Name: מדידת Caenorhabditis elegans חיים טווח על מדיה מוצק (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-12T00:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 49 s
Description: למדו כיצד למדוד את אורך החיים של תולעים Caenorhabditis elegans על מדיה מוצקה באמצעות חיידקי E. coli מושמדים ב-UV. שיטה זו מאפשרת לחוקרים לסנכרן אוכלוסיות ולעקוב אחרי תמותת הבוגרים בצורה מדויקת.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי פריצות דרך גלן / מרחוק פרס גרונטולוגיה ו-NIH גרנט 1R01AG031108-01 ל MKGS נתמך על ידי NIH הכשרה מענק P30AG013280. ח&quot;כ הוא רפואי אליסון קרן מלומד חדש הזדקנות.

<ol><li>Wood, W. B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWood%2C+WB+%22The+Nematode+Caenorhabditis+elegans%22">The Nematode Caenorhabditis elegans</a>. Wood, W. B. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, NY. 1-16 (1988).</li>
<li>Sutphin, G. L., Kaeberlein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+restriction+by+bacterial+deprivation+increases+life+span+in+wild-derived+nematodes%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Dietary restriction by bacterial deprivation increases life span in wild-derived nematodes.</a> Exp Gerontol. 43, 130-135 (2008).</li>
<li>Garigan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+tissue+aging+in+Caenorhabditis+elegans%3A+a+role+for+heat-shock+factor+and+bacterial+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of tissue aging in Caenorhabditis elegans: a role for heat-shock factor and bacterial proliferation.</a> Genetics. 161, 1101-1112 (2002).</li>
<li>Chen, D., Pan, K. Z., Palter, J. E., Kapahi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longevity+determined+by+developmental+arrest+genes+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Longevity determined by developmental arrest genes in Caenorhabditis elegans.</a> Aging Cell. 6, 525-523 (2007).</li>
<li>Curran, S. P., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lifespan+regulation+by+evolutionarily+conserved+genes+essential+for+viability%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Lifespan regulation by evolutionarily conserved genes essential for viability.</a> PLoS Genet. 3, e56-e56 (2007).</li>
<li>Dillin, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rates+of+behavior+and+aging+specified+by+mitochondrial+function+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Rates of behavior and aging specified by mitochondrial function during development.</a> Science. 298, 2398-2401 (2002).</li>
<li>Hamilton, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+RNAi+screen+for+longevity+genes+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">A systematic RNAi screen for longevity genes in C. elegans.</a> Genes Dev. 19, 1544-1555 (2005).</li>
<li>Hansen, M., Hsu, A. L., Dillin, A., Kenyon, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+genes+tied+to+endocrine%2C+metabolic%2C+and+dietary+regulation+of+lifespan+from+a+Caenorhabditis+elegans+genomic+RNAi+screen%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">New genes tied to endocrine, metabolic, and dietary regulation of lifespan from a Caenorhabditis elegans genomic RNAi screen.</a> PLoS Genet. 1, 119-128 (2005).</li>
<li>Lee, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+RNAi+screen+identifies+a+critical+role+for+mitochondria+in+C.+elegans+longevity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">A systematic RNAi screen identifies a critical role for mitochondria in C. elegans longevity.</a> Nat Genet. 33, 40-48 (2003).</li>
<li>Smith, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-+and+calorie-independent+life+span+extension+from+dietary+restriction+by+bacterial+deprivation+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Age- and calorie-independent life span extension from dietary restriction by bacterial deprivation in Caenorhabditis elegans.</a> BMC Dev Biol. 8, 49-49 (2008).</li>
<li>Hodgkin, J., Horvitz, H. R., Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nondisjunction+Mutants+of+the+Nematode+CAENORHABDITIS+ELEGANS%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Nondisjunction Mutants of the Nematode CAENORHABDITIS ELEGANS.</a> Genetics. 91, 67-94 (1979).</li>
<li>Emmons, S. W., Sternberg, P. W. C. ELEGANS II. Riddle, D. L., Blumenthal, T., Meyer, B. J., Priess, J. R. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Springs Harbor, NY. (1997).</li>
<li>Lipton, J., Kleemann, G., Ghosh, R., Lints, R., Emmons, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mate+searching+in+Caenorhabditis+elegans%3A+a+genetic+model+for+sex+drive+in+a+simple+invertebrate%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mate searching in Caenorhabditis elegans: a genetic model for sex drive in a simple invertebrate.</a> J Neurosci. 24, 7427-7434 (2004).</li>
<li>Davis, B. O., Anderson, G. L., Dusenbery, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Total+luminescence+spectroscopy+of+fluorescence+changes+during+aging+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Total luminescence spectroscopy of fluorescence changes during aging in Caenorhabditis elegans.</a> Biochemistry. 21, 4089-4095 (1982).</li>
<li>Klass, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans%3A+major+biological+and+environmental+factors+influencing+life+span%5BTitle%5D)+AND+%22Mech+Ageing+Dev%22%5BJournal%5D)">Aging in the nematode Caenorhabditis elegans: major biological and environmental factors influencing life span.</a> Mech Ageing Dev. 6, 413-429 (1977).</li>
<li>Steinkraus, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+restriction+suppresses+proteotoxicity+and+enhances+longevity+by+an+hsf-1-dependent+mechanism+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Dietary restriction suppresses proteotoxicity and enhances longevity by an hsf-1-dependent mechanism in Caenorhabditis elegans.</a> Aging Cell. 7, 394-404 (2008).</li>
</ol>

