Name: Tumour Murine Bioluminescent כבדית דגם (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-07-17T17:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 23 s
Description: למד טכניקה כירורגית להשתלת גידולים ביולומינסצנטיים בכבד עכברים. שיטה זו מאפשרת ניטור לא פולשני של גידולים ומחקר תרופות חדשות לטיפול במטסטזים כבדיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו מומנה דרך קורק בדרום מרפאת קופת ויקטוריה אוניברסיטת השד בבית החולים, האגודה למלחמה בסרטן אירי (CRI07TAN) לבין סרטן קורק מרכז המחקר. תא לואיס ריאות קו ביציבות להביע בלוציפראז הייתה מתנה סוג של ד&quot;ר קארין יוס, Cell Genesys, Inc, סן פרנסיסקו, ארה&quot;ב.

הקדמה הכבד הוא לעתים קרובות את האתר הראשון של מחלה גרורתית וניתן האתר היחיד של התפשטות% כמספר 30 של 40 חולים עם מחלה מתקדמת. עם זאת אפשרויות לטיפול בגידולים בכבד גרורתי מעטים עם מיעוט מהחולים מתאים כריתה ורק 23% המגיבים העיקריים chemotherapeutics. מחקר קליני בתחום זה הוגבל על ידי בהעדר העכבר מודל מתאים ללימוד מחלת כבד מבודד. אנו מתארים גישה מפוצל הטחול כי ניתן להשתמש באופן אמין להקים אחיד, גרורות בכבד מפוזר. כריתה של מחצית זו של הטחול ימנע את ההשלכות של הגידול הטחול ואת החצי השני של הטחול הוא חזר עם מחזור פורטל שלם כדי לשמור על הטחול מאפייני הגנה חיסונית. המודל שאנו מתארים הוא די פשוט לביצוע, ניתן לעשות זאת במהירות דרך חתך אחד בלבד. המאפיינים bioluminescent של קו תאים סרטניים מאפשר כימות מדויק של התגובה לטיפול מבלי להקריב בעלי חיים. פרוטוקול I. הכנה Cell <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לואיס לתאי ריאה קרצינומה גדלים שונה של Dulbecco בינוני חיוניים בתוספת סרום 10% עגל העובר על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 ו שנקטפו על ידי trypsinisation כאשר תת ומחוברות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים נספרו באמצעות Nucleocounter (חמו-metec, דנמרק) ואת השעיית תא בודד של 1 X 10 6 תאים μl 200 הוכן תקשורת חופשית בסרום. </li></ol> השנייה. עכבר הכנה הערה: כל הנהלים אושרו על ידי ועדת האתיקה של מכללת אוניברסיטת קורק. במעבדה שלנו אנו משתמשים בזריקות הרדמה כדי להרדים את העכבר, לחילופין, ניתן להשתמש הרדמה נשאפים כדי להשיג את אותו אפקט. המתח עכבר השתמשנו הוא שיער MF1 נו / נו המתח המתקבל הרלן מעבדות (אוקספורדשייר, אנגליה). נקבה MF1 נו / נו עכברים במשקל 16-22 גרם של 6-8 שבועות של גיל נכללו בניסוי זה. זנים אחרים כגון C57 ו Balb / C יכול לשמש גם עם שורות תאים מתאים סרטניים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אלחוש נמסר על ידי הזרקת intraperitoneal של קטמין 100ul של 1.5 מ"ג ו 300 xylazine UG. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עומק ההרדמה היא הוערכה באמצעות צביטה הבוהן. לא צריך להיות שום נסיגה רפלקס עם קמצוץ הבוהן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכבר הרדים ממוקם כראוי מודבק על כרית חימום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הבטן היא prepped עם פתרון בבטאדין 10%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הבטן אתר כירורגי הם עטופים בצורה סטרילית. </li></ol> ג. בטן החתך <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חתך subcostal קטן עשוי בעור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החתך מורחב 2-3 ס"מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בטן קיר השרירים חולקו ואת חלל הצפק נכנס. </li></ol> IV. חשיפה אגף הטחול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הטחול הוא לגייס exteriorized בעדינות על גזה מראש לחתוך סטרילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שני חיבורי אותיות vicryl 4-0 קשורות סביב הגוף באמצע של הטחול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הטחול מחולק בין שני חיבורי אותיות יצירת שני חמי spleens. </li></ol> V. הזרקת תאים לתוך הטחול, חמי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> G 27 משמש להזריק נפח 100 μL של תאים לתוך אחד חמי הטחול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים Tumour מותר לנקז אל הכבד במשך עשר דקות מתן זמן מספיק עבור רוב התאים מוזרקים להגיע אל הכבד. </li></ol> VI. כריתה של הטחול, חמי, סגר שחזור בטן <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוזרק חמי הטחול הוא נכרת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השני חמי הטחול הוא חזר חלל הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שכבת השריר נסגר עם תפר PDS 4-0 בעזרת תפר פועל פשוט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עור הבטן נסגר עם Prolene 4-0 באמצעות תפרים קטע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בולוס נוזלים מנוהל ואת שלאחר הניתוח כאבים, Carpofen (5 מ"ג / ק"ג) מנוהל על ידי הזרקת IP לניתוח שלאחר 24 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העכבר הוא מותר להתאושש מן ההרדמה </li></ol> VII. IVIS כל הגוף Bioluminescent הדמיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכבר הוא מורדם באמצעות הרדמה בזריקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המצע Luciferin ניתנת על ידי התוך צפקי עשר דקות לפני הזריקה הדמיה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים מוצבים על הבמה צילמו דקות 3 IVIS באמצעות המערכת כולה הדמיה הגוף </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הארה מהכבד ניתן למדוד באמצעות אזור של כלי הריבית </li></ol> VIII. חשיפה של הכבד העכבר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכבר הוא מורדם באמצעות הרדמה בזריקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חתך גג בטן מאפשר הדמיה של גרורות בכבד מפוזר in vivo. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העכבר הוא מורדמים על ידי נקע בצוואר הרחם והכבד ניתן נכרת לניתוח נוסף. </li></ol>_upload/1977/1977fig1.jpg "alt =" איור 1 "/&gt; באיור 1. מטופלים Murine נכרת טרי ואת הגידול הסתננו הכבדים. <img src="/files/ftp_upload/1977/1977fig2.jpg" alt="איור 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 2"> איור 2. קינטיקה של גידול בכבד הגידול כפי שמעידים הדמיה IVIS הגוף כולו.

