Name: LAD-קשירת: מודל Murine של אוטם שריר הלב (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-10-14T23:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 23 s
Description: למד את שיטת ה-LAD-ligation בעכברים לחקר אוטם שריר הלב וטיפולי תאי גזע. מודל כירורגי אמין לחקר פיזיולוגיית מחלות לב ופיתוח אינטרוונציות טיפוליות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

המחברים מודים כריסטיאן Pahrmann לקבלת סיוע טכני אותה היסטולוגיה ביצוע.

<html> Balb / C עכברים במשקל מינימום של 20 גרם בגיל של 8 עד 12 שבועות נרכשים מ צ&#39;ארלס ריבר (Sandhofer מאייתים 7, D-97633 Sulzfeld). עכברים הם שוכנו בתנאים רגילים, נמאס כדורי תקן העכבר כרצונך מים. הרדימי עכבר עם isoflurane (2%) באמצעות תא אינדוקציה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את אזור הצוואר בצד השמאלי של בית החזה ולחטא באמצעות אתנול 80%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר על הגב שלה במקום facemask על האף והפה שלה כדי לשמור על הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את הרפלקסים צובט את הזנב והרגליים האחוריות כדי להיות בטוח כי העכבר הוא anesthesized מספיק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת נוף מיקרוסקופי לבצע חתך קו האמצע המפריד בין צוואר הרחם, עור, שרירים ורקמות מכסה את קנה הנשימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר קנה הנשימה חשוף לחתוך חור קטן לתוך הרקמה בין שתי טבעות מחסנית מתחת מיתרי הקול להכניס את הצינור endotracheal (איור 1). הכנס את הצינור endotracheal מחזיק את החלק גולגולתי של קנה הנשימה באמצעות forecepts מיקרו כירורגי. בדוק את תנועת החזה כדי להיות בטוח כי הן הריאות הן מאוורר היטב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קצב הנשימה (RR) צריך להיות כ 110 לדקה, עם לחץ inspiratory של 17 עד 18cm H 2 O. הפעל את העכבר בזהירות, שוכב על צדו הימני, מול הצד השמאלי שלה. ביצוע פתיחת בית החזה leftsided בין ה -3 לבין צלע 4 ה, ו לנתח את רקמות השריר בקפידה, תוך שימוש cauter כדי למנוע דימום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את בית החזה בזהירות, פעם בית החזה נפתח, למצוא את הלב, בלי לגעת ריאות עם כל חפץ חד. עכשיו להסיר את החלק של שק קרום הלב כי הוא מכסה את הלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנער נמצא בין עורק הריאה לבין אפרכסת שמאל. השתמש 8-0 Prolene תפר (Ethicon, Norderstedt, גרמניה) ולקשור LAD הפרוקסימלי עם תפר אחד (איור 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום צינור החזה (קטטר 28G, מושחתים), בין ה 4 ו 5 הצלעות ה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגירת החתך החזי בשכבות, באמצעות 6-0 תפרים ריצה Prolene (Ethicon, Norderstedt, גרמניה) על מנת להתאים את צלעות התפרים Prolene 4-0 ריצה (Ethicon, Norderstedt, גרמניה) כדי לסגור את העור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מסננים את החזה בעזרת מזרק 2ml בקפידה (איור 3). הנח את העכבר על גבו. עכשיו לקחת את הצינור endotracheal החוצה להתאים את טבעות מחסנית קנה הנשימה עם תפר אחד באמצעות 7-0 תפרים Prolene (Ethicon, Norderstedt, גרמניה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את המסכה על הפנים העכבר ולסגור את העור באמצעות Prolene 4-0 ריצה התפרים (Ethicon, Norderstedt, גרמניה). </li></ol> תוקף ישנן אפשרויות שונות כדי לאשר את ההצלחה של קשירת-LAD. בדיקת טרופונין ניתן לבצע 6-18 שעות לאחר הניתוח, תוך שימוש רק 150 בדם אני ללא צורך להרדימו. הדם מוחל על ערכת בדיקה אישית טרופונין (TROP T רגיש, רוש, מנהיים) (איור 4). טרופונין הוא חלבון הוויסות של סיבי אקטין של תא השריר, יש isotypes שונות שלושה סוגים של שרירים. Isotypes cTnI ו cTnT נמצאים הלב משתחררים לפגיעה ברקמות. מבחן סטנדרטי עבור טרופונין T (cTnT) מבוססת על שני נוגדנים חד שבטיים לב ספציפית, אחת המלכודות טרופונין במדגם דם, והשני הוא סמן. אזור infarcted ניתן לזהות macroscopically לאחר 3 ימים (איור 5). TTC (2,3,5-Triphenyltetrazolium כלוריד) מודד מכתים הכדאיות רקמות השתמשו כדי להעריך גודל האוטם. אוונס צבע כחול (1.5%, 1.0mL) ב פוספט בופר סליין (PBS) מוזרק לתוך חלל החדר השמאלי כדי למדוד את שטח איסכמי לבבי. העכבר הוא מורדמים והלב הוא לקצור מחולק לפרוסות. פרוסות הרקמה מודגרת בתמיסה של 1% PBS TTC, pH 7.4 ב 37 מעלות 20min. רקמות שתוקנו ב 10% PBS שנאגרו פורמלין לילה בשעה 2-8 ° C. TTC מנוהל vivo לשעבר לצבוע אוונס כחול שלילי אזורים (איור 6). עבור היסטולוגיה העכבר צריך להיות מורדמים והלב חייב להיות מוטבע לעיבוד נוסף. לאחר ביצוע סעיפים פרפין, מגלשות מגואלות H &amp; E (hematoxylin ו eosin) או trichrome לדמיין רקמות fibrotic (איור 7). <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig1.jpg" alt="איור 1" /> איור 1: צינור לקנה הנשימה. 1A: חשופים קנה הנשימה, לאחר חתך צוואר הרחם הגחון. 1B: קנה הנשימה נפתח שתי טבעות סחוס הזנב אל הגרון. 1C: צינור לקנה הנשימה מוכנס לתוך קנה הנשימה. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig2.jpg" alt="איור 2" /> איור 2: לב חשוף באמצעות פתיחת בית החזה השמאלי צדדית, הבחור הוא ligated. t &quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig3.jpg" alt="איור 3" /> איור 3: לאחר החזה סגור, ניקוז הצדר מבוצע. העכבר הוא עדיין מורדם. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig4.jpg" alt="איור 4" /> איור 4: שני קווים להופיע אחרי כמה דקות כאשר הבדיקה טרופונין חיובית. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig5.jpg" alt="איור 5" /> איור 5: מציג את הלב explanted. 5 א: לצפות מקרוסקופית של הלב עם אזור איסכמי עם צבע לבנבן דהוי. 5B: חתך של הלב infarcted, אזור איסכמי מראה בפינה הימנית העליונה.