הבקרה הגנטית של אריכות ימים, נחקרה בהרחבה ב C. elegans, בעיקר בשל הקלות ואת המהירות שבה תוחלת החיים ניתן לקבוע. פרוטוקול שנדונו במאמר זה מתאר המסגרת הבסיסית להשגת לשחזור נתונים תוחלת החיים ב C. elegans והוא יכול לחול גם על מינים relatednematode. 2 על ידי ביצוע כמה שינויים פשוטים הליכים אלה ניתן להתאים מדד תוחלת החיים תחת מגוון של תנאים. כאן נדון וריאציות משותף, ובהם חיידקים חיים, התערבות RNA (RNAi), הגבלה תזונתית על ידי מניעת חיידקים ללא שימוש בסמים NG...

<table><tbody><tr><td>אגר</td><td>ריאגנט</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0145-17-0 (214530)</td><td></td></tr><tr><td>אמפיסילין</td><td>ריאגנט</td><td>MidSci</td><td>0339</td><td></td></tr><tr><td>BactoTryptone</td><td>ריאגנט</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0123-17-3 (211705)</td><td></td></tr><tr><td>BactoPeptone</td><td>ריאגנט</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0118-17-0 (211677)</td><td></td></tr><tr><td>CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>ריאגנט</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9699248 (1332-01)</td><td></td></tr><tr><td>קרבניסילין</td><td>ריאגנט</td><td>Gold Biotechnology</td><td>C0109</td><td></td></tr><tr><td>כולסטרול</td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C75209</td><td></td></tr><tr><td>פלואורודאוקסיורידין (FUDR)</td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F0503</td><td></td></tr><tr><td>Isopropyl &amp;#946;-d-Thiogalactopyranoside (IPTG)</td><td>ריאגנט</td><td>Gold Biotechnology</td><td>I2481C5</td><td></td></tr><tr><td>KPi דיבסי</td><td>ריאגנט</td><td>Fisher Scientific</td><td>5087862 (3252-01)</td><td></td></tr><tr><td>KPi מונובסי</td><td>ריאגנט</td><td>Fisher Scientific</td><td>5087861 (3246-01)</td><td></td></tr><tr><td>MgSO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>ריאגנט</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9561800 (2500-01)</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>ריאגנט</td><td>Fisher Scientific</td><td>S251</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1503</td><td></td></tr><tr><td>תמצית שמרים</td><td>ריאגנט</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0886-17-0 (288620)</td><td></td></tr></tbody></table>

