מ בעדינות מערבבים את שתי טיפות המכילות את המקפיא הפשרת פתרונות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השאירו ביציות / עוברים בתערובת במשך 15 דקות בטמפרטורת החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת ביציות / עוברים לירידה טרי KSOM-H על 15 דקות נוספות ב 37 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביציות / עוברים כעת מוכן מניפולציה נוספת. </li></ol> הערה: במהלך שלבים 6 ו -7 אתה צריך לראות כי ביציות מופשר / עוברים לאט להתנפח עקב התייבשות. V. תוצאות נציג השימוש בפרוטוקול cryopreservation דיווחו כאן התוצאה היא שיעור הישרדות של כ 95% עבור ביציות אוגר של 90%&gt;, 85% ו 80% עבור B6CBAF1 עוברי עכברים בבית pronuclear, 2 תאים בשלבים 4 תאים, בהתאמה. כאשר עוברי עכברים הם מתורבתים במבחנה ב KSOM לאחר ההפשרה, לפחות 70 עד 80% צריך להגיע לשלב הבלסטוציסט בתנאים אופטימליים תרבות. מומלץ לכלול קבוצת ביקורת (קש) של ביציות / עוברים כל ניסוי מקפיא שאתה להפשיר את הקבוצה הזאת לפני שאר ביציות / עוברים משמשים מניפולציות נוספות. אם שיעורי ההישרדות בקבוצת הביקורת נמוכים מהצפוי, להפשיר עוד קש ממגרש אותו. אם שיעורי ההישרדות של הקבוצה השנייה הם גם נמוכים, לבטל את קשיות הנותרים ממגרש זה מקפיא.

<ol><li>Whittingham, D. G., Leibo, S. P., Mazur, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+of+mouse+embryos+frozen+to+-196+and+-269+%C2%B0C%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Survival of mouse embryos frozen to -196 and -269 °C.</a> Science. 178, 411-414 (1972).</li>
<li>Wilmut, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+cooling+rate%2C+warming+rate%2C+cryoprotective+agent+and+stage+of+development+on+survival+of+mouse+embryos+during+freezing+and+thawing%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci%22%5BJournal%5D)">The effect of cooling rate, warming rate, cryoprotective agent and stage of development on survival of mouse embryos during freezing and thawing.</a> Life Sci. 11, 1071-1079 (1972).</li>
<li>Parkening, T. A., Tsunoda, Y., Chang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+various+low+temperatures%2C+cryoprotective+agents+and+cooling+rates+on+the+survival%2C+fertilizability+and+development+of+frozen-thawed+mouse+eggs%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Zool%22%5BJournal%5D)">Effects of various low temperatures, cryoprotective agents and cooling rates on the survival, fertilizability and development of frozen-thawed mouse eggs.</a> J. Exp. Zool. 197, 369-374 (1976).</li>
<li>Schneider, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryobiological+principles+of+embryo+freezing%5BTitle%5D)+AND+%22J.+In+Vitro+Fert.+Embryo+Transf%22%5BJournal%5D)">Cryobiological principles of embryo freezing.</a> J. In Vitro Fert. Embryo Transf. 3, 3-9 (1986).</li>
<li>Vajta, G., Kuwayama, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+cryopreservation+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Theriogenology%22%5BJournal%5D)">Improving cryopreservation systems.</a> Theriogenology. 65, 236-244 (2006).</li>
<li>Duselis, A. R., Vrana, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retrieval+of+mouse+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22JoVE%22%5BJournal%5D)">Retrieval of mouse oocytes.</a> JoVE. 3, (2007).</li>
<li>Lassalle, B., Testart, J., Renard, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+embryo+features+that+influence+the+success+of+cryopreservation+with+the+use+of+1%2C2+propanediol%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil.+Steril%22%5BJournal%5D)">Human embryo features that influence the success of cryopreservation with the use of 1,2 propanediol.</a> Fertil. Steril. 44, 645-651 (1985).</li>
<li>Ibáñez, E., Grossmann, M., Vidal, F., Egozcue, J., Santaló, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryopreservation+of+caprine+beta-lactoglobulin+transgenic+mouse+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Cryopreservation of caprine beta-lactoglobulin transgenic mouse embryos.</a> Cryobiology. 35, 290-298 (1997).</li>
<li>Dinnyes, A., Wallace, G. A., Rall, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+genotype+on+the+efficiency+of+mouse+embryo+cryopreservation+by+vitrification+or+slow+freezing%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Reprod.+Dev%22%5BJournal%5D)">Effect of genotype on the efficiency of mouse embryo cryopreservation by vitrification or slow freezing.</a> Mol. Reprod. Dev. 40, 429-435 (1995).</li>
<li>Tateno, H., Kamiguchi, Y., Mikamo, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+freezing+and+thawing+method+of+hamster+oocytes+designed+for+both+the+penetration+test+and+chromosome+assay+of+human+spermatozoa%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Reprod.+Dev%22%5BJournal%5D)">A freezing and thawing method of hamster oocytes designed for both the penetration test and chromosome assay of human spermatozoa.</a> Mol. Reprod. Dev. 33, 202-209 (1992).</li>
<li>Biggers, J., McGuinnis, L. K., Raffin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amino+acids+and+preimplantation+development+of+the+mouse+in+the+protein-free+KSOM%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Amino acids and preimplantation development of the mouse in the protein-free KSOM.</a> Biol. Reprod. 63, 281-293 (2000).</li>
</ol>

