הסרת פופריום חרקים: שיטה לחקירת גולמים

-כדי לקבל גישה לגולם המתפתח, הסר את הבובה לאחר שאפיתל הגולם נפרד מהקוטיקולה או לאחר שלב הגולם P5. כדי להתחיל, הניחו את הגולם, כשצדו הגחוני פונה אליכם. השתמשו במלקחיים כדי להחזיק את הבובה בחלל הריק שבין הקצה הקדמי של המעטפת לבין ראש הגולם. לאחר מכן, לשבור בעדינות ולהסיר את החלק הקדמי של הבובה כדי לחשוף את הראש.

תוך שמירה על כיוון הגחון, השתמשו במלקחיים כדי ליצור שברים קטנים לאורך הציר הקדמי-אחורי של הבובה וודאו שנוצר פער רציף בתהליך. היזהרו שלא לפגוע ישירות ברקמת הגלמים שמתחתיה. לאחר מכן המשיכו לשבור את הבובה מהרווח החוצה, חלק אחר חלק, ופרשו את המעטפת הקרועה תוך כדי. בעזרת מברשת צבע רטובה עדינה, הרימו את הגלמים החשופים להמשך חקירה. בפרוטוקול לדוגמה, נראה כיצד להסיר את הבובה של Drosophila guttifera ולהכין את הגלמים להדמיה.

-כדי להתחיל בהסרת בובות, הדביקו פיסת סרט דו-צדדי על מגבת נייר. מניחים את הגלמים על סרט דו-צדדי, צד הגחון כלפי מעלה. אתר את הרווח בין הצד הקדמי של הבובה לבין הגולם. אחזו והסירו את הבובה סביב רווח זה באמצעות מלקחיים, וחשפו את הצד הקדמי של ראש הגולם.

הכנס קצה של מלקחיים על ידי הזזתו במקביל לציר הקדמי-אחורי. הרימו את קצה המלקחיים כדי לשבור את הגלמים באופן מקומי. חזור על פעולה זו עד שהשבירה מגיעה לחלק האחורי של הגולם. יש לוודא שנוצר רווח בין רגלי הבובה לרגלי הגולם, ולשבור את הצד הגחוני של הבובה תוך מזעור הנזק לגולם. לאחר ששברו את הבובה ככל האפשר, הוציאו את הגלמים בעזרת מברשת צבע עדינה. הניחו את הגלמים על פיסת נייר טישו שהורטבה ב-ddH2O והונחה בכלי פטרי מפלסטיק. צלמו מיד מכיוון שהגולם החשוף פגיע ומתייבש בקלות.