Name: כרוני סלמונלה עכבר אינפקטד דגם (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-05-31T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: למדו כיצד ליצור מודל עכבר כרוני נגוע ב-Salmonella typhimurium לחקר מחלות זיהומיות. שיטה זו מאפשרת מעקב אחרי קולוניזציה ממושכת במעי ותגובת המארח לאורך זמן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי KO1 NIDDK DK075386 מענק האגודה האמריקנית למלחמה בסרטן RSG-09-075-01-MBC עד יוני יום ראשון

פרוטוקול זה כולל שלושה חלקים: זיהוי תרבית החיידקים gavage העכבר, סלמונלה. 1. הצמיחה סלמונלה מצב. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את סלמונלה לוריא-Bertani מרק (LB) צלחת, דגירה על 37 מעלות צלזיוס למשך הלילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר שיבוט מהצלחת LB והכניסו LB 7 מ"ל בצינור 12 מ"ל, וללחוץ על 37 מעלות צלזיוס למשך כ 5 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחסן 50 מ"ל LB עם 0.05 מ"ל של תרבות שלב דגירה נייחים ב 37 ° C בלי לרעוד במשך כ 18 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין תרבית החיידקים למשך הלילה בטמפרטורת החדר עם 6000 סל"ד במשך 10 דקות, להשעות את החיידקים באמצעות HBSS 100:3 יחס (LB: HBSS). לדוגמה: בכל תרבות LB 50 מ"ל יושעה ב 1.5 HBSS מ"ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור gavage החי, עוד למהול את תרבית החיידקים ביחס 1:10. לדוגמה: 1.5 כל LB תרבות מ"ל יושעה ב 15 HBSS מ"ל. </li></ol> 2. סלמונלה, זיהום מודל *. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את הפתרון סטרפטומיצין. עכבר כל תינתן 7.5 מ"ג של סטרפטומיצין ב 100 HBSS μl. לדוגמה, להכין סך 90 מ"ג של סטרפטומיצין ב 1.2 HBSS מ"ל במשך 10 עכברים. תמיד יש תוספת נפח כשמכינים את הפתרון סטרפטומיצין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משיכה מים ומזון 4 שעות לפני הטיפול gavage הפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים Gavage עם סטרפטומיצין עם 7.5 מ"ג של סטרפטומיצין (100 μl של HBSS עבור עכברים שליטה). תפוס את העור מעל הכתף עכבר בחוזקה עם האגודל והאצבע האמצעית, למתוח את הראש והצוואר עם האצבע על מנת להפוך את הוושט ישר. כוונו את הכדור קצה המחט האכלה לאורך הגג של הפה כלפי הצד הימני האחורי של הלוע, אז בעדינות לעבור לתוך הוושט להזריק את הפתרון 100 μl. ההתנגדות לא צריכה להיות מורגשת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בגיל 20 שעות לאחר הטיפול סטרפטומיצין, מים ומזון נסוגה שוב לפני עכברים נגועים בחיידקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Gavage כל עכבר עם ההשעיה 100 μl ב HBSS או שטופלו HBSS סטרילי (שליטה) על ידי gavage הפה. ההליך gavage זהה 2.3) עכברים gavage עם סטרפטומיצין. </li></ol> * ניסויים בבעלי חיים בוצעו על ידי שימוש ספציפי-הפתוגן ללא C57BL נקבה / 6 עכברים (Taconic, הדסון, ניו יורק) שהיו 6-7 שבועות כפי שתואר לעיל 1. פרוטוקול שאושר על ידי האוניברסיטה של ​​אוניברסיטת רוצ'סטר ועדת משאבים בעלי חיים (UCAR). 3. איתור של סלמונלה במעי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכבר איסוף צואה (כ 100 מ"ג). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת דגימת צואה על צינור 1.5 צנטריפוגה מיקרו עם 1ml PBS ו מערבולת במרץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה במשך 10 דקות ב 800 סל"ד. מעבירים את supernatant לתוך צינור microfuge נקי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה בסל"ד 6000 עבור 5min. Supernatant נמחקת ו 200 PBS μL הוא הוסיף את כדורי ואת vortexed. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Streak 200 PBS μl עם מפזר תא הפנויה על צלחת CHROMagar BBL לזהות סלמונלה. סלמונלה מינים מופיעים ארגמן (עלה סגול, ראה תמונה 1). אם התשואות 200 μl מושבות רבות מדי על הצלחת, או להשתמש 100 μl 50 μl עבור פס. </li></ol> 4. נציג תוצאות. כאשר הפרוטוקול הוא נעשה בצורה נכונה, קולוניזציה typhimurium סלמונלה ניתן להבחין במעי העכבר מעל 6 חודשים. סלמונלה יכול להיות מזוהים על ידי תרבות צואה מעל 6 חודשים (תמונה 1). בתור החוצה טיפוסי לבוא של מודל זה, הגוף שוקל אובדן ומוות להתרחש בתוך 4 שבועות זיהום הודעה. תלוי זני סלמונלה המשמש זיהום, עכברים מסוימים עשויים לא לשרוד מעל 6 חודשים. <img src="/files/ftp_upload/1947/1947fig1.jpg" alt="איור 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> באיור 1. סלמונלה מעיים של סלמונלה מינים מופיעים ארגמן (עלה סגול) בצבע, עקב הבדלים מטבוליים בנוכחות chromogens שנבחר. חיידקים אחרים הם או עכבות או לייצר מושבות כחול ירוק או צבע. <img src="/files/ftp_upload/1947/1947fig2.jpg" alt="איור 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 2"> איור 2. הפרופורציות ההישרדות של עכברים נגועים עם מוטציה זן סלמונלה PhoP ג, ג PhoP אברה-ו PhoP ג AvrA-/AvrA +, PhoP ג אברה למשך 4 שבועות (28 ימים). 1. טבלת משקל גוף של עכברים נגועים עם סלמונלה למשך 4 שבועות. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td></td><td> 0 </td><td> 1 שבוע </td><td> 2 שבועות </td><td> 3 שבועות </td><td> 4 בשבוע </td></tr><tr><td> שליטה </td><td> 16.78 ± 1.05 </td><td> 16.91 ± 1.28 </td><td> 18.26 ± 1.23 </td><td> 19.31 ± 1.26 </td><td> 20.26 ± 1.15 </td></tr><tr><td> PhoP ג </td> 16.89 ± 1.03 <td> 17.14 ± 1.19 </td><td> 17.43 ± 1.63 * </td><td> 18.68 ± 1.78 </td><td> 20.05 ± 1.11 </td></tr><tr><td> PhoP c-אברה </td><td> 16.91 ± 1.12 </td><td> 16.96 ± 1.39 </td><td> 17.06 ± 2.14 ** </td><td> 18.71 ± 2.18 </td><td> 20.15 ± 1.56 </td></tr><tr><td> PhoP ג AvrA-/AvrA + </td><td> 16.94 ± 0.96 </td><td> 17.17 ± 1.02 </td><td> 17.63 ± 1.42 * </td><td> 18.44 ± 2.03 </td><td> 20.09 ± 1.17 </td></tr></tbody></table> * לעומת קבוצת הביקורת p &lt;0.05 ** לעומת קבוצת הביקורת p &lt;0.01 טבלה 2. זני סלמונלה השתמשו במחקר זה. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם </td><td> תאור </td><td> הפניה או מקור </td></tr><tr><td> סלמונלה 14028s </td><td> Wild מסוג S. typhimurium </td><td> ATCC </td></tr><tr><td> PhoP ג </td><td> Non-פתוגניים הרגולטור מורכב מוטציה </td><td> מילר et al. 1990 </td></tr><tr><td> PhoP c-אברה </td><td> אברה-מוטציה </td><td> קולייר-היינס et al. 2002 </td></tr><tr><td> PhoP ג AvrA-/AvrA + </td><td> PhoP ג אברה, אברה השלים עם קידוד פלסמיד </td><td> קולייר-היינס et al. 2002 </td></tr></tbody></table>

