Name: מדידת Caenorhabditis elegans חיים טווח על מדיה מוצק (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-12T00:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 49 s
Description: למדו כיצד למדוד את אורך החיים של תולעים Caenorhabditis elegans על מדיה מוצקה באמצעות חיידקי E. coli מושמדים ב-UV. שיטה זו מאפשרת לחוקרים לסנכרן אוכלוסיות ולעקוב אחרי תמותת הבוגרים בצורה מדויקת.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי פריצות דרך גלן / מרחוק פרס גרונטולוגיה ו-NIH גרנט 1R01AG031108-01 ל MKGS נתמך על ידי NIH הכשרה מענק P30AG013280. ח&quot;כ הוא רפואי אליסון קרן מלומד חדש הזדקנות.

<ol><li>Wood, W. B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWood%2C+WB+%22The+Nematode+Caenorhabditis+elegans%22">The Nematode Caenorhabditis elegans</a>. Wood, W. B. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, NY. 1-16 (1988).</li>
<li>Sutphin, G. L., Kaeberlein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+restriction+by+bacterial+deprivation+increases+life+span+in+wild-derived+nematodes%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Dietary restriction by bacterial deprivation increases life span in wild-derived nematodes.</a> Exp Gerontol. 43, 130-135 (2008).</li>
<li>Garigan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+tissue+aging+in+Caenorhabditis+elegans%3A+a+role+for+heat-shock+factor+and+bacterial+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of tissue aging in Caenorhabditis elegans: a role for heat-shock factor and bacterial proliferation.</a> Genetics. 161, 1101-1112 (2002).</li>
<li>Chen, D., Pan, K. Z., Palter, J. E., Kapahi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longevity+determined+by+developmental+arrest+genes+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Longevity determined by developmental arrest genes in Caenorhabditis elegans.</a> Aging Cell. 6, 525-523 (2007).</li>
<li>Curran, S. P., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lifespan+regulation+by+evolutionarily+conserved+genes+essential+for+viability%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Lifespan regulation by evolutionarily conserved genes essential for viability.</a> PLoS Genet. 3, e56-e56 (2007).</li>
<li>Dillin, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rates+of+behavior+and+aging+specified+by+mitochondrial+function+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Rates of behavior and aging specified by mitochondrial function during development.</a> Science. 298, 2398-2401 (2002).</li>
<li>Hamilton, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+RNAi+screen+for+longevity+genes+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">A systematic RNAi screen for longevity genes in C. elegans.</a> Genes Dev. 19, 1544-1555 (2005).</li>
<li>Hansen, M., Hsu, A. L., Dillin, A., Kenyon, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+genes+tied+to+endocrine%2C+metabolic%2C+and+dietary+regulation+of+lifespan+from+a+Caenorhabditis+elegans+genomic+RNAi+screen%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">New genes tied to endocrine, metabolic, and dietary regulation of lifespan from a Caenorhabditis elegans genomic RNAi screen.</a> PLoS Genet. 1, 119-128 (2005).</li>
<li>Lee, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+RNAi+screen+identifies+a+critical+role+for+mitochondria+in+C.+elegans+longevity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">A systematic RNAi screen identifies a critical role for mitochondria in C. elegans longevity.</a> Nat Genet. 33, 40-48 (2003).</li>
<li>Smith, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-+and+calorie-independent+life+span+extension+from+dietary+restriction+by+bacterial+deprivation+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Age- and calorie-independent life span extension from dietary restriction by bacterial deprivation in Caenorhabditis elegans.</a> BMC Dev Biol. 8, 49-49 (2008).</li>
<li>Hodgkin, J., Horvitz, H. R., Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nondisjunction+Mutants+of+the+Nematode+CAENORHABDITIS+ELEGANS%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Nondisjunction Mutants of the Nematode CAENORHABDITIS ELEGANS.</a> Genetics. 91, 67-94 (1979).</li>
<li>Emmons, S. W., Sternberg, P. W. C. ELEGANS II. Riddle, D. L., Blumenthal, T., Meyer, B. J., Priess, J. R. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Springs Harbor, NY. (1997).</li>
<li>Lipton, J., Kleemann, G., Ghosh, R., Lints, R., Emmons, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mate+searching+in+Caenorhabditis+elegans%3A+a+genetic+model+for+sex+drive+in+a+simple+invertebrate%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mate searching in Caenorhabditis elegans: a genetic model for sex drive in a simple invertebrate.</a> J Neurosci. 24, 7427-7434 (2004).</li>
<li>Davis, B. O., Anderson, G. L., Dusenbery, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Total+luminescence+spectroscopy+of+fluorescence+changes+during+aging+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Total luminescence spectroscopy of fluorescence changes during aging in Caenorhabditis elegans.</a> Biochemistry. 21, 4089-4095 (1982).</li>
<li>Klass, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans%3A+major+biological+and+environmental+factors+influencing+life+span%5BTitle%5D)+AND+%22Mech+Ageing+Dev%22%5BJournal%5D)">Aging in the nematode Caenorhabditis elegans: major biological and environmental factors influencing life span.</a> Mech Ageing Dev. 6, 413-429 (1977).</li>
<li>Steinkraus, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+restriction+suppresses+proteotoxicity+and+enhances+longevity+by+an+hsf-1-dependent+mechanism+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Dietary restriction suppresses proteotoxicity and enhances longevity by an hsf-1-dependent mechanism in Caenorhabditis elegans.</a> Aging Cell. 7, 394-404 (2008).</li>
</ol>

