דרוזופילה בדיקת מחילה ומנהור: שיטה להערכת היפוקסיה של רקמות בזחלי זבובים

- כדי להקים את כלוב איסוף העוברים, השתמשו בצלחות אגר מיץ ענבים בתוספת משחת שמרים טריים והניחו את הצלחות על כלובים המכילים זבובי דרוזופילה זכרים ונקבות מהגנוטיפ המתאים. ריח השמרים ומיץ הענבים מושך ומקדם הטלת ביצים על ידי הנקבות. אפשר הטלת ביצים לתקופה קצובה. לאחר מכן להסיר את המבוגרים לדגור על לוחות העובר במשך 24 שעות כדי לקבל זחלי instar הראשון. לאחר מכן העבירו בעדינות כמה זחלים בודדים מצלחת מיץ הענבים לצלחת בדיקה לאגר בלבד, שם נחתך חור באגר במרכז הצלחת ומולא במשחת שמרים.

זחלים צעירים חייבים להאכיל כדי לעלות במשקל הגוף כדי להתפתח, ולכן הם מתחפרים במקור המזון, משחת השמרים. כאשר הם מתפתחים, הזחלים נכנסים לשלב נדידה ומתרחקים מהמזון כדי לחפש אתר לגור. כדי להעריך היפוקסיה, בחנו את דפוסי המנהור שהזחלים יוצרים במצע. חוסר או מנהור לא מספיק הוא סימן למחסור בחמצן. בפרוטוקול לדוגמה, נראה כיצד להגדיר את בדיקת המחילה והמנהור.

- הגדרת הבקרה וההצלבות הגנטיות הניסיוניות בצלחות הטלת ביצים כמתואר בפרוטוקול הטקסט. החזיקו את הזבובים בחשיכה לפחות יומיים לפני תחילת איסוף הביצים המתוזמן. לאיסוף ביצים מתוזמן, העבירו את הבוגרים לצלחות אגר ענבים חדשות המעוטרות במריחה טרייה של ממרח שמרים בתחילת היום ואפשרו למבוגרים להטיל ביצים על הצלחות במשך ארבע שעות. לאחר ארבע שעות, מעבירים את המבוגרים לצלחות אגר ענבים טרי