עם ביציות זה אוגר פרוטוקול עוברי עכבר ניתן cryopreserved בהצלחה. קפוא פעם, ביציות / עוברים ניתן לאחסן מכלי חנקן נוזלי ללא הגבלת זמן והחלים בכל זמן או מקום הרצוי. זו מציעה את היתרון שיש דגימות כמעט מוכנה להשתמש בכל פעם לפי הצורך. מצד שני, פרוטוקול זה יכול לשמש גם כדי לייצר cryobanks העובר מן הזנים העכבר ערך (כגון קווי מהונדס), כחלופה חסכוני ובטוח יותר לשמירה על מושבות חיים לחיות. חשוב לציין כי פרוטוקול מותאם cryopreserve ביציות אוגר היברידית עוברי עכבר B6CBAF1. הבדלים שלאחר ההפשרה שיעורי ההישרדות בקרב ...

<table><tbody><tr><td>שם החומר</td><td>סוג</td><td>חברה</td><td>מספר קטלוגי</td><td>הערה</td></tr><tr><td>קש מיני מסוג French 0.25 ml</td><td></td><td>Mini-tub</td><td>13407/0010</td><td></td></tr><tr><td>hCG</td><td></td><td>Farma-Lepori, Spain</td><td>749036.4</td><td></td></tr><tr><td>Hyaluronidase</td><td></td><td>Sigma</td><td>H-3884</td><td></td></tr><tr><td>מדיום KSOM-H</td><td></td><td></td><td></td><td>סימוכין [11]</td></tr><tr><td>חנקן נוזלי</td><td></td><td>Air Liquide</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פקקים מפלסטיק</td><td></td><td>Mini-tub</td><td>19046</td><td></td></tr><tr><td>PMSG</td><td></td><td>Intervet, Spain</td><td>1.614/8447</td><td></td></tr><tr><td>Propilenglycol</td><td></td><td>Fluka</td><td>82280</td><td></td></tr><tr><td>Sucrose</td><td></td><td>Merck</td><td>107687</td><td></td></tr><tr><td>מספריים כירורגיים</td><td></td><td>Aesculap</td><td>BC-060R; BG-061R</td><td></td></tr><tr><td>מכשיר איטום תרמי (Thermo-sealer)</td><td></td><td>SIZ</td><td>220</td><td></td></tr><tr><td>צלחות תרבית 35 ו-90 mm</td><td></td><td>Nunc</td><td>153066; 150350</td><td></td></tr><tr><td>מבחנות 10 ml</td><td></td><td>Greiner Bio-one</td><td>163160</td><td></td></tr><tr><td>מכל חנקן</td><td></td><td>MVE, Cryogenics</td><td>XC 43/28</td><td></td></tr><tr><td>מקפיא תכנותי</td><td></td><td>Planner Products Ltd.</td><td>Kryo-10 Series III</td><td></td></tr><tr><td>פינצטה</td><td></td><td>Aesculap</td><td>BD-331R; BD-053R; OC-020R</td><td></td></tr></tbody></table>

