Name: פלאש מקפיא Cryosectioning E12.5 מוח עכבר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-05-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 28 min 32 s
Description: למד טכניקות קריוסקשן לרקמת מוח עוברית בעכברים באמצעות קיפאון מהיר בחנקן נוזלי ושימוש בקריוסטט. שיטה זו מספקת טיפים מעשיים להשגת חתכים איכותיים ללא סדקים או עיוותים לניתוח עצבי מדויק.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תיקון רקמות paraformaldehyde 4% PBS בפעם הרצוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשרות סוכרוז רקמות (cryoprotection) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע פתרון סוכרוז 30% PBS w / v בצינור 2059. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את רקמת 3x ב PBS (~ 5 דקות עם נדנדה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקום הרקמה בתמיסה סוכרוז 30%. רקמות לא תטבע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הרקמה 4 ° C במשך הלילה, או עד שהוא שקע. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גודל התווית המתאימה cryomold עם מידע והתמצאות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלאו cryomold עם אוקטובר (למנוע בועות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת רקמות אמבטיה אוקטובר ומעיל עם אוקטובר </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת רקמות אוקטובר ב cryomold. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המזרח הרקמה תחת מיקרוסקופ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצקים חנקן נוזלי לתוך צלחת פטרי מפלסטיק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהירות ובזהירות להוריד את הרקמה cryomold בחנקן. (לא להטביע את החלק העליון של cryomold). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אוקטובר כאשר הוא מוצק לבן, במקום הרקמה הקפואה אל תוך -80 ° C במקפיא לאחסון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאזן רקמות ~ 20 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות לפחות. לפני חתך. </li></ol>

<table><tbody><tr><td>Tissue-Tek Cryomold</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>27181</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T.</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>27050</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת סוכרוז</td><td></td><td></td><td>תמיסת סוכרוז 30% ב-PBS w/v</td></tr><tr><td>פראפורמלהיד</td><td></td><td></td><td>4% פראפורמלהיד ב-PBS</td></tr></tbody></table>

פלאש מקפיא cryosectioning e12.5 מוח עכבר

Flash Freezing and Cryosectioning E12.5 Mouse Brain

<p class="jove_content">הפגינו וידאו זו הן טכניקות פלאש מקפיא חתך ברקמת המוח העובריים של העכבר. טיפים שימושיים לשימוש cryostat מקבלים, כולל שיטות לפתרון בעיות שניתן להשתמש בהם בעת חיתוך על מנת להבטיח כי הסעיפים רקמות כתוצאה חופשיים של סדקים ועיוותים אחרים.</p>

פלאש מקפיא Cryosectioning E12.5 מוח עכבר

<p>שלום, אני ספנסר קרלי מאוניברסיטת קליפורניה אירביין וממעבדתו של אד מאקי, ואני אדגים כיצד לבצע חיתוך קריוסטטי (cryosectioning). לשם כך, אשתמש תחילה בריאגנטים הנפוצים הבאים. תרכובת ההטמעה או מדיום ההטמעה שבהם אני משתמש נקראים OCT, עבור optimal cutting temperature.</p><p>זהו תמיסה שקופה, היא סמיכה וצמיגית מאוד, והיא מחזיקה את הרקמה היטב בזמן שניתן להכווינה ולאחר מכן היא קופאת, ובסופו של דבר היא מסיסה במים כך שניתן להסירה במהלך כל סוג של הליך צביעה. לכן אני מטמיע את הרקמה בתבנית. מישורי הקפאה אלו עבור דגימות ביופסיה מגיעים בגדלים שונים.</p><p>אני אשתמש בתבנית קטנה יותר זו מכיוון שאני עובד עם רקמה עוברית של עכבר. אנו מקפיאים את הרקמה שלנו בהקפאה מהירה בתוך חנקן נוזלי. לכן, ראשית אני אמלא את בקבוק הוואקום המגן הזה בחנקן נוזלי מהמכל שלנו כאן.</p><p>לפני הקפאה מהירה של הרקמה, יש לבצע שלב הנקרא הגנה קריוגנית (cryoprotection) של הרקמה, אחרת תהליך ההקפאה עצמו יהרוס אותה. לשם כך, טובעים את הרקמה בתמיסת סוכרוז 30% למשך לילה. אם התהליך אורך זמן רב יותר, הדבר אינו מהווה בעיה, כל עוד הרקמה שוקעת.</p><p>וכפי שניתן לראות, ראשי עכברים ביום עוברי 12.5 שקעו בתוך תמיסת הסוכרוז, ולכן הם מוכנים להקפאה. כעת אני פשוט אשפוך את הרקמה שנמצאת בתמיסת הסוכרוז לתוך צלחת גדולה יותר, כדי שאוכל לטפל ברקמה. אני אקח מעט מ-OCT ואשפוך אותו לתוך צלחת</p>

flash-freezing-and-cryosectioning-e125-mouse-brain

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

סרטון זה מדגים שימור בהקפאה של מוח עכבר כדי לבודד אזורים אנטומיים נפרדים או אוכלוסיות תאים ספציפיות מרקמות הגידול. טכניקה זו היא קריטית להשגת רזולוציה אופטית אופטימלית של מורפולוגיה של רקמת המוח לניתוח הבא.

