Name: ניטור הלב לתפקד הזחל תסיסנית melanogaster ללימודים פיזיולוגיים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-11-16T17:02:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: למד שיטות לניטור קצב לב בזחלי Drosophila melanogaster ללימודים פיזיולוגיים. הטכניקות כוללות הכנות שלמות ומפורקות, הקלטות פוטנציאל שדה ותיעוד תוך-תאי לבחינת פעילות קוצב הלב ותפקוד ערוצי יונים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מימון הניתן על ידי מלגות Ribble G. ב המחלקה לביולוגיה, קנטאקי חוקרים צעירים לתואר ראשון בחינוך, אאוריקה! Office (Univ. של KY).

<ol><li>Ashton, K., Wagoner, A. P., Carrillo, R., Gibson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+trait+loci+for+the+monoamine-related+traits+heart+rate+and+headless+behavior+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Quantitative trait loci for the monoamine-related traits heart rate and headless behavior in Drosophila melanogaster.</a> Genetics. 157, 283-294 (2001).</li>
<li>Azpiazu, N., Frasch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tinman+and+Bagpipe%3A+Two+homeo+box+genes+that+determine+cell+fates+in+the+dorsal+mesoderm+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Tinman and Bagpipe: Two homeo box genes that determine cell fates in the dorsal mesoderm of Drosophila.</a> Genes & Development. 7, 1325-1340 (1993).</li>
<li>Badre, N. H., Martin, M. E., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+physiological+and+behavioral+effects+of+carbon+dioxide+on+Drosophila+melanogaster+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Biochem+Physiol+A+Mol+Integr+Physiol%22%5BJournal%5D)">The physiological and behavioral effects of carbon dioxide on Drosophila melanogaster larvae.</a> Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. 140, 363-376 (2005).</li>
<li>Baker, J. D., McNabb, S. L., Truman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hormonal+coordination+of+behavior+and+physiology+at+adult+ecdysis+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">The hormonal coordination of behavior and physiology at adult ecdysis in Drosophila melanogaster.</a> J. Exp. Biol. 202, 3037-3048 (1999).</li>
<li>Bier, E., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila%2C+an+emerging+model+for+cardiac+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gene%22%5BJournal%5D)">Drosophila, an emerging model for cardiac disease.</a> Gene. 342, 1-11 (2004).</li>
<li>Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gene+tinman+is+required+for+specification+of+the+heart+and+visceral+muscles+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The gene tinman is required for specification of the heart and visceral muscles in Drosophila.</a> Development. 118, 719-729 (1993).</li>
<li>Bodmer, R., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+homeobox-containing+gene%2C+msh-2%2C+is+transiently+expressed+early+during+mesoderm+formation+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A new homeobox-containing gene, msh-2, is transiently expressed early during mesoderm formation of Drosophila.</a> Development. 110, 661-669 (1990).</li>
<li>Cooper, A. S., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+activity+of+Drosophila+larvae%3A+Impedance+%26+video+microscopy+measures%5BTitle%5D)+AND+%22Drosophila+Information+Service%22%5BJournal%5D)">Monitoring activity of Drosophila larvae: Impedance & video microscopy measures.</a> Drosophila Information Service. 87, 85-87 (2004).</li>
<li>Dasari, S., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+influence+of+serotonin+on+the+larval+heart+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+B%22%5BJournal%5D)">Direct influence of serotonin on the larval heart of Drosophila melanogaster.</a> J. Comp. Physiol. B. 176, 349-357 (2006).</li>
<li>Dasari, S., Viele, K., Turner, A. C., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+p-CPA+and+MDMA+on+physiology%2C+development+and+behavior+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22European+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Influence of p-CPA and MDMA on physiology, development and behavior in Drosophila melanogaster.</a> European J. Neurosci. 26, 424-438 (2007).</li>