<ol><li>Duan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((beta-Catenin+activity+negatively+regulates+bacteria-induced+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">beta-Catenin activity negatively regulates bacteria-induced inflammation.</a> Lab Invest. 87 (6), 613-624 (2007).</li>
<li>Barthel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pretreatment+of+mice+with+streptomycin+provides+a+Salmonella+enterica+serovar+Typhimurium+colitis+model+that+allows+analysis+of+both+pathogen+and+host%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+immunity%22%5BJournal%5D)">Pretreatment of mice with streptomycin provides a Salmonella enterica serovar Typhimurium colitis model that allows analysis of both pathogen and host.</a> Infection and immunity. 71 (5), 2839-2858 (2003).</li>
<li>Miller, S. I., Mekalanos, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Constitutive+expression+of+the+phoP+regulon+attenuates+Salmonella+virulence+and+survival+within+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+bacteriology%22%5BJournal%5D)">Constitutive expression of the phoP regulon attenuates Salmonella virulence and survival within macrophages.</a> Journal of bacteriology. 172 (5), 2485-2490 (1990).</li>
<li>Valdez, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nramp1+expression+by+dendritic+cells+modulates+inflammatory+responses+during+Salmonella+Typhimurium+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Nramp1 expression by dendritic cells modulates inflammatory responses during Salmonella Typhimurium infection.</a> Cell Microbiol. 10 (8), 1646-1661 (2008).</li>
<li>Woo, H., Okamoto, S., Guiney, D., Gunn, J. S., Fierer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+of+Salmonella+colitis+with+features+of+diarrhea+in+SLC11A1+wild-type+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">A model of Salmonella colitis with features of diarrhea in SLC11A1 wild-type mice.</a> PLoS ONE. 3 (2), e1603-e1603 (2008).</li>
<li>Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+call-and-response%3A+how+Salmonella+learns+the+gospel+from+its+host%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Molecular call-and-response: how Salmonella learns the gospel from its host.</a> Trends Microbiol. 11 (6), 245-246 (2003).</li>
<li>Zaharik, M. L., Vallance, B. A., Puente, J. L., Gros, P., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host-pathogen+interactions%3A+Host+resistance+factor+Nramp1+up-regulates+the+expression+of+Salmonella+pathogenicity+island-2+virulence+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Host-pathogen interactions: Host resistance factor Nramp1 up-regulates the expression of Salmonella pathogenicity island-2 virulence genes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99, 15705-15710 (2002).</li>
<li>Townsend, P., Morton, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+Animal+Care+Policies+and+Regulations%3A+United+Kingdom%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Laboratory Animal Care Policies and Regulations: United Kingdom.</a> ILAR J. 37 (2), 68-74 (1995).</li>
<li>Olfert, E. D., Godson, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humane+endpoints+for+infectious+disease+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Humane endpoints for infectious disease animal models.</a> ILAR J. 41 (2), 99-104 (2000).</li>
<li>Ye, Z., Petrof, E. O., Boone, D., Claud, E. C., Sun, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salmonella+effector+AvrA+regulation+of+colonic+epithelial+cell+inflammation+by+deubiquitination%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Salmonella effector AvrA regulation of colonic epithelial cell inflammation by deubiquitination.</a> Am J Pathol. 171 (3), 882-892 (2007).</li>
<li>Grassl, G. A., Valdez, Y., Bergstrom, K. S., Vallance, B. A., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+enteric+salmonella+infection+in+mice+leads+to+severe+and+persiste+nt+intestinal+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Chronic enteric salmonella infection in mice leads to severe and persiste nt intestinal fibrosis.</a> Gastroenterology. 134 (3), 768-780 (2008).</li>
<li>Sukupolvi, S., Edelstein, A., Rhen, M., Normark, S. J., Pfeifer, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+murine+model+of+chronic+Salmonella+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+immunity%22%5BJournal%5D)">Development of a murine model of chronic Salmonella infection.</a> Infection and immunity. 65 (2), 838-842 (1997).</li>
<li>Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories (BMBL). , Fifth Edition, US Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention and National Institutes of Health. (2007).</li>
<li>Wu, S., Lu, R., Zhang, Y., Sun, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+effects+of+a+Salmonella+type+III+secretion+effector+protein+AvrA+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Chronic effects of a Salmonella type III secretion effector protein AvrA in vivo.</a> PLoS ONE. , Forthcoming (2010).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

