Name: פלסטיק הטבעת ואת חתך של עוברים Xenopus laevis (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-29T00:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 39 s
Description: למדו הכנת חתכי פלסטיק בעוברי Xenopus laevis לביולוגיה התפתחותית ונוירוביולוגיה. השיטה שומרת על מורפולוגיית רקמות אמיתית ומאפשרת אימונו-צביעה פלואורסצנטית ברזולוציה גבוהה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

קיבוע <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת עוברים כולו או explants גזור לתוך MEMFA או 3.7% FA + PBS ב בקבוקון scintillation (חתול פישר # 03-339-25B). לדגור על בקבוקון nutator ב RT, רק 2 שעות, ולא יותר מזה. אין להשאיר את העובר ב-FA במשך יותר מ 2 שעות. הדגירה כבר FA יהפכו את הרקמה העוברית קשה לגרום חדירה עני של נוגדנים בתהליך זיהוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ישאפו רוב FA ולהוסיף מקבע של דנט עד העליון של הבקבוקון (~ 4.5ml). בעדינות להפוך את הבקבוקון עבור כמה פעמים כדי לשטוף את העוברים של דנט, חילופי עם 4.5ml אחר טריים של דנט, ו דגירה אותו -20 מעלות צלזיוס במשך 48 שעות לפחות. לילה זה לא מספיק. צעד זה הופך את העוברים חדיר יותר הנוגדן. העוברים יכולים להישמר במצב זה למשך מספר שבועות. </li></ol> Immunofluorescence <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רעננותם את הדגימה. דגירה זה בסדרה מדורגת של מתנול, כדלקמן: <table style="width: 171px; height: 119px;;text-align:right;direction:rtl" border="0" cellpadding="3"><tbody><tr><td> 75% MeOH / H 2 O </td><td> 10min </td></tr><tr><td> 50% MeOH / PBS </td><td> 10min </td></tr><tr><td> 25% MeOH / PBS </td><td> 10min </td></tr><tr><td> PBS </td><td> 10min </td></tr><tr><td> PBS </td><td> 10min </td></tr></tbody></table> </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע 1.5% agarose / PBS צלחות עם מנות פלסטיק 60mm. יוצקים PBS על גבי agarose אחרי זה הפך להיות מוצק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חמי, חתך של העוברים: שים את העוברים בתוך צלחת agarose / PBS 1.5%. גזל עובר עם זוג מלקחיים ולחתוך אותה לשניים דרך מרכז של העובר באמצעות סכין גילוח דק. בחר את אלה שיש לך לחתוך בהצלחה עם מטוס חיתוך ישר במחצית. <img src="/files/ftp_upload/old/188_2008_7_10_3/188_figure-01.jpg" alt="איור 1" width="591" height="193" /> </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת עוברים נחצה לתוך בקבוקון זכוכית עם הנצנץ PBT. Exchange עם 4.5ml של עז 20% נסיוב + PBT. לדגור על RT עבור 2 שעות על nutator (חסימה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן דילול המתאים הנוגדן העיקרי PBT. 0.5ml זה דגימות לכל צורך. למשל, השתמשתי 1 / 200 דילול PAB ארנב נגד C-cadherin ללמוד את לוקליזציה subcellular של C-cadherin בסעיפים פלסטיק 5mm. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב את הפתרון חוסם ולהוסיף 0.5ml של הנוגדן העיקרי בדילול מלא. שימו את צלוחיות בעמדה בעמידה על בעל צינורית קלקר. דגירה לילה ב-C º 4 על nutator. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הנוגדן העיקרי מדולל (זה נוגדן ראשוני המדולל ניתן לשמור ולעשות בהם שימוש חוזר ב 1-2 השבועות הקרובים). לשטוף עם 4.5ml של PBT במשך 4 פעמים (40-60 דקות כל אחד) ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Exchange עם 0.5ml של דילול 1 / 100 של נוגדן ביוטין, מצומדות משני PBT. דגירה לילה ב-C º 4 על nutator. מכסים את צלוחיות עם נייר אלומיניום כדי להגן על ביוטין מן האור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מנקודה זו, יש להקפיד להגן על מדגם של אור כלומר, לשמור על צלוחיות מתחת לכיסוי חלק או רדיד אלומיניום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הנוגדן ביוטין, משני (זה ניתן לעשות שימוש חוזר גם את 1-2 השבועות הקרובים). לשטוף עם או 4.5ml של PBT במשך 4 פעמים (40-60 דקות כל אחד) ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Exchange עם 0.5ml של דילול 1 / 200 של fluorescently שכותרתו (FITC, טקסס אדום וכו &#39;) streptavidin ב PBT. דגירה לילה ב-C º 4 על nutator. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את streptavidin (זה ניתן לעשות שימוש חוזר, מדי). לשטוף עם 4.5ml של PBT במשך 3 פעמים (15 - 30 דקות כל אחת) ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן את העוברים 4.5ml של 3.7% FA + PBS במשך 30 דקות ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף עם 4.5ml של PBS פעמיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ליבש את הדגימה. דגירה זה בסדרה מדורגת של אתנול, כדלקמן: <table style="width: 172px; height: 80px;;text-align:right;direction:rtl" border="0"><tbody><tr><td> 30% EtOH / H 2 O </td><td> 10 דקות </td></tr><tr><td> 50% EtOH / H 2 O </td><td> 10 דקות </td></tr><tr><td> 75% EtOH / H 2 O </td><td> 10 דקות </td></tr><tr><td> 100% EtOH </td><td> 10 דקות </td></tr></tbody></table> </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הדגימה ניתן לאחסן 100% EtOH ב-C º 4 עם כיסוי כדי להגן עליו מפני האור. </li></ol> הסתננות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך את Technovit 7100 לערבב הסתננות. אני בדרך כלל לוקח 15 מ&quot;ל של הנוזל בצינור 50 מ&quot;ל בסיס חרוטי, להוסיף 150 מ&quot;ג של hardener אני ומערבבים אותו מתנדנד על nutator במשך 15 דקות. תערובת זו חדירה יכולים להישמר על 4 מעלות צלזיוס למשך חודש אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חדור את הדגימה עם תערובת חדירת ידי החלפת עם סדרה מדורגת משולבת של חדירה Technovit לערבב / EtOH, כדלקמן: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 50% Technovit / EtOH - 1 שעה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 100 Technovit% - 1 שעה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 100 Technovit% - לילה </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Specimen ניתן לאחסן תערובת חדירה של 100% לתקופה של עד חודש אחד בכל 4 º C. לשים כיסוי על דגימות כדי להגן עליהם מפני האור. </li></ol> הטבעת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך את Technovit 7100 לערבב הטבעה: קח 0.75ml של תמהיל חדירה בצינור 1.5ml ולהוסיף 50 מ&quot;ל של hardener השנייה. מערבבים אותו פעמים את הצינור היפוך מספר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת פיפטה העברת פלסטיק, לקחת אחד הדגימה הסתננו לתוך הלילה 0.5ml צינור דק PCR הקיר. הסר את רוב supernatant. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 0.25ml של תמהיל הטבעה עשה צעד # 1 של סעיף זה, &quot;הטבעת&quot;, כדי הדגימה. המזרח העובר נחצה להפוך את המטוס לנתיחה מול אל החלק התחתון של הצינור, על ידי נגעה בעדינות עם מחט עמום בקצה דיסקציה (עץ מחט לטפל דיסקציה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את הפקק דגירה הצינור במקום חשוך במשך כארבע שעות, כדי לאפשר הפלסטיק לפלמר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך את Technovit 3040 ומערבבים. קח 1 גרם של אבקת לצלחת במשקל, ולהוסיף 0.5ml של הנוזל. מיד לערבב אבקת נוזלי באמצעות bluetip. יוצקים על גבי spacimen מוקשה. זה Technovit הצהוב 3040 ימנע את גוש פלסטיק שלם יוצא מן הצינור. </li></ol> חתך <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נגב Histoknife H עם קסילן (EtOH הוא לעתים קרובות לא מספיק טוב) והעמיד אותו על microtome שלך. זווית הלהב על כ 45 °. נגב את אזור הבמה מול הלהב עם קסילן, גם בגלל הניקיון של אזור זה הוא קריטי לאיכות פרוסות מחולק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את הצד של הצינור לקלף את קצה באמצעות סכין קרטון. <img src="/files/ftp_upload/old/188_2008_7_10_5/188_figure-02.jpg" alt="איור 2" width="818" height="243" /> </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את הדגימה לתוך מחזיק צ&#39;אק של microtome. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף &quot;הקש אל חותם&quot; מבדד סיליקון על זכוכית שקופית כדי ליצור תא גובר על סעיף פרוסות. היטב בעיתונות מבודדת לשקופית על benchtop נקי להסתכל מהצד השני כדי לוודא כי מבודדת מחוברת לחלוטין, ללא בועות אוויר. יוצקים נקי וחמים DH 2 O (~ 40 ° C) לבריכה בשקופית באמצעות פיפטה פסטר, עד לרמה שבה ניתן לראות כי פני המים הופך שטוח, לא קעורה או קמורה בצורת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התחל לעשות פרוסות סעיף. עבור מחקרים immunofluorescence, אני עושה 5 סעיף פרוסות מ&quot;מ. עבור בדגימות הכלאה באתרו, עובי הפרוסות ניתן להתאים בטווח של ~ 3-8 מ&quot;מ, בהתאם למטרת ואת עוצמות של אותות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח את פרוסות סעיף משלב מול להב לחדר גובר עם מים, באמצעות מכחול קטנות. החזק את המכחול עם פרוסה על גבי בריכת מים ולשחרר את הפרוסה אל המים על ידי לדפוק את זה עם מחט עמום בקצה לנתיחה. פרוסה תרחיב לצורה עגולה ברגע שהוא פוגע פני המים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר רוב שטח פני המים של החדר הרכבה מלא פרוסות סעיף, להתחנף כמעט מחצית מהמים באמצעות פיפטה פסטר. דגירה את השקופית שקופית לילה חם לעשות המדגם להתייבש לחלוטין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Counter-כתם עם 1ml של DAPI (0.1mg/ml ב TE) במשך חמש דקות. לשאוב DAPI ויבש המדגם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את מבודדת גומי סיליקון מתוך השקופית. עכשיו ניתן לקחת תמונות של המדגם. חנות המדגם ב 4 ° C, מוגן מפני אור. </li></ol>