איסוף cryopreservation של ביציות ועוברים אוגר עכבר

Collection and Cryopreservation of Hamster Oocytes and Mouse Embryos

עוברים וביציות היו הראשונים cryopreserved בהצלחה יותר מ -30 שנים, כאשר Whittingham<i&gt; Et al.</i&gt;<sup&gt; 1</sup&gt; ו וילמוט<sup&gt; 2</sup&gt; תיאר בנפרד כי עוברי עכבר יכול להיות קפוא המאוחסן -196 מעלות צלזיוס, כמה שנים מאוחר יותר, Parkening<i&gt; ואח&#39;</i&gt;.<sup&gt; 3</sup&gt; דיווח על לידת צאצאים חיים הנובע הפריה חוץ גופית (IVF) של ביציות cryopreserved. מאז, השימוש בטכניקות cryopreservation התפשט במהירות להיות מרכיב חיוני בפועל של שעתוק בסיוע אדם ובעלי חיים ועל שימור משאבי גנטית של חיות. נכון לעכשיו, יש שתי שיטות עיקריות משמש cryopreserve ביציות ועוברים: הקפאת vitrification איטי. מגוון רחב של גישות שימשו כדי לנסות לשפר הן טכניקות של מיליוני בעלי חיים אלפי ילדים נולדו מעוברים cryopreserved. עם זאת, חסרונות חשובים הקשורים ל cryopreservation עדיין צריך להתגבר, מאז היווצרות קרח קריסטל, אפקטים פתרון הלם אוסמוטי נראה לגרום cryoinjuries מספר שלאחר להפשיר ביציות ועוברים. הקפאה איטית עם מקפיאים לתכנות יש את היתרון של שימוש בריכוזים נמוכים של cryoprotectants, אשר מזוהה בדרך כלל עם רעילות כימית הלם אוסמוטי, אבל היכולת שלהם למנוע היווצרות קרח קריסטל בריכוזים נמוכים היא מוגבלת. הקפאה איטית גם גורם תופעות קירור כי יש להימנע באמצעות זריעה ידנית או אוטומטית<sup&gt; 4</sup&gt;. בתהליך vitrification, ריכוזים גבוהים של cryoprotectants לדכא היווצרות של גבישי קרח ו להוביל להיווצרות של מדינה מזוגגת glasslike שבו המים הקרושה, אך לא הרחיב. עם זאת, בשל רעילות של cyroprotectants על ריכוזי בשימוש, ביציות / עוברים רק יכול להיחשף לפתרון cryoprotectant לתקופה קצרה מאוד של זמן בפתרון נפח המינימום, לפני השריית דגימות ישירות חנקן נוזלי<sup&gt; 5</sup&gt;. בעשור האחרון, vitrification הפך פופולרי יותר כי היא שיטה מהירה מאוד שבו לא ציוד יקר (במקפיא לתכנות) נדרשת. עם זאת, הקפאה איטית ממשיכה להיות השיטה הנפוצה ביותר עבור cryopreservation הביצית / העובר. במאמר וידאו זה אנו מראים, צעד אחר צעד, איך לאסוף לאט להקפיא ביציות אוגר עם שלאחר ההפשרה שיעור גבוה הישרדות. ההליך אותו יכול גם להיות מיושם בהצלחה להקפיא להפשיר עוברי עכבר בשלבים שונים של פיתוח preimplantation.

במאמר וידאו זה אנו מציגים הפגנה צעד אחר צעד כיצד לאסוף ביציות cryopreserve אוגר עם שלאחר ההפשרה שיעור גבוה הישרדות. ההליך אותו יכול גם להיות מיושם בהצלחה להקפיא להפשיר עוברי עכבר בשלבים שונים של פיתוח preimplantation.

עוברים וביציות שימרו בהצלחה לראשונה באמצעות הקפאה לפני יותר מ-30 שנה, כאשר Whittingham וחב' 1 ו-Wilmut 2 תיארו בנפרד שביציות של עכבר...

collection-and-cryopreservation-of-hamster-oocytes-and-mouse-embryos

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

פרוטוקול זה ממחיש את הטכניקה עבור ביציות לחילוץ או בשלב מוקדם, עוברים מן oviduct מופרית של עכברים. היכולת לזהות את infindibulum והכנס מחט סוף בוטה לתוך זה הכרחי נכון לבצע את ההליך.

