Name: קבלת Hemocytes מן הוואי Bobtail קלמארי Euprymna scolopes והתבוננות דבקותם חיידקים סימביוטיים שאינן הסימביוטי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-02-11T04:52:00.000+00:00
Duration: 5 min 29 s
Description: למדו כיצד לבודד המוציטים מדיונון Euprymna scolopes ולחקור את הדבקות החיידקים אליהם באמצעות צביעה פלואורסצנטית ומיקרוסקופיה. שיטה זו מאפשרת מחקר אינטראקציות תא-חיידק בביולוגיה ימית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מקורות המימון: אוניברסיטת קונטיקט קרן המחקר והמחלקה לביולוגיה מולקולרית Cell ל SVN, Sigma Xi גרנט-in-Aid-מחקר אנטוניו ח ו ר Majorie רומנו בוגר חינוך לידידות AJC

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 500 MLS של 0.22 פילטר מעוקרים ים מלאכותי מיקרומטר (FSW; מליחות 35 ppt). ים מלאכותי או טבעי סינון דרך מסנן 0.22 מיקרון מיקרומטר להסיר חלקיקים וחיידקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי אחד מבוגר הוואי bobtail דיונון (Euprymna scolopes) על ידי הצבת בפתרון 2% אתנול FSW. מניחים את החיה הרדמה למשך כ 10 דקות. דיונון תחדל שחייה לא יהיה פעיל להגיב למגע. הנשימה המשך, שמסומן על ידי התנועה של המעטפת, ופעילות chromatophore עדיין צריך להיות שנצפו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום דיונון עם הצד הגחוני פונה כלפי מעלה על מגש שעווה רגילה לנתיחה. להטביע את חיה עם FSW המכיל אתנול 2%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש אחד רגיל 200 טיפים פיפטה μl, למשוך בחזרה את המשפך ואת המעטפת כדי לחשוף את כלי הדם הראשי cephalic ממוקם בין שתי העיניים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מזרק סטרילי 1 מ"ל עם מחט 26.5-מד, לנקב את כלי הדם cephalic ולסגת בין 50-100 μl של hemolymph. מניחים את hemolymph בצינור סטרילי 1.5 מ"ל על הקרח. הערה: אם חיה ישמש פעמים תורם רבות, רק לסגת 10-20 μl של hemolymph בכל זמן נתון. מחזירים את החיה טנק מי ים רגילים. חיה יהיה להחיות בתוך 30 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Hemocytes שנאספו טרי נשטפים מחדש תלויה μl 500 של פתרון קלמארי של Ringer (S-האצבעות; 530 mM NaCl, KCl 10 mM, 25 מ"מ MgCl 2, 10 mM CaCl 2 ו - 10 mM חיץ HEPES, pH 7.5). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ריכוזים Hemocyte נקבעים על ידי hemocytometer, וכ 2,000 תאים מתווספים תלושי החדרים מכסה זכוכית, ואפשר לדבוק הזכוכית של 10 דקות בטמפרטורת החדר. בשלב זה צפיפות, hemocytes הטופס monolayer אחיד על פני השטח את השקופית זכוכית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לצפות חיידקי מחייב hemocytes המארח, hemocytes נחשפים זן חיידקי שכותרתו fluorescently כגון Vibrio fischeri ES114 ו / או Vibrio harveyi B392, שכל אחת מהן מכילה כתב פלואורסצנטי ירוק. V. fischeri ES114 וו ' harveyi B392 גדלים לשלב יומן אמצע ב tryptone מי ים מדיה (SWT) על 28 מעלות צלזיוס שייקר מסלולית. צפיפות אופטית ב 600nm נמדדת spectrophotometrically לקבוע צפיפות התאים. חיידקים הם pelleted ידי צנטריפוגה (5000 סל"ד במשך 5 דקות), supernatant הוא מושלך, ואת גלולה מחדש תלויה S-האצבעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 100,000 תאים חיידקיים מתווספים קאמרית כל כך טוב כי יש 50 חיידקים לכל hemocyte בממוצע. Hemocyte / תערובות חיידקים מודגרת בפתרון של S-Ringer במהירות של 25 ° C עבור 1 שעה, זמן נקבע להניב את מרב מחייב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הציטופלסמה של hemocytes אז הם מוכתמים fluorescently עם CellTracker אורנג' 0.005% (Invitrogen) ולאחר מכן לשטוף S-האצבעות כדי להמחיש את התאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Hemocytes ויטראז עם חיידקים הקשורים נתפסים על ידי הקרינה או באמצעות גילוי Zeiss stereoscope V20 פלורסנט או מיקרוסקופ SP2 לייקה לייזר ספקטרלי confocal, ומנה מעל פני השטח של התא החי. </li></ol> נציג תוצאות מכיוון hemolymph תכשיטים hemocyanin מכיל תאית ולא המוגלובין, על חמצון, hemolymph יהפוך לכחול כהה. הממוצע של ~ 5000 hemocytes לכל μl של hemolymph יושג באמצעות שיטה זו. לאחר עמידה מחליק לכסות החדרים ואת מכתים ניאון, hemocytes אמור להופיע במאור אדום fluorescently ו amoeboid בצורת. עבור הידבקות חיידקים, V. fischeri תדבק גרוע hemocytes (1-2 תאים חיידקיים לכל תא דם) תוך V. harveyi תדבק מאוד (10-15 תאים חיידקיים לכל hemocyte). <img src="/files/ftp_upload/1714/1714fig1.jpg" alt="איור 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> באיור 1. למבוגרים הוואי bobtail דיונון Euprymna scolopes מראה המיקום של כלי דם cephalic. <img src="/files/ftp_upload/1714/1714fig2.jpg" alt="איור 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 2"> איור 2. תוצאות של חשיפה hemocyte כדי Vibrio fischeri (א) ו Vibrio harveyi (B). אדום, כתום Cell Tracker, ירוק, GFP שכותרתו חיידקים.