<ol><li>Kasuya, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+subcutaneous+spleen+reservoir+for+multiple+portal+venous+injections+to+treat+liver+malignancies%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Mouse models of subcutaneous spleen reservoir for multiple portal venous injections to treat liver malignancies.</a> Cancer Res. 65, 3823-3827 (2005).</li>
<li>Liu, Q. Z., Tuo, C. W., Wang, B., Wu, B. Q., Zhang, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+metastasis+models+of+human+colorectal+carcinoma+established+in+nude+mice+by+orthotopic+transplantation+and+their+biologic+characteristic%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Liver metastasis models of human colorectal carcinoma established in nude mice by orthotopic transplantation and their biologic characteristic.</a> World J Gastroenterol. 4, 409-411 (1998).</li>
<li>Li, Z. Y., Ni, S., Yang, X., Kiviat, N., Lieber, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenograft+models+for+liver+metastasis%3A+Relationship+between+tumor+morphology+and+adenovirus+vector+transduction%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Xenograft models for liver metastasis: Relationship between tumor morphology and adenovirus vector transduction.</a> Mol Ther. 9, 650-657 (2004).</li>
<li>Cashman, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+gene+therapy+as+a+neoadjuvant+to+surgical+excision+to+control+metastatic+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Lett%22%5BJournal%5D)">Immune gene therapy as a neoadjuvant to surgical excision to control metastatic cancers.</a> Cancer Lett. , (2008).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

