Name: גזירת בתאי גזע hematopoietic מ Murine בתאי גזע עובריים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 22 min 6 s
Description: למדו פרוטוקול לגזירת תאי גזע המטופויטיים מתאי גזע עובריים של עכברים באמצעות גופי עובריים וזיהום רטרויראלי HoxB4. שיטה זו מאפשרת הצלת עכברים מוקרנים ומספקת מודל לחקר פיתוח תאי גזע ויישומים קליניים עתידיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

התמיינות של תאים עובריים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איסוף בקבוקון ומחוברות ליד של תאים עובריים (ESC) דרך הטיפול עם טריפסין ESC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend תאים 5 מ&quot;ל של התקשורת גזירה להעביר שאינו מצופה ג&#39;לטין T25. לדגור על 37 מעלות צלזיוס במשך 45 דקות. אחזר supernatant לאסוף תאים באמצעות צנטריפוגה. הערה: fibroblasts עכבר עובריים (MEFs) מן התרבויות ESC לצרף בקלות הלא מצופה ג&#39;לטין T25 ובכך מתרוקנים מתרבות במהלך שלב זה ציפוי. אם אתה לא culturing ESC על MEFs, אתה יכול לדלג על צלחת מראש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend-MEF מדולדל ESC בתקשורת בידול בכל מ&quot;ל cells/50 333,333. ריכוז התוצאה ESC/15 100 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש רב ערוצי pipettor, צלחת ESC על ירידה cells/15 100 מ&quot;ל ב -15 ס&quot;מ 2 צלחות פטרי. Pipettor עם 8 ערוצים, אתה אמור להיות מסוגל להתאים על 18-22 שורות של טיפות לכל צלחת (כ 5 מ&quot;ל לכל צלחת). הערה: לקבלת הפרוטוקול הזה, 2-5 15 ס&quot;מ 2 מנות של טיפות יהיה יותר מהדרוש ויש תשואה 2-5 x 10 6 ששת הימים EB-derived תאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות להעיף צלחות כדי להפוך טיפות. לדגור על 37 ° C 5% CO 2 למשך 48 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בריכת טיפות ידי בעדינות מתערבל צלחות להעביר צינור חרוטי 15 מ&quot;ל. לשטוף צלחות עם 4-6 מ&quot;ל של PBS ולהוסיף אותו 15 מ&quot;ל חרוטי. הערה: ייתכן הבריכה עד חמש צלחות ירידה תלוי. EBS יגדל כפי שהם ממשיכים להבדיל אם הם מרוכזים מדי והם נוטים ליצור גושים גדולים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר EBS ונקווה להתיישב על ידי כוח הכבידה (כ -10 דקות). לשאוב supernatant מבלי להפריע EBS. Resuspend בעדינות 10 מ&quot;ל בידול התקשורת והעברת עד 10 צלחת לא חסיד ס&quot;מ פטרי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים צלחת על צלחת פטרי שייקר בסל&quot;ד 50 ו לדגור על 37 ° C 5% CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 24 שעות לאחר מכן (יום ארבעה בידול), צלחות מערבולת להתרכז EBS במרכז של צלחת פטרי. בזהירות להחליף 50% לתקשורת (5 מ&quot;ל) עם 5 מ&quot;ל מדיה בידול טריים. חזור אל צלחת החממה במשך יומיים נוספים. </li></ol> EB דיסוציאציה וזיהום עם MSCV-HoxB4-IRES-GFP <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום שישה בידול, העברת EBS על צינור 15 מ&quot;ל חרוטי. אפשר להתיישב על ידי כוח הכבידה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב מדיה resuspend ב 10 מ&quot;ל PBS. EBS אפשר ליישב על ידי כוח הכבידה. לשאוב PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיפים 250 מ&quot;ל לערבב דיסוציאציה האנזים 1 מ&quot;ל PBS. דגירה באמבט מים C ° 37 במשך 20 דקות, לפעמים מתערבל צינור לערבב אנזימים EBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף חוצץ 8 מ&quot;ל אנזים ללא ניתוק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Triturate התערובת בעזרת פיפטה 5 מ&quot;ל עד EBS הם מנותקים לחלוטין (בערך 10 פעמים; pipetting מופרז תגדיל את מותו בתוך בהכנת-EB נגזר התא). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תערובת יהיה מעונן עם תאים כמו EBS לנתק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנחת קצה פיפטה נגד התחתון של צינור חרוטי במהלך טחינה דקה תיצור כוח גזירה כי יהיה מאוד להקל על ניתוק. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איסוף תאים באמצעות צנטריפוגה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend EB-derived תאים 5 מ&quot;ל של IMDM 10% מהסכום באמצעות הרחקה trypan כחול הערה: בין יום לארבעה ימים שישה בידול, EBS למער שתוצאתה כמות גדולה של אפופטוזיס ו death.Thus התא, ביום השישי, למעלה מ -30% EB-derived תאים עשויים כתם כחול עם trypan. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים Resuspend EB-נגזרת ב 100,000 תאים / 2 מ&quot;ל של 10% + IMDM ויראלי supernatant כזה משרד הפנים של 50-10 הוא achieved.Add סולפט protamine לריכוז סופי של 8 מ&quot;ג / מ&quot;ל. הערה: הכן EB מספיק / לערבב supernatant ויראלי לצלחת ארבע צלחות 6-היטב (בהנחה 2 mL / טוב). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלייט 2 מ&quot;ל EB / לערבב היטב לכל supernatant ויראלי של ארבע 6 צלחות היטב מראש מצופה OP9 תאים stroma (ראה להלן). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה צלחות ב 2500 סל&quot;ד בטמפרטורת החדר למשך 90 דקות. העברת צלחות החממה ב 37 ° C 5% CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 4-6 שעות לאחר מכן, מסיק supernatant מתוך צלחות לאסוף את כל התאים הנותרים פוטנציאל ההשעיה באמצעות צנטריפוגה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend גלולה (עשוי להיות קטן) ב IMDM מ&quot;ל 48 10% + ציטוקינים. לוותר על 2 מ&quot;ל / היטב resuspension המקורי four-6 גם צלחות שבו זיהום בוצע supernatant נאסף. הערה: תמיד להכין 10% IMDM + ציטוקינים טרי בזמן השימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה צלחות ב 37 ° C 5% CO 2 למשך שבעה ימים. מושבות צריכה להיות ברורה על ידי זיהום four שלאחר יום גדול בנוי היטב על ידי שבעה ימים. הרחבת חזקים צריכים להניב 40-60 מושבות / גם ביום שבע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על שבעה זיהום שלאחר יום, לאסוף בריכת כל התאים (כולל OP9 stroma) מבארות כל ידי טיפול עם טריפסין. הערה: אין להשליך supernatant או PBS שוטף המועסקים במהלך טריפסין treatment.At הנקודה הזו בתרבות, מושבות מסוימים עשויים להיות חסיד רק באופן רופף ויש תאים רבים floaהטבעת suspension.Collect ובריכת כל מתרחץ supernatant על מנת להבטיח כי לא התאים ערך פוטנציאלי מבוטלים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים Resuspend ב IMDM 8 מ&quot;ל טרי 10% + ציטוקינים. הפץ 2 MLS / בקבוקון לארבע צלוחיות T75. הוסף נוספת 13 MLS 10% + ציטוקינים IMDM אל בקבוק אחד. לדגור על 37 ° C 5% CO 2 למשך שלושה ימים (סה&quot;כ עשרה ימים של זיהום הודעה). </li></ol> התרבות ציפוי של OP9 stroma <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור OP9 stroma פי פרוטוקולים סטנדרטיים ב 20%, ממ. OP9 התאים יהיה לשנות את מאפייני כאשר גדלה confluency. לפצל תמיד ב 80% confluency על הפיצול לא יותר מ 01:03. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 24 שעות לפני ההדבקה של שישה יום EB-derived תאים עם MSCV-HoxB4-IRES-GFP, צלחת 25,000 OP9 תאים / טוב של ארבעה 6 צלחות גם 20% מ-. </li></ol> , אוסף חלוקה והשתלות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איסוף תאים מורחבת על stroma OP9 עשרה ימים באמצעות טיפול עם טריפסין. ספירת תאים. הערה: אין להשליך supernatant או PBS שוטף המועסקים במהלך הטיפול טריפסין. בשלב זה בתרבות, מושבות מסוימים עשויים להיות חסיד רק באופן רופף ויש תאים רבים צפים suspension.Collect ובריכת כל מתרחץ supernatant על ​​מנת להבטיח כי לא התאים ערך פוטנציאלי מבוטלים. הערה: הרחבה טוב צריך התשואות בין 40-50 x 10 6 תאים / צלחת המקורי 6-גם נגוע, עבור סכום כולל של 160-200 x 10 6 תאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים עשויים להיות מופרדים באמצעות מבחר חרוז או FACS מגנטי על פי טכניקות סטנדרטיות בשלב זה בפרוטוקול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשתלה, לספק תאים באמצעות רטרו מסלולית או הזרקה לווריד הזנב לנמענים לקוי Rag-2/gc (במשקל בין 15-22 גרם) נתון מנה פיצול של 9.25 gy של 2.5 שעות הקרנה. בנפרד. הערה: זה קריטי, כי המשקל של בעלי החיים ליפול בין 15-22 גרם בזמן של קרינה. אם הם גדולים יותר מאשר 22 גרם, 9.25 gy לא יהיה מנה מספקת של הקרנה, כדי להבטיח את אבלציה המתאימים תאים לא יכול לתווך להציל הקרנה קטלנית ו / או נקלטים תא hematopoietic. אם השתלת בעלי חיים גדולים יותר, במינון קרינה המתאים צריכה להיקבע באופן ניסיוני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מינון מינימלי של 2-5 x 10 6 תאים / החי נדרשת ערבות להציל הקרנה קטלנית. אם fractionating התאים, להזריק 2-5 x 10 6 ושווי התא (לדוגמא, אם האוכלוסייה עניין מייצג 10% בריכת unfractionated של תאים, להזריק 2-5 x 10 5 תאים / בעלי חיים). הערה: אם הזרקת&gt; 2 x 10 6 תאים, תמיד מזריקים דרך וריד הזנב, כדי למנוע היווצרות תפלצת במסלול, אשר עלול לגרום כאשר מספר רב של תאים מועברות בסגנון רטרו orbitally. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור על סמרטוט-2 - / - / GC - / - מקבלי לקוי בכלובים autoclaved. בהתאם &quot;ניקיון&quot; של המתקן החי, השתלת פוסט חיות עשויים לדרוש הממשל מים acidified או Trimethiprim-Sulfasoxazole (Septra) במשך 5 שבועות לאחר קרינה קטלנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צפו&gt; GFP 90% + ES-derived לויקוציטים בדם ההיקפי בבית 3 שבועות לאחר ההשתלה. Engraftment צריך להיות רב השושלת, למרות לימפוציטים ידועים שתיקה retroviral HoxB4-IRES-GFP. </li></ol>

