Name: Dissection של דיסקים דמותי מן הזחלים 3 תסיסנית Instar (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-17T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 36 s
Description: למדו את שיטת החיתוך לבידוד דיסקים דמותיים מזחלי Drosophila בשלב התסיסן השלישי. הפרוטוקול מדגים בידוד דיסקי כנף, רגל ועין לצורך חקר תהליכי התפתחות ואפופטוזה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

dissection של דיסקים דמותי מן הזחלים 3 תסיסנית instar

Dissection of Imaginal Discs from 3rd Instar Drosophila Larvae

פרוטוקול זה מדגים את הטכניקה לנתיחה משמש לבידוד דיסקים דמותי מן הזחלים תסיסנית בשלב instar 3. שיטות לתיקון רקמות אחרי אומר והסרה של הזרוע, רגל, עין ודיסקים הם הוכיחו ישירות על שקופיות מיקרוסקופ להדמיה הבאים.

Dissection של דיסקים דמותי מן הזחלים 3 תסיסנית Instar

היום אני אראה לכם כיצד לבצע דיסקציה של דיסקים דמיוניים (imaginal discs) מz larvae של דרוזופילה בשלב השלב השלישי (third instar). ניתן להשתמש בדיסקים של זחלי שלב שלישי למספר תהליכי התפתחות. במעבדה שלנו אנו בוחנים אותם כדי לצפות בתהליך של אפופטוזיס, אך ניתן לבטא בהם חלבונים שונים וללמוד אותם בדרך זו, ולראות כל מיני תהליכי התפתחות המתרחשים בתוך הדיסקים לפי הסדר.כדי לעשות זאת, אשתמש במספר כלים חשובים מאוד. ראשית, מקל הברירה (picking stick) שבאמצעותו נוציא את הלרוות מהצלחות שלהן. לאחר מכן, וזה חשוב מאוד, פינצטת דיסקציה, שחייבת להיות חדה במיוחד כדי שניתן יהיה להמשיך בתהליך הדיסקציה.לאחר מכן נשתמש בלהב ניתוח, להב ניתוח מספר 11, כדי להוציא את הדיסקים מהראש. לאחר מכן נניח את הדיסקים על תבנית זכוכית עם vector shield כחומר קיבוע. לכן, הדבר הראשון שנעשה הוא לאסוף מספר זחלי third and star wandering.אני פשוט משתמש במקל הברירה שלי כדי למעשה להדליק אותם מדופן המבחנה. לעיתים זה עוזר אם המקל מעט רטוב, ואז מעבירים אותם לטיפה של PBS. אוקיי, כאן יש לנו את הלרבות השלישית שלנו.מכיוון שאני ימני, אני אסובב את ראשו לכיוון ימין, ונשתמש במספר נקודות ייחוס כדי להנחות אותנו היכן לאחוז בו. הראשונה היא החלק המרכזי של ה-trachea כאן וכאן. ולאחר מכן ישנו חתך רוחבי קטן כאן למעלה, לכיוון הראש.ראשית, אני אחזיק בעדינות את הזחלים בערך בשני שלישים מגוף הזחל, במרחק מהראש. לאחר מכן, אחזיק ביד ימיני מספר מילימטרים מאחורי רכיב החיבור (cross piece), תוך ניסיון להגיע למחצית רוחב הזחל. כך מתקבלת אחיזה טובה למדי.