נוגדנים נגד אנטיגן ראשיים שלך או תגי epitope: הפוך דילול המתאים PBT. ביוטין, מצומדות נוגדנים משני: ספקים שונים למכור ביוטין, מצומדות נוגדנים.

פלסטיק הטבעת ואת חתך של עוברים xenopus laevis

Plastic Embedding and Sectioning of Xenopus laevis Embryos

חלקים פלסטיק לשמור מורפולוגיה רקמות נכון בסעיפים דקה של רקמה שניתן immunostained עם נוגדנים משני פלורסנט, מה שהופך שיטה זו יעילה יותר מאשר חלקים פרפין, מוטבע או קפואים עבור סוגים רבים של רקמות. השיטה עבור מכתים, הטבעה פלסטיק, חתך מודגם וידאו.

פלסטיק הטבעת ואת חתך של עוברים Xenopus laevis

שלום, שמי Sochi ota. אני מדענית פוסט-דוקטורט במעבדה של Dr.Ken Cho במחלקה לביולוגיה התפתחותית ותאית באוניברסיטת קליפורניה, אירביין. היום אראה לכם כיצד להכין חיתוך פשוט של עובר Xenopus.הליך זה כולל חצייה של עוברים של צפרדע בשלב גז מאוחר, צביעה באמצעות נוגדן נגד המולקולה הרלוונטית, חדירה לתוך פלסטיק והכנת חיתוך פלסטיק בעובי של 5 מיקרון. ניתן להשתמש בהליך זה למחקר אימונופלואורסצנציה, אימונוהיסטוכימיה או היברידיזציה במקום (in situ hybridization) עם תמונה ברזולוציה גבוהה מאוד. אלו הם הכלים הקטנים והשימושיים שבהם אני משתמש לחיתוך פלסטיק של יותר מ-10 עוברים.אלו הן פינצטות מתכת עם קצה דלתא; את זו, מספר אחת, ניתן להשתמש בה כדי להכווין את העובר בתוך הפלסטיק. ובמספר שתיים, ניתן להשתמש בפינצטה זו יחד עם מברשת הצבע הזו כדי להעביר את העובר מהמיקרוטום למשטח ההרכבה. זהו מבודד גומי סיליקון, אותו אני מניח על פני השטח של העגלה, והוא יוצר מעין בריכת מים שבה אני יכול להרכיב את פרוסות הפלסטיק של העוברים שנחתכו.כעת אראה כיצד לבצע חיתוך לאורכי (ביסקציה) של העובר, כאשר העובר מקובע עבור בדיקות כגון היברידיזציה של אתרים (in situ hybridization) או זיהוי באמצעות פלואורסצנציה עקיפה (immunofluorescence). כדי לחתוך את העובר לחצי, אני משתמשת ברשת קיסמים דקה מאוד, שניתן לרכוש בחנויות למצרכים. העוברים קובעו ב-3.7% formaldehyde למשך לילה.וזו הדרך; באופן התיקון תלוי במטרה. כאן הקיבוע בוצע למשך לילה. למטרת היברידיזציה in situ, ניתן לבצע קיבוע למשך לילה, אך עבור זיהוי באמצעות אימונופלואורסצנציה, שבו מזהים את החלבון בתוך העובר, אינני ממליץ על קיבוע ממושך מדי.אני מעדיף לבצע קיבוע בפורמאלדהיד בריכוז 3.7% למשך שעתיים בלבד, כדי למזער את ההשפעה על הלוקליזציה התת-תאית של החלבון, וכדי למנוע קיבוע יתר שיאפשר חדירה טובה של הנוגדן בשלב הגילוי. כעת אני מנתח את העובר על ידי חיתוך דופן השליה בצד שמאל ובצד ימין. אני רואה כעת שמדובר בעובר בשלב 11, שבו ה-PO משתרע לאורך כל הדרך מהצד הגבי לצד הגחוני, אך זהו עובר בשינוי.