כדי להשתמש במערכת, זה הכרחי עבור החוקר ללמוד איך gavage החיות. אנו פרט מתודולוגיה להכין התרבות חיידקים gavage העכברים. כמו כן, אנו מראים כיצד לפקח על התמדה סלמונלה בדרכי (GI) במערכת העיכול. השלבים הקריטיים פרוטוקול זה כולל: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סטרפטומיצין, המקדים: סטרפטומיצין, טיפול מקדים יכול להיפטר כמה צמחיית המעיים commensal ולעשות את העכברים רגישים לזיהום סלמונלה 2. </li><li s...

<table><tbody><tr><td>HBSS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>ABCD1234</td><td></td></tr><tr><td>ציר לוריה-ברטני</td><td>BD Biosciences</td><td>244610</td><td></td></tr><tr><td>מחט האכלה</td><td>Popper &amp;amp; Sons, Inc.</td><td>7920</td><td></td></tr><tr><td>סטרפטומייסין</td><td>MP Biomedicals</td><td>100556</td><td></td></tr><tr><td>BBL CHROMagar &lt;em&gt;Salmonella&lt;/em&gt;</td><td>BD Biosciences</td><td>214983</td><td></td></tr><tr><td>לוחות פריסה לתאים חד-פעמיים</td><td>Biologix Research Company</td><td>65-1010</td><td></td></tr></tbody></table>

כרוני סלמונלה עכבר אינפקטד דגם

Chronic Salmonella Infected Mouse Model

המודל חיידקי עכבר נגוע היא מערכת מודל רב עוצמה ללימוד בתחומים כגון דלקת זיהום, אימונולוגיה, התמרה האות, ו tumorigenesis. חוקרים רבים ניצלו קוליטיס המושרה על ידי<em&gt; סלמונלה</em&gt; Typhimurium עבור מחקרים בשלב מוקדם של דלקת וזיהום. עם זאת, רק דיווחים מעטים על זיהום כרוני<em&gt; In vivo</em&gt;. עכברים עם<em&gt; סלמונלה</em&gt; קיום מתמשך במערכת העיכול מאפשרים לנו לחקור את המארחת בקטריאלי לטווח ארוך אינטראקציה, התמרה האות, ו tumorigenesis. הקמנו מודל כרוני חיידקי עכבר נגוע<em&gt; סלמונלה</em&gt; Typhimurium קולוניזציה במעי העכבר מעל 6 חודשים. כדי להשתמש במערכת, זה הכרחי עבור החוקר ללמוד איך להכין את התרבות חיידקים gavage החיות. אנו פרט מתודולוגיה תרבית החיידקים להכין ועכברים gavage. כמו כן, אנו מראים כיצד לזהות את<em&gt; סלמונלה</em&gt; התמדה במערכת העיכול. בסך הכל, פרוטוקול זה יסייע לחוקרים באמצעות מודל חיידקי עכבר נגוע במטרה לענות על שאלות ביולוגיות מיקרוביולוגית חשוב ביסודו.

לבסס מודל כרוני חיידקי עכבר נגוע מתמיד<em&gt; סלמונלה</em&gt; Typhimurium קולוניזציה במעי במשך 27 שבועות.