<ol><li>Koropatnick, T. A., Kimbell, J. R., McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Responses+of+host+hemocytes+during+the+initiation+of+the+squid-Vibrio+symbiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Bull%22%5BJournal%5D)">Responses of host hemocytes during the initiation of the squid-Vibrio symbiosis.</a> Biol. Bull. 212, 29-39 (2007).</li>
<li>McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unseen+forces%3A+the+influence+of+bacteria+on+animal+development%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Unseen forces: the influence of bacteria on animal development.</a> Dev. Biol. 242, 1-14 (2002).</li>
<li>McFall-Ngai, M. J., Ruby, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Symbiont+recognition+and+subsequent+morphogenesis+as+early+events+in+an+animal-bacterial+mutualism%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Symbiont recognition and subsequent morphogenesis as early events in an animal-bacterial mutualism.</a> Science. 254, 1491-1494 (1991).</li>
<li>Nyholm, S. V., Stewart, J. J., Ruby, E. G., McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recognition+between+symbiotic+Vibrio+fischeri+and+the+haemocytes+of+Euprymna+scolopes%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Recognition between symbiotic Vibrio fischeri and the haemocytes of Euprymna scolopes.</a> Environ. Microbiol. 11, 483-493 (2009).</li>
<li>Nyholm, S. V., McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+winnowing%3A+establishing+the+squid-Vibrio+symbiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The winnowing: establishing the squid-Vibrio symbiosis.</a> Nat. Rev. Microbiol. 2, 632-642 (2004).</li>
<li>Nyholm, S. V., Stabb, E. V., Ruby, E. G., McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+an+animal-bacterial+association%3A+recruiting+symbiotic+Vibrios+from+the+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Establishment of an animal-bacterial association: recruiting symbiotic Vibrios from the environment.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 97, 10231-10235 (2000).</li>
<li>Nyholm, S. V., McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sampling+the+light-organ+microenvironment+of+Euprymna+scolopes%3A+description+of+a+population+of+host+cells+in+association+with+the+bacterial+symbiont+Vibrio+fischeri%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Bull%22%5BJournal%5D)">Sampling the light-organ microenvironment of Euprymna scolopes: description of a population of host cells in association with the bacterial symbiont Vibrio fischeri.</a> Biol Bull. 195, 89-97 (1998).</li>
<li>Visick, K. L., Ruby, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vibrio+fischeri+and+its+host%3A+it+takes+two+to+tango%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Vibrio fischeri and its host: it takes two to tango.</a> Curr. Opin. Microbiol. 9, 632-638 (2006).</li>
</ol>

