Name: הקלטה של אלקטרו תסיסנית עובריים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-21T00:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 31 s
Description: למד הקלטות אלקטרופיזיולוגיות משרירים ונוירונים מוטוריים בזבובי פירות Drosophila. השיטה מאפשרת לחקור תהליכי סינפטוגנזה ותכונות חשמליות של מערכת העצבים המתפתחת.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

KB הוא נתמך על ידי NIH מענק GM54544.

למחברים אין הצהרות לגבי ניגודי עניינים.

הקלטה אלקטרו מעוברים תסיסנית דורש מניפולציה דיסקציה ידנית. הבריאות של התכשיר, ואיכות הסוגר של הקלטות, תלוי על אחד להיות מסוגל במהירות בצורה מסודרת להכין את הרקמות עובריים שביר הקלטה, ולאחר מכן לבצע את הניסוי. הניסויים צריכים להיות בקיאים בשני חתכים עובריים מהדק electrophysiology תיקון לפני שתנסה להתמודד בעת ובעונה אחת. הקלטות ניתן לעשות זאת באחת הגרסאות של כמה &quot;שונה תקן&quot; או &quot;haemolymph דמו...

הקלטה של ​​אלקטרו תסיסנית עובריים

Electrophysiological Recording in the Drosophila Embryo

תסיסנית הוא מודל גנטי המוביל במחקר של פיתוח הן עובריים המוח תפקודית. באופן מסורתי, בתחומים אלה הם די מבודדים אחד מהשני, עם היסטוריה עצמאית במידה רבה קהילות מדעיות. עם זאת, הממשק בין שדות אלה נבדלים בדרך כלל התוכניות התפתחותית תפקודית הבסיסית רכישת נכסים איתות חשמלי הבחנה של סינפסות כימיות תפקודית במהלך השלבים האחרונים של הקמת מעגל עצבי. ממשק זה הוא אזור חשוב ביותר לחקירה. ב תסיסנית, אלה שלבים של התפתחות תפקודי להתרחש בתקופה של &lt;8 שעות (במהירות של 25 ° C) במהלך השליש האחרון של העובר. תקופה זו התפתחותי מאוחר נחשב ארוך סורר אל בשל חקירה בתצהיר של הציפורן, קשה אפידרמיס חדיר. מראש היה פריצת דרך ביישום של דבק מים polymerizing כירורגית כי ניתן להחיל באופן מקומי כדי לאפשר לציפורן לנתיחה מבוקר של עוברים בשלב מאוחר. עם חתך אורכי הגבי, העובר יכול להיות מונח שטוח, חשיפת עצבים בחוט הגחון ועל קיר שרירי הגוף חקירה ניסויית. Whole-cell-clamp תיקון טכניקות אז יכול להיות מועסק על מנת להקליט בנפרד נוירונים לזיהוי והשרירים סומטי. תצורות אלו הקלטה שימשו כדי לעקוב אחר המראה ההבשלה של זרמים יוניים התפשטות פוטנציאל פעולה בשני הנוירונים והשרירים. מוטנטים גנטיים המשפיעים אלה התכונות החשמליות כבר מאופיין לחשוף את ההרכב המולקולרי של תעלות יונים ומתחמים איתות קשור, ולהתחיל חקר המנגנונים המולקולריים של בידול פונקציונלי. דגש מיוחד כבר את הרכבה של קשרים סינפטיים, הן בפריפריה מערכת העצבים המרכזית. Glutamatergic neuromuscular צומת (NMJ) נגיש ביותר שילוב של דימות אופטי ורישום אלקטרו. אלקטרודה יניקה כוס משמש כדי לעורר את העצבים ההיקפית, עם הגירוי הנוכחי לצומת (EJC) הקלטות שנעשו בשריר מתח מהודק. תצורה זו הקלטה שימש בתרשים בידול פונקציונלי של הסינפסה, ולעקוב אחר המראה ההבשלה של נכסים presynaptic שחרור גלוטמט. בנוסף, תכונות postsynaptic ניתן assayed באופן עצמאי באמצעות iontophoretic או יישום בלחץ של גלוטמט ישירות על פני שרירים, כדי למדוד את המראה ואת ההבשלה של שדות קולטן הגלוטמט. לפיכך, גם אלמנטים טרום postsynaptic ניתן לנטר בנפרד או בשילוב במהלך synaptogenesis עובריים. מערכת זו הייתה בשימוש רב לבודד ולאפיין מוטציות גנטיות הפוגעות במבנה סינפסה העוברית, וכך לגלות את המנגנונים המולקולריים השולטים מפרט והבחנה של קשרים סינפסה ופונקציונלי תכונות האיתות הסינפטי.