שימור בהקפאה בהקפאה מהירה של מוח עכבר שלם לצורך ניתוח היסטולוגי

בסרטון זה אנו מדגימים חתך של רקמת גידול במוח עכבר קפואה באמצעות קריוסטט. חלקי רקמת המוח הקפואים המתקבלים כך מאוחסנים בטמפרטורות נמוכות עד לניתוח נוסף.

חתך רקמת מוח של עכבר קפוא: הליך להשגת קטעי רקמה קפואה דקה מרקמת מוח מורין קפואה

סרטון זה מדגים פרוטוקול מפורט שלב אחר שלב להכנת מקטעי רקמת מוח של עכברים קפואים לניתוחים במורד הזרם.

עיבוד מוח של עכבר לניתוח במורד הזרם

כאן, אנו מציגים פרוטוקול הקפאה של סעיף רקמת מוח מחיות מרובים כחלופה ייעול עיבוד המוח יחיד. זה מפחית את השתנות מכתימים במהלך אימונוהיסטוכימיה, מפחית את הזמן cryosectioning והדמיה.

Cryosectioning בו זמנית של המוח מכרסמים מרובים

הליך זה מתאר את אוסף אזורי המוח קפוא בנפרד כדי להשיג חלבון באיכות גבוהה ו-RNA באמצעות כלים זולים וזמינים בדרך כלל.

אוסף של אזורים קפואים המוח מכרסם עבור ניתוח במורד הזרם

פרוטוקול זה מתאר שיטה לשילוב הכלאה פלואורסצנטית באתרו (FISH) ואימונוהיסטוכימיה פלואורסצנטית (IHC) באזורי מוח עכבר טריים קפואים וקבועים, במטרה להשיג FISH רב-תוויות ואות IHC פלואורסצנטי. IHC התמקד בחלבונים ציטופלזמיים וחלבונים המחוברים לממברנה.

שילוב של הכלאה פלואורסצנטית <em>באתרו</em> עם אימונוהיסטוכימיה פלואורסצנטית על חלקי מוח טריים של עכברים קפואים או קבועים

מוצגת שיטת זלוף נוחה הניזונה מכוח הכבידה לניתוח היסטולוגי של מערכת העצבים המרכזית של העכבר. זיהוי אימונופלואורסצנטי של α-סינוקלאין זרחני מודגם במודל עכברי של מחלת פרקינסון. עבודה זו גם מתארת באופן מקיף את ההעתקה, הנתיחה, הקפאת/הטבעת רקמות ושלבי חתך קפואים.

שיטת פרפוזיה טרנסקרדיאלית הניזונה מכוח הכבידה לניתוח היסטולוגי של מערכת העצבים המרכזית של העכבר

הפרוטוקול הנוכחי מתאר אסטרטגיה מעשית לזרז את שלב האימות של קואורדינטות הזרקה סטריאוטקסיות לפני ביצוע מעקב נגיפי באמצעות צבעים ומקטעים קפואים.

אימות ראשוני של קואורדינטות הזרקה סטריאוטקסיות באמצעות קריוסקציה

מחקר זה מציג פרוטוקול פשוט לעיבוד רקמות הכולל עריפת ראש, קיבוע, קריוסקציה, צביעה פלואורסצנטית, צביעה חיסונית והדמיה, שניתן להרחיב להדמיה קונפוקלית ורב-פוטונית. השיטה שומרת על יעילות דומה לדיסקציות מורכבות, ועוקפת את הצורך במיומנויות מוטוריות מתקדמות. ניתוח תמונה כמותי מספק פוטנציאל חקירה נרחב.

הקפאה ישירה של ראשי <em>דרוזופילה</em> לצביעה פלואורסצנטית משופרת של המוח וצביעה חיסונית

הרשתית מציגה ארגון מרחבי מורכב על פני המבנה הלמינרי שלה. טכניקות מודרניות של טרנסקריפטומיקה מרחבית וריצוף דורשות קטעי רקמה בעובי &lt; 20 מיקרומטר, מה שמגביל את תחולת מחקר הרשתית. שיטת הקפאה טרייה זו מייצרת קטעי פנים דקים של רשתית העכבר תוך שמירה על יחסים מרחביים מישוריים, ומאפשרת מיפוי מולקולרי מקיף על פני הלמינות.

<em>פנים</em> פנים הקפאה של רשתית עכבר לניתוח מרחבי מרחבי בממדים גבוהים

פרוטוקול זה מתקן את טומוגרפיית הקריו-אלקטרון (קריו-ET) לרקמות עבות על ידי שילוב הקפאה בלחץ גבוה (HPF) עם שיטת הוופל, הרמת קרן יוני מוקד קריוגנית (crio-FIB), ורכישה מקבילה סימטרית במינון, מה שמניב למלות דקות ודגימות מזגוגות לניתוח שכפול בשטח בהיפוקמפוס העכבר.

תהליך עבודה של טומוגרפיית קריו-אלקטרון לרקמות עבות שהודגם בהיפוקמפוס של עכבר

למד טכניקות קריוסקשן לרקמת מוח עוברית בעכברים באמצעות קיפאון מהיר בחנקן נוזלי ושימוש בקריוסטט. שיטה זו מספקת טיפים מעשיים להשגת חתכים איכותיים ללא סדקים או עיוותים לניתוח עצבי מדויק.

פלאש מקפיא Cryosectioning E12.5 מוח עכבר

גלה סרטונים נוספים