מחקרים לגבי תפקידה של המערכת החיסונית בתיווך איתות מולקולרי בין חיידקים מועילים המארחים שלהם, בשנים האחרונות, תרומה משמעותית להבנת האבולוציה המשותפת של אאוקריוטים עם החיידקים שלהם. מערכת דיונון / Vibrio הוכיחה את עצמה כמערכת מודל ממושמע כדי לענות על שאלות היסוד בתחום זה 2,3,5,6,8. אור איבר של Euprymna דיונון scolopes היתרי קולוניזציה באופן בלעדי על ידי החיידק המאיר Vibrio fischeri. מאחר ורקמות שהבית חיידקים נשארים במגע עם מי ים, דיונון צריך לא...

<table><tbody><tr><td>מערכת כיסויי זכוכית בורוסיליקט עם תאים Lab-Tek #1.0 (8 תאים)</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>155411</td><td></td></tr><tr><td>מזרק אינסולין ללא לטקס 1ml, 26.5 G</td><td>BD Biosciences</td><td>C34551</td><td></td></tr><tr><td>Cell Tracker Orange</td><td>Invitrogen</td><td>C34551</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ SteREO Discovery V20</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ קונפוקאלי SP2</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

קבלת hemocytes מן הוואי bobtail קלמארי euprymna scolopes והתבוננות דבקותם חיידקים סימביוטיים שאינן הסימביוטי

Obtaining Hemocytes from the Hawaiian Bobtail Squid Euprymna scolopes and Observing their Adherence to Symbiotic and Non-Symbiotic Bacteria

מחקרים לגבי תפקידה של המערכת החיסונית בתיווך איתות מולקולרי בין חיידקים מועילים המארחים שלהם, בשנים האחרונות, תרומה משמעותית להבנת האבולוציה המשותפת של אאוקריוטים עם החיידקים שלהם. הקשר הסימביוטי בין הוואי bobtail דיונון,<em&gt; Euprymna scolopes</em&gt; ואת החיידק bioluminescent<em&gt; Vibrio fischeri</em&gt; נוצל כמערכת מודל להבנת ההשפעות של חיידקים מועילים על התפתחות של בעלי חיים. מחקרים שנעשו לאחרונה הראו כי macrophage כמו hemocytes, המרכיב הסלולר הבלעדית של מערכת החיסון המולדת המארחת של דיונון, צפוי לשחק תפקיד חשוב בתיווך הקמת ותחזוקה של עמותה זו. פרוטוקול זה יהיה להדגים כיצד להשיג hemocytes מ<em&gt; א scolopes</em&gt; ולאחר מכן להשתמש תאים אלה מבחני מחייב חיידקי. למבוגרים דיונון מורדמים הראשון לפני hemolymph נאסף על ידי מזרק מתוך כלי הדם הראשי cephalic. Hemocytes המארח, הכלול hemolymph המחולץ, הם דבקו coverslips החדרים זכוכית חשוף ואז חלבון הפלואורסצנט הירוק שכותרתו הסימביוטי<em&gt; Vibrio fischeri</em&gt; ולא סימביוטית<em&gt; Vibrio harveyi</em&gt;. Hemocytes הם counterstained עם פלורסנט לצבוע (Cell Tracker אורנג&#39;, Invitrogen) ולאחר מכן דמיינו באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

וידאו זה יהיה להדגים כיצד להשיג hemocytes (כדוריות דם) של הוואי bobtail דיונון,<em&gt; Euprymna scolopes</em&gt; לשימוש מבחני תא ביולוגי חיידקי הידבקות. Hemocytes יהיה מוכתם עם פלורסנט לצבוע וחשוף GFP שכותרתו חיידקים.

קבלת Hemocytes מן הוואי Bobtail קלמארי Euprymna scolopes והתבוננות דבקותם חיידקים סימביוטיים שאינן הסימביוטי

מחקרים העוסקים בתפקידו של מערכת החיסון בתיווך איתות מולקולרי בין חיידקים מועילים לבין המארחים שלהם, הובילו בשנים האחרונות ל...