מודל העכבר המודבק בחיידקים הוא מערכת מודלים עוצמתית לחקר תחומים כגון זיהום, דלקת, אימונולוגיה, העברת אותות ו...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לבסס מודל של עכבר עם זיהום כרוני ב-salmonella. דבר זה מושג תחילה על ידי הכנת תמיסת salmonella. השלב השני של הפרוצדורה הוא מתן streptomycin לעכברים באמצעות gavage, ולאחריו מתן salmonella או מתן streptomycin בלבד.השלב השלישי של הפרוצדורה הוא בידוד של salmonella מצואה של עכברים, וזיהוי זיהום ב-salmonella במעי העכבר באמצעות מצעי BL chroma. השלב האחרון של הפרוצדורה הוא מעקב ותיעוד של מסת הגוף של העכבר וסימון שינויים בחיוניות בעקבות הזיהום ב-salmonella. בסופו של דבר, ניתן לקבל תוצאות המראות שניתן להשריש זיהום של salmonella במעיהם של עכברים שקיבלו salmonella בגרגור (gavage).שלום, אני מישל פ' מהמעבדה של ד"ר ג'ונסון במחלקה לרפואה באוניברסיטת רוצ'סטר. אני גם ממעבדת סאן, ואני Y ממעבדת סאן. היום נדגים לכם פרוצדורה להקמת מודל של מסה מזוהמת ב-Alytic Lennar.אנו משתמשים בנוהל זה במעבדה שלנו כדי לחקור את העברת האותות באינטראקציה בין המארח לבקטריה ואת התהליך של קרצינוגנזה. אז בואו נתחיל. לפני התחילת הניסוי, הכינו מספיק צלחות מצע LB או ציר Luria-Bertani עבור כל זן של salmonella לשימוש לאורך כל הניסוי.ניתן לשמור את הצלחות בקירור למשך מספר חודשים. בשלב הבא, הכין תרבית סלמונלה. הוצא מבחנה של מאגר סלמונלה שהוקפא במינוס 80 מעלות צלזיוס והנח לה להפשיר על משטח העבודה לצורך זריעת הסלמונלה.חטאו לולאת הזרקה בלהבה של מבער וטבלו אותה במלאי החיידקים שהופשר. הניעו את הלולאה בתנועות זיגזג הלוך וחזור בשליש העליון של צלחת ה-LB. חטאו שוב את הלולאה בלהבה וסובבו את הצלחת.בצעו תנועות זיגזג בלולאה כך שתחצה את הפסיקות הקודמות ותפזר את החיידקים על השליש השני של הצלחת. חזרו על הפעולה פעם נוספת. שרפו שוב את הלולאה.אין לאפשר ללופ לחדור אל תוך האגר. יש לאפשר למושבות לגדול על ידי אחסון הפלטות באינקובטור בטמפרטורה של 37 °C למשך לילה. אם הפעולה בוצעה נכון, פלטת הסלמונלה אמורה להניב מושבות בודדות לפחות באחד מהמגזרים.ביום למחרת. בחר קולוניה מלוחית ה-LB באמצעות קיסם סטרילי או לולאת חידוד והעבר אותה ל-7 mL של LB בתוך מבחנה של 12 mL. נקנוע את המבחנה בטמפרטורה של 37 °C למשך כחמש שעות.השתמש ב-0.05 milliliters של תרבית זו כדי להנחית ב-50 milliliters של LB בתוך מבחנה מסוג Falcon. דגור ב-37 degrees Celsius ללא ניעור למשך כ-18 שעות.סובב את תרבית החיידקים של 50 milliliter מהגידול למשך לילה בטמפרטורת החדר ב-5,000 RPM למשך 10 דקות והסר את הנוזל העליון (supernatant). לאחר מכן, הוסף למבחנה 1.5 milliliters של תמיסת מלחים חוצצת של הנק (Hank's buffered salt solution) או HBSS כדי לתוחב את החיידקים, או יחס של 100 חלקים LB ל-3 חלקים HBSS. לאחר מכן, השלם את הנפח הכולל ל-15 milliliters באמצעות HBSS, או ביחס של 1 ל-10 בין LB ל-HBSS.כל עכבר דורש 100 µL של תרבית סלמונלה מדוללת, או בין 1×10⁶ ל-1×10⁸ יחידות יוצרות מושבה (CFU) לפני תחילת הגבג' (gavage); יש להסיר את המים והמזון מהעכברים ארבע שעות לפני הניסוי. לאחר מכן, הכין תמיסת סטRepartition streptomycin מיד לפני הגבג' על ידי דילול של 7.5 mg של streptomycin באבקה ב-100 µL של HBSS. עבור כל עכבר המוזרק, הקפד להכין נפח עודף כדי לפצות על אובדן לפני הגבג' של העכבר.ראשית, הכין מחט האכלה עם 100 µl של תמיסת סטריפטומייצין. הוצא את העכבר הראשון מהכלוב לקבלת הגavage והחזק את העכבר כשהוא פונה לכיוון משטח העבודה. אחז בחוזקה בעור מעל כתף העכבר באמצעות האגודל והאצבע האמצעית, ומתוך מתיחה של הראש והצוואר בעזרת האצבע המורה כדי להביא את הוושט למצב ישר.