ניתן לראות שהגעתי בערך לחצי הדרך. כעת אני אמשיך למשוך בעדינות קדימה עם ידי ימני, ראו את כל המעיים שיוצאים שם. אוקיי. כעת ניתן להשליך את החלק העיקרי של הגוף.וכאן יש לנו את הראש, הכולל את הדיסקים האימגינליים המחוברים לחלקי הפה. לכן, אני אתפוס אותו בחלקי הפה כדי שלא אמעך אף אחד מהדיסקים ואעביר אותו לטיפה רעננה של PBS. כעת יש לנו את ראש הזחל המקובע.נסיר את כל עודפי הרקמה ונאחז בזחל באמצעות חלקי הפה כפי שנעשה קודם לכן, או שניתן להצמיד אותו לפלטת הנתיחה בעזרת הפינצטה. חלקי הפה נמצאים כעת מצד שמאל. ובכן, כאן אנו רואים את מערכת העיכול, שאיננו מעוניינים בה, וכאן יש בלוטה רוקת.ישנן רקמות שומן או גופי שומן. המשיכו להסיר אותם, במיוחד את השומן, שעלול להפריע לחלק מהבדיקות ולצביעה של דברים שאינכם רוצים. כעת יש לנו את ראש הזחל הנקי.כעת יש בידינו את ראשי הזחלים, אשר נשלו מהגוף, קובעו ונשטפו, הרקמות העודפות הוסרו, והם טופלו בכל טיפול הנדרש, כגון צביעת נוגדנים ב-C two tunnel או צביעה תפקודית אחרת. כעת הנחנו אותם על זכוכית ומסומנים לביצוע השליפה של הדיסקים עצמם מהראש, מאזורי חלקי הפה.בסדר, הפעם חלקי הפה שלנו נמצאים כאן משמאל. אני אקח את הפינצטה שלי ואפשוט אלחץ אותה מטה כנגד הזכוכית. ביד ימין יש לי להב סקלפל מספר 11, שהוא כלי עדין יותר, שבאמצעותו אבצע את הניתוח.ראשית, אני אסיר את ה-CNS ואת האונות האופטיות. ניתן לראות את ה-CNS, את שתי האונות האופטיות, ואת דיסקיות העין והמחוש (eye antenna discs) המחוברות אליהן. לכן, אני מסיר את ה-CNS על ידי החדרת הלהב בין האונות האופטיות לבין דיסקיות העין ומשיכה איטית, כך שדיסקיות העין נמתחות החוצה.בסדר, שם אנו רואים את ה-CNS ואת האונות האופטיות. כעת יש לנו את שתי דיסקיות העין, שהופרדו מה-CNS. עכשיו אני אסיר אותן מחלקי הפה באמצעות חיתוך עדין ומשיכה בבסיס.ובכן, ישנה דיסקית עין-תחושה אחת, והדיסקית השנייה. ובכן. ועכשיו ניתן לראות את דיסקית הכנף בולטת כאן. אני אנסה, שוב, למצוא בעדינות את הבסיס, לחתוך ולמשוך.כך שקיבלנו דיסק כנף ודיסק רגל המחוברים אליו, יחד עם מעט קנה נשימה (trachea). אוקיי, אז זהו דיסק הכנף שלכם עם דיסק רגל מחובר, וכמובן שישנם מספר דיסקי רגליים. לכן, אנחנו יכולים לחפש כאן ולמצוא דיסקים נוספים פשוט על ידי מישוש עדין עם הלהב.אלו כל הדיסקים שנמצא במקרה זה. ישנם עוד מספר דיסקי רגליים.