לאחר שהוצאו דיונוני בובטייל (bobtail squid) בוגרים מהמיכלים שלהם והורדמו באמצעות תמיסת מי ים מסוננים עם 2% ethanol, הם עברו דימום דרך כלי הדם הצפלי. באמצעות מזרק במידה 26.5, ההמולימפה שהופקה נראית כחולה.בשל נוכחותו של המוציאנין, המהמוציטים מדוללים לריכוז הרצוי ומחולקים לאליקוטיים על גבי לית גסיס בעל שמונה תאים. לאחר שהמהמוציטים נצמדו לית הגסיס, הם נצבעים ב-CellTracker Orange, צבע פלואורסצנטי, ונחשפים לחיידקים המסומנים ב-GFP, אותם ניתן להדמיות תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי. שלום, אני ספנסר אולם מהמחלקה לביולוגיה מולקולרית ותאית באוניברסיטת קונטיקט.ואני אנדרו קולינס מ-NY Home Lab. היום נראה לכם הליך להוצאת המולימפה או דם מהדיונון המנקה ההוואי. אתם מכינים את ה-opis.דיונוני הזנב הקצר הם בעלי חיים ליליים הנמצאים מול חופי הוואי בקרבת שוניות אלמוגים, והם משתמשים באור המופק על ידי הסימביוזה שלהם כדי להסוות את עצמם בלילה כאשר הם יוצאים לצוד את מזונם המועדף, שרימפס. אנו משתמשים בקשר זה במעבדה כדי לחקור כיצד חיידקים מועילים מקולנזים רקמות של בעלי חיים. אנו משתמשים בנוהל זה במעבדה שלנו כדי לחקור אינטראקציות בין מרכיבים של מערכת החיסון המולדת של המארח לבין השותף הבקטריאלי הביולומינסצנטי שלו, VIO ide.אם כן, נתחיל. לפני הפקת ההמולימפה (Hemolymph), הרדימו דיונון בוגר אחד בכלי כימי של ליטר אחד המכיל תמיסה שהוכנה טרייה של 2% ethanol ב-500 milliliters של מי ים מלאכותיים שעברו סטריליזציה באמצעות סינון. לאחר 10 דקות, הדיונון ייראה שוחה ולא יגיב באופן פעיל למגע.עם זאת, עדיין יש להבחין בנשימה מתמשכת, כפי שמעידה תנועת המעטפת ופעילות הכרומטופורים המעידה על פעילות של תאי הפיגמנט. שפכו חלק מתמיסת מי הים הסטריליים והאתנול מהכלי למגש נתיחה סטנדרטי משעווה והטביעו את הדיונון במגש כאשר הצד הגחוני פונה כלפי מעלה. באמצעות טיפ סטנדרטי של פיפט של 200 µL, משכו לאחור את המשפך ואת המעטפת כדי לחשוף את כלי הדם הצפלי הראשי הממוקם בין שתי העיניים.השתמש במזרק סטרילי עם מחט במידה 26.5 כדי לדקור את כלי הדם הצפלי (cephalic) ולשאוב בין 50 ל-100 µL של המולימפה או 10 ל-20 µL. אם בעל החיים ישמש כתורם מספר פעמים, העבר את ההמולימפה למבחנה סטרילית של 1.5 mL על קרח. שים לב שאם שלב זה בוצע נכון, דם הדיונון צריך להיראות בכחול כהה.העבירו את בעל החיים למכל עם מי ים רגילים להחייאה, לאחר מכן סובבו את ההמולימפה במיקרו-צנטריפוגה בטמפרטורת החדר כדי לשקע את ההמוציטים והסירו את הנוזל העלון בעזרת פיפטה. השעיקו מחדש את ההמוציטים ב-500 µL של תמיסת ריינגר לדיונונים לשטיפה. לאחר מכן, סובבו שוב כדי לשקע את התאים והסירו את הנוזל העלון.לבסוף, השהו מחדש את דם הדיונונים (hemos) ואת תמיסת רינגר לדיונונים (squid ringer solution). קבעו את ריכוז התאים באמצעות המוציטומטר (hemo cytometer). לאחר מכן, הוסיפו כ-2000 תאים לכל תא של זכוכית כיסוי.יש לאפשר לתאים להיצמד לזכוכית למשך כ-10 דקות. בצפיפות זו, ה-hemos אמורים ליצור שכבה אחת אחידה (monolayer) על פני השטח של הזכוכית. יש להקפיא את ה-hemos על קרח בזמן הכנת החיידקים במנער אורביטלי בטמפרטורה של 28 °C.גדלו זן אחד או יותר של חיידקי Vireo המכילים גן רפורטר פלואורסצנטי ירוק עד לשלב ה-mid log בתווך מי מלח עם טריטון. באמצעות ספקטרופוטומטר, מדדו את הצפיפות האופטית של התרבית ב-600 כדי לקבוע את צפיפות התאים; רכזו את החיידקים באמצעות סבב בצנטריפוגה, השליכו את הנוזל העליון והשעיקו מחדש את המשקע. במיליליטר אחד של תמיסת רינגר לדיונונים, הוסיפו את החיידקים להמוציטים.במטריצות של שקופיות זכוכית עם 100,000 חיידקים לכל תא. דגרו את השקופיות בטמפרטורת החדר למשך שעה אחת. כדי להשיג קישור מקסימלי, הוסיפו cell tracker orange בריכוז סופי של 0.005% לצביעת הציטופלזמה.דגרו למשך 30 דקות ולאחר מכן שטפו עם 150 µL של תמיסת ringer טרייה של דיונון. בעזרת מיקרוסקופ קונפוקאלי, בחנו את ההמיציטים הצבועים ואת החיידקים הנלווים אליהם, וספרו את החיידקים על פני כל שטח ההמיציט. כעת נציג לכם מספר תמונות מייצגות של המיציטים שנחשפו לחיידק Filio Harvey Eye הבלתי-סימביוטי המסומן ב-GFP ולחיידק הסימביוזה הטבעי של הדיונון, Filio fii.כאן מוצגת תמונה של אתר המו (hemo site) שלא נחשף לחיידקים כלשהם. התא נראה אדום והפך לפעיל. לפיכך, ניתן לראות את תוספתיו הדמויות פסאודופודיה.כאשר התא נחשף לחיידק הסימביוטי filio fii, ניתן לראות מספר קטן של חיידקים נקשרים לפני השטח של התא. עם זאת, כאשר החיידק הלא-סימביוטי filio Harvey Harveyi נחשף להמוס, נקשר מספר רב יותר של חיידקים באופן משמעותי. הרגע הצגנו בפניכם כיצד למצות המולימפה מדיונון זנב-קצר, לבודד את ההמוס ולהשתמש בהם בניסויים לאפיון היצמדות חיידקים לתאי הדיונון הללו.ניתן לשנות פרוטוקול זה לצורך אימונוכימיה על ידי קיבוע ההמוציטים לאחר היצמדותם למשטח של זכוכית הכיסוי. ניתן להפיק גם R-N-A-D-N-A וחלבונים לאחר שההמוציטים הופקו מהבעל החיים. וזהו.תודה שצפיתם ובהצלחה בניסוייכם.