התפתחות אמינה במודלים vivo לחקר גרורות בכבד הופך הגדלת חשוב עם כניסתו של אסטרטגיות טיפוליות חדשות. לצורך המחקר מדויק של אסטרטגיות חדשות, במודלים של בעלי חיים צריכים להיות קל יחסית לביצוע, טופס מספר משמעותי של הגרורות, לערב את כל השלבים של מפל גרורתי יש מערכת כתב המאפשר איתור הספירה של מספר מצומצם של תאים גרורתי. הגישה מפוצל טחול כמתואר כרוכה בפעולה אחת היא טכניקה קלה יחסית ללמוד ליצור גרורות בכבד אחיד מפוזר עם סיכון נמוך מאוד של carcinomatosis ו פקקת וריד הפורטל 1.</...

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D6429</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>קטמין</td><td>V&amp;eacute;toquinol</td><td></td><td></td></tr><tr><td>קסילזין</td><td>V&amp;eacute;toquinol</td><td></td><td></td></tr><tr><td>קרפרופן</td><td>V&amp;eacute;toquinol</td><td></td><td></td></tr><tr><td>וידן</td><td>Ecolab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>חוט תפירה Vicryl 4-0</td><td>Ethicon Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>חוט תפירה PDS 4-0</td><td>Ethicon Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>חוט תפירה Prolene 4-0</td><td>Ethicon Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>לוציפרין Firefly</td><td>Biosynth International, Inc</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

tumour murine bioluminescent כבדית דגם

Murine Bioluminescent Hepatic Tumour Model

וידאו זה מתאר את הקמתו של גרורות בכבד במודל של עכברים, כי ניתן לנתח לאחר מכן על ידי הדמיה bioluminescent. תאים Tumour מנוהלים במיוחד כדי לכבד לגרום גידול בכבד מקומי, באמצעות גיוס של הטחול ואת פיצול לשני, והשאיר על כנו את כלי הדם pedicle עבור כל מחצית של הטחול. לואיס לתאי ריאה קרצינומה כי constitutively לבטא את הגן בלוציפראז גחלילית (luc1) הם מחוסן אל הטחול, חמי אחד שהוא resected אז 10 דקות מאוחר יותר. השני חמי הטחול נשאר ללא פגע וחזר הבטן. הגידול בצמיחה הכבד יכול להיות פיקוח על ידי פליטת אור הדמיה באמצעות דימות כולו IVIS מערכת הגוף. הדמיה כמותי של הגידול באמצעות IVIS מספק quantitation המדויק של תאים סרטניים קיימא. תא Tumour מוות נמק עקב טיפול תרופתי מצוין מוקדם על ידי הפחתה של האות bioluminescent. זה מודל העכבר מאפשר לחקור את המנגנונים הישרדות גרורתי גידול תאים וגדילה והוא יכול לשמש לצורך הערכה של הרפוי של גרורות בכבד.

מאמר זה מתאר את הליך הגיוס של orthotopic גידולים בכבד bioluminescent בעכברים, ניתוח בדיעבד של הגידול מוגבל בכבד באמצעות הארה חיים שלמים הדמיה הגוף.

Tumour Murine Bioluminescent כבדית דגם

סרטון זה מתאר את הקמתם של גרורות בכבד במודל עכברים, שניתן לנתחן לאחר מכן באמצעות דימוי ביולומינסנציה. תאי גידול הם...