<li>Dowse, H., Ringo, J., Power, J., Johnson, E., Kinney, K., White, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+congenital+heart+defect+in+Drosophila+caused+by+an+action-potential+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurogenetics%22%5BJournal%5D)">A congenital heart defect in Drosophila caused by an action-potential mutation.</a> J. Neurogenetics. 10, 153-168 (1995).</li>
<li>Dulcis, D., Levine, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamatergic+innervation+of+the+heart+initiates+retrograde+contractions+in+adult+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Glutamatergic innervation of the heart initiates retrograde contractions in adult Drosophila melanogaster.</a> J. Neurosci. 25, 271-280 (2005).</li>
<li>Feng, Y., Ueda, A., Wu, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+minimal+hemolymph-like+solution%2C+HL3.1%2C+for+physiological+recordings+at+the+neuromuscular+junctions+of+normal+and+mutant+Drosophila+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurogenetics%22%5BJournal%5D)">A modified minimal hemolymph-like solution, HL3.1, for physiological recordings at the neuromuscular junctions of normal and mutant Drosophila larvae.</a> J. Neurogenetics. 18, 377-402 (2004).</li>
<li>Ganetzky, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+ion+channel+dysfunction+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of ion channel dysfunction in Drosophila.</a> Kidney International. 3, 766-771 (2000).</li>
<li>GG, G. u <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+analysis+of+heartbeat+in%5BTitle%5D)+AND+%22Drosophila.+J.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Pharmacological analysis of heartbeat in.</a> Drosophila. J. Neurobiol. 28, 269-280 (1995).</li>
<li>He, B., Adler, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+mechanisms+in+the+development+of+the+Drosophila+arista%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Development%22%5BJournal%5D)">Cellular mechanisms in the development of the Drosophila arista.</a> Mechanisms of Development. 104, 69-78 (2001).</li>
<li>Johnson, E., Ringo, J., Dowse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+Drosophila+heartbeat+by+neurotransmitters%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+B%22%5BJournal%5D)">Modulation of Drosophila heartbeat by neurotransmitters.</a> J. Comp. Physiol. B. 167, 89-97 (1997).</li>
<li>Johnson, E., Ringo, J., Bray, N., Dowse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+pharmacological+identification+of+ion+channels+central+to+the+Drosophila+cardiac+pacemaker%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurogenetics%22%5BJournal%5D)">Genetic and pharmacological identification of ion channels central to the Drosophila cardiac pacemaker.</a> J. Neurogenetics. 12, 1-24 (1998).</li>
<li>Johnson, E., Ringo, J., Dowse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Native+and+heterologous+neuropeptides+are+cardioactive+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Native and heterologous neuropeptides are cardioactive in Drosophila melanogaster.</a> J. Insect Physiol. 1, 1229-1236 (2000).</li>
<li>Johnson, E., Sherry, T., Ringo, J., Dowse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+the+cardiac+pacemaker+of+Drosophila%3A+cellular+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+B%2C+Biochem.%2C+Systemic%2C+Environmental+Physiol%22%5BJournal%5D)">Modulation of the cardiac pacemaker of Drosophila: cellular mechanisms.</a> J. Comp. Physiol. B, Biochem., Systemic, Environmental Physiol. 172, 227-236 (2002).</li>
<li>Lewis, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+standard+food+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Drosophila+Inform.+Serv%22%5BJournal%5D)">A new standard food medium.</a> Drosophila Inform. Serv. 34, 117-117 (1960).</li>
<li>Miller, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+circulation+in+insects%5BTitle%5D)+AND+%22General+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Control of circulation in insects.</a> General Pharmacol. 29, 23-38 (1997).</li>