הבקרה הגנטית של אריכות ימים, נחקרה בהרחבה ב C. elegans, בעיקר בשל הקלות ואת המהירות שבה תוחלת החיים ניתן לקבוע. פרוטוקול שנדונו במאמר זה מתאר המסגרת הבסיסית להשגת לשחזור נתונים תוחלת החיים ב C. elegans והוא יכול לחול גם על מינים relatednematode. 2 על ידי ביצוע כמה שינויים פשוטים הליכים אלה ניתן להתאים מדד תוחלת החיים תחת מגוון של תנאים. כאן נדון וריאציות משותף, ובהם חיידקים חיים, התערבות RNA (RNAi), הגבלה תזונתית על ידי מניעת חיידקים ללא שימוש בסמים NG...

<table><tbody><tr><td>אגר</td><td>ריאגנט</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0145-17-0 (214530)</td><td></td></tr><tr><td>אמפיסילין</td><td>ריאגנט</td><td>MidSci</td><td>0339</td><td></td></tr><tr><td>BactoTryptone</td><td>ריאגנט</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0123-17-3 (211705)</td><td></td></tr><tr><td>BactoPeptone</td><td>ריאגנט</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0118-17-0 (211677)</td><td></td></tr><tr><td>CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>ריאגנט</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9699248 (1332-01)</td><td></td></tr><tr><td>קרבניסילין</td><td>ריאגנט</td><td>Gold Biotechnology</td><td>C0109</td><td></td></tr><tr><td>כולסטרול</td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C75209</td><td></td></tr><tr><td>פלואורודאוקסיורידין (FUDR)</td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F0503</td><td></td></tr><tr><td>Isopropyl &amp;#946;-d-Thiogalactopyranoside (IPTG)</td><td>ריאגנט</td><td>Gold Biotechnology</td><td>I2481C5</td><td></td></tr><tr><td>KPi דיבסי</td><td>ריאגנט</td><td>Fisher Scientific</td><td>5087862 (3252-01)</td><td></td></tr><tr><td>KPi מונובסי</td><td>ריאגנט</td><td>Fisher Scientific</td><td>5087861 (3246-01)</td><td></td></tr><tr><td>MgSO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>ריאגנט</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9561800 (2500-01)</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>ריאגנט</td><td>Fisher Scientific</td><td>S251</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1503</td><td></td></tr><tr><td>תמצית שמרים</td><td>ריאגנט</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0886-17-0 (288620)</td><td></td></tr></tbody></table>

מדידת caenorhabditis elegans חיים טווח על מדיה מוצק

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media

הזדקנות היא תהליך ניוונית המאופיינת הידרדרות מתקדמת של רכיבים סלולריים האברונים וכתוצאה מכך התמותה. נמטודות<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; התפתחה כמודל העיקריים המשמשים כדי לחקור את הביולוגיה של ההזדקנות. כי כמעט כל המשנה הביולוגי עובר ירידה תפקודית עם העלייה בגיל, תוחלת החיים היא נקודת הסיום הראשונית של עניין כאשר בהתחשב בשיעור כולל של הזדקנות. ב נמטודות, תוחלת חיים מוגדרת בדרך כלל כמספר ימים חיה נותר תגובה לגירויים חיצוניים. נמטודות יכול להיות מופצות גם בתקשורת נוזל או מוצק מדיה צלחות, טכניקות פותחו למדידת תוחלת החיים בתנאים שניהם. כאן אנו מציגים פרוטוקול כללית למדידת אורך החיים של נמטודות שמרו על התקשורת צמיחה מוצקה נמטודות והאכילה דיאטה של ​​UV-הרג חיידקים. נהלים אלה יכולים בקלות להיות מותאם תוחלת החיים assay בתנאים משותף שונים, כולל תזונה המורכבת של חיידקים חיים, הגבלה תזונתיים, ואת התערבות RNA.