מדידת caenorhabditis elegans חיים טווח על מדיה מוצק

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media

הזדקנות היא תהליך ניוונית המאופיינת הידרדרות מתקדמת של רכיבים סלולריים האברונים וכתוצאה מכך התמותה. נמטודות<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; התפתחה כמודל העיקריים המשמשים כדי לחקור את הביולוגיה של ההזדקנות. כי כמעט כל המשנה הביולוגי עובר ירידה תפקודית עם העלייה בגיל, תוחלת החיים היא נקודת הסיום הראשונית של עניין כאשר בהתחשב בשיעור כולל של הזדקנות. ב נמטודות, תוחלת חיים מוגדרת בדרך כלל כמספר ימים חיה נותר תגובה לגירויים חיצוניים. נמטודות יכול להיות מופצות גם בתקשורת נוזל או מוצק מדיה צלחות, טכניקות פותחו למדידת תוחלת החיים בתנאים שניהם. כאן אנו מציגים פרוטוקול כללית למדידת אורך החיים של נמטודות שמרו על התקשורת צמיחה מוצקה נמטודות והאכילה דיאטה של ​​UV-הרג חיידקים. נהלים אלה יכולים בקלות להיות מותאם תוחלת החיים assay בתנאים משותף שונים, כולל תזונה המורכבת של חיידקים חיים, הגבלה תזונתיים, ואת התערבות RNA.

במאמר זה אנו מציגים את פרוטוקול כללי למדידת אורך החיים של נמטודות שמרו על התקשורת עם מזון מוצק-UV הרג חיידקים.

מדידת Caenorhabditis elegans חיים טווח על מדיה מוצק

הזדקנות היא תהליך דגנרטיבי המאופיין בהידרדרות הדרגתית של רכיבים תאיים ואברונים, המובילה למוות. הנמטודה...

על מנת למדוד את תוחלת החיים ב-C. elegans, יוצרים אוכלוסייה מסונכרנת בגיל באמצעות השחאת ביצים מתוזמנת. תולעים הרמפרודיטיות בוגרות ופעילות מועברות לצלחות מצע גידול לנמטודות (NGM) הזרועות ב-E. coli שהורג ב-UV, ומושארות להטלת ביצים למשך שש עד שמונה שעות ולאחר מכן מוסרות. במהלך יומיים, התולעים בוקעות מביצים אלו וגדלות עד לשלב הזרקים L4. תולעי L4 מועברות לצלחות NGM חדשות המכילות אמפיסילין למניעת זיהום בחיידקים חיים ו-FUDR למניעת רבייה, ומושארות להתפתח לבוגרים.מנקודה זו ואילך, התולעים הבוגרות נבחנות מדי יומיים עד שלושה ימים עד שכל התולעים מתות. בכל נקודת זמן, התולעים המתות מוסרות מהצלחת ומספר התולעים החיות והמתות נרשם. אני ג'ורג' סטון מהמעבדה של מאט קפליין במחלקה הפתולוגיה באוניברסיטת וושינגטון.היום נדגים לכם כיצד למדוד תוחלת חיים ונראה את ה-hepatitis elegance שלנו. אנו משתמשים בהליך זה במעבדה שלנו כדי לחקור את הגנטיקה של ההזדקנות. אז בואו נתחיל.ניסוי תוחלת חיים בסיסי דורש שני סוגי מצעים: מצעי NGM סטנדרטיים, שאינם מכילים תוספים, ומצעי AMP FUDR, שבהם נוספו ל-NGM גם אמפיסילין וגם פלואורו-דאוקסי-אורידין. שני סוגי המצעים מזורעים בחיידקי e coli OP 50, שמומתים לאחר מכן בחשיפה ל-uv. התחל בהכנת 10 milliliters של תמיסת NGM.עבור כל צלחת פטרי בקוטר 60 millimeter, המס לחלוטין את ה-NGM המוצק באמצעות ח

measuring-caenorhabditis-elegans-life-span-on-solid-media

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

בפרוטוקול זה אנו מציגים שיטה...

מדידת Caenorhabditis elegans חיים טווח של 96 צלחות microtiter טוב

סרטון זה מתאר שיטה מסורתית מבוססת לוחות למדידת תוחלת החיים של C. elegans. הפרוטוקול לדוגמה מודד את תוחלת החיים של תולעים שטופלו ב-RNAi.

ניתוח תוחלת חיים: מדידת אריכות ימים של C. elegans

ביצה בתולעת assay (EIW) הוא שיטה יעילה לכמת-הטלת התנהגות. שינויים בנחת ביצה יכולים להיות תגובה התנהגותית של האורגניזם...