<li>Molina, M. R., Cripps, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ostia%2C+the+inflow+tracts+of+the+Drosophila+heart%2C+develop+from+a+genetically+distinct+subset+of+cardial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Development%22%5BJournal%5D)">Ostia, the inflow tracts of the Drosophila heart, develop from a genetically distinct subset of cardial cells.</a> Mechanisms of Development. 118, 51-59 (2001).</li>
<li>Muller, K. J., Nicholls, J. G., Stent, G. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMuller%2C+KJ+%22Neurobiology+of+the+Leech%22">Neurobiology of the Leech</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory. Cold Spring Harbor, New York. 254-254 (1981).</li>
<li>Nichols, R., Kaminski, S., Walling, E., Zornik, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulating+the+activity+of+a+cardioacceleratory+peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Peptides%22%5BJournal%5D)">Regulating the activity of a cardioacceleratory peptide.</a> Peptides. 20, 1153-1158 (1999).</li>
<li>Ocorr, K., Akasaka, T., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+cardiac+disease+model+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Ageing+and+Development%22%5BJournal%5D)">Age-related cardiac disease model of Drosophila.</a> Mechanisms of Ageing and Development. 128, 112-116 (2007a).</li>
<li>Ocorr, K. A., Crawley, T., Gibson, G., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+variation+for+cardiac+dysfunction+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Genetic variation for cardiac dysfunction in Drosophila.</a> PLoS ONE. 2, e601-e601 (2007).</li>
<li>Papaefthmiou, C., Theophilidis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro+method+for+recording+the+electrical+activity+of+the+isolated+heart+of+the+adult+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cellular+%26+Developmental+Biol.+Animal%22%5BJournal%5D)">An in vitro method for recording the electrical activity of the isolated heart of the adult Drosophila melanogaster.</a> In Vitro Cellular & Developmental Biol. Animal. 37, 445-449 (2001).</li>
<li>Peron, S., Zordan, M. A., Magnabosco, A., Reggiani, C., Megighian, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+action+potential+to+contraction%3A+Neural+control+and+excitation-contraction+coupling+in+larval+muscles+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Comp.+Biochem.Physiol.+A%3A+Molecular+%26+Integrative+Physiol%22%5BJournal%5D)">From action potential to contraction: Neural control and excitation-contraction coupling in larval muscles of Drosophila.</a> Comp. Biochem.Physiol. A: Molecular & Integrative Physiol. 154, 173-183 (2009).</li>
<li>Ponzielli, R., Astier, M., Chartier, A., Gallet, A., Therond, P., Semeriva, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+tube+patterning+in+Drosophila+requires+integration+of+axial+and+segmental+information+provided+by+the+Bithorax+Complex+genes+and+hedgehog+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Develop%22%5BJournal%5D)">Heart tube patterning in Drosophila requires integration of axial and segmental information provided by the Bithorax Complex genes and hedgehog signaling.</a> Develop. 129, 4509-4521 (2002).</li>
<li>Sl ma, K., Farkas, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heartbeat+patterns+during+the+postembryonic+development+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Heartbeat patterns during the postembryonic development of Drosophila melanogaster.</a> J. Insect Physiol. 51, 489-503 (2005).</li>
<li>St hmer, W., Roberts, W. S., Almers, W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSt+hmer%2C+W+%22Single+channel+recordings%22">Single channel recordings</a>. Sakmann, B., Neher, E. The loose patch clamp, Plenum Press. New York. 123-132 (1983).</li>
<li>Wessells, R. J., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+assays+for+heart+function+mutants+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Screening assays for heart function mutants in Drosophila.</a> Biotechniques. 37, 58-66 (2004).</li>
<li>Zornik, E., Paisley, K., Nichols, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+transmitters+and+a+peptide+modulate+Drosophila+heart+rate%5BTitle%5D)+AND+%22Peptides%22%5BJournal%5D)">Neural transmitters and a peptide modulate Drosophila heart rate.</a> Peptides. 20, 45-51 (1999).</li>
</ol>