במאמר זה אנו מציגים את פרוטוקול כללי למדידת אורך החיים של נמטודות שמרו על התקשורת עם מזון מוצק-UV הרג חיידקים.

מדידת Caenorhabditis elegans חיים טווח על מדיה מוצק

הזדקנות היא תהליך דגנרטיבי המאופיין בהידרדרות הדרגתית של רכיבים תאיים ואברונים, המובילה למוות. הנמטודה...

על מנת למדוד את תוחלת החיים ב-C. elegans, יוצרים אוכלוסייה מסונכרנת בגיל באמצעות השחאת ביצים מתוזמנת. תולעים הרמפרודיטיות בוגרות ופעילות מועברות לצלחות מצע גידול לנמטודות (NGM) הזרועות ב-E. coli שהורג ב-UV, ומושארות להטלת ביצים למשך שש עד שמונה שעות ולאחר מכן מוסרות. במהלך יומיים, התולעים בוקעות מביצים אלו וגדלות עד לשלב הזרקים L4. תולעי L4 מועברות לצלחות NGM חדשות המכילות אמפיסילין למניעת זיהום בחיידקים חיים ו-FUDR למניעת רבייה, ומושארות להתפתח לבוגרים.מנקודה זו ואילך, התולעים הבוגרות נבחנות מדי יומיים עד שלושה ימים עד שכל התולעים מתות. בכל נקודת זמן, התולעים המתות מוסרות מהצלחת ומספר התולעים החיות והמתות נרשם. אני ג'ורג' סטון מהמעבדה של מאט קפליין במחלקה הפתולוגיה באוניברסיטת וושינגטון.היום נדגים לכם כיצד למדוד תוחלת חיים ונראה את ה-hepatitis elegance שלנו. אנו משתמשים בהליך זה במעבדה שלנו כדי לחקור את הגנטיקה של ההזדקנות. אז בואו נתחיל.ניסוי תוחלת חיים בסיסי דורש שני סוגי מצעים: מצעי NGM סטנדרטיים, שאינם מכילים תוספים, ומצעי AMP FUDR, שבהם נוספו ל-NGM גם אמפיסילין וגם פלואורו-דאוקסי-אורידין. שני סוגי המצעים מזורעים בחיידקי e coli OP 50, שמומתים לאחר מכן בחשיפה ל-uv. התחל בהכנת 10 milliliters של תמיסת NGM.עבור כל צלחת פטרי בקוטר 60 millimeter, המס לחלוטין את ה-NGM המוצק באמצעות חימום במיקרוגל בהספק גבוה בפולסים של 32 שניות. סובב את המצע בין הפולסים כדי למנוע הצטברות של בועות גז בלחץ, והנח את ה-NGM הנוזלי באמבט מים בטמפרטורה של 55 degree Celsius או על השולחן כדי לאפשר למצע להתקרר. ברגע שהמצע התקרר ל-55 degree Celsius, נקודה שבה תוכל להחזיק את כלי הזכוכית בידיים חשופות בנוחות, הוא מוכן להוספת תרופות.ולשפוך את הצלחות עבור צלחות עם תרופות, הוסיפו 33 µL של 150 mM FUDR ו-100 µL של 100 mg/mL Ampicillin לכל 100 mL NGM וסובבו לערבוב; Ampicillin משמש למניעת זיהום חיידקי חיצוני ו-FUDR למניעת בקיעת ביצים. כך לא יהיה צורך להעביר את התולעים מדי כמה ימים כדי להפריד אותן מזחלים הגדלים.כעת מזגו את המצע והניחו לצלחות להתייבש על שולחן העבודה במשך יומיים. ביום שלפני סיום ייבוש הצלחות, זרעו תרבית נוזלית של LB עם מושבה בודדת ממריחה טרייה של חיידקי e coli. OP 50 בתוך LB auger. הכינו לפחות 0.5 milliliter תרבית לכל צלחת של 60 millimeter.העבירו את תרבית ה-OP 50 למנער בטמפרטורה של 37 degree Celsius והניחו לחיידקים לגדול למשך לילה. למחרת, השקיעו את חיידקי ה-OP 50 באמצעות כוח צנטריפוגלי של 3,500 g למשך 10 דקות. שפכו כמות מספקת מהנוזל העליון (supernatant) כדי לתרחף מחדש את החיידקים בריכוז של 10 x.