dissection-of-imaginal-discs-from-3rd-instar-drosophila-larvae

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

כאן אנו מתארים פרוטוקול לבחון את ההגירה של ותאי גלייה לתוך העין תסיסנית מתפתחות באמצעות ניתוח מיקרוסקופי לחיות יחד עם התאים GFP גליה מתויג.

הדמיה חיה של נדידת תאים גליה את הדיסק העין דמותי תסיסנית

אנו מתארים רומן אדום חלבון פלואורסצנטי (RFP) כתב כי באה לידי ביטוי במיוחד...

RFP כתב רומן על סיוע ויזואליזציה של דיסק העין דמותי ב תסיסנית</em

הזחלים תסיסנית melanogaster לספק מערכת מודל אידיאלי לחקור את המנגנונים של תחבורה axonal בתוך העצבים סגמנטלי הזחל. באמצעות הליך זה, 3 rd הזחלים instar נושאת מוטציות שונות ניתן להשוות את הזחלים סוג בר.

ויזואליזציה של עצבים המגזרי הזחל ב 3 Rd Instar תסיסנית הכנות הזחל

נתיחה ואימונוהיסטוכימיה של זחל, גלמים ומבוגרים<em&gt; דרוזופילה</em&gt; רשתיות

בעת צביעת דיסקים דמיוניים של דרוזופילה, לעיתים קרובות מתבצעת דיסקציה גסה בה הדיסקים חשופים אך נשארים מחוברים לגוף. לאחר המוכתמים, הדיסקים המעניינים מבודדים ומורכבים. הפרוטוקול לדוגמה מדגים הליך לדיסקציה והרכבה של דיסק דמיוני בכנף.

דרוזופילה דיסקציה דמיונית של הזחל: שיטה להתבוננות בהתפתחות אפיתליה

פרוטוקול זה מפרט שיטה יעילה המשמשת לביצוע הדמיה תא חי בהקשר של מוח זחל בשלמותה. גישות הדמיה תא חי הן לא יסולא בפז לחקר חלוקות תא גזע עצביים סימטריות כמו גם תהליכים עצביים והתפתחותיות אחרים, לחשוף באופן עקבי מנגנונים שהתעלמו בעבר.

הדמיה חיה של<em&gt; דרוזופילה</em&gt; הזחל Neuroblasts

המבנים הבוגרים של דרוזופילה נגזרים ממבנים דמויי שק הנקראים דיסקים דמיוניים. ניתוח דיסקים אלה מספק תובנה לגבי תהליכים התפתחותיים רבים כולל קביעת רקמות, קביעת גבול תאים, התפשטות תאים, מפרט גורל התא וקוטביות תאים מישוריים. פרוטוקול זה משמש להכנת דיסקים דמיוניים למיקרוסקופ אור/פלורסנט.

נתיחה וImmunostaining של דמותי דיסקים מ Melanogaster דרוזופילה

מטרת טכניקה זו היא לאפשר לחוקרים לבצע דיסקציה, צביעה חיסונית והרכבה של דיסקים של עין גולם מדרוזופילה מלנוגסטר בכל גיל.

נתיחה והתקנה<em&gt; דרוזופילה</em&gt; גלמי דיסקי העין

פרוטוקול זה מדגים כיצד ליצור מסומן פלורסנטי, גידולים המשובטים מוגדר גנטית בעין תסיסנית / דיסקים דמותי מחושים (EAD). הוא מתאר כיצד לנתח את EAD והמוח מן הזחלים instar השלישי וכיצד לעבד אותם לחזות ולכמת שינויים בהתבטאות גנים הפולשנות הגידול.

ה<em&gt; תסיסנית</em&gt; דגם גידול דיסק דמותי: ויזואליזציה וכימות של ביטוי גנים סרטניים הפולשנות שימוש פסיפסים גנטי

אנו מתארים פרוטוקול למדידת מגעים בין תאים בשכבות אפיתל סמוכות בדיסקים דמיוניים חיים של כנפי דרוזופילה באמצעות גישה מבוססת בנייה מחדש של GFP.

מערכת ביטוי כפול מבוססת השלמת GFP להערכת מגע תא-תא בתיווך ציטונמים בדיסקים דמיוניים חיים של כנף דרוזופילה

מאמר זה מתאר פרוטוקול יעיל לפירוק דיסק דמיוני וצביעת נוגדנים, שהוא חסכוני עם מגיבים ומקל על טיפול בדיסקים דמיוניים במספרים קטנים.

כריתה בקנה מידה קטן וצביעת נוגדנים של דיסקים דמיוניים באנטנות העיניים והכנף מ-Drosophila melanogaster

למדו את שיטת החיתוך לבידוד דיסקים דמותיים מזחלי Drosophila בשלב התסיסן השלישי. הפרוטוקול מדגים בידוד דיסקי כנף, רגל ועין לצורך חקר תהליכי התפתחות ואפופטוזה.

Dissection של דיסקים דמותי מן הזחלים 3 תסיסנית Instar

גלה סרטונים נוספים