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Dissection כלים: פיין # 5 פינצטה ומספריים קנס (להשיג כל כלי מן המדע פיין (ארה&quot;ב), Inc, 373-G Vintage פארק דרייב, פוסטר סיטי, קליפורניה 94404-1139) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הביתור מיקרוסקופ עם פונקציית זום לנתיחה וקצב הלב הספירה. עבור גירוי המוקד של הלב הזה יש צורך גם כן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור הקלטות תאיים ו תאיים מיקרוסקופ תרכובת עם מטרות זקוף (4 x ו-20X) משמש. מגבר תאיים Standard ו-A / D הלוח על קו ההקלטה למחשב. אותות חשמל נרשמות על הקו לממשק PowerLab/4s (ADInstruments, אוסטרליה). אנו משתמשים בתוכנה מבית תקן ADInstruments בשם תרשים או היקף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כימיקלים: כל הכימיקלים מלוחים מתקבלים Sigma כימיים החברה (סנט לואיס, מיזורי). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור הקלטות תאיים אנו משתמשים בצינור זכוכית נימי (קטלוג # 30-31-0 מתוך fhc, ברונסוויק, ME, 04011, ארה&quot;ב) הקלטה macropatch מוקד ואלקטרודות מגרה אנו משתמשים Kimax-51, לאמנות קימבל מוצרים. מס &#39;34502, מזהה 0.8-1.1mm, 100 מ&quot;מ אורך. אלקטרודה תאיים צריך התנגדות של mOhm 20-30. אלקטרודה macropatch נבנה על ידי ניתוק קצה הכוס לאחר טיפ יפה היה עשוי חולץ אלקטרודה. קצה שבור את צריכה להיות הפסקה בניצב נקי על 20μM בקוטר. קצה הוא חום אז מלוטש לקוטר על 10μM הפנימי ההקלטה תאיים מוקד. עבור האלקטרודה מגרה לכונן לב אנו משתמשים קצה הסופי של כ 20-50 מיקרומטר קוטר. פיר של האלקטרודה פועלת על גוף חימום כדי לגרום לו להתכופף על 45 מעלות עם עיקול הדרגתי. זה מייצר שטוח או אלקטרודה לומן ניצב מעל הצינור לב כמו זווית עם מניפולטור מיקרו יהיה לייצר עוד כ 45 מעלות ההכנה. </li></ol>