הכווינו את קצה הכדור של מחט ההזנה לאורך תקרת הפה לעבר הצד הימני של החלק האחורי של הלוע. לאחר מכן, העבירו אותה בעדינות מטה אל תוך הוושט והזריקו 100 µL של תמיסת streptomycin. אין להרגיש התנגדות.חזור על תהליך זה עבור כל העכברים בקבוצת הניסוי ובקבוצת הביקורת העוברים את הניסוי. כ-20 שעות לאחר ה-strp de m והזנה ב-gavage, וארבע שעות לפני הזנת הסלמונלה ב-gavage, הסר את המים והמזון מהעכברים שיקבלו את תמיסת הסלמונלה ב-gavage דרך הפה. בצע gavage לכל עכבר באופן דומה לשלב הקודם, תוך שימוש ב-100 µL של תמיסת סלמונלה ב-HBSS.לאחר ההזנה (gavage), העבירו כל עכבר לכלוב חדש כדי להתחיל באיסוף הצואה. החל משמונה שעות בקירוב לאחר ההזנה, הסירו את הצואה מהכלוב מיד לאחר הפרשתה. אספו 100 milligrams של צואת עכבר כדגימה ניסויית.אסוף דגימות מדי יום או מדי שבוע, בהתאם לאורך המחקר, לצורך אנליזה של salmonella בצואה. העבר את דגימת הצואה למבחנה של מיקרו-צנטריפוגה בנפח 1.5 milliliter עם 1 milliliter של PBS, ערבב במכשיר vortex בעוצמה וסבב בצנטריפוגה במשך 10 דקות במהירות של 800 RPM. העבר את הסופרנאטנט למבחנה נקייה של 1.5 milliliter וסבב בצנטריפוגה ב-6, 000 RPM למשך חמש דקות.שפכו את הנוזל העליון והוסיפו 200 µL של PBS למשקעים, וערבבו במערבל Vortex כדי להחזיר אותם לתמיסה. לאחר מכן, גלו Salmonella באמצעות צלחת BB l roag. השתמשו ב-10 עד 100 µL של תמיסת צואה לכל צלחת, ופזרו אותה על הצלחת כפי שמוצג בסעיף שני.מיני הסלמונלה מופיעים בצבע בורדו עקב הבדלים מטבוליים בנוכחות כרומוגנים נבחרים. ספרו את מושבות הסלמונלה בצלחת כדי להשוות את רמת הזיהום בין עכברים בודדים. בהליך ניסיוני זה השתמשנו בעכברי C 57 black six נקבות, נקיים מפתוגנים ספציפיים (SPF), בני שש עד שבעה שבועות.עכברים הוזרקו בסלמונלה ובסטרטומיצין בתוספת HBSS. קבוצת ביקורת של עכברים קיבלה גאוואז' של סטרטומיצין בלבד. זני הסלמונלה ששימשו במחקר כוללים את זן הבר (wild type) של salmonella typhimurium, A TCC 1 4 0 2 8 S FP C, זן מוטנט לא פתוגני של סלמונלה, ושלושה זני FPC מהמעבדה של ד"ר ג'יימס מדרה (Dr. James Madera) הנושאים את הגן AAV R age הקשור לאריריות בתוך פלסמיד PSKW 29 בעתק נמוך. באמצעות פרוטוקול זה, ניתן לזהות קולוניזציה של salmonella tyrian במעי העכבר.זיהום כרוני בסלמונלה נמדד באמצעות ניתוח צואה, ודגימות של משקל גוף ורקמת מעי נאספו לצורך צביעה אימונופלואורסצנטית. בדרך כלל, ירידה במשקל הגוף ומוות מתרחשים בתוך ארבעה שבועות לאחר ההדבקה. שיעורי ההישרדות ארבעה שבועות לאחר ההדבקה מוצגים כאן.לאחר שעכברים שורדים ארבעה שבועות לאחר ההדבקה, הם עולים במשקל הגוף ושיעורי התמותה פוחתים ב-23 השבועות שנותרו. באופן כללי, למעלה מ-65% מהעכברים שהודבקו בזני salmonella, מסוג FSY fsy, A VRA null או fsy. A VRA heterozygote, יכולים לשרוד למעלה משישה חודשים עם זיהום salmonella מתמשך במעי.לאחר הזיהום החריף, השורדים עדיין נשאו את הסלמונלה, אותה ניתן היה לזהות שישה חודשים לאחר הזיהום באמצעות השיטה המתוארת בפרוטוקול זה. ניתוח אימונופלואורסצנציה של דגימות רקמה ממעי של עכבר מראה את פלישת הסלמונלה לרירית המעי 27 שבועות לאחר הזיהום. בתמונה זו, הגרעינים צבועים בכחול והסלמונלה המזהמת מוצגת בירוק.כפי שמוצג בקבוצת הביקורת, אין צביעה ירוקה בהירה, דבר המעיד על היעדר קולוניזציה של salmonella. לעומת זאת, בעכברים שהודבקו ב-salmonella ב-27 שבועות לאחר ההדבקה, נצפית צביעה ירוקה בהירה ברירית המעי. הדבר מעיד על התמדה של זיהום ב-salmonella בעכבר שטופל מראש ב-streptomycin.הרגע הדגמנו כיצד להשרות זיהום כרוני של some במודל עכברים. בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור להכין תרבית טרייה עבור garage, להשתמש בכישורי garage נכונים ולבדוק את נוכחותם של ANA כדי לוודא שמודל הניסוי שלכם עובד. זהו כל התהליך.תודה לצפייה ובהצלחה בניסוייכם.

