Name: ראשי תאים אנושיים אפיתל הסימפונות גדלה מ Explants (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-03-26T17:10:00.000+00:00
Duration: 14 min 32 s
Description: למדו פרוטוקול לגידול תאים אפיתליים סימפוניים אנושיים מבודדים מקטעי סימפון טריים. השיטה כוללת ממשק אוויר-נוזל לגידול מובחן ומספקת משאב חשוב למחקר בריאות ומחלות ריאה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

המחברים מודים מאוד ד&quot;ר ריצ&#39;רד Inculet למתן הרקמות הסימפונות. מחקר אתיקה האישורים מועצת התקבלו המילטון בריאות סנט ג&#39;וזף של אוניברסיטת מערב אונטריו / לונדון למדעי הבריאות מרכז (ד&quot;ר דוד מקורמק), רקמות ארכיון הוועדה, המחלקה לפתולוגיה. אנו מודים גם ארני שפיצר (מיקרוסקופית אלקטרונים, אוניברסיטת מקמאסטר) למתן TEMs של תרבויות עלי שלנו, פרקש דניאלה למתן חלק מהחומרים הדרושים immunostaining. עבודה זו מומנה על ידי מענק בלוק טווח מהחברה אונטריו בית החזה, ד&quot;ר אסמא יגי נתמכה על ידי מלגה FSORC, בריאות סנט ג&#39;וזף, המילטון, אונטריו, קנדה.

<ol><li>Phillips, J. Growing Cells on Transwell Inserts - Tips and Techniques [Internet]. Corning Life Sciences, Technical Resources, Online Training. , (2008).</li>
<li>Turi, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+stress+activates+anion+exchange+protein+2+and+AP-1+in+airway+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Oxidative stress activates anion exchange protein 2 and AP-1 in airway epithelial cells.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol. Physiol. 283, L791-L798 (2002).</li>
<li>Lechner, J. F., Haugen, A., McClendon, I. A., Pettis, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+growth+of+normal+adult+human+bronchial+epithelial+cells+in+a+serum-free+medium%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro%22%5BJournal%5D)">Clonal growth of normal adult human bronchial epithelial cells in a serum-free medium.</a> In Vitro. 18, 633-642 (1982).</li>
<li>Yoshisue, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+ciliated+bronchial+epithelium+1%2C+a+ciliated+cell-associated+gene+induced+during+mucociliary+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Cell+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Characterization of ciliated bronchial epithelium 1, a ciliated cell-associated gene induced during mucociliary differentiation.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 31, 491-500 (2004).</li>
<li>Wetering, S. van <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+secretory+leukocyte+proteinase+inhibitor+%28SLPI%29+production+by+human+bronchial+epithelial+cells%3A+increase+of+cell-associated+SLPI+by+neutrophil+elastase%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Investig.+Med%22%5BJournal%5D)">Regulation of secretory leukocyte proteinase inhibitor (SLPI) production by human bronchial epithelial cells: increase of cell-associated SLPI by neutrophil elastase.</a> J. Investig. Med. 48, 359-366 (2000).</li>
<li>Tristram, D. A., Hicks, W., Hard, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory+syncytial+virus+and+human+bronchial+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Otolaryngol.+Head+Neck+Surg%22%5BJournal%5D)">Respiratory syncytial virus and human bronchial epithelium.</a> Arch. Otolaryngol. Head Neck Surg. 124, 777-783 (1998).</li>
<li>Mattinger, C., Nyugen, T., Schafer, D., Hormann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+serum-free+culture+conditions+for+primary+human+nasal+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Hyg.+Environ.+Health%22%5BJournal%5D)">Evaluation of serum-free culture conditions for primary human nasal epithelial cells.</a> Int. J. Hyg. Environ. Health. 205, 235-238 (2002).</li>
<li>Freshney, R. I. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFreshney%2C+RI+%22Culture+of+epithelial+cells%22">Culture of epithelial cells</a>. Freshney, R. I. , Wiley-Liss, Inc. New York. 1-23 (1992).</li>
<li>Freshney, R. I. Normal human bronchial epithelial cell cultures in Culture of specialized cells series. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFreshney%2C+RI+%22Culture+of+epithelial+cells%22">Culture of epithelial cells</a>. Freshney, R. I. , Wiley-Liss, Inc. New York. 181-196 (1992).</li>
</ol>