ניטור הלב לתפקד הזחל תסיסנית melanogaster ללימודים פיזיולוגיים

Monitoring Heart Function in Larval Drosophila melanogaster for Physiological Studies

אנו מציגים שיטות שונות כדי להקליט תפקוד הלב של הזחל<em&gt; תסיסנית</em&gt;. גישות מאפשרים קצב הלב להיות נמדד הזחלים כל רסן ומאופקת. עבור שליטה ישירה של הסביבה סביב הלב גישה אחרת מנצלת את הזחלים גזור והסרה של איברים פנימיים על מנת לרחוץ את הלב תרכובות הרצוי. לב חשוף גם מאפשר פוטנציאל הממברנה להיות במעקב אשר יכול לתת תובנה של זרמים יוניים שנוצר על ידי myocytes ועל הולכה חשמלית לאורך הצינור לב. גישות אלה יש יתרונות וחסרונות שונים לניסויים עתידיים הנזכרים. הכנת לב הזחל מספק מודל נוסף מלבד<em&gt; תסיסנית</em&gt; השלד NMJ לחקור את התפקיד של ויסות הסידן תאיים על תפקוד התא. למידה נוסף על זרמים יוניים הבסיסית לעצב את פוטנציאל הפעולה myocytes במינים שונים, אפשר לקוות לקבל להתמודד על תפקוד יוניים ידוע על גנים ספציפיים הקשורים אחראי למחלות שונות אצל יונקים.

אנו מציגים דרכים שונות כדי לפקח על תפקוד הלב של הזחל<em&gt; תסיסנית</em&gt; להערכת שאלות להתמודדות עם הפונקציה של צמתים הפער, מוטציות ערוץ יון, מודולציה של פעילות קוצב לב ומחקרים פרמקולוגיים.

אנו מציגים שיטות שונות להקלטת תפקוד הלב בזבוב הפירות (*Drosophila*) בשלב הלרבה. גישות אלה מאפשרות למדוד את קצב הלב בבעלי חיים שאינם מוגבלים ו...