<ol><li>Atkins, B. Z., Hueman, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+cardiomyoplasty+improves+diastolic+properties+of+injured+Heart%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Cellular cardiomyoplasty improves diastolic properties of injured Heart.</a> J Surg Res. 85 (2), 234-242 (1999).</li>
<li>Jaquet, K., KT, K. rause <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+of+myocardial+scar+size+after+implantation+of+mesenchymal+stem+cells+in+rats%3A+what+is+the+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Reduction of myocardial scar size after implantation of mesenchymal stem cells in rats: what is the mechanism.</a> Stem Cells Dev. 14 (3), 299-309 (2005).</li>
<li>Joung, B., Kim, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+mononuclear+stem+cells+transplanted+in+rat+infarct+myocardium+improved+the+electrical+conduction+without+evidence+of+proarrhythmic+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Yonsei+Med+J%22%5BJournal%5D)">Bone marrow mononuclear stem cells transplanted in rat infarct myocardium improved the electrical conduction without evidence of proarrhythmic effects.</a> Yonsei Med J. 48 (5), 754-764 (2007).</li>
</ol>

מימון המחקר הנוכחי נתמך על ידי החולים האוניברסיטאי בהמבורג (ח&quot;כ, אישה Habilitation גרנט), DFG (SS, SCHR992/3-1), ISHLT (TD, פרס המחקר 2009). הצהרה כל החיות קיבלו טיפול אנושי מתיישב עם עקרונות של טיפול בבעלי חיים מעבדה, ניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות והתקנות שנקבעו על ידי האגודה הלאומית למחקר רפואי המדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה שפורסם על ידי המכונים הלאומיים לבריאות (National Institutes of Health פרסום 85-23, מתוקנת 1985). כל החיות התקבלו צ&#39;ארלס ריבר מעבדות (Sulzfeld, גרמניה) נשמרו על מרכזים בעלי חיים של החולים האוניברסיטאי בהמבורג Eppendorf. החיות קיבלו תקן ושולחת כרצונך מים המודעה.

