Name: PuraMatrix Encapsulation של תאים סרטניים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-12-17T17:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 8 s
Description: למד שיטת הכלאת תאי סרטן שחלות CAR5 ב-PuraMatrix ליצירת מודל תרבית תלת-ממדי. הפרוטוקול מדגים יצירת מבנים דמויי גרורות מיקרומטסטטיות לחקר תגובה לטיפול.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

טכנית הערות: <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Gelation הוא שיזם תוספת של מלחים. לכן, זה קריטי, כי מלחי לא לבוא במגע עם PuraMatrix עד gelation היא הרצויה; חשיפה מלחי כוח יוניים נמוך מאוד (למשל, &lt;0.05 מ ') תגרום gelation בלתי הפיך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתרונות שאריות מלאי כי הם מוכנים ניתן להשתמש במועד מאוחר יותר, בתנאי שהם לא באים במגע עם מלחים. אתה לא צריך לדאוג sonication לחזור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בועות האוויר ניתן להסיר aliquoting PuraMatrix לתוך צינורות סטרילי ואחריו צנטריפוגה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> היזהר מאוד בזמן שינויים מדיה כשאיפה יכול בקלות לשבש את המיטה PuraMatrix. </li></ul> חומרים: BD PuraMatrix פפטיד RAD16 Hydrogel-1% (Cat # 354250): ריכוז הפפטיד הכולל של התערובת חי היא 10 מ"ג / מ"ל. <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אמבט מים Sonicator או וורטקס </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 96, גם בתא תרבות צלחת </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבית תאים מדיה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סינון סטרילי H 2 O </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סטרילי סוכרוז 20% מסוננים </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים (כל התאים ב 5000 / טוב): OVCAR-5 </li></ul> כל הצעדים חייבים להתבצע בתנאים aseptic. נוהל: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Sonicate PuraMatrix 1% (RAD16) ב sonicator מים באמבטיה במשך 30 דקות כדי להפחית את צמיגות לפני השימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפתרון PuraMatrix 1% כעת ניתן aliquoted לתוך צינורות סטרילי כדי לפשט ניסויים עתידיים. <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הימנע היווצרות של בועות אוויר, אם הם יוצרים פשוט ספין את צינורות סטרילי המכיל PuraMatrix ב 1000 סל"ד (300 XG) במשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ריכוז הפפטיד הכולל של התערובת חי היא 10 מ"ג / מ"ל. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שני סטים של 4 בארות יהיה מצופה ב 2.5 מ"ג / מ"ל ​​ו - 1.25 מ"ג / מ"ל ​​פפטיד ריכוז מוחלט, בהתאמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל את PuraMatrix בכל להגדיר היטב עם 0.2 מיקרומטר סטרילי סוכרוז 20% מסונן סוכרוז 13.3% לריכוזים פפטיד סך של 5 מ"ג / מ"ל ​​ו - 2.5 מ"ג / מ"ל, בהתאמה כדי להשיג ריכוז של 2x BD PuraMatrix ב סוכרוז 10%. <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> To Make סוכרוז 20%, לדלל 10 גרם של סוכרוז, אז נפח 50 מ"ל מים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 13% סוכרוז ו 10% יכול להיות מוכן על ידי דילול פתרון המניה 20%. <ol class="lroman" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סוכרוז 13% (עבור כל 10 מ"ל): 6.5 מ"ל סוכרוז 20% + 3.5 מ"ל סטרילי H 2 O. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 10% סוכרוז (עבור כל 10 מ"ל): 5.0 מ"ל סוכרוז 20% + 5.0 מ"ל סטרילי H 2 O. </li></ol></li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכינו תערובת אמן PuraMatrix הפפטיד מבוסס על מספר בארות אתה מתכוון צלחת. (ראו דוגמה להלן). Aliquot ואז לתוך צינורות בודדים המכיל 25 מ"ל של תערובת האב. <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לערבב האב צריך להיות מוכן בריכוז פעמיים הסופית הרצויה של הפפטיד הכולל כפי שהוא יהיה מדולל עם נפח שווה של תאים במהלך ציפוי. <img src="/files/ftp_upload/1692/1692_fig11.jpg" alt="איור 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="דמות 1"></li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן השעיות התא על ידי trypsinizing monolayer תא בתרביות תאים. <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 2 מ"ל של 0.05% טריפסין EDTA יכול לשמש Flask T-75 כל אחד. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנטרל את טריפסין על ידי תוספת של תרבות התקשורת התא המכיל 10% נסיוב מומת חום שור העובר (להשתמש לפחות 2 מ"ל של התקשורת לכל מ"ל של טריפסין משמש בשלב הקודם). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה התאים ב 1000 סל"ד (~ 300 XG) במשך 5 דקות כדי ליצור תא גלולה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend התאים סוכרוז 10% סינון סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת התאים ספין שוב ב 1000 סל"ד (~ 300 XG) במשך 5 דקות להסיר כמויות זעירות של מלח נמצא בתקשורת. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend OVCAR-5 תאים סוכרוז 10% ב 2.0 x 10 5 תאים / מ"ל כך לספור התא הסופי לכל טוב יהיה טוב 5000 תאים כל אחד. השלבים הבאים יש לבצע במהירות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 25 μl של 10 x 2.0 5 תאים / מ"ל השעיה אל הצינור היחיד first המכיל 25 μl של תמהיל אמן PuraMatrix כפי שמוצג סכמטית לעיל. <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לערבב במהירות על ידי pipetting (~ 5 פעמים הלוך ושוב) בצינור ללא החדרת בועות אוויר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ואז פיפטה 50 תערובת μl השעיה / PuraMatrix התא לתוך הבאר המתאים מנה 96 באר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ליזום gelation של PuraMatrix BD ידי בעדינות pipetting 150 μl תרבית תאים מדיה (RPMI + 10% FBS) לצד הבאר <img src="/files/ftp_upload/1692/1692_fig12.jpg" alt="איור 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="דמות 2"></li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על הפעולות המתוארות 8 עד שכל בארות כבר מצופה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 30 דקות להסיר בעדינות רבה ~ 2 / 3 של התקשורת באמצעות פיפטה 200 μl לאזן את רמת החומציות של הידרוג. <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אל תשתמש ASPIRATOR אבק כמו זה ישבש את MATRIX </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הניחו את קצה פיפטה את הבאר כךזה לא נוגע במיטה PuraMatrix בעדינות להסיר מדיה מן הבאר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש להקפיד לא לשבש את מטריקס במהלך התרבות התאים PuraMatrix. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות להוסיף 150 μl של התקשורת בתרבות טרי תא לצד התאים המכילים גם הגלום PuraMatrix. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שינוי התרבות תאים התקשורת בכל טוב כל 48 שעות עם התקשורת בתרבות טרי בקפידה על ידי חזרה על שלבים 10 ו -11. </li></ol> נציג תוצאות: <img src="/files/ftp_upload/1692/1692_fig1tmb.jpg" alt="איור 1" border="0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="דמות 1"> באיור 1. OVCAR-5 תאים היו ארוזים כמתואר בפרוטוקול לעיל. תמונות נרכשו באמצעות הפוכה אולימפוס FV1000 מיקרוסקופ המצויד Spectra-Physics DeepSee טי: ספיר לייזר מכוון 750 ננומטר. הפעלות הדמיה שנערכו בימים 1, 3, 5 ו - 7 שלאחר ציפוי. מרחק עבודה ארוך, טובלים במים אובייקטיבי 40X (אולימפוס LUMPLFLN 0.8 NA) שימש תמונה דרך PuraMatrix. תלת ממדי כרכים נאספו באמצעות רכישת ערימות התמונה צעדים 1.47 מיקרומטר צירית. שני אי - descanned גלאי אסף את פליטת autofluorescence באמצעות סגול (440-490 ננומטר) וירוק (510-550 ננומטר) מסננים bandpass. התמונות הסופית וסרטים מחסנית עומק עובדו באמצעות ImageJ על ידי שילוב שני ערוצי גילוי. אנא <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1692/1692_fig1.jpg">לחץ כאן</a> כדי לראות גרסה גדולה יותר של דמות 1.