זבוב הדרוזופילה (Drosophila) הוא דגם גנטי אטרקטיבי לחקר הפיתוח והתפקוד של הלב ושל פעילות קוצב הלב שבבסיסו. פרוצדורה זו מדגימה כיצד להכין דגימות של פגליות שלמות ושל פגליות לאחר נתיחה, וכיצד לנטר את קצב הלב. הדגימה שנתיחה מאפשרת גם הקלטות של פוטנציאלים חוץ-תאיים או תוך-תאיים כדי לבחון לעומק את תפקוד תעלות היונים.שלום, אני רובין קופר, חבר סגל במחלקה לביולוגיה באוניברסיטת קנטקי. היום תלמידיי, אן קופר, קיילה ריימן, מאט וורד ואיסטר בוקו, יציגו בפניכם פרוצדורות שונות לניטור קצב הלב בפסיונות זבוב הדרוסופילה (Drosophila larvae). השיטה הבאה, ללא ריסון, נקראת "חוות נמלים" כיוון שהזבובים נצפים במישור מוקד אחד.לקבלת הוויזואליזציה הטובה ביותר של הלרוות, השתמשו במיקרוסקופ דיסקטור עם עדשה בסיסית של 2x ועדשת עינית של 0.5x, כדי להשיג את הרזולוציה המרחבית וההגדלה המיטביות על פני מלבן של 1 סנטימטר על 0.5 סנטימטר. ניתן להקליט תצלומים וסרטונים באמצעות מצלמה המותקנת על התושבת של העינית. כדי להתחיל בשיטה זו, הניחו לרבה בין שתי זכוכיות כיסוי עם שכבה דקה של מזון ביניהן.הזجاجיות מוחזקות במרחק של 1 עד 1.5 מילימטרים זו מזו באמצעות ספייסרים מפלסטיק בכל ארבעת הצדדים. הטה את הדגימה בזווית של בין 20 ל-45 מעלות למשך מספר דקות כדי לעודד את הלרווה לשמור על ראשו מופנה כלפי מטה. כוון את מראת המיקרוסקופ לקבלת הניגודיות המיטבית של הלב או של שתי הקששסוֹת (trachea) כדי לצפות בפעימות הלב.שיטת ההדבקה היא שיטת קיבוע קבועה לריסון זחלים על עלית זכוכית. כדי להתחיל בשיטת ההדבקה, הניחו כיסוי זכוכית נקי על גבי עלית זכוכית. הניחו טיפה קטנה של דבק מהיר בפינה אחת של כיסוי הזכוכית.בשלב הבא, שטפו את הזחלים במים. כדי להסיר שאריות מזון, ספגו את הנוזל באמצעות טישיו או פינה של נייר סופג. לאחר שהזחל נשטף היטב, הרימו אותו בעדינות בעזרת פינצטה נקייה והניחו אותו על התובית, הרחק מזכוכית הכיסוי, תחת המיקרוסקופ, כאשר הזחל מונח על בטנו.על קיבתו ייראו חריצים אופקיים עמומים עם שערות שחורות דקיקות. גבם של הזחלים צריך להיות פונה כלפי מעלה, ובו שני פסים מקבילים המהווים את הטרכיאה. באמצעות סט פינצטות שני המיועד אך ורק לטיפול בדבק, קחו כמות קטנה מהטיפה שבקצה הזז והניחו אותה בפינה בצד הנגדי.השתמשו בכמות מזערית, רק מספיק כדי לכסות את ראש הפינצטה. הרימו את החיה והניחו אותה על הדבק תוך כדי וידוא שהיא נשארת בצד הבטן כלפי מטה בתוך הפה השחור.הווים צריכים להיות בקצה של כיסוי הזכוכית או קרוב אליו, כולל ווים הפה והספירלה החומה. אסור להם לגעת בדבק. לחץ בעדינות על ה larvae כדי לשטוח אותה.כדי להחיל את חומר הבדיקה, מומלץ להחליט טיפות קטנות באמצעות מזרק בסמוך לראש הזחלים. יש לעקוב אחר קצב הלב על ידי ספירת מספר הפעימות של הספירלות בדקה אחת. עבור תצפיות ממושכות יותר, ניתן להאכיל את הזחלים במקומם ולהרטיב אותם כדי למנוע התייבשות. כדי להכין פלטת נתיחה שניתן להשתמש בה תחת המיקרוסקופ, השתמש בסכין מנתח (scalpel) כדי לחתוך חור בקוטר של 2 cm במרכז חתיכת סרט מגנטי והדבק אותה לעלית זכוכית.השתמשו בסיכות נתיחה שכוופפו והודבקו למהדקי נייר כדי להקל על הקיבוע. במהלך הנתיחה, הניחו פלבה של זחלי כוכב שלמה על לוח הנתיחה. כאשר הצד הגבי פונה כלפי מעלה, הקנה צריך להיות נראה דרך הקוטיקולה.מקמים שני סיכות ב larvae משני צדדיו של ה-mouth hooks, ושתי סיכות נוספות משני צדדיהם של ה-spirals. לאחר מכן, מוסיפים saline כדי לשמור על ה-larvae לחים. לאחר מכן מבצעים חתך אופקי ליד ה-coddle end, ואחריו חתך אורך שיוסיף להמשיך לצד ה-spirals לכיוון ראש החיה.