ובואו נבחן את החלק הימני הזה. ניתן לראות את ה-blastopore הן בצד הגבי והן בצד הבטני, אך הצד הגבי בולט יותר כיוון שההכנסה (invagination) הזו מגיעה בבירור לעומק רב בתוך העובר בהשוואה לצד הבטני. לכן, זהו חלק טוב, פרוסה טובה, לבחינת הצד הגבי והבטני כאחד.בתוך העובר, בעובר מנוסח זה, אבצע זיהוי של חלבון המבטא בתוך העובר באמצעות פלואורסצנציית אימונו (immunofluorescence). עבור פלואורסצנציית אימונו או אימונוהיסטוכימיה, משתמשים בנוגדן ספציפי לצורך הזיהוי. אך הבעיה היא שנוגדנים אינם חודרים היטב אל תוך העובר.לכן, אם תשתמשו בעובריים שלמים (whole mount), לא תוכלו לדעת זאת. לא תוכלו לחקור את דפוס הביטוי של החלבונים שלכם בעובריים. אך באמצעות שימוש בעוברים שחציתם מראש, תוכלו לחקור מהו דפוס הביטוי בתאים הממוקמים עמוק בתוך העובר.העובר הצבוע כבר קובע ב-3.7% Formaldehyde, הותשב באתנול וחדר לפלסטיק, הנקרא techno 7, 100. ערכה זו מכילה שלושה חלקים: החלק הראשי הנוזלי, האבקה הנקראת hardener one, והנוזל הנקרא hardener two.ראשית, אני מערבב את החלק העיקרי ואת המקשה ביחס של 100 ל-1, מה שייתן את תערובת החדירה. זוהי תערובת נוזלית שבאמצעותה אני מבצע חדירה לעובר. התערובת עדיין נוזלית כדי שלא תתקשה בשלב זה.דגימות עוברים אלו נשארות בתערובת ההספיגה למשך הלילה כדי להבטיח שהדגימות יספיגו את הפלסטיק באופן מלא. כעת, אני לוקח את אחת דגימות העוברים באמצעות פיפטת העברה ומעביר אותה לשפופרת MPCL בעלת דופן דקה בנפח 0.5, המשמשת כתבנית להטמעה. לאחר מכן, אני מסיר מהעובר את עודפי הנוזל.כעת העובר הזה, עובר זה כבר מוכן להטמעה בפלסטיק המתקשה. כדי להכין את הפלסטיק המתקשה, מערבבים את תערובת החדירה הזו עם מעבה זה ביחס של 15 ל-1. כך למשל, אם אקח 750 µL מתערובת החדירה הזו לשפופרת spin-off, עלי להוסיף 50 µL מהמעבה הזה כדי להתחיל את הפולימריזציה של הפלסטיק. לאחר ההוספה, אופס, סוגרים את המכסה ומערבבים בעדינות כך.אין לבצע ערבול במכשיר וורטקס (vortex), כיוון שחמצן פועל כמעכב של תגובת הפולימריזציה. הוסיפו כ-250 µL מתערובת זו לעובר. שלב פולימריזציה זה נמשך כמעט ארבע שעות, ולכן אין צורך להאיץ את התהליך.לאחר הוספת הפלסטיק המתבלגור this polymerizing plastic תחילה, ניתן להזריק אותו מעלה ומטה כדי להביא את העובר לצוף בתוך הפלסטיק. כעת אני משתמש בפינצטה ממתכת חומצנית כדי להזיז את העובר ולכוון אותו כך שפני השטח המיועדים לחיתוך של העובר יפנו לתחתית תבנית ההטמעה הזו. לאחר מכן סגור את המכסה, כיוון שחמצן הוא מעכב של תגובת הפילום, והשאר אותו למשך ארבע שעות כדי לאפשר את תגובת הפילום.