כעת, חסנו כל צלחת עם 100 µL של התרבית המרוכזת. הימנעו ממגע של קצה הפ pipette עם פני השטח של ה-NGM, שכן פגמים במצע יאפשרו לתולעים לחפור; סובבו את הצלחות עד שהחיידקים מכסים את האזור המרכזי של ה-NGM מבלי להתקרב לדפנות הצלחת, והשאירו את הצלחות להתייבש על השולחן למשך 24 שעות. לאחר הייבוש, חשפו את פני השטח של הצלחות למינון UV חזק מספיק כדי לעצור את הצמיחה החיידקית; אנו משתמשים ב-strata gene UV straddle linker 2, 400.התחילו בהטענת הפלטות במקשר הדילוג (straddle linker) ללא המכסים שלהן. כעת לחצו על energy. הקישו 9 9 9 9 במקלדת ולחצו על start.הצלחות ייחשפו לקרינת UV למשך כחמש דקות. ניתן לאחסן צלחות עם חיידקים שהורגו ב-UV כשהן הפוכות בטמפרטורה של 4°C למשך עד חודש. סעיף זה מתאר כיצד להפיק אוכלוסייה של תולעים עם תאריך בקיעה משותף.התחילו בהעברה של כ-20 תולעים בוגרות צעירות לצלחת NGM רעננה ללא תרופות. השאירו את הצלחת בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס למשך כשבוע כדי לאפשר לתולעים להתרבות ולאכול את כל המזון הבקטריאלי תוך שבוע. כאשר יופיעו תולעים שבקעו לאחרונה בשלב ה-dower שבו הצמיחה נעצרת, יש להעביר 20 עד 30 לרוות dower לצלחת NGM רעננה ללא תרופות ולהדגיר אותן בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס בנוכחות מזון.הזחלים הבוגרים יהפכו למבוגרים פעילים רביייתית תוך יומיים ויישארו פעילים רביייתית למשך מספר ימים לאחר מכן. כעת העבירו 10 עד 15 מהמבוגרים הפעילים רביייתית לצלחת NGM רעננה ללא תרופות. צלחת זו מכונה צלחת הנחת ביצים מתוזמנת או צלחת TEL.השאירו את פלטת ה-TEL בטמפרטורה של 25 degrees Celsius כדי שהתולעים יוכלו להטיל ביצים. בעלי החיים שיבבקו מביצים אלו יהיו בעלי החיים הניסוייים, ומשך חייהם יימדד לאחר שש שעות. בדקו את פלטת ה-TEL כדי לוודא קיום של ביצים.אם טרם הוטלו מספיק ביצים, השאירו את לוח ה-TEL בטמפרטורה של 25 degrees Celsius למשך זמן כולל של עד 24 שעות, תוך בדיקה תקופתית של נוכחות ביצים. כאשר הוטלה כמות מספיקה של ביצים, הסירו את הבוגרים מלוח ה-TEL.ניסוי אורך חיים טיפוסי ידרוש בין 30 ל-90 ביצים לכל קבוצה ניסיונית, אך ניתן להפיק מספר מאות ביצים מלוח TEL בודד. כ-150 ביצים יונחו על ידי 10 עד 15 בוגרים פעילים רבייתית בתוך שש עד שמונה שעות. בעת השוואה בין קבוצות ניסיוניות, ניתן להגיע למובהקות סטטיסטית עבור הבדלי אורך חיים גדולים עם כ-30 בעלי חיים בלבד.יש להשתמש במספר רב יותר של בעלי חיים כדי להבחין בהבדלים צנועים יותר. כעת, הניחו את לוח ה-TEL ללא הבוגרים בטמפרטורה של 20 °C עד שהביצים יבבקו והתולעים יתפתחו לשלב הלרבה L4. תהליך זה אורך בדרך כלל יומיים עבור C elegance מסוג wild type, אך עשוי להימשך זמן רב יותר עבור זנים בעלי פנוטיפים של התפתחות איטית.