הרימו סיכה גבית אחת והשחילו אותה מתחת לקוטיקולה. השתמשו בסיכה כדי להרחיב. פתחו את חלל הגוף.חזור על הפעולה עם שלושת המסמרים האחרים. לאחר שהבעל חיים קובע במקומו כשהוא פתוח, הסר את האיברים הפנימיים תוך זהירות כדי לא לפגוע בטרכאה או בלב. מבנים מסוימים, כולל המוח וגופי שומן מסוימים, מחוברים ללב ועלולים לגרום לנזק לו בעת הסרתם.יש להניח להכנה להירגע באמבט של תמיסת HL three saline למשך שלוש עד חמש דקות לאחר הניתוח; רישומים תוך-תאיים ורישומי שדה מבוצעים בהכנה זו בעוד שחומרים פרמקולוגיים מיושמים ישירות על הלב. הזמן הכולל לשלב ניתוח זה הוא שלוש עד שש דקות. לצורך ביצוע קוצב חשמלי, יש להכין תחילה אלקטרודות מוקדיות; כדי להכין אלקטרודה מוקדית, העבירו אלקטרודת זכוכית מעל גוף חימום לצורך ליטוש באש (fire polish) וצרו כיפוף הדרגתי של כ-45 מעלות, לאחר מכן הרכיבו על המניפולטור אלקטרודה מוקדית מלאה בתמיסת HL three saline בטמפרטורת החדר, כאשר הקצה פונה כלפי מטה.וודאו שחוט המעורר נוגע בתמיסת המלח בתוך האלקטרודה ושהמעורר כבוי. הצמידו למסגרת המיקרוסקופ דגימה טרייה של נתיחה של לב. הניחו את חוט ההארקה בתוך תמיסת המלח.הקפידו לא לגעת בפינים או להפריע להכנה. שמרו על מיקוד באלקטרודה תוך שימוש במניפולטור כדי להוריד אותה לתוך התמיסה המלוחית. ברגע שהיא נמצאת בתמיסה המלוחית, מקמו את קצה האלקטרודה כך שהלומן יהיה שטוח כנגד הלב ונוגע בו קלות.לאחר מיקום האלקטרודה, הגדירו את תדר הגירוי ל-two hertz כאשר המתח נמצא בהגדרה הנמוכה ביותר. הפעילו את הגירוי. כווןנו את התדר לכ-three hertz והעלו לאט את המתח עד שקצב הלב יאיץ כך שיתאים למקצב של המגרה.כעת ניתן לשלוט במקצב באמצעות הסטיםולטור. ניתן להוסיף תרכובות כדי לבחון אם הן משפיעות על ההתכווצות או על ההולכה החשמלית. לביצוע הקלטות פוטנציאל שדה, מלאו אלקטרודת הקלטה מסוג macro patch בתמיסת רחצה והרכיבו אותה על מניפולטור מעל מיקרוסקופ מורכב.חברו את האלקטרודה למגבר ולמתקן הקלטה. השתמשו במניפולטור כדי להוריד את לומן האלקטרודה מעל לב של תכשיר ניתוח המקובע למיקרוסקופ. געו קלות מאוד בלב עם קצה האלקטרודה.ניתן כעת לבצע הקלטות שדה כדי להקליט פוטנציאלי שדה מאזור אחר של הלב. הרם בעדינות את קצה האלקטרודה והזז אותו לאזור חדש באמצעות המניפולטור, ולאחר מכן בצע שוב הקלטות של פוטנציאל השדה בקצה. אפשר ניטור מדויק של קצב ומשך האותות החשמליים בלב כדי למדוד פוטנציאלים טרנס-ממברנליים של מיוציטים בעוברי זחלים.ראשית, ודאו כי הלומן של אלקטרודה חדה המלאה ב-three molar potassium chloride נשען בצורה שטוחה על הלב בזווית של כ-45 מעלות מהאנך. לאחר מיקום נכון, געו בעדינות בלב עם קצה האלקטרודה והחדירו את הקצה לתוך תא. ניתן להשתמש באלקטרודה שוב אם היא לא נשברה.ההקלטות התוך-תאיות מאפשרות למדוד את הבסיס היוני של פוטנציאל הפעולה ואת הצורות האופייניות של הפוטנציאלים כדי לבחון את ההשפעות של מוטציות בתעלות יונים או של מודולטורים של תעלות. כך שהראינו לכם כעת כיצד לבצע הקלטות מהלב, וכן כיצד למדוד פוטנציאלים תוך-תאיים ופוטנציאלי שדה. ניתן להשתמש בטכניקות אלו כדי לבחון שינויים בלב, כמו גם מניפולציות פרמקולוגיות ושינויים גנטיים.בעת ביצוע הליך זה, חשוב להימנע ממשיכה של מבנה קשור המחובר ללב או מלחיצה חזקה מדי עם האלקטרודה המוקדית. כמו כן, בשימוש בשיטת הדבק, יש להיזהר לא להדביק את הפיה או את הכדור כך שיהיו סגורים. זהו התהליך.תודה שצפיתם ובהצלחה בניסויים.