<table><tbody><tr><td>עכברים C57Bl/6 עם חסר ב-Rag-2/gamma-c</td><td>בעל חיים</td><td>Taconic Farm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מנער פלטות</td><td>כלי</td><td>VWR international</td><td>33998-360</td><td>Orbital Shaker מבית Ikaworks</td></tr><tr><td>פיפטור רב-ערוצי</td><td>כלי</td><td>VWR international</td><td>15000-174</td><td>ePet מבית BioHit</td></tr><tr><td>ES trypsin</td><td>ריאגנט</td><td>Invitrogen</td><td>15090-046</td><td>0.25% Trypsin ב-PBS</td></tr><tr><td>טריפסין סטנדרטי</td><td>ריאגנט</td><td>Invitrogen</td><td>25300-062</td><td>0.05% Trypsin-EDTA</td></tr><tr><td>PBS</td><td>בופר</td><td>Invitrogen</td><td>20012-027</td><td></td></tr><tr><td>בופר דיסוציאציה נטול אנזימים</td><td>בופר</td><td>Invitrogen</td><td>13151-014</td><td></td></tr><tr><td>תערובת אנזימי דיסוציאציה</td><td>בופר</td><td>Invitrogen</td><td>17104-019</td><td>500 mg Collagenase IV</td></tr><tr><td>היאלורונידאז</td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H2126</td><td>להקפיא במנות של 500 &amp;mu;L ולהימנע מהקפאה והפשרה חוזרות.</td></tr><tr><td>DNAse</td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4527</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td></td><td>Invitrogen</td><td>10-017CV</td><td></td></tr><tr><td>פרוטמין סולפט</td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3369</td><td>8 &amp;mu;g/mL</td></tr><tr><td>מדיום דיפרנציאציה של EB</td><td>מדיום</td><td></td><td></td><td>יש לעיין במתכון בקובץ Protocol.doc המצורף</td></tr><tr><td>10% IMDM</td><td>מדיום</td><td></td><td></td><td>יש לעיין במתכון בקובץ Protocol.doc המצורף</td></tr><tr><td>10% IMDM+cytokines</td><td>מדיום</td><td></td><td></td><td>יש לעיין במתכון בקובץ Protocol.doc המצורף</td></tr><tr><td>20% anti-MEM</td><td></td><td></td><td></td><td>יש לעיין במתכון בקובץ Protocol.doc המצורף</td></tr></tbody></table>