מדידת ההשפעות של חיידקים על<em&gt; ג Elegans</em&gt; התנהגות באמצעות Assay שימור ביצה

כאן אנו מפרטים פרוטוקולים שתוכננו במיוחד לניטור פגמים מורפוגניים המתרחשים בשלבים מוקדמים ומאוחרים של התארכות עוברית של הנמטודה Caenorhabditis elegans. בסופו של דבר, פרוטוקולים אלה נועדו לזהות גנים המווסתים את השלבים הללו ולאפיין את הדרישות הדיפרנציאליות שלהם לאורך הציר הקדמי-אחורי של העובר.

מדדי רומן לאפיון התארכות עוברית של נמטודות<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em

כאן, אנו מציגים מסגרת להתייחס הגבלות תזונתיות מגוון רחב ביטוי גנים ואת תוחלת החיים. אנו מתארים פרוטוקולים עבור הגבלות תזונתיות מגוון רחב, הדמיה כמותית של ביטוי גנים תחת הפרדיגמה הזו. אנחנו עוד חלוקה לרמות ניתוחים חישובית לחשוף שבבסיס תכונות עיבוד המידע של מעגלים גנטי מעורב חישה מזון.

כימות של מידע מקודד על ידי גנים ביטוי רמות במהלך תוחלת החיים אפנון תחת הגבלת תזונה מגוון רחב C . elegans

כאן נתאר שיטת עותקים משוכפלים, גישה באופן כמותי מודדים C. elegans תוחלת החיים/הישרדות, healthspan באופן תפוקה גבוהה וחזק, ובכך לאפשר הקרנה של מצבים רבים מבלי להתפשר על איכות הנתונים. פרוטוקול זה מפרט את האסטרטגיה, ומספק כלי תוכנה לניתוח של נתונים המשוכפלים.

השיטה קבע עותק משוכפל: בגישה תפוקה גבוהה באופן כמותי מידה Caenorhabditis elegans תוחלת החיים

Caenorhabditis elegans משמשים כמערכת מודל מצוינת עם שיטות חזקות ובעלות נמוכה לסקר את תוחלת החיים, תוחלת החיים והחוסן ללחץ.

סקר שיטות בעלות נמוכה למדידת תוחלת החיים ותוחלת הבריאות ב - Caenorhabditis elegans

מוצג כאן פרוטוקול אופטימלי לגידול נמטודות בודדות מבודדות על מדיה מוצקה בהתקנים מרובי בארות מיקרו-מפוברקים. גישה זו מאפשרת לעקוב אחר בעלי חיים בודדים לאורך חייהם עבור מגוון פנוטיפים הקשורים להזדקנות ולבריאות, כולל פעילות, גודל וצורת גוף, גיאומטריה של תנועה והישרדות.

תרבית ארוכת טווח וניטור של Caenorhabditis elegans מבודדים על מדיה מוצקה במכשירים מרובי בארות

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לתרבית נמטודות בודדות על מדיה מוצקה למעקב אחר פרמטרים פיזיולוגיים לכל החיים וכימות פלואורסצנטי. מערכת תרבית זו כוללת מחסום חומצה פלמיטית סביב בארות תולעים בודדות כדי למנוע מבעלי חיים לברוח, ומאפשרת שימוש בהתערבויות מרתיעות, כולל חיידקים פתוגניים וגורמי עקה כימיים.

תרבות ארוכת טווח של Caenorhabditis elegans בודדים על מדיה מוצקה לניטור פלואורסצנטי אורכי והתערבויות מרתיעות

כאן, אנו מציגים שיטה כללית לקביעת הכדאיות העוברית והמספר הכולל של עוברים המיוצרים (brood) באמצעות אורגניזם המודל C. elegans.

מדידת כדאיות עוברית וגודל הברוד ב- Caenorhabditis elegans

פרוטוקול זה מתאר בדיקה לכימות קצב ההזנה של Caenorhabditis elegans בהתבסס על מדידת פינוי החיידקים בתרבית נוזלית.

כימות צריכת המזון ב- Caenorhabditis elegans על ידי מדידת פינוי חיידקים

למדו כיצד למדוד את אורך החיים של תולעים Caenorhabditis elegans על מדיה מוצקה באמצעות חיידקי E. coli מושמדים ב-UV. שיטה זו מאפשרת לחוקרים לסנכרן אוכלוסיות ולעקוב אחרי תמותת הבוגרים בצורה מדויקת.

מדידת Caenorhabditis elegans חיים טווח על מדיה מוצק

גלה סרטונים נוספים