במחקר זה הצגנו שיטות מפורטות תרבות והרחבה של האדם תאים ראשוניים אפיתל הסימפונות. הראינו כיצד explants והשתלות של רקמת הסימפונות, תרבותי בתקשורת אשר לקדם גדילת תאים אפיתל, יכולים לספק מקור מתמיד של תאים אפיתל דרכי הנשימה האנושית ללימודי הלא מובחן מודלים תא (שקוע) הבדיל (גדל על ממשק אוויר נוזלי) . תאים אלה יכולים להיות מנוצל מערכות בדיקה תרופה דומים יותר לתאים בסביבות פיזיולוגי האמיתי שלהם. חשוב מאוד כי אתה צופה את התאים לגדול מן explants / השתלות ואשר את המורפולוגיה המרוצף. אם התאי...

דרישות אחרות: חממה, בטיחות ביולוגית הממשלה (BSC), צנטריפוגות, צלחות תרבות 100mm, צינורות סטרילי (15 מ&quot;ל, 50 מ&quot;ל, ו - 2 מ&quot;ל), טיפים פיפטה סטרילית, ידית האזמל להבי, מספריים חדות קטן, חלוקי מעבדה וכפפות. אלו ניתן להשיג מהספקים המועדפת עליך.

ראשי תאים אנושיים אפיתל הסימפונות גדלה מ explants

Primary Human Bronchial Epithelial Cells Grown from Explants

האדם תאים אפיתל הסימפונות יש צורך מודלים התא של המחלה כדי לחקור את ההשפעה של excipients וסוכני תרופתי על תפקוד ומבנה של תאים אפיתל אנושיים. כאן אנו לתאר בפירוט את השיטה של ​​גידול בתאי אפיתל הסימפונות מרקמות דרכי הנשימה הסימפונות כי הוא שנקטפו על ידי המנתח על פי ניתוחים הריאות (סרטן ריאות למשל או ניתוח הקטנת נפח הריאה). באישור אתיקה הסכמה מדעת, המנתח לוקח את מה שדרוש על פתולוגיה מספק לנו חלק הסימפונות כי הוא מרוחק מאזורי החולות. הרקמה משמשת אז כמקור explants כי ניתן להשתמש לגידול העיקרי לתאי האפיתל הסימפונות בתרבות. קטעי הסימפונות על 0.5-1cm ארוך ≤ 1cm בקוטר הם שטופים עם EBSS קר רקמות parenchymal עודף מוסר. מגזרי נחתכים פתוח טחון לתוך 2-3mm<sup&gt; 3</sup&gt; פיסות רקמה. חתיכות משמשים כמקור של תאים ראשוניים. לאחר 100mm ציפוי צלחות תרבות שעות 1-2 עם שילוב של קולגן (30 מיקרוגרם / מ&quot;ל), פיברונקטין (10 מיקרוגרם / מ&quot;ל), ו - BSA (10 מיקרוגרם / מ&quot;ל), צלחות הם שרוטים באזורים 4-5 ורקמות חתיכות ממוקמים באזורים שרוט, אז בינוני תרבות (DMEM / חם ה-F-12 עם תוספים) מתאים צמיחת תאים אפיתל מתווסף וצלחות ממוקמים באינקובטור ב 37 מעלות צלזיוס CO 5%<sub&gt; 2</sub&gt; האוויר humidified. בינוני התרבות משתנה כל 3-4 ימים. לתאי האפיתל לצמוח מן החלקים ויוצרים כ -1.5 ס&quot;מ קוטר הטבעות 3-4 שבועות. Explants ניתן שימוש חוזר עד 6 פעמים על ידי העברת אותם מראש מצופה צלחות חדשות. תאים הם הרימו באמצעות טריפסין / EDTA, ונקווה, נספר, מחדש מצופה ב T75 צלוחיות Bind Cell להגדיל את מספרם. T75 seeded צלוחיות עם 2-3 מיליון תאים לגדול מפגש 80% ב 4 שבועות. מורחבות תאים ראשוניים אפיתל האדם יכול להיות תרבותי מותר להבדיל על ממשק אוויר נוזלי. השיטות המתוארות כאן לספק מקור שופע של האדם תאים אפיתל הסימפונות מרקמות מבודדים טרי ולאפשר לחקר התאים הללו כמודלים של המחלה ועל פרמקולוגיה סינון הרעלים.