איחזור של ביציות עכבר

ביציות נוטים aneuploidy בשל טעויות הפרדה כרומוזום במהלך ההבשלה meiotic. ביצים Aneuploid יכול לגרום לבעיות פוריות הפלות או הפרעות התפתחותיות כמו תסמונת דאון. כאן אנו מתארים שיטות להציג חומרים הבחירה לתוך ביציות ושיטות מחקר התבגרות meiotic ולהעריך ploidy.

הביצית Microinjection עכבר, הבשלה ו Ploidy הערכה

אתילן גליקול מבוססי שיטה vitrification עבור עוברי עכבר מתואר. זהו יתרון לשיטות אחרות בפשטותו ורעילות נמוכה עובריים, ולכן יכול להיות ישים באופן נרחב זנים רבים של עכברים, כולל עכברים טבועה ו גנים שונה.

Cryopreservation של עוברי עכברים ידי Vitrification אתילן גליקול מבוסס

הגישה מינים השוואתי מאפשר מדעני מוח התנהגותיים לחקור הנוירוביולוגי גורמים שונים הקשורים התנהגויות מסוימות כאל מאפיין של הדגם בעל חיים מסוים. ניצול טבעי ההבדלים בהתנהגות בין מינים קרובים, טכניקה זו אינה דורשת טכניקות פולשניות כדי לתפעל את הביטוי של התנהגות.

באמצעות גישה המינים השוואתי לחקירת לנוירוביולוגיה התגובות של אבי האב

כאן אנו מדגימים את החדש שפותח אני • ערכת cryo עבור cryopreservation זרע העכבר. שני תאים בשלב התפתחות העובר עם זרע קפוא מופשר השתפר באופן עקבי 5 זנים עכבר עם השימוש בערכה זו. במשך 1.5 שנים, 49 קווי עכבר מהונדסים גנטית היו בארכיון ידי cryopreservation זרע עם • אני cryo ערכה ולאחר מכן התאושש בהצלחה על ידי הפריה חוץ גופית.

הזרע עכבר cryopreservation ושחזור באמצעות · אני cryo Kit

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לדלדול mRNA ספציפי בתיווך siRNA אחרי ניתוח immunofluorescence להעריך הרכבה ציר meiotic וארגון בביציות עכבר. פרוטוקול זה מתאים לדלדול במבחנה של תמלילים והערכה תפקודית של ציר שונה ו / או גורמים הקשורים MTOC בביציות.

Meiotic ציר ההערכה בעכבר ביציות על ידי השתקה בתיווך siRNA

מאמר זה מתאר פרוטוקול ביעילות להפיק, תרבות pluripotent שורות תאי גזע מעוברים עכבר בשלב הבלסטוציסט.

נגזרת של שורות תאי גזע מעוברים של עכבר

כאן, אנו מציגים שיטה ששונתה עבור הקפאת הזמנות של עוברי תא אחד, כמו גם פרוטוקול כי זוגות השימוש של עוברים הקפאת להקפיא ואלקטרופורציה עבור הדור היעיל של עכברים מהונדסים גנטית.

השימוש של עוברים הקפאת-הפשפה לייצור יעילות גבוהה של עכברים ששונו גנטית

כתב יד זה מתאר פרוטוקול עבור אמצעי האחסון המינימלי של ויטריפיקציה של חתולים בלתי בוגרים עם מדיה מתוצרת מעבדה על תמיכות מסחריות. הוא מכסה כל צעד מ oocyte בידוד מ vivo גונדות לשעבר כדי ויטריפיקציה והתחממות.

כמות מינימלית של ויטריפיקציה של חתולים לא בוגרים

פרוטוקול זה מתאר הליכים לבשלות חוץ-גופית של ביציות עכברים, הפריה חוץ-גופית , ותרבות עוברים לשלב הבלסטוציסט.

ביציות עכברים בבגרות במבחנה, הפריה ותרבות עוברים לפני ההשתלה

למד שיטה לאיסוף וקירור ביציות אוגר ועוברי עכבר לשימור גנטי לטווח ארוך. הטכניקה מבטיחה שיעורי הישרדות גבוהים לאחר הפשרה ומסייעת למחקר בביולוגיה רה-פרודוקטיבית.

איסוף cryopreservation של ביציות ועוברים אוגר עכבר

גלה סרטונים נוספים