לאחר מכן, זהו ה-HUD שכבר הוחדר לדגימה. יש להוסיף סוג של דבק לדגימה זו כדי להבטיח שהחלק הפלסטי הקשיח לא יצא מהתבנית. זהו פלסטיק נוסף המשמש כדבק למטרה זו הנקרא techno 30 40.אני מערבבת את האבקה והנוזל ביחס של 2, 2, 1; כאן יש 0.6 gram של האבקה הזו. לכן, אני עומדת להוסיף 300 µL מהנוזל הזה, לאחר מכן אערבב זאת במהירות, והפלסטיק הופך לקשה למדי במהירות. זהו חלק שבו יש לפעול במהירות, ואז שופכים זאת אל הדגימה שכבר התקשחה.זה מספיק טוב. סגור את הפקק. זה נראה כך.תהליך זה יארך כ-30 עד 60 דקות עד להתקשחות. זהו השלב שבו הדגם מוכן לביצוע. ראשית, אגזור את קצה התבנית בעזרת סכין קרטון, ואקלף חלק זה מהתבנית.כעת העובר המוטמע חשוף. כמו כן, הסרתי את המכסה מכיוון שאיני זקוק לו. כעת אני לוקח את להב ה-Tain Roy, כלומר לא מחט, אלא להב Tain Roy, שהוא קשיח יותר מלהב הסטיינ הרגיל המשמש לחיתוכי פאראפין.אני טובל זאת קצרה ב-Xylene כדי לנקות אותה. מניח זאת במחזיק הלהב ומנגב את שאריות ה-Xylene. לעיתים אני מנקה גם אזור זה עם Xylene, כיוון שניקיון אזור זה הוא קריטי לחלוטין.כעת הדגימה מוכנה לחיתוך. לפני תחילת החיתוך, אני מכין את תא ההרכבה. כאן מדובר בזכוכית של שקופית.בנוסף לכך, אני מכניס את גומי הסיליקון הזה ודוחף אותו עד הסוף, כדי שלא תהיה שום דליפה. אני מניח זאת על מחמם השקופיות ומוסיף מים מזוקקים נקיים כדי ליצור את הבריכה. מוסיפים מים עד להגעה למפלס שבו פני השטח מכוסים במים.וזה חשוב כיוון שפני מי השטפה מעניקים התפלגות שווה של מתח הפנים של המים, דבר החשוב כדי להבטיח שהחתך יתרחב באופן שווה. כעת אני מבצע את החיתוך, אך לפני כן אני חובש את המסכה הזו, כיוון שכל פרוסה היא קלה מאוד, כל כך קלה, שנשימת החזה שלי עלולה להעיף אותה מהבמה. לכן אני חובש את המסכה.כעת נתחיל בתהליך החיתוך. לאחר שנוצר מספר מסוים של חתיכות חיתוך על המשטח, העבירו אותן בעזרת מכחול, הניחו אותו באיטיות מעל תא המים והקישו על המכחול כדי שהחתיכות יפלו אל תוך המים בעזרת כוח הכבידה. ברגע שהן נוחתות על המים, הן נפרסות ויוצרות חתיכה מעגלית על פני המים.כיצד נראה האור לאחר ייבוש בן לילה? כעת הוא נראה כך וכך. כעת הדגימה מוכנה למגע עם DPI עבור DNA גרעיני.לאחר מכן ניתן לבחון את הדגימות תחת המיקרוסקופ. היום הדגמתי את הכנת חתכי פלסטיק באמצעות עובר של צפרדע בשלב גז לאחר. פרוצדורה זו שימושית מאוד למחקר של מבנים תת-תאיים או למיקום של חלבונים, שאינם ניתנים לבדיקה באמצעות טכניקת שיכון בפראפין, והיא שימושית באופן כללי גם עבור היברידיזציה של RNA.חתך פלסטי זה מאפשר גם היברידיזציה שיורית, ופרוצדורה זו יכולה לספק תמונות ברמה גבוהה בהרבה מאשר דגימות של חתכים פאראפיניים או קפואים.