גזירת בתאי גזע hematopoietic מ murine בתאי גזע עובריים

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

תא גזע מוגדר בתא עם היכולת הן עצמית לחדש וליצור בידול צאצאים מרובים. לתאי גזע עובריים (ESC) נגזרות הבלסטוציסט העובר מוקדם הם pluripotent ביכולת differentiative. פוטנציאל עצום differentiative שלהם הפכה אותם למוקד של מחקר רב התרכזו והסיק איך לפתות אותם כדי לייצר תאים מסוגים שימושי קלינית. גזרה מוצלחת של בתאי גזע hematopoietic (HSC) מהעכבר ESC לאחרונה הושג וניתן דמיינו בפרוטוקול הווידאו הזאת. HSC, ניתן לטעון את האוכלוסייה תא ביותר לנצל קלינית, משמשות לטיפול מספר עצום של ממאירויות והפרעות hematopoietic. עם זאת, חולים רבים שעשויים להפיק תועלת מטיפול HSC חוסר גישה תורמים מתאימים. ESC יכול לספק מקור חלופי של HSC עבור חולים אלו. פרוטוקול הבאה קובעת הבסיס שממנו ESC-HSC ניתן ללמוד ולהודיע ​​המאמצים לבודד HSC מ ESC האדם. בפרוטוקול זה, ESC הם להבדיל גופים embryoid (EBS) במשך 6 ימים בידול זמינים מסחרית מראש לגילוי נסיוב hematopoietic אופטימלית. EBS הם ניתק אז נגוע HoxB4 retroviral. אינפקטד EB-derived תאים מצופה על OP9 stroma, מח עצם קו סטרומה תא נגזר מכסה הגולגולת של M-CSF-/ - עכברים, ושיתוף בתרבית בנוכחות hematopoiesis קידום ציטוקינים למשך עשרה ימים. במהלך תרבות משותפת זו, תאים נגועים להרחיב באופן משמעותי, וכתוצאה מכך הדור בריכה הטרוגנית של 100s של מיליוני תאים. תאים אלה לאחר מכן ניתן להשתמש כדי עכברים הצלה מחדש מוקרן קטלנית.

זה פרוטוקול הפרטים גזירת להשתלה בתאי גזע hematopoietic מתאי גזע עובריים של עכבר (ESC) הזרקת הבאים שלהם לעכברים הנמען מוקרן קטלנית. בקצרה, הם ESC להבדיל גופים embryoid, אשר נגועים אז עם HoxB4 retroviral ושיתוף תרבותי עם OP9 תאים סטרומה וציטוקינים hematopoietic.

גזירת בתאי גזע hematopoietic מ Murine בתאי גזע עובריים

תא גזע מוגדר כתא בעל היכולת להתחדש באופן עצמי וליצור צאצאים מובחנים מרובים. תאי גזע עובריים (ESC) הם...