<ol><li>Gelain, F., Bottai, D., Vescovi, A., Zhang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Designer+self-assembling+Peptide+nanofiber+scaffolds+for+adult+mouse+neural+stem+cell+3-dimensional+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Designer self-assembling Peptide nanofiber scaffolds for adult mouse neural stem cell 3-dimensional cultures.</a> PLoS One. 1, e119-e119 (2006).</li>
</ol>

puramatrix encapsulation של תאים סרטניים

PuraMatrix Encapsulation of Cancer Cells

הראיות עולה כי הגדלת תאים סרטניים culturing בשלושה ממדים משחזר בצורה מדויקת יותר את המורכבות של ביולוגיה הגידול. רבים מן המודלים האלה לנצל קרום במרתף מחדש שמקורם בבעלי חיים אשר מכילים כמות משתנה של גורמי גדילה ציטוקינים שיכולים להשפיע על הצמיחה של המודלים האלה תרבית תאים. כאן אנו מתארים בפרוטרוט את ההכנה והשימוש PuraMatrix, זמין מסחרית הרכבה עצמית פפטיד ג&#39;ל כי הוא נטול חומרים שמקורם בבעלי חיים ומזיקים כדי לתמצת להפיץ את סרטן השחלות התא קו, OVCAR-5. נתחיל המתאר כיצד להכין את PuraMatrix לפני השימוש. בשלב הבא, אנחנו מדגימים איך שצריך לערבב את PuraMatrix ההשעיה התא כדי לתמצת את התאים הידרוג. עם תוספת של תרבות המדיה הנייד או הזרקה לסביבה פיזיולוגית, רכיב של הפפטיד PuraMatrix במהירות עצמי מרכיב לתוך הידרוג 3D שמספקת בקנה מידה ננומטרי מבנה סיבי עם גודל נקבוביות ממוצע של 500-200 ננומטר<sup&gt; 1</sup&gt;. בנוסף, אנו מדגימים כיצד להפיץ תרבויות גדל PuraMatrix כמוס. כאשר הגלום PuraMatrix, OVCAR-5 תאים להרכיב לתוך שלושה מבנים acinar ממדי דומים יותר את המורפולוגיה של גושים micrometastatic שנצפו במרפאה מאשר monolayer במודלים חוץ גופית. באמצעות מיקרוסקופיה confocal לנו להמחיש את המראה של נציג OVCAR-5 תאים הגלום PuraMatrix על 1 יום, 3, 5, 7 ו ציפוי הודעה. השימוש PuraMatrix לתאי סרטן תרבות צריך לשפר את הבנתנו של המחלה מאפשר לנו להעריך את התגובה לטיפול במערכות מודל החיזוי יותר מבחינה קלינית.

סרט הווידאו הזה מדגים כיצד לתמצת תאים סרטניים תרבות PuraMatrix, עצמי זמינים מסחרית להרכבת ג&#39;ל פפטיד.

PuraMatrix Encapsulation של תאים סרטניים

ראיות רבות יותר מצביעות על כך שגידול תאי סרטן בתלת-ממד משחזר בצורה מדויקת יותר את המורכבות של הביולוגיה של הגידול. רבות מהן...