plastic-embedding-and-sectioning-of-xenopus-laevis-embryos

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

כאן אנו מדגימים microinjection cytoplasmic...

Microinjection של ביציות Xenopus Laevis

האאקטודרם Xenopus עובריים הפך מודל אטרקטיבי עבור מחקרים של הקוטביות בתא. Assay מתואר, שבה חלוקת subcellular של חלבוני ניאון נבחנת בתאים האאקטודרם. פרוטוקול זה יעזור כתובת לשאלות הקשורות שליטה מרחבית של איתות.

טרנסלוקציה מקוטב של חלבוני ניאון ב Xenopus האאקטודרם בתגובה איתות Wnt

תרבויות Explant עצביות מן<em&gt; Xenopus laevis</em

טכניקה להשתלה "אקסטרים Anterior דומיין" רקמות פנים בין Xenopus laevis עובר כבר מפותחת. רקמה ניתן להעביר מהרקע ביטוי גנים אחת לאחרת, ומאפשרת הלימוד של דרישות מקומיות לפיתוח craniofacial ולאיתות אינטראקציות בין אזורי פנים.

השתלת פנים ב<em&gt; Laevis Xenopus</em&gt; עוברים

פרוטוקול זה מתאר כיצד לנתח פסגת premigratory גולגולת עצבית (NC) מneurulas laevis Xenopus. יכול להיות מצופה explants אלה בפיברונקטין ותרבית במבחנה, או מורכב בחזרה לעוברי מארח. טכניקה זו מאפשרת חקר המנגנונים של מעבר NC האפיתל לmesenchyme, הגירה, ובידול.

Dissection של<em&gt; Laevis Xenopus</em&gt; העצבי קרסט עבור<em&gt; במבחנה</em&gt; Explant תרבות או<em&gt; In vivo</em&gt; השתלות

כתב היד כאן מספקת מערכת פשוטה של שיטות לניתוח ההפרשה ודיפוזיה של ligands מתויג fluorescently ב Xenopus. זה מספק הקשר לבדיקת היכולת של חלבונים אחרים לשנות הפצת יגנד ומאפשר ניסויים שעשויות לתת תובנה מנגנוני ויסות הדרגתיים מורפוגן.

באמצעות ניתוח של Confocal<em&gt; Laevis Xenopus</em&gt; לחקירת מאפננים של עירובים מורפוגן Wnt וששש

בעוברי קסנופוס, תאים מגג הבלסטוקואל הם פלוריפוטנטיים וניתן לתכנת אותם ליצירת רקמות שונות. כאן, אנו מתארים פרוטוקולים לשימוש בצמחי גג בלסטוקואל דו-חיים כמערכת בדיקה לחקירת תכונות מפתח in vivo  ו-in vitro של התפתחות עצבית מוקדמת.

כמו תא גזע<em&gt; Xenopus</em&gt; Explants העובריים לחקר תכונות המוקדמות עצבי התפתחותית<em&gt; במבחנה</em&gt; ו<em&gt; In vivo</em

מאמר זה מציג שיטה נוחה ומהירה המאפשר הדמיה אוכלוסיות תאים עצביים שונים במערכת העצבים המרכזית של עוברי Xenopus באמצעות מכתים immunofluorescent על ​​הסעיפים.

הערכת Neurogenesis יסודי<em&gt; Xenopus</em&gt; עוברים באמצעות Immunostaining

אנו מציגים פרוטוקול דו-חלקי המשלב הדמיה של סידן פלורסנט עם היברידיזציה באתרו, ומאפשר לניסויים לתאם דפוסים של פעילות הסידן עם פרופילי ביטוי גנים ברמה של תא אחד.

סידן פלואורסצנטי הדמיה ובעקבות היברידיזציה באתרו לאפיון עצבי בלתי מבשר בקספוס זריזה

אנו מתארים שיטת היצרה פיזית ליצירת עוברים מיניאטוריים מעוברים חד-תאיים של Xenopus laevis .

מניפולציה פיזית ליצירת עוברים מיניאטוריים של Xenopus

למדו הכנת חתכי פלסטיק בעוברי Xenopus laevis לביולוגיה התפתחותית ונוירוביולוגיה. השיטה שומרת על מורפולוגיית רקמות אמיתית ומאפשרת אימונו-צביעה פלואורסצנטית ברזולוציה גבוהה.

פלסטיק הטבעת ואת חתך של עוברים Xenopus laevis

גלה סרטונים נוספים