שלום לכולם. שמי Simon Regenron. אני אחד מהמתמחים בניתוחים במרכז למחקר סרטן בקרב בעלי חיים כאן באירלנד.היום אדגים לכם טכניקה כירורגית להשראת גרורות בכבד. במודל של נוירון, הכבד הוא אתר נפוץ להתפשטות גרורתית וגורם מרכזי לתמותה הקשורה לסרטן. רק אחוז קטן מהחולים מתאימים לכריתה כירורגית במקרה של מחלת כבד מתקדמת.לפיכך, דרושים טיפולים חדשניים לטיפול במצב זה. מודלים רבים של גרורות בכבד בבעלי חיים אינם מביאים למחלה הדומה למצב הקליני. המודל שאני מציג לכם היום הוא מודל רלוונטי מבחינה קלינית, והוא קל יחסית ללמידה עם שיעורי הצלחה גבוהים מאוד.מודל זה כולל חלוקה של הטחול לשני חצאי טחול. חצי טחול אחד משמש להזרקת תאי גידול. תאי גידול אלו נעים דרך מחזור הדם הפורטלי אל הכבד.חצי הטחול השני נשאר ללא פגע כדי לשמר את תכונותיו האימונולוגיות. שורת התאים שבה אני משתמש מבטאת לוסיפראז באופן יציב, מה שמאפשר ניתוח ביו-לומינסנטי של צמיחת הגידול in vivo. לפיכך, מודל זה יאפשר ניטור לא פולשני של טיפולים למחלות כבד.בסדר, נתחיל כעת את הפרוצדורה להיום. המכשירים הדרושים לנו הם מספרי ניתוח, מחזיק מחט, שתי פינצטות קטנות, סכין מנתח (scalpel) גודל 10, תפר פרולין 5-0 לסגירת העור, תפר PIA 4-0 לסגירת שכבת הפריטון, קשרי Vicryl 3-0 לחלוקת הטחול, סליין, מחט אינסולין 29 gauge להזרקת חומר הרדמה, מחט אינסולין 26 gauge להזרקת תרחיף ג

murine-bioluminescent-hepatic-tumour-model

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

בלוציפראז, שונה אדם xenografts גידול במוח ניתן לקבוע intracranially בעכברים athymic, עם ניטור הבאים של הגידול ואת התגובה לטיפול באמצעות הדמיה פליטת אור. בשילוב עם ניתוח הישרדות, ניטור פליטת אור הוא כלי מחקר הכרחי לצורך בדיקות טרום קליניים של טיפולים נשקלת לטיפול בגידולים במוח.

הקמת גידול תוך גולגולתי xenografts המוח עם ניתוח בדיעבד של הגידול ואת התגובה לטיפול באמצעות הדמיה פליטת אור

הדמיה של פליטת אור ועין מתנהלת פעילות היפוקסיה, גורם 1α מוחל לפקח היפוקסיה תוך גולגולתי התפתחות גידולים של סרטן השד מודל גרורות במוח העכבר.

בתחום ההדמיה vivo של פליטת אור Dynamics היפוקסיה גידול של גרורות סרטן השד המוח במודל של עכברים

סרטון זה מדגים מודל אורתוטופי של סרטן הלבלב המשתמש במטריג'ל להעברת תאים מקומית והדמיית ביולומינסנציה in vivo לניטור לא פולשני של התקדמות הגידול. המודל האורתוטופי מתאים הן למודלים סינגניים והן למודלים של קסנוגרפט, וניתן להשתמש בו בניסויים פרה-קליניים כדי לחקור את ההשפעה של טיפולים אנטי-סרטניים חדשניים על צמיחת הגידול הראשוני בלבלב וגרורות.

מודל עכבר סרטן לבלב אורתוטופי ביולומינסנטי: טכניקה לא פולשנית למעקב אחר התקדמות סרטן בעכברים

מקור:מרינה אראנטס רדיקי1, ויקטור קרלוס מלו1,ויקטורה פאס מצ'אדו1, מרסיה כריסטינה אוליביירה דה רושה1, ז'קלין ואז דה אוליביירה1, לואנה כריסטינה קמרגו1,2, לואיס אלכסנדר מולמן1, ריקרדו בנטס אזבדו1, סוניה נאיר באו1, ז'ואאו פאולו פיגרו לונגו11המכון למדעי הביולוגיה, אוניברסיטת ברזיליה, 2המחלקה לתהליכים פסיכולוגיים בסיסיים, המכון לפסיכולוגיה, אוניברסיטת ברזיליהסרטון זה מדגים את ההליך למעקב אחר התקדמות הגידול in vivo על ידי הזרקת תאי אדנוקרצינומה שדיים המבטאים לוציפראז לעכבר נקבה וניטור אותות ביולומינסנט...