הדבר הראשון שנעשה הוא לקחת בקבוק T 25 של תאי umsl שהגיעו למצב של התמסגות (confluency). אני פשוט אשטוף עם PBS ואוסיף מספר טיפות של Trypsin, ואני אמתין מספר דקות. אני יכול לראות שהתאים ניתקים מהפלטה, כך שהם מוכנים למעשה.בשלב זה אסוף את תאי ה-trypsinized, ומומלץ לבצע trypsinization קצרה לתאי ה-trypsinized כדי לפרק את המושבות לפני העברתם לצלחת ה-UN. אלו יישארו באינקובטור למשך כ-30 עד 45 דקות. כעת אסבב את התאים במ centriuge כדי לאסוף אותם, ואז אבצע שאיבה.אני עומד לבצע רספנדסיה (resus) בעוד מספר דקות כדי שאוכל לספור זאת. כעת, לאחר שביצעתי רספנדסיה וספירה, אני מוציא אליקוט ומדלל אותו ל-50 mils, מה שיעניק לי את הריכוז המתאים כדי להגיע למאה תאים לטיפה, וזאת כדי לוודא שהתאים תקינים. כעת יש לנו מאגר.נניע את התמיסות מעט שוב, ונשפוך אותן אל תוך המאגר שלנו. אוקיי, זה כבר תוכנת. הנה זה קורה.עכשיו זה די ישר. הפכו את המנה והניחו אותה בצד. בכל כמה מנות, אני פשוט מטה אותה מעט רק כדי שהנוזל ינוע מעט בפנים.בסדר, אלו חמש צלחות. אני עומדת כעת להכניס אותן לאנקובטור. אלו הן טיפות התלייה שהנחנו לפני יומיים.כדי לאסוף אותם, פשוט מנערים את הפלטות כדי לאסוף את הטיפות. אני פשוט אאסוף את הכל ואנסה לעשות זאת בעדינות כדי לא להפריע מדי ל-EVs; אני אקח חמישה או שישה מ"ל של PBS ואשטוף את הפלטות. לאחר מכן נשאיר אותן למש

derivation-hematopoietic-stem-cells-from-murine-embryonic-stem

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

היכולת של בתאי גזע עובריים אנושיים עצמית לחדש להתמיין לכל סוגי התאים בגוף עולה כי הם מחזיקים הבטחה גדולה עבור שניהם יישומים רפואיים ככלי מחקר להתמודדות עם שאלות יסוד בהתפתחות מחלות. כאן, אנו מספקים תמציתי, צעד אחר צעד פרוטוקול הגזירה של בתאי גזע עובריים אנושיים מעוברים על ידי בידוד immunosurgical של מסת התאים הפנימית.

גזירת בתאי גזע עובריים אנושיים על ידי Immunosurgery

שיטה לנתח את התפלגות אבות היווצרות הדם במח העצם ב cytometry זרימה, כמו גם ביעילות לבודד מטוהרים מאוד בתאי גזע hematopoietic (HSCs) מתואר. הליך הבידוד מבוסס בעיקרו על העשרת המגנטי של כ-Kit תאים + תא מיון לטהר HSCs ללימודי תאית ומולקולרית.

ניתוח בידוד פנוטיפי של Murine בתאי גזע hematopoietic ו-Lineage מחויבים אבות

ניתן להשיג מניפולציה של ביטוי גנים טמפורלי בהתמיינות תאי גזע עובריים (ESCs) באמצעות מערכות גנים הניתנות להשראה. עם זאת, יצירת קווי תאים אלה היא יקרה וגוזלת זמן. פרוטוקול זה משיג ביטוי מהיר של טרנסגן בהתמיינות תאים שמקורם ב-ES וניתוח לאחר מכן של התמיינות המטופויאטית במורד הזרם.