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

מקור: לו, ב. ס. ואחרים. זיהום כרוני בסלמונלה פיברוזיס במעי. J. Vis. Exp. (2019)הסרטון מדגים את כימות העומס החיידקי במודל עכבר של זיהום כרוני בסלמונלה טיפימוריום עמידה לסטרפטומיצין. לאחר המתת חסד וניתוח סטרילי, רקמות ציקלי וטחול נקצרות, הומוגניות עם חרוזי פלדה לשחרור חיידקים, ומדוללות באופן סדרתי. הדילול מצופה על אגר סלקטיבי, ומושבות נראות נספרות להערכת עומס חיידקי לגרם רקמה באתרים מעיים ומערכתיים.

כימות עומס חיידקי רקמה במודל עכבר של זיהום כרוני במעי

מקור: לנהרד, א., ואחרים. מודל עכבר למעבר של Streptococcus pneumoniae ממתיישב לפתוגן בעקבות זיהום נגיפי משחזר מחלה שהוחמרה על ידי הגיל. J. Vis. Exp. (2022)הסרטון הזה מדגים את עיבוד הריאות של עכבר שנדבק יחד בחיידק פתוגני ובווירוס. טחון, הומוגניזציה וציפוי רקמת הריאה מאפשרים כימות של עומס חיידקים, מה שמעיד על התפשטות חיידקים לריאות וחומרת המחלה.