מודלים של תרביות תאים בשכבה אחת (Monolayer) היו כלים שימושיים מאוד לחקר מחלות שונות, כולל סרטן. עם זאת, מודלים אלו אינם מצליחים לשחזר את הסביבה התלת-ממדית הנצפית in vivo. סרטון זה ידגים את השימוש ב-Matrixx טהור, ג'ל פפטידים בעל יכולת הרכבה עצמית הזמין מסחרית, לצורך אנקפסולציה והנמאה של שלב תאי סרטן השחלה CAR five.מתלילים את תרחיף התאים עם ה-Matrixx הטהור ותהליכי תרבית תאים. מוסיפים מצע גידול כדי להתחיל את תהליך ההיווצרות של ה-Matrixx הטהור; כאשר תאים עטופים ומגודלים ב-Matrixx טהור של Carv, חמישה תאים מתאגדים למבני 3D ASIN R הדומים במורפולוגיה שלהם לרכיבים של קשרי מיקרו-מטסטזיס. היי, אני עדנאן אבי.אני עמית מחקר במעבדתו של ד"ר TBA Hassan במרכז לנשאי פוטו-רפואה בבית החולים הכללי של מסצ'וסטס. היום נדגים לכם פרוטוקול לאנקפסולציה ולתרבית של שורת תאי סרטן שחלה במטריצה סינתטית הנקראת pure matrix. אנו משתמשים במודל זה במעבדתנו כדי להעריך תגובה לטיפול בסרטן השחלה.אז בואו נתחיל. להידרוג'ל הפפטידי BD 1%pure matrix RAD 16 יש ריכוז פפטידים כולל של 10 mg/mL לפני השימוש. הפחיתו את הצמיגות של ה-pur matrix על ידי חימומו במקלחית מים ולאחר מכן בצעו סוניקציה למשך 30 דקות, תוך שמירה על תנאים סטריליים.חלקו את תמיסת המטריקס הטהורה בריכוז 1% למבחנות סטריליות. כדי לפשט ניסויים עתידיים, הימנעו מהיווצרות בועות אוויר; אם הן נוצרו, פשוט סבבו את המבחנות הסטריליות המכילות מטריקס טהור ב-1000 RPM למשך חמש דקות. בהדגמה זו, נבצע זריעה לשתי קבוצות של ארבע בארות בריכוזים של 2.5 mg/mL ו-1.25 mg/mL של ריכוז פפטיד כולל, בהתאמה. הכינו שתי תערובות מאסטר (master mixes) של פפטיד מטריקס טהור בהתבסס על מספר הבארות שאתם מתכוונים לזרוע, שבמקרה זה הוא שמונה.יש להכין כל תערובת מאסטר (master mix) בריכוז כפול מהריכוז הסופי הרצוי של הפפטיד הכולל, כיוון שהיא תדלל בנפח שווה של תאים במהלך הזריעה. כדי להכין את תערובות המאסטר, יש לדלל את המטריקס הטהור עם סוכרוז 10% סטרילי וסוכרוז 13.3% לריכוזי פפטיד כוללים של 5 mg/mL ו-2.5 mg/mL בהתאמה, כדי להשיג ריכוז של 2x של Matrixx טהור ב-10%Sucrose. לאחר מכן, יש לחלק 25 µL מתערובות המאסטר לשמונה מבחנות נפרדות. תערובות המאסטר של המטריקס הטהור מוכנות כעת לכליאת תאים. בניסוי זה תכלא ותורבה שורת תאי סרטן השחלה CAR5. לפני הטיפול בטריפסין, יש לדגור את התאים עם 10 mL של PBS סטרילי ללא סידן ומגנזיום למשך 15 עד 20 דקות.שאבו את ה-PBS ובצעו טריפסינציה לשכבת תאי תרבית חד-שכבתית (monolayer), נטרלו את ה-trypsin על ידי הוספת מצע גידול לתאים המכיל 10% fetal bovine serum שעבר אינאקטיבציה בחום. השתמשו בלפחות שני מיליליטרים של מצע גידול לכל מיליליטר של trypsin שנעשה בו שימוש בשלב הקודם. לאחר מכן, העבירו את התאים לאنبובות צנטריפוגה וסבבו אותם ב-1000 RPM למשך חמש דקות כדי ליצור משקע תאים (cell pellet).לאחר סבבי צנטריפוגציה, השעו את משקע התאים ב-10% sucrose מסונן סטרילית. ספרו את התאים והסמירו אותם שוב ב-1000 RPM למשך חמש דקות. כדי להסיר כמויות מזעריות של מלח שנמצא במצע, השעו את התאים ב-10% sucrose בריכוז של 2×10⁵ תאים למילליטר, כך שספירת התאים הסופית לכל באר תהיה 5,000 תאים.התאים מוכנים כעת לכליאה ב-Matrixx טהור. את השלבים הבאים לכליאת תאים במטריקס טהור יש לבצע במהירות: יש להעביר 25 microliters של תרחיף התאים שהוכן קודם לכן אל השפופרת הבודדת הראשונה המכילה 25 microliters של תערובת ה-master mix של Matrixx טהור. יש לערבב במהירות באמצעות פיפטור של כחמש פעמים מעלה ומטה בשפופרת, ללא הכנסת בועות אוויר.לאחר מכן, העבירו בפיפטה 50 µL מתערובת תליית התאים ב-Matrixx הטהור לבאר המתאימה בצלחת תרבית תאים של 96 בארות. התחילו את תהליך הפולימריזציה של ה-BD pure matrix על ידי העברה עדינה בפיפטה של 150 µL מתווך תרבית תאים לצד הבאר. חזרו על שלבי הכליאה של התאים עבור שאר הבארות.זכרו כי יש לבצע שלבים אלה במהירות, ויש להשלים את כל הליך הכמיסה עבור באער אחת לפני המעבר לבאער הבאה. לאחר שכל שמונה הבאערים מולאו בתאים, המתינו 30 דקות. לאחר 30 דקות, באמצעות פיפט של 200 µL, הניחו את קצה הפיפט בתוך הבאער באופן שבו הוא אינו נוגע בשכבת המטריקס הטהורה, והסִירו בעדינות רבה את המדיום מהבאער. יש להסיר כשני שליש מהמדיום כדי לאזן את ה-pH של ההידרוג'ל.אין להשתמש בשואב ואקום כיוון שהדבר ישבש את המטריקס. בשלב הבא, הוסיפו בעדינות רבה 150 µL של מצע גידול תאים טרי לדופן הבאר המכילה תאים העטופים ב-Matrixx טהור. באותו אופן כפי שהודגם קודם לכן, הסירו שני שלישים מהמצע והוסיפו מצע טרי לשאר הבארות.יש להחליף את מצע גידול התאים בכל באר בכל 48 שעות במצע גידול טרי. תאי Ocar five הוכנסו לקפסולות כפי שהודגם בפרוטוקול הקודם. מוצגות הדמיות תלת-ממדיות מייצגות של תאי OR five שנכנסו לקפסולות וגודלו במטריקס טהור בימים 1, 3, 5 ו-7.הראינו לכם כיצד לבצע אנקפסולציה בתרבית של שורת תאי סרטן השחלה OCar5 בתוך מטריצה סינתטית הנקראת pure Matrixx. כאשר משתמשים ב-pure Matrixx, חשוב להבין כי פרוטוקול זה עבר אופטימיזציה עבור שורת התאים OCar5. כל חוקר יצטרך לבצע אופטימיזציה וכיוונון עדין של הפרוטוקול עבור שורת התאים הספציפית שלו.וזכרו שבזמן החלפת המדיום, חשוב מאוד לא להפריע למצע המטריקס כיוון שהוא שביר מאוד; לעולם אל תשאיבו ותשתמשו תמיד בפיפטה. זה הכל. תודה רבה שצפיתם ובהצלחה בניסוייכם.