monitoring-heart-function-larval-drosophila-melanogaster-for

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

המחקר של התנהגות של תנועה...

וידאו ברזולוציה גבוהה של מעקב אחר תנועה של מבוגרים תסיסנית melanogaster

הקלטה של ​​אלקטרו תסיסנית עובריים

טכניקה נדרש לדמיין את הלב הפועם של הזחל...

לדמיין את הלב הפועם תסיסנית</em

פיתחנו חצי אוטומטיות Heartbeat אופטי ניתוח בשיטה (סוהא) לניתוח הקלטות מהירות גבוהה אופטי...

חצי אוטומטיות Heartbeat ניתוח אופטי של לבבות קטנים

דוח זה מתאר שיטה למדידת פעילות הזחלים של דרוזופילה באמצעות מוניטור פעילות הדרוזופילה TriKinetics. המכשיר משתמש בקרני אינפרא אדום כדי לזהות תנועות של עד 16 בעלי חיים בודדים. ניתן לנתח נתונים כדי לייצג פרמטרי תנועה כולל קצבים ומיקומי בעלי החיים בתוך תאי הבדיקה.

מדידה של הזחל פעילות ב<em&gt; דרוזופילה</em&gt; צג פעילות

כאן, מתוארים פרוטוקולי הניסוי להכנת דרוזופילה בשלבי התפתחות שונים וביצוע הדמיה אופטית אורכית של פעימות הלב של דרוזופילה באמצעות מערכת מיקרוסקופיה קוהרנטית אופטית מותאמת אישית (OCM). ניתן לאפיין את השינויים המורפולוגיים והדינמיים הלבביים באופן כמותי על ידי ניתוח הפרמטרים המבניים והתפקודיים של הלב מתמונות OCM.

הכנת תסיסנית והדמיה אורכית תפקוד הלב in vivo באמצעות מיקרוסקופית קוהרנטיות אופטית (OCM)

הפרוטוקול מתאר של assay פשוט לזהות את הזחלים דרוזופילה melanogaster חווים היפוקסיה תחת רמות חמצן אטמוספרי רגיל. פרוטוקול זה מאפשר הזחלים שתקבעו יהיה מכובד של מוטאנטים אחרים שמראים פנוטיפים חופפים כגון והאתרי או צמיחה איטית.

וזמינותו נובר/למנהור עבור זיהוי של היפוקסיה ב הזחלים דרוזופילה melanogaster

פרוטוקול זה מתאר שיטה כדי להקליט את הפעילות החשמלית יורד של מערכת העצבים המרכזית דרוזופילה melanogaster כדי לאפשר את עלות-יעיל ונוח בדיקה של סוכנים תרופתי, מוטציות גנטיות של חלבונים עצבית, ו/או את התפקיד של מסלולים פיזיולוגיים נחקרו.

הקלטה אלקטרופיזיולוגיות של פעילות מערכת העצבים המרכזית השלישית-לחלל דרוזופילה Melanogaster

הפרוטוקול הנוכחי מתאר את הדור של Drosophila melanogaster המבטא eNpHR2.0 או ReaChR opsins בלב עבור הדמיית OCT וקצב לב אופטוגנטי. מדווחות הוראות מפורטות להדמיית Drosophila OCT ואפנון פעימות לב, כולל סימולציה של דום לב בר-שחזור, ברדיקרדיה וטכיקרדיה בבעלי חיים חיים בשלבי התפתחות שונים.

פיתוח מודלים דרוזופילה מלנוגסטר להדמיה ובקרה אופטוגנטית של תפקוד הלב

פרוטוקול חתך הלב וההדמיה הקרינה של דרוזופילה מפשט את חקר מבנה הלב והפתולוגיות. גישה זו כוללת חתך, צביעה והדמיה פשוטים, תוך עקיפת המומחיות הטכנית הדרושה לנתיחה מסורתית. זה משפר את הנגישות, מה שהופך את הדרוזופילה למודל שמיש יותר למחקר הקשור ללב בקרב הקהילה המדעית הרחבה יותר.

שיטה חדשנית ויעילה לצביעה פלואורסצנטית של לב דרוזופילה עם הקפאה

הפרוטוקול מציג שיטה בעלת תפוקה גבוהה וחסכונית להערכת רעילות עצבית בזבוב הפירות באמצעות כימות תפקוד לקומוטורי כחלופה למודלים מסורתיים של יונקים. מטרתו להעריך את ההשפעות הנוירוטוקסיות של תרכובות פרמצבטיות, גורמים סביבתיים או שינויים גנטיים באמצעות מודל רגיש, ניתן לשחזור וחיובי מבחינה אתית.

ניתוח התנהגותי של תפקוד לקומוטורי ב-Drosophila melanogaster כקריאה לרעילות עצבית

למד שיטות לניטור קצב לב בזחלי Drosophila melanogaster ללימודים פיזיולוגיים. הטכניקות כוללות הכנות שלמות ומפורקות, הקלטות פוטנציאל שדה ותיעוד תוך-תאי לבחינת פעילות קוצב הלב ותפקוד ערוצי יונים.

ניטור הלב לתפקד הזחל תסיסנית melanogaster ללימודים פיזיולוגיים

גלה סרטונים נוספים