כאן אנו מתארים את שיטת מפורט לגידול העיקרי בתאים אנושיים אפיתל הסימפונות מ explants של רקמה אנושית דרכי הנשימה הסימפונות כולל גידול הבדיל על ממשק אוויר נוזלי. שיטה זו מספקת מקור שופע של תאים ראשוניים על חקירת תפקידו של אפיתל דרכי הנשימה בריאות מחלת ריאות האדם.

ראשי תאים אנושיים אפיתל הסימפונות גדלה מ Explants

תאי אפיתל ברונכיאליים אנושיים נחוצים למודלים תאיים של מחלות ולחקירת ההשפעה של חומרי עזר וסוכנים פרמקולוגיים על ה...

במאמר זה אנו מתארים פרוטוקול לגידול והרחבה של תאי אפיתל ברונכיאליים אנושיים מתוך מקטעים ברונכיאליים אנושיים שבודדו טריים. פרוטוקול זה מורכב מחמישה חלקים: קידוד וגירוד, צלחות תרבית של מאה מילימטר, תיקון רקמה ברונכיאלית, השתלות של רקמה ברונכיאלית שהוצאה (explan), מעבר של תאי אפיתל ברונכיאליים אנושיים הגדלים עם ריססים, ותאי אפיתל ברונכיאליים אנושיים על transwells. לפני שתתחילו, שימו לב שכל השלבים מבוצעים במCאבט בטיחות ביולוגית.אלא אם צוין אחרת, אנא קראו את סעיף החומרים, הריאגנטים וההכנה וודאו כי התכוננתם כראוי. השלבים הבאים של קידוד, תרביות של תמיסות מלאי, תמיסות פירוק של מדיום, ציפוי ושריטות, בצלחות תרבית של 100 מילימטר, צריכים להתבצע ב-bst.שמרו על סטריליות מלאה. הכינו פלטות תרבית סטריליות של 100 מילימטר ותמיסת ציפוי. בעזרת פפיט BST, העבירו 2 מיליליטר של תמיסת ציפוי לפלטה של 100 מילימטר וסובבו אותה כדי לצפות את בסיס הפלטה.ודאו שתמיסת הציפוי מכסה את בסיס הצלחת באופן אחיד. שאבו החוצה את התמיסה שנותרה והשתמשו בה לציפוי צלחת שנייה של מאה מילימטר. חזרו על הפעולה עבור מספר הצלחות הדרוש.מספר הצלחות הדרוש משתנה בהתאם למספר רגמי הרקמה. ודאו שתמיסת הציפוי מכסה את בסיס הצלחות באופן אחיד, כפי שמוצג.כסו את הצלחות במכסיהן. הניחו לצלחות להתייבש באינקובטור למשך שעה עד שעתיים ושאבו את התמיסה העודפת ל

primary-human-bronchial-epithelial-cells-grown-from-explants

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

תאי אפיתל באף, שהושגו באמצעות ביופסיה לגרד שטחית של מתנדבים אנושיים, הם התרחבו ומועברים על גבי מוסיף בתרבית רקמה. בהגיעם confluency, תאים גדלים בממשק נוזל האוויר, מניב תרביות של תאי ריסי ולא ריסי. תרביות תאי אפיתל באף מובחנות לספק מודלים ניסויים מעשי ללימוד הרירית בדרכי הנשימה.

Culturing של אדם תאי אפיתל באף בממשק האוויר הנוזלי

פרסום זה מדגים שיטות לדגימה ותרבית מוצלחת של רירית אפיתל האף מילדים, ותכנות מחדש של תאים אלה לתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים (iPSCs).

טפח תאי אפיתל באף הראשי מיילד לתכנת מחדש לתאי גזע מושרים

קשה להמיר תאי אפיתל ראשוניים של הסימפונות האנושיים. פרוטוקול זה מתאר את ייצור הלנטי-וירוסים וריכוזם, כמו גם את תנאי התרבית האופטימליים הדרושים להשגת טרנסדוקציות יעילות ביותר בתאים אלה לאורך התמיינות לאפיתל פסאודוסטטי.