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

Assay אישור mesothelial המתוארת כאן מנצלת את התאים שכותרתו fluorescently ואת זמן לשגות מיקרוסקופיה וידאו להמחיש כמותית למדוד את יחסי הגומלין של סרטן השחלות spheroids תאיים ו monolayers התא mesothelial. Assay מתווך זה מדגים את השלבים המוקדמים של גרורות סרטן השחלות.

ב Assay עמילות חוץ גופית mesothelial כי מודלים השלבים המוקדמים של גרורות סרטן השחלות

הפעילות ציטוטוקסית של phenanthridine PJ-34 בתאים סרטניים שעברו מיטוזה תועדה בזמן אמת על ידי ההדמיה confocal חי. סרטן PJ-34 להכחיד אנושי שד מד"א-MB-231 תאי מחסה Extra-centrosomes במיטוזה. בניגוד למיטוזה דו מוקדי רגילים, את centrosomes במיוחד לא התקבצו בשני קטבי הכישור בנוכחות של PJ-34.

מוות של תאים הקשורים מיטוזה חריגה נצפה על ידי ההדמיה Confocal בתאי סרטן חיים

מטריצה ​​מקורית המופק פיברובלסטים רקמה מהונדסות היא כלי המתעוררים ליצירת מצע סטרומה אשר תומך בהתפשטות תאי אפיתל ובידול. הנה פרוטוקול יישום מתודולוגיה זו כדי להעריך את ההשפעה של סוגי תאים שונים של סטרומה בביולוגיה של תא הסרטני מוצג.