לסיכום, וידאו זה visualizes המודל LAD-קשירת צעד אחר צעד ומזהה LAD-ligations בעכברים כמו ניתוחים אפשרי בקלות.

lad-קשירת: מודל murine של אוטם שריר הלב

LAD-Ligation: A Murine Model of Myocardial Infarction

מודלים מחקר של אוטם שריר הלב ואת חיוניים כדי לחקור את התהליכים pathobiological ו pathophysiological אקוטי וכרוני איסכמיה של שריר הלב כדי לפתח לייעל את הטיפול בעתיד. שתי שיטות שונות של יצירת איסכמיה בשריר הלב מבוצעות מכרסמים במעבדה. השיטה הראשונה היא ליצור cryo אוטם, טכניקה מהיר אבל לא מדויק, שם cryo-עט מוחל על פני השטח של הלב (1-3). באמצעות שיטה זו המדען אינו יכול להבטיח כי cryo-צלקת מוביל איסכמיה, גם פגיעה בשריר הלב העצום שנוצר המציג תופעות לוואי pathophysiological כי אינם קשורים לאוטם שריר הלב. השיטה השנייה היא קשירת קבועה של העורק השמאלי הקדמי היורד (LAD). כאן הנער הוא ligated עם תפר אחד, להרכיב איסכמיה כי ניתן לראות באופן כמעט מיידי. על ידי סגירת LAD, אין זרימת דם נוספת מותרת באזור זה, תוך רקמת שריר הלב שמסביב הוא כמעט לא השפיע. זה הליך כירורגי מחקה את ההיבטים pathobiological ו pathophysiological המתרחשים איסכמיה, אוטם שריר הלב קשור. השיטה הציג סרטון זה מדגים את הליך כירורגי של מודל אוטם העכבר על ידי ligating LAD. דגם זה נוח ללימודי pathobiological ו pathophysiological וכן immunobiological על אוטם לבבי. הטכניקה המוצגת מספקת דיוק גבוהה וקושרת היטב עם סעיפים היסטולוגית.

וידאו זה מדגים כיצד להשתמש במודל מהיר ואמין ללמוד תהליכים pathobiological ו pathophysiological של שריר הלב.

LAD-קשירת: מודל Murine של אוטם שריר הלב

מודלים מחקריים של אוטם ואיסכמיה מיוקרדיאלית חיוניים לחקירת התהליכים הפתוביולוגיים והפתופיזיולוגיים החריפים והכרוניים...

מבוצעת חתך צווארי בקו האמצע כדי לחשוף את הקנה, ונחור חור קטן בקנה להחדרת צינור הנשמה. העכבר מופנה על צדו הימני ומבוצעת תורקוטומיה (פתיחת בית החזה) בצד שמאל בין הצלע השלישית לרביעית. הלב נחשף וה-LAD נקשר באמצעות תפר בודד.לאחר הנחת צינור חזה וסגירת החתך, מרוקנים את בית החזה על ידי שאיבה זהירה בעזרת מזרק. לבסוף, הופכים את העכבר על גבו.את צינור הקנה מסירים ואת הקנה ואת החתך הצווארי סוגרים. שלום, אני סוניה רפא. אני פרופסור לאימונולוגיה ולכירורגיה לבבית במחלקה לכירורגיה קרדיווסקולרית במרכז הלב האוניברסיטאי בהמבורג.המעבדה שלי מתמקדת באימונוביולוגיה של תאי גזע ובאימונולוגיה של השתלות. היום נציג בפניכם את מודל הליגציה של LID. אנו משתמשים במודל זה במעבדה שלנו כדי לחקור את השפעת הטיפול בתאי גזע על התחדשות הלב לאחר אוטם שריר הלב.אני KA Wan, סטודנט באוניברסיטת סטנפורד ועמית קיץ במעבדת TSI של Drer. ואני Mandy Cooch ממעבדת TSI של מרכז הלב האוניברסיטאי בהמבורג. אני אראה לכם כיצד לבצע קשירה של העורק הכלילי השמאלי (LAD ligation), ומאוחר יותר נראה לכם כיצד לוודא את הצלחתו של השבץ בשריר הלב (myocardial infarction) באמצעות שיטות שונות.אם כך, נתחיל. גלחו את אזור הצוואר ואת הצד השמאלי של כלוב הצלעות של העכבר המורדם. הניחו את העכבר על גבו והניחו מסכת פנים מעל אפו ופיו כדי לשמור על ההרדמה באמצעות 2% isof f

lad-ligation-a-murine-model-of-myocardial-infarction

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

מניפולציות גנטיות רבות ו / או זריקות intramyocardial של גנים, חלבונים, תאים, ו / או biomaterials באים על גבי מימד הזמן במחקרים של פגיעה איסכמיה / reperfusion חריפה שיפוץ כרונית בעכברים. וידאו זה ממחיש את הליכי microsurgical עבור איסכמיה / reperfusion, קשירת עורק כלילי קבע, ומחקרים הזרקת intramyocardial.