הדמיה ביולומינסנט של התקדמות גידול השד במודל עכבר נקבה

מקור: Clark, A.J., et al. הדמיית ביולומינסנציה של מודל בעלי חיים בעלי יכולת חיסונית לגליובלסטומה. J. Vis. Exp. (2016)סרטון זה מדגים הדמיית ביולומינסנציה כדי לעקוב אחר התקדמות גליובלסטומה במודל עכבר בעל יכולת חיסונית, תוך שימוש בתאי גידול המבטאים לוציפראז ולוציפרין כדי לכמת את צמיחת הגידול באופן לא פולשני.

הדמיה ביולומינסנציה של מודל עכבר בעל יכולת חיסונית לגליובלסטומה

הבנה משופרת של ביולוגיה של סרטן הלבלב היא צורך קריטי כדי לאפשר הפיתוח של אפשרויות טיפוליות טובות יותר לטיפול בסרטן הלבלב. כדי לענות על צורך זה, אנו מדגימים מודל orthotopic של סרטן הלבלב המאפשר ניטור בלתי פולשני של התקדמות הסרטן...

דגם orthotopic bioluminescent של התקדמות סרטן הלבלב

תאי גליומה GL261 מספקים מודל שימושי של בעלי חיים בעלי יכולת חיסונית של גליובלסטומה. מטרות פרוטוקול זה הן להדגים טכניקות מתאימות לניטור צמיחת גידול תוך גולגולתי באמצעות הדמיית ביולומינסנציה in vivo, ולאמת את התועלת של תאי GL261 שעברו שינוי בלוציפראז לחקר אימונולוגיה של גידול וגישות אימונותרפיות לטיפול בגליובלסטומה.

הדמיה פליטת אור של דגם עם מערכת חיסון בבעלי חיים לגליובלסטומה

הדמית פליטת אור היא כלי ידוע לאיתור גידולים וגרורים, אבל כימות של התמונות האלה לעתים קרובות דורש חישובים מורכבים ומכשירים בפרט. אנו מתארים את שיטת luminoscore הקלה לשימוש, מבוסס על תנאי רכישה מדויקים, אין צורך בחישובים, ומאפשר ניטל גידול ותגובה לטיפול כדי להיות במעקב במודלים של עכברים.

פליטת אור מבוסס שיטת כימות גידול עבור התקדמות גידול ניטור שפעות טיפול מודלים לימפומה העכבר

היכולת של שיבוטים גרורתיים ליישב אתרים מרוחקים תלויה ביכולת ההתפשטות שלהם ו/או ביכולתם לשרוד במיקרו-סביבה המארחת ללא התפשטות משמעותית. כאן, אנו מציגים מודל של בעלי חיים המאפשר הדמיה כמותית של שני סוגי ההתיישבות בכבד על ידי שיבוטים גרורתיים.

מתקדם במודל חיה של גרורה גסה בכבד: טכניקות הדמיה ונכסים של משובטים גרורתי

אנחנו מציגים את orthotopic מאתר השד סרטן ומודל כריתה רדיקלית בטכנולוגיה ביולומינסנציה לכמת את נטל הגידול לחקות התקדמות סרטן השד אנושי.

יצירת מודל של סרטן שד גרורתי Orthotopic מאתר וביצוע מאתר כריתה רדיקלית

אתגר מרכזי בפיתוח טיפולים חדשים לסרטן ריאות כולל מידול המיקרו-סביבה של הגידול כאשר מחלה אזורית מתקדמת למחלה גרורתית. כאן, אנו מתארים שיטה פשוטה להקמת מודל סינגני אורתוטופי של סרטן ריאות המאפשר מעקב in vivo אחר המחלה לאורך זמן.

שיטה זעיר פולשנית ליצירת מודל עכבר אורתוטופי סינגני של סרטן ריאות

למד טכניקה כירורגית להשתלת גידולים ביולומינסצנטיים בכבד עכברים. שיטה זו מאפשרת ניטור לא פולשני של גידולים ומחקר תרופות חדשות לטיפול במטסטזים כבדיים.

Tumour Murine Bioluminescent כבדית דגם

גלה סרטונים נוספים