obtaining-hemocytes-from-hawaiian-bobtail-squid-euprymna-scolopes

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

סרטן פרסה האמריקאי, Limulus פוליפמוס, הוא לטעון את המקור הנוח ביותר עבור כמויות גדולות של דם של חסרי חוליות כלשהו. דם היא פשוטה בהרכב, כאשר רק סוג תא אחד במחזור כללי, amebocyte פרטנית, ורק שלושה חלבונים בשפע בפלסמה, hemocyanin, C-reactive חלבונים, α2-macroglobulin. הדם נאסף מן הלב ותאי דם פלזמה מופרדים על ידי צנטריפוגה.

דם אוסף של סרטן הפרסה האמריקאי, Limulus פוליפמוס

פרוטוקול זה מתאר מודל microfluidic שיתוף תרבות לתרבות סימולטני מקומי של תאים וחיידקים אפיתל. מודל זה יכול לשמש חוקר את תפקידם של אותות מולקולריים שונים מסיסים על הפתוגנזה, כמו גם מסך האפקטיביות של זני חיידקים פרוביוטיים המשוערת.

Microfluidic משותף התרבות של תאים וחיידקים אפיתל לחקירת מסיסים אותות בתיווך אינטראקציות

השיטה מתארת ​​את התהליך שבאמצעותו דיונון הוואי...