סעיף זה מתאר כיצד לעקוב אחר מהלך חייהם של אוכלוסיות מסונכרנות גיל. ראשית, העבירו את הלרוות בשלב L4 מצעיל ה-TEL לצעילי AMP FUDR מוכנים. עבור כל זן או תנאי שנבדקים, נהוג להכין שתיים עד שלוש צלחות עם 25 עד 30 תולעים בכל צלחת.דגרו את צלחות ה-AMP FUDR בטמפרטורה של 20 °C למשך 24 שעות. לאחר מכן, בצעו הערכה ויזואלית של התולעים, המצע והחיידקים, והעבירו את התולעים לצלחות AMP FUDR טריות. אם התולעים אכלו את רוב המזון החיידקי, פעולה זו תתבצע בדרך כלל פעם או פעמיים בשבוע.בשלבים מוקדמים של הניסוי, אם נוכח מספר משמעותי של לרוות, הדבר מעיד בדרך כלל על כך שהתולעים הועברו לצלחות AMP FUDR כבוגרים צעירים במקום כשלב L4. בוגרים צעירים עלולים להטיל ביצים לפני שנכנס ה-FUDR לתוקף, ומדי פעם לרוות חומקות מהשפעות ה-FUDR וגדלות לבוגרים. במצב זה, לרוות אלו יסיבקו את תוצאות הניסוי; במקרה כזה, העבירו את התולעים הבוגרות לצלחות טריות והשליכו את הצלחות הישנות המכילות את הלרוות.יש להעביר את התולעים לצלחות רעננות גם אם נצפה גדילה של חיידקים חיים. בדרך כלל השילוב של AMP והריגה באמצעות UV יבטיח שחיידקים חיים לא יזהמו את הניסוי, אך לעיתים הדבר קורה. כמו כן, העבירו את התולעים.במידה ונצפתה צמיחה פטרייתית על המצע. אם הדבר מזוהה בשלב מוקדם מספיק, ניתן להסיר את הפטרייה באמצעות טיפ של פיפטה או שפכטל. ברגע שהצמיחה גדלה למשקף של יותר ממספר מילימטרים בקוטר, בדרך כלל קל יותר להעביר את התולעים לצלחת חדשה.בצעו דירוג של אורך החיים עבור כל התולעים מדי יומיים עד שלושה ימים. בעזרת מיקרוסקופ דיסקציה, קבעו האם כל תולעת חיה או מתה.הקש בעדינות על הצלחת. התולעת חיה אם היא נעה בתגובה להקשה. אם התולעת אינה מגיבה להקשה על הצלחת, בצע זום לאזור הראש והקש בעדינות על ראש התולעת באמצעות פיקת העברה מפלטינה.סמן את התולעת כמתה. אם היא אינה מגיבה באמצעות תנועת הראש, הסר את התולעת המתה מהצלחת. לאחר בדיקת כל התולעים, רשום את התאריך ואת מספר התולעים החיות והמתות.תולעים המגודלות על מצע מוצק עלולות מדי פעם לברוח מפני השטח של הצלחת על ידי חפירה או זחילה במעלה הדופן. תולעים שנמלטו מושמטות לחלוטין מהמחקר. עם הסיום, החזירו את הצלחות לאינקובטור בטמפרטורה של 20 degrees Celsius.המתינו יומיים עד שלושה ימים נוספים ולאחר מכן בדקו שוב את הצלחות הפטריה. המשיכו במשטר זה עד שכל התולעים ימותו. מספר התולעים שמתות בכל יום נהפך בדרך כלל כדי לחשב את פרופורציית התולעים החיות בכל יום, ונתונים אלו מוצגים גרפית כעקומת הישרדות תוך התחשבות ביום של הנחת הביצים המתוזמנת.יום אפס. תוחלת החיים החציונית הטיפוסית עבור זן הבר (wild type) של *C. elegans*, המגודל על מצע NGM עם חיידקים שהוקטלו באמצעות UV בטמפרטורה של 20 מעלות צלזיוס, היא כ-25 ימים, כפי שנמדד החל משלב הביצה.הרגע הדגמנו כיצד למדוד את תוחלת החיים ולהבחין באלגנסיות. ניתן לשנות פרוטוקול בסיסי זה כדי לבחון מגוון תנאים סביבתיים, כולל הגבלה תזונתית והשתקת RNA (RNA interference), הנושאים הנדונים בטקסט התומך. זהו סיכום התהליך.תודה שצפיתם ובהצלחה בניסוי שלכם.