עיבוד רקמות נגועות לספירת חיידקים במודל זיהום משותף בעכבר

זיהום rodentium Citrobacter מספק מודל יקר ללמוד זיהומים חיידקיים enteric כמו גם לארח תגובות וקוליטיס חיסוניים בעכברים. פרוטוקול זה מתאר מדידה של יושרת מכשול, עומס הפתוגן ופגיעת היסטולוגית מאפשרת אפיון היסודי של תרומות פתוגן ומארח לקוליטיס המדבק העכברי.

<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; דגם עכבר: תרומות הפתוגן ומארח לומדים קוליטיס המדבק

מאמר זה מתאר שיטה חדשה לזיהום אוראלי של עכברים...

הילוכים אוראלי של<em&gt; חיידקי ליסטריה</em&gt; בעכברים באמצעות בליעה של מזון מזוהם

מודלים של בעלי החיים הוכיחו להיות כלי רב ערך בהגדרת מנגנונים ספציפיים מארח ופתוגן שתורמים להתפתחות של דלקת כרונית. כאן אנו מתארים מודל עכבר של זיהום אוראלי עם הפתוגן האנושי Porphyromonas gingivalis ומתודולוגיות פרט כדי להעריך את ההתקדמות של דלקת באתרים מקומיים ומערכתיים.

מודל של עכברים של דלקת כרונית הנגרם על ידי פתוגן באתרים מקומיים ומערכתיים

פרוטוקול זה מתאר את מודל עכבר cefoperazone של זיהום difficile Clostridium (CDI) באמצעות זן קליני רלוונטי וגנטי-צייתן, R20291. דגש על ניטור מחלה קליני, פקידת חיידקי C. difficile, cytotoxicity רעלן, ושינויי histopathological ברחבי CDI במודל של עכברים מפורטים בפרוטוקול.

Cefoperazone שטופל עכבר דגם של קליני רלוונטי<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; R20291 הזנים

פרוטוקול זה מספק את הצעדים הדרושים כדי ליצור ולהעריך אלח דם neonatal בעכברים בן יום-7.

דגם עכבר מבוקר Neonatal אלח דם Polymicrobial

פרוטוקול זה מתאר מודל העכבר של סלמונלה פיברוזיס המעי מונחה הדומה הסימנים העיקריים מפתח פתולוגי של מחלת קרוהן כולל דלקת קיר ופיברוזיס. שיטה זו יכולה לשמש כדי להעריך גורמים מארחים לשנות את התוצאות הפיברוטיות באמצעות עכברים מוטציה המתוחזקות על C57Bl/6 רקע גנטי.

סלמונלה כרונית זיהום דלקת מעיים פיברוזיס

פרוטוקול זה מתאר את האינדוקציה של אלח דם מונובקטריאלי גראם שלילי במערכת מודל עכבר. המודל שימושי בחקירת תגובות הפונדקאי הדלקתיות והקטלניות במהלך אלח דם.

אפיון סלמונלה טיפימוריום המושרה על ידי דלקת צפק ספטית בעכברים

מאמר זה מתאר מודל עכברי חדשני למעבר של פנאומוקוק ממתיישב אסימפטומטי לפתוגן הגורם למחלה במהלך זיהום ויראלי. מודל זה יכול להיות מותאם בקלות לחקר אינטראקציות מיקרוביאליות ומארח-פתוגן במהלך השלבים השונים של התקדמות המחלה ועל פני מארחים שונים.

מודל עכברי למעבר של דלקת ריאות סטרפטוקוקוס מקולונייזר לפתוגן עם זיהום משותף ויראלי מחזיר מחלה המחמירה בגיל

למדו כיצד ליצור מודל עכבר כרוני נגוע ב-Salmonella typhimurium לחקר מחלות זיהומיות. שיטה זו מאפשרת מעקב אחרי קולוניזציה ממושכת במעי ותגובת המארח לאורך זמן.

כרוני סלמונלה עכבר אינפקטד דגם

גלה סרטונים נוספים