קולוניזציה של Euprymna scolopes קלמארי על ידי Vibrio fischeri</em

hemocytes חרקים למלא תפקידים חשובים רבים, הוא חיסון ושאינם מחוסנים, לאורך כל שלבי התפתחות חרקים. הידע הנוכחי שלנו של הסוגים והתפקוד hemocyte מגיע ממחקרים על מודלים גנטיים של חרקים. כאן, אנו מציגים שיטה לחילוץ, כימות והמחשת hemocytes מזחלים פרא.

פרוטוקול פשוט לחילוץ Hemocytes מזחלי Wild

סרטון זה מדגים את בדיקת הפרעות ההמוציטים, ומעריך הידבקות חוזרת של המוציטים בכיסים ההמטופויטיים של זחלי דרוזופילה. הפרעה מכנית משחררת המוציטים תושבים, ומעלה את ספירת ההמוציטים במחזור. לאחר ההחלמה, דבקות מחדש של המוציטים תושב הוא אישר, הממחיש הפיכות.

בדיקת הפרעה המוציטית להערכת היצמדות חוזרת של המוציטים לכיסים המטופויטיים

polygyrus Heligmosomoides הוא נמטודות עכבריות עם יכולות המערכת החיסונית חזקות שדומות לאלה של זיהום helminth אדם מאוד-שכיח. כאן אנו מתארים פרוטוקול לתחזוקה ארוך הטווח של ה ' מחזור החיים polygyrus.

טיפוח<em&gt; Heligmosomoides Polygyrus:</em&gt; נמטודות טפיל מערכת חיסונית ומוצרים המופרשים

פרוטוקול להפקת פיגמנטים מן גרגרי nanostructured ב כרומטופור דיונון Doryteuthis pealeii מוצג.

שיטה לחילוץ פיגמנטים מן קלמארי<em&gt; Doryteuthis pealeii</em

שמירה חבר ממלא תפקיד חשוב ברבייה של משטרגליים intertidal של הסוג Tigriopus. עם זאת, שיטות לימוד התנהגות זו לא היה טוב המתואר. כאן נתאר שיטות: תרבות 1) בודדים של חיות Tigriopus בתולה, 2) ניתוח כמותי של ההתנהגות שומרים על חבר שלהם.

Culturing בודדים של Tigriopus משטרגליים וניתוח כמותי של התנהגותם שומרים על חבר

ניתוח SEM הוא שיטה יעילה כדי לסייע לזן או פנוטיפי אפליה. פרוטוקול זה מתאר את השיטות לבחינת המסוימות מורפולוגי של שלושה סוגי האורגניזמים נציג ויהיה בהרחבה החלים על בחינת תכונות של רבים organismal סוגי רקמות.

הכנה של אורגניזמים Prokaryotic ו האיקריוטים באמצעות ייבוש כימיים עבור ניתוח מורפולוגי סריקה מיקרוסקופ אלקטרונים (SEM)

האלמוגים יוצרים מערכות אקולוגיות ביושונות החשובות הן לבני אדם והן לאורגניזמים ימיים. עם זאת, אנו עדיין לא מבינים את מלוא הפוטנציאל והתפקוד של תאי אלמוגים רבים. כאן אנו מציגים פרוטוקול שפותח עבור הבידוד, התיוג וההפרדה של אוכלוסיות של תאי אלמוגים מאבן.

תא מיון המופעל על ידי קרינה פלואורסצנטית לבידוד של אוכלוסיות תאים בלובן המין

המאמר מציע שיטה חדשה במבחנה להערכה מהירה ורגישה של הרעילות והרעילות האקולוגית של מזהמים, המבוססת על התנועתיות של המוציטים Mytilus galloprovincialis . השיטה נועדה לתרום לפיתוח בדיקות חשיפה טוקסיקולוגיות ואקוטוקסיקולוגיות אתיות ורגישות יותר.

בדיקה טוקסיקולוגית ואקוטוקסיקולוגית המבוססת על תנועתיות המוציטים של מולים (Mytilus galloprovincialis)

למדו כיצד לבודד המוציטים מדיונון Euprymna scolopes ולחקור את הדבקות החיידקים אליהם באמצעות צביעה פלואורסצנטית ומיקרוסקופיה. שיטה זו מאפשרת מחקר אינטראקציות תא-חיידק בביולוגיה ימית.

קבלת Hemocytes מן הוואי Bobtail קלמארי Euprymna scolopes והתבוננות דבקותם חיידקים סימביוטיים שאינן הסימביוטי

גלה סרטונים נוספים