קשירת עורקים כלילית לבין הזרקת Intramyocardial ב מודל Murine של אוטם

ההליך הניתוחי המשמש ללגרום לאוטם שריר לב בעכברי ניסוי מתחיל בבית חזה שמאלי בין השלישי ואת צלעות 4 כדי להמחיש את המשטח הקדמי של הלב והריאה שמאלית. העורק הכלל שמאלי גבעול, החזה סגור והעכבר מותר להתאושש באופן ספונטני.

טכניקה שונה לקשירת עורקים הכליליים בעכברים

בסרטון זה, אנו מתארים הליך כירורגי ליצירת מודל עכבר של אוטם שריר הלב על ידי קשירת העורק הכלילי היורד הקדמי השמאלי.

יצירת מודל מורין של אוטם שריר הלב: הליך כירורגי לקשירה קבועה של עורק כלילי יורד קדמי שמאלי במודל עכבר

אנחנו מציגים את שיטה כירורגית כדי לגרום לאיסכמיה / reperfusion הניסיוני (I / R) פציעה כדי לדמות אוטם שריר הלב (MI) בעכברי מודל, המאפשר ליותר בהירות במיצוב של קשירה בעורק השמאלי הקדמי יורד (LAD) כדי להגדיל את שחזור ניסויים MI בעכברים.

דגם של שריר הלב איסכמיה reperfusion הפגיעה Murine באמצעות קשירת של העורק השמאלי קדמי יורד

אי ספיקת לב היא הגורם המוביל לאשפוז וגורם עיקרי לתמותה. מודל של קשירה קבועה של העורק הכלילי היורד הקדמי השמאלי בעכברים מיושם כדי לחקור עיצוב מחדש של החדרים ותפקוד לקוי של הלב לאחר אוטם שריר הלב. מוצגת הטכניקה של מדידות המודינמיות פולשניות בעכברים.

קשירת קבע של העורק השמאלי קדמי יורד כלילית בעכברים: דגם של Remodelling אוטם שריר לב ופוסט-אי ספיקת לב

אנו מספקים שיטה אמינה לקשירת העורק היורד הקדמי השמאלי (LAD) במודל עכבר. שיטה זו פחות פולשנית יחסית משיטות אחרות, הכוללת אינטובציה אנדוטרכיאלית, גישת כריתת בית החזה בצד שמאל וניתוח בית החזה. שיטה זו יכולה לשמש כמודל לאוטם שריר הלב החריף והכרוני (MI).

Murine שמאל Anterior יורד (LAD) קשירת עורקים הכליליים: דגם משופר או פשוט עבור אוטם שריר לב

כאן אנו מתארים הליך כירורגי המראה כיצד להשיג הארכה קבועה של עורק שמאלי הקדמי כלילית בעכברים. מודל זה הוא בעל רלוונטיות גבוהה לחקור את הפתופסולוגיה של אוטם שריר הלב ואת התהליכים הביולוגיים המקביל.

מודל אוטם שריר הלב באמצעות הארכה קבועה של עורק שמאלי קדמי כלילי יורד

כאן אנו מתארים שיטה פשוטה וניתנת לשחזור שיכולה לגרום לאוטם שריר הלב או לפגיעה באיסכמיה של שריר הלב בעכברים על ידי קשירה מדויקת של העורק הכלילי היורד הקדמי השמאלי באמצעות מיקרומניפולציה.

השראת אוטם שריר הלב ופגיעה באיסכמיה של שריר הלב בעכברים

מוצג כאן הליך כירורגי לקשירה קבועה של העורק הכלילי השמאלי בעכברים. מודל זה יכול לשמש כדי לחקור את הפתופיזיולוגיה ואת התגובה הדלקתית הקשורים לאחר אוטם שריר הלב.

קשירת עורקים כליליים שמאליים: מודל מורין כירורגי של אוטם שריר הלב

הלבלב Murine איילט בידוד

למד את שיטת ה-LAD-ligation בעכברים לחקר אוטם שריר הלב וטיפולי תאי גזע. מודל כירורגי אמין לחקר פיזיולוגיית מחלות לב ופיתוח אינטרוונציות טיפוליות.

LAD-קשירת: מודל Murine של אוטם שריר הלב

גלה סרטונים נוספים