הנדסת רקמות של גידול סטרומה Microenvironment עם בקשה לפלישת תאי הסרטן

מאמר זה מספק מתודולוגיות מפורטות לשימוש במבחנים תלת ממדי (3D) לכמת פלישת תאי סרטן השד. באופן ספציפי, אנו דנים בהליכים הנדרשים להקמת מבחני כאלה, כימות, וניתוח נתונים, וכן שיטות לבדיקת ההפסד של שלמות קרום המתרחש כאשר תאים לפלוש.

כימות של הפולשנות תאי סרטן השד תוך שימוש במודל תלת ממדים (3D)

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לאנקפסולציה של תאים קטבוליים, הצורכים שומנים לייצור חום ברקמת השומן התוך-בטנית ומגבירים את פיזור האנרגיה בעכברים שמנים.

Encapsulation תרמוגנית Preadipocytes להשתלה לבסיס מיון רקמת שומן

שיטה זו מעריכה פלישת תאי סרטן מספרואידים למטריצה תלת מימדית מסביב.  ספרואידים נוצרים בשיטת תרבית טיפה תלויה ולאחר מכן מוטמעים במטריצה המורכבת מחומרי ממברנת הבסיס וקולגן מסוג I.  פלישת הספרואידים מנוטרת לאחר מכן.

תאי סרטן ספרואיד Assay להערכת פלישה בסביבת 3D

כאן, אנו מתארים שיטה של מיקרוסקופיה ארוכת טווח כדי לעקוב לאורך תאים בודדים בתגובה לטיפולים אנטי-סרטניים.

מבעד למראה: זמן לשגות מיקרוסקופית ו מעקב אורך של תאים בודדים כדי ללמוד Therapeutics אנטי-סרטניות

התאמנו תוספת ממברנה מיקרו-נקבובית חדירה כדי לחקות את המיקרו-סביבה של הגידול (TME). המודל מורכב מתרבית תאים מעורבת, מאפשר יצירה פשוטה של אוכלוסיות תאים בודדות מועשרות מאוד ללא שימוש בתיוג פלואורסצנטי או מיון תאים, ומאפשר לחקור תקשורת בין-תאית בתוך ה-TME בתנאים רגילים או בתנאי עקה.

חקיין של microenvironment הגידול: שיטה פשוטה ליצירת אוכלוסיות תאים מועשרות חוקרים אינטר תקשורת

כאן, אנו מתארים שיטה תלת מימדי התרבות לנתח המורפולוגיה של ראשי תאים סרטניים בשד, כמו גם כדי לחקור את יחסי הגומלין ישירים ועקיפים ומונוציטים לבין התוצאות כגון קולגן השפלה, גיוס תאים חיסוניים, תא הפלישה, קידום של דלקת הקשורים לסרטן.

ניתוח התקשורת בין ומונוציטים ו תאים סרטניים בשד ראשי במטריצה חוץ-תאית לחלץ (ECME)-מבוסס מערכת תלת מימדי

אינטראקציות סלולרי Paracrine ו- juxtacrine תפקיד חשוב בתהליכים ביולוגיים רבים, כולל התקדמות הגידול, תגובות חיסוניות, אנגיוגנזה ופיתוח. כאן, שיטה תרבות proximal משמש כדי ללמוד paracrine איתות שבו ריכוז המותאמות לשפות אחרות של הגורמים המופרש נשמרים תוך מניעת מגע ישיר הסלולר.

שיטה תרבות Proximal ללמוד Paracrine איתות בין תאים

למד שיטת הכלאת תאי סרטן שחלות CAR5 ב-PuraMatrix ליצירת מודל תרבית תלת-ממדי. הפרוטוקול מדגים יצירת מבנים דמויי גרורות מיקרומטסטטיות לחקר תגובה לטיפול.

PuraMatrix Encapsulation של תאים סרטניים

גלה סרטונים נוספים