זיהום retroviral של Murine גזע עוברי תאי Embryoid גוף תא נגזר לניתוח של בידול המטופואטיות

בפרוטוקול זה, יודגם גזירה של תאי אב לבביים מתאי גזע עובריים של עכבר ושל בני אדם. אסטרטגיה עיקרית בפרוטוקול זה היא להעשיר תאי אב לבביים בזרימה ציטומטרית באמצעות מדווחים פלואורסצנטיים שהונדסו לתוך קווי תאי הגזע העובריים.

גזירה של תאי לב ותאים מתאי גזע עובריים

ניתן להתמיין בתאי גזע עובריים של עכבר לתאי T במבחנה באמצעות מערכת התרבות המשותפת OP9-DL1. הצלחה בהליך זה דורשת תשומת לב קפדנית לתחזוקת ריאגנט/תאים, ושלבים רגישים לטכניקה מרכזית. כאן אנו דנים בפרמטרים קריטיים אלה ומספקים פרוטוקול מפורט לעידוד אימוץ טכנולוגיה זו.

גזירה של תאי T במבחנה מתאי עכבר גזע העובריים

גזע אבות היווצרות הדם תאים (HSPC) נובעים מתאי אנדותל מיוחדים (hemogenic) במהלך הפיתוח, עדיין מעט מאוד ידוע על התהליך שבו כמה תאי אנדותל לציין להפוך להרכיב דם. אנו מדגימים שיטה המבוססת זרימת cytometry המאפשרת בידוד סימולטני של תאי hemogenic האנדותל HSPC מרקמות עובריות בעכברים.

בידוד של Murine העוברי Hemogenic לתאי אנדותל

הפרוטוקול המתואר כאן מפרט את השראת תוכנית המוגנית בפיברובלסטים עובריים של עכברים באמצעות ביטוי יתר של קבוצה מינימלית של גורמי שעתוק. טכנולוגיה זו עשויה להיות מתורגמת למערכת האנושית כדי לספק פלטפורמות למחקר עתידי של המטופואיזה, מחלות המטולוגיות והשתלת תאי גזע המטופויאטיים.

תכנות מחדש עכבר עוברי פיברובלסטים עם גורמי שעתוק כדי לגרום תכנית Hemogenic

כאן, אנו מציגים pluripotent האנושי פרוטוקולים התרבות תאי גזע (hPSC), נהגו להבדיל hPSCs לתוך CD34+ אבות hematopoietic. שיטה זו משתמשת ספציפיות שלב מניפולציה של חגיגת הקנוני איתות לציין תאים באופן בלעדי לתוכנית או סופית או פרימיטיבי hematopoietic.

ביים הבידול של אבות Hematopoietic פרימיטיבי, מהווים הסופית מתאי גזע Pluripotent אנושי

מאמר זה מתאר פרוטוקול ביעילות להפיק, תרבות pluripotent שורות תאי גזע מעוברים עכבר בשלב הבלסטוציסט.

נגזרת של שורות תאי גזע מעוברים של עכבר

כאן אנו מציגים מתודולוגיה לניתוח המשובטים של תא גזע hematopoietic מבשרי במהלך התפתחות עובריים מאתר. אנו משלבים אינדקס מיון של תאים בודדים מאזור העורקים-בלוטת המין-mesonephros עובריים עם תרבות משותפת תא אנדותל והשתלות לאפיין את המאפיינים פנוטיפי ואת הפוטנציאל engraftment של מבשרי hematopoietic יחיד.

ניתוח המשובטים של תא גזע Hematopoietic מבשרי באמצעות אינדקס תא בודד מיון משולב עם תאי אנדותל נישה תרבות משותפת

מוצג כאן פרוטוקול פשוט להתמיינות מכוונת של תאי אנדותל המוגני מתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים תוך כשבוע.

התמיינות מכוונת של תאי אנדותל המוגניים מתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים

למדו פרוטוקול לגזירת תאי גזע המטופויטיים מתאי גזע עובריים של עכברים באמצעות גופי עובריים וזיהום רטרויראלי HoxB4. שיטה זו מאפשרת הצלת עכברים מוקרנים ומספקת מודל לחקר פיתוח תאי גזע ויישומים קליניים עתידיים.

גזירת בתאי גזע hematopoietic מ Murine בתאי גזע עובריים

גלה סרטונים נוספים