measuring-caenorhabditis-elegans-life-span-on-solid-media

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

בפרוטוקול זה אנו מציגים שיטה...

מדידת Caenorhabditis elegans חיים טווח של 96 צלחות microtiter טוב

סרטון זה מתאר שיטה מסורתית מבוססת לוחות למדידת תוחלת החיים של C. elegans. הפרוטוקול לדוגמה מודד את תוחלת החיים של תולעים שטופלו ב-RNAi.

ניתוח תוחלת חיים: מדידת אריכות ימים של C. elegans

C. התנהגות הטלת ביצים של elegans יכולה לספק מידע חשוב במחקרים התפתחותיים, פוריותיים ואנטומיים. סרטון זה מציג את השלבים החשובים של בדיקת הטלת ביצים ומציג ניסוי לדוגמה שבו תרופה נבדקת לרעילות רבייה.

בדיקת הטלת ביצים: שיטה לכימות התנהגות הטלת הביצים של C. elegans

ביצה בתולעת assay (EIW) הוא שיטה יעילה לכמת-הטלת התנהגות. שינויים בנחת ביצה יכולים להיות תגובה התנהגותית של האורגניזם...

מדידת ההשפעות של חיידקים על<em&gt; ג Elegans</em&gt; התנהגות באמצעות Assay שימור ביצה

כאן אנו מפרטים פרוטוקולים שתוכננו במיוחד לניטור פגמים מורפוגניים המתרחשים בשלבים מוקדמים ומאוחרים של התארכות עוברית של הנמטודה Caenorhabditis elegans. בסופו של דבר, פרוטוקולים אלה נועדו לזהות גנים המווסתים את השלבים הללו ולאפיין את הדרישות הדיפרנציאליות שלהם לאורך הציר הקדמי-אחורי של העובר.

מדדי רומן לאפיון התארכות עוברית של נמטודות<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em

כאן נתאר שיטת עותקים משוכפלים, גישה באופן כמותי מודדים C. elegans תוחלת החיים/הישרדות, healthspan באופן תפוקה גבוהה וחזק, ובכך לאפשר הקרנה של מצבים רבים מבלי להתפשר על איכות הנתונים. פרוטוקול זה מפרט את האסטרטגיה, ומספק כלי תוכנה לניתוח של נתונים המשוכפלים.

השיטה קבע עותק משוכפל: בגישה תפוקה גבוהה באופן כמותי מידה Caenorhabditis elegans תוחלת החיים

Caenorhabditis elegans משמשים כמערכת מודל מצוינת עם שיטות חזקות ובעלות נמוכה לסקר את תוחלת החיים, תוחלת החיים והחוסן ללחץ.

סקר שיטות בעלות נמוכה למדידת תוחלת החיים ותוחלת הבריאות ב - Caenorhabditis elegans

מוצג כאן פרוטוקול אופטימלי לגידול נמטודות בודדות מבודדות על מדיה מוצקה בהתקנים מרובי בארות מיקרו-מפוברקים. גישה זו מאפשרת לעקוב אחר בעלי חיים בודדים לאורך חייהם עבור מגוון פנוטיפים הקשורים להזדקנות ולבריאות, כולל פעילות, גודל וצורת גוף, גיאומטריה של תנועה והישרדות.

תרבית ארוכת טווח וניטור של Caenorhabditis elegans מבודדים על מדיה מוצקה במכשירים מרובי בארות

כאן, אנו מציגים שיטה כללית לקביעת הכדאיות העוברית והמספר הכולל של עוברים המיוצרים (brood) באמצעות אורגניזם המודל C. elegans.

מדידת כדאיות עוברית וגודל הברוד ב- Caenorhabditis elegans

פרוטוקול זה מתאר בדיקה לכימות קצב ההזנה של Caenorhabditis elegans בהתבסס על מדידת פינוי החיידקים בתרבית נוזלית.

כימות צריכת המזון ב- Caenorhabditis elegans על ידי מדידת פינוי חיידקים

למדו כיצד למדוד את אורך החיים של תולעים Caenorhabditis elegans על מדיה מוצקה באמצעות חיידקי E. coli מושמדים ב-UV. שיטה זו מאפשרת לחוקרים לסנכרן אוכלוסיות ולעקוב אחרי תמותת הבוגרים בצורה מדויקת.

מדידת Caenorhabditis elegans חיים טווח על מדיה מוצק

גלה סרטונים נוספים