אופטימלית Lentivirus ייצור תרבית תאי תנאים הכרחיים בהצלחת transduce האדם הראשי תאי אפיתל סימפונות

מאמר זה מספק מתודולוגיה מפורטת לגישות דיסוציאציה של רקמות ופירוק תאי, המאפשרות העשרה של תאי אפיתל בני קיימא מאזורים פרוקסימליים ודיסטליים של הריאה האנושית. כאן גישות אלה מיושמות לניתוח פונקציונלי של תאי אב אפיתל ריאה באמצעות שימוש במודלים של תרביות אורגנואידים תלת-ממדיות.

בידוד והעשרה של תאי אב אפיתל הריאה האנושיים לתרבית אורגנואידית

כאן אנו מתארים את הבידוד, ההגברה וההתמיינות של תאי אפיתל האף האנושיים העיקריים (HNE) בממשק האוויר-נוזלי ופרוטוקול ביו-בנקאי המאפשר להקפיא בהצלחה ולאחר מכן להפשיר HNE מוגבר. הפרוטוקול מנתח תכונות אלקטרופיזיולוגיות של תאי HNE ממוינים ותיקון הפרשת כלוריד הקשור ל-CFTR בטיפולי אפנון שונים.

תאי אפיתל האף האנושיים העיקריים: ביובנקינג בהקשר של רפואה מדויקת

הפרוטוקול מציג שיטה להפקת אורגנואידים של ריאה אנושית מרקמות ריאה ראשוניות, הרחבת האורגנואידים של הריאה וגרימת התמיינות פרוקסימלית ליצירת אורגנואידים תלת-ממדיים ודו-ממדיים של דרכי הנשימה, המנצלים בנאמנות את אפיתל דרכי הנשימה האנושיות.

ביסוס אורגנואידים של ריאות אנושיות והתמיינות פרוקסימלית ליצירת אורגנואידים בוגרים של דרכי הנשימה

הפרוטוקול הנוכחי מתאר תאים דמויי אפיתל דמויי אפיתל פלוריפוטנטיים מסוג 2 המושרים על ידי בני אדם (iAT2s). תאים אלה יכולים להיות מתורבתים ככדורים המתחדשים בעצמם בתרבית תלת-ממדית או מותאמים לתרבית ממשק אוויר-נוזלי (ALI).

יצירת כדורים תלת-ממדיים ותרביות ממשק אוויר-נוזל דו-ממדיות של תאי אפיתל פלוריפוטנטיים שמקורם בתאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי בני אדם מסוג 2

ההתקדמות האחרונה בפרוטוקולי התמיינות תאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי בני אדם מאפשרת נגזרת מדורגת של סוגי תאים ספציפיים לאיברים. כאן, אנו מספקים שלבים מפורטים לתחזוקה והרחבה של תאי בסיס של דרכי הנשימה שמקורם ב-iPSC והתמיינותם לאפיתל רירית בתרביות ממשק אוויר-נוזל.

יצירת תרביות ממשק אוויר-נוזל של תאי אפיתל דרכי הנשימה מתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים

מוצגת כאן שיטה ניתנת לשחזור, משתלמת וחזקה לבידוד והרחבה של תאי אפיתל סימפונות ראשוניים עבור ביו-בנקאות לטווח ארוך ויצירת תאי אפיתל ממוינים על ידי תרבית בממשק אוויר-נוזל.

בידוד תאי אפיתל של הסימפונות מרקמת ריאה שנכרתה לצורך ביו-בנקאות והקמת תרביות ממשק אוויר-נוזל ממוינות היטב

תרבית ממשק אוויר-נוזל משמשת בדרך כלל לפיתוח אפיתל דרכי נשימה פסאודוסטרטי על ידי התמיינות תאי אפיתל סימפונות אנושיים תקינים ראשוניים המחקים את הצד האפי של נתיב האוויר של הריאה. במאמר זה אנו מתארים פרוטוקול קל לקביעת איכותו על ידי ניטור תכונותיו הביופיזיקליות, כגון תפקוד ריסוני ושלמות הממברנה.

קביעת תפקוד ריסני ואטימות הממברנה של אפיתל דרכי הנשימה הריאה הפסאודוסטרטי

למדו פרוטוקול לגידול תאים אפיתליים סימפוניים אנושיים מבודדים מקטעי סימפון טריים. השיטה כוללת ממשק אוויר-נוזל לגידול מובחן ומספקת משאב חשוב למחקר בריאות ומחלות ריאה.

ראשי תאים אנושיים אפיתל הסימפונות גדלה מ Explants

גלה סרטונים נוספים