הקלטות אלקטרו מן<em&gt; תסיסנית</em&gt; עוברים לאפשר ניתוח של שריר בפיתוח תכונות הנוירון חשמל, כמו גם אפיון של synaptogenesis תפקודית בצומת neuromuscular glutamatergic ו כולינרגית מרכזית וסינפסות GABAergic.

*Drosophila* היא מודל גנטי מוביל לחקר ההתפתחות העוברית ומדעי העצבים התפקודיים כאחד. באופן מסורתי, תחומים אלו הם למדי...

ניתן להשיג רישומים אלקטרופיזיולוגיים משרירים ומנוירונים מוטוריים מדופן הגוף של עובר oph שהוכן כראוי. ניתן לבצע רישומים משרירים 6, 7, 12 או 13 בקלות באמצעות תצורת רישום של תא שלם (whole cell recording), וניתן למדוד זרמי מיניאטורה בעוצמה רבה לאחר השגת אטם של giga ohm לצורך רישום מהצומת העצבי-שרירי. ניתן להשתמש באלקטרודת יניקה כדי למשוך עצב מוטורי בקרבת נקודת היציאה מה-CNS ולהעביר גרייה פרה-סינפטית בזמן שזרמי תא שלם נמדדים בשריר הפוסט-סינפטי.לחלופין, ניתן להשתמש בפיפט כדי להעביר מוליכים עצביים מעוררים ליד אלקטרודת ההקלטה באמצעות יונטופורזה או הזרקה בלחץ. שלום, אני טון מהמעבדה של דייב במחלקה למדעי הביולוגיה באוניברסיטת אילינוי בשיקגו. היום אראה לכם הקלטה אלקטרופיזיולוגית של צומת עצב-שריר בעוברים בשלב הסלאט ושל נוירונים מרכזיים.הליכים אלו משמשים אותנו כדי לחקור את התפקוד וההתפתחות של המערכת הנוירו-שרירית של joof. טכניקות אלו פותחו במקור על ידי Kendall Brody, עברו ל-David Fit Stone, ולאחר מכן אליי, והיום אעביר אותן אליכם.פרוצדורה זו דורשת כי העוברים ייאספו ויבוצעו בהם דיסקציות כראוי מראש. כדי לראות כיצד הדבר מבוצע, צפו בפרסום הנלווה של Brody Featherstone and Chen Electrophysiological. הקלטות מנוירונים ומשרירי עוברים של Jossa משתמשות בטכניקות סטנדרטיות של whole cell patch clamping. ראשית,

electrophysiological-recording-in-the-drosophila-embryo

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

וידאו זה מדגים את נוהל בידוד המוח כולו מן הבוגרים תסיסנית כהכנה ההקלטה מתא עצב בודד באמצעות תא רגיל הטכנולוגיה כולו. זה כולל תמונות של תאים GFP ונוירונים שכותרתו שנצפו במהלך ההקלטה.

תא הקלטות שלמות של המוח של מבוגרים תסיסנית

כאן אנו מתארים שיטות אלקטרו למדידת בשידור סינפטי בצומת neuromuscular של הזחל תסיסנית. שחרור עורר היא יזמה באופן מלאכותי על ידי המרצת הנוירונים אקסונים מוטוריים, והעברת דרך NMJ ניתן למדוד התגובה postsynaptic עורר בשריר.

שיטות אלקטרו עבור הקלטה פוטנציאלים Synaptic מן NMJ של הזחלים תסיסנית

טכניקה זו חושפת את neuromusculature עובריים תסיסנית עבור אימונוהיסטוכימיה או הקלטה אלקטרו. זה שימושי לחקר אירועי מוקדם בהתפתחות neuromuscular או ביצוע electrophysiology ב מוטנטים שאינם יכולים לבקוע.

מסיק והכנת תסיסנית עוברים הקלטה אלקטרו ונהלים אחרים

אנו מציגים דרכים שונות כדי לפקח על תפקוד הלב של...

ניטור הלב לתפקד הזחל תסיסנית melanogaster ללימודים פיזיולוגיים

מערכת סיבים הענק הוא מעגל עצבי פשוטה של...

הקלטות אלקטרו מתוך מסלול של סיבים ענק ד melanogaster</em

סרטון זה מתאר את הפרוטוקול לרישום אלקטרופיזיולוגי של פעילות קולטני אור בעין של דרוזופילה משותקת, המאפשר מדידה מדויקת של שינויי מתח בתגובה לגירויי אור.

רישום אלקטרופיזיולוגי של תגובות מתח של פוטורצפטורים ברשתית דרוזופילה לגירויי אור

הסרטון מדגים רישום חוץ-תאי של פעילות עצבית ממערכת העצבים המרכזית (CNS) של זחלי דרוזופילה. מערכת העצבים המרכזית הטרנסקטיבית ממוקמת בתא הקלטה, והפעילות החשמלית לעצב יורד נרשמת כדי לקבוע את תדר הירי הבסיסי. לאחר מכן מוצג סוכן בדיקה, והשינוי בתדירות הירי נרשם כדי לקבוע את ההשפעה המעוררת או המעכבת של הסוכן.

רישום חוץ-תאי של פעילות חשמלית במערכת העצבים המרכזית של דרוזופילה

פרוטוקול זה מתאר הקלטה תאית מתגובות פוטנציאל הפעולה שנורו על ידי נוירונים טעם labellar בדרוזופילה.

הקלטת אלקטרו מ<em&gt; דרוזופילה</em&gt; Labellar טעם Sensilla

מיקרואלקטרודות חדות מאפשרות אפיון אלקטרופיזיולוגי מדויק של תפוקת קולטני האור והאינטרנוירונים החזותיים בדרוזופילה חיה. כאן אנו מראים כיצד להשתמש בשיטה זו כדי להקליט תגובות מתח באיכות גבוהה של תאים בודדים לגירוי אור מבוקר. שיטה זו אידיאלית לחקר עיבוד מידע עצבי בעיניים של תרכובות חרקים.

שיטת אלקטרו עבור תגובות מתח תאיים הקלטה של<em&gt; תסיסנית</em&gt; קולטני אור ו interneurons יאירו גירויים<em&gt; In vivo</em

כל תא הקלטות של תסיסנית melanogaster photoreceptors לאפשר מדידה של ספונטני בליטות כהה, בליטות קוונטיות, תגובות מאקרוסקופיות לאור, ואת המתח הנוכחי היחסים בתנאים שונים. בשילוב עם ד melanogaster כלים מניפולציה גנטית, שיטה זו מאפשרת את המחקר של inositol- השומן ליפיד המסלול נתיב היעד שלה, ערוץ TRP.

שיטה אלקטרו-קולית לקולקציית מתח מלא<em&gt; תסיסנית</em&gt; פוטורספטורים

פרוטוקול זה מתאר שיטה כדי להקליט את הפעילות החשמלית יורד של מערכת העצבים המרכזית דרוזופילה melanogaster כדי לאפשר את עלות-יעיל ונוח בדיקה של סוכנים תרופתי, מוטציות גנטיות של חלבונים עצבית, ו/או את התפקיד של מסלולים פיזיולוגיים נחקרו.

הקלטה אלקטרופיזיולוגיות של פעילות מערכת העצבים המרכזית השלישית-לחלל דרוזופילה Melanogaster

למד הקלטות אלקטרופיזיולוגיות משרירים ונוירונים מוטוריים בזבובי פירות Drosophila. השיטה מאפשרת לחקור תהליכי סינפטוגנזה ותכונות חשמליות של מערכת העצבים המתפתחת.

הקלטה של ​​אלקטרו תסיסנית עובריים

גלה סרטונים נוספים

